豆芽中6-苄基腺嘌呤检测
豆芽中6-苄氨基腺嘌呤检测方法研究
非全日制硕士专业学位论文豆芽中6-苄氨基腺嘌呤检测方法研究学位申请人：张翠侠指导教师：张伟校外导师：王丽霞学位名称：农业推广硕士研究领域：食品加工与安全授予单位：河北农业大学答辩日期：二〇一二年十一月二十四日分类号：X836 单位代码：10086密级：公开学号：Z2009147 非全日制硕士专业学位论文豆芽中6-苄氨基腺嘌呤检测方法研究Determination metod of 6-Benzylaminopurinein bean sprout学位申请人：张翠侠指导教师：张伟校外导师：王丽霞学位名称：农业推广硕士研究领域：食品加工与安全授予单位：河北农业大学答辩日期：二〇一二年十一月二十四日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。
据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得河北农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。
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(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)学位论文作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日摘要6-苄氨基腺嘌呤（6-Benzylaminopurine）白色针状结晶，难溶于水，微溶于乙醇，可溶于酸性及碱性溶液中。
属于第一个人工合成的细胞分裂素，具有抑制植物叶内叶绿素、核酸、蛋白质分解，保绿防老的作用。
目前常用于蔬菜、水果的保鲜和无根豆芽的培育。
它在植物体内含量甚微但它对植物的生长发育具有显著的影响，其主要作用是促进细胞的分裂和扩大促进侧芽的发育抑制衰老等，具有诱导同化物向施用部位定向运输的作用。
豆芽中6-苄基腺嘌呤的研究现状
豆芽具有较高的营养价值，深受大家喜爱，因其价格低廉、爽口美味成为餐桌上最常见的蔬菜，它的质量安全对人们的身体健康有着重要影响。
随着媒体对毒豆芽事件的报道发现一些不法商贩为了提高豆芽产量、缩短生产周期，在豆芽生长过程中滥用添加剂，其中包括无根剂（主要成分为6-苄基腺嘌呤）严重影响了豆芽生产的总体安全水平，使其成为国内广受关注的食品安全问题之一。
毒豆芽是指在豆芽生产过程中非法添加对人体有害的工业原料、激素、农药、化学试剂、兽药、抗生素等，用来增加豆芽产量和改变外观，最后流入市场销售的豆芽，因添加对人体有害的物质，称为毒豆芽。
无根剂是一种广泛使用的添加于植物生长培养基的细胞分裂，主要成分为6-苄基腺嘌呤，简称6-BA，是目前国内外广泛使用的植物生长调节剂，用于诱导细胞分裂、调节细胞分化、延缓蛋白质和叶绿素的降解[1]。
1 豆芽概述1.1 豆芽简介豆类具有较高的营养价值，尤其是黄豆中含有大量的蛋白质，但吸收利用率较低，小部分人群大量食用后有时还会引起腹胀等现象。
以绿豆芽为例，有关科研数据显示：在良好生长条件下的绿豆芽，蛋白质分解为人体所需的氨基酸，其维生素C的含量可达绿豆原含量的7倍，维生素B2的含量增加2到4倍，吸收利用率提高了10%左右，引发胀气的棉子糖、鼠李糖等寡糖会被分解。
1.2 豆芽中的药物残留豆芽生产过程中滥用辅助剂的情况引起了广大消费者和国家的关注。
豆芽生产过程中添加的主要辅助剂品种较多，经多地抽样检测结果可知，残留超标的物质主要以农药为主，其次还有硫胺素和尿素等肥料以及头孢氨苄、诺氟沙星、青霉素等抗生素还有食品添加剂二亚硫酸钠。
豆芽中农药残留有很多潜在污染来源：①豆芽生产过程中农药的不规范使用是导致豆芽中产生农药残留的主要原因。
在监管力度不强、技术欠缺的情况下，一些豆芽生产商过量使用农药的情况十分普遍；②原料豆的污染。
豆子在种植过程中为了防止病虫害而使用农药，可导致原料豆中农药残留污染；③水体污染。
DB33-T 625.3-2007 无公害豆芽 第3部分6-苄基腺嘌呤残留量和4-氯苯氧乙酸钠残留量的测定
DB33-T 625前言DB33/ 625－2007《无公害豆芽》分为三个部分：——第1部分：生产技术规程；——第2部分：质量安全要求；——第3部分：6-苄基腺嘌呤残留量和4-氯苯氧乙酸钠残留量的测定。
本部分为DB33/ 625－2007《无公害豆芽》第3部分。
本部分的附录A和附录B为资料性附录。
本部分起草单位：浙江省疾病预防控制中心、宁波市疾病预防控制中心、杭州市质量技术监督检测院、浙江省农业厅农作物管理局、宁波市卫生监督所、宁波市五龙潭蔬菜食品有限公司、宁波市质量技术监督局。
无公害豆芽第3部分：6－苄基腺嘌呤残留量和4－氯苯氧乙酸钠残留量的测定第一法豆芽中6-苄基腺嘌呤残留量的测定——LC-MS/MS法1 范围本方法规定了豆芽中6-苄基腺嘌呤的测定方法。
本方法适用于豆芽中6-苄基腺嘌呤的测定。
本方法检出限为1×10-6 mg/kg。
2 原理豆芽中残留的6-苄基腺嘌呤经酸化甲醇提取，反相柱分离，电喷雾离子化（ESI）和多离子反应监测（MRM）方式进行定量测定。
以试样峰的保留时间、母离子（m/z: 226.20[M+H]+）与子离子(226.20>91.0, 226.20>147.90)定性，以子离子(226.20>91.0)峰面积外标法定量。
3 试剂除非另有规定，仅使用分析纯试剂、蒸馏水或去离子水。
3.1 乙酸。
3.2 乙腈（HPLC）。
3.3 甲醇（HPLC）。
3.4 50%的甲醇水溶液。
3.5 酸化甲醇：每100 mL甲醇中加入乙酸50μL，混匀。
3.6 标准溶液的配置：3.6.1 标准储备溶液精密称取6-苄基腺嘌呤（含量＞98.0％）0.1000g于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，作为标准储备溶液。
此标准储备溶液每毫升相当于1.0 mg 6-苄基腺嘌呤。
标准使用液用甲醇稀释至每毫升含1μg的6-苄基腺嘌呤。
在4℃冰箱中储存，有效期1个月。
3.6.2 标准工作溶液3.6.2.1 空白豆芽萃取液制备选择在生产过程中未添加6-苄基腺嘌呤的豆芽菜。
HPLC法测定豆芽中6-苄基腺嘌呤残留研究
HPLC法测定豆芽中6-苄基腺嘌呤残留研究李小平1,陈晓红1,姚浔平1,金米聪1,蒋经纬2(1.宁波市疾病预防控制中心,浙江宁波315010;2.宁波市卫生监督所,浙江宁波315010)李小平,陈晓红,姚浔平,等. HPLC法测定豆芽中6-苄基腺嘌呤残留研究[J].中国卫生检验杂志,2005,15(2):149-150,159 [摘要]目的：建立高效液相色谱法测定豆芽中6 -苄基腺嘌呤残留量的检测方法。
方法：豆芽样品经酸化甲醇提取，高速离心沉淀分离后,以甲醇+乙腈+0.1%醋酸(60+5+35)为流动相，采用ZORBAXSB C18柱(250 mm×4.6 mm×5μm)分离，UV267 nm检测，外标法定量。
结果：豆芽中6 -苄基腺嘌呤的线性范围在0～2.0 mg /L，回收率在81.3%～87.5%，RSD均小于6%，最低检出限为0.04 mg /kg。
结论：该方法具有快速、灵敏、简便、准确等优点，能满足实际工作的需要。
[关键词]高效液相色谱；豆芽；6 -苄基腺嘌呤Determination of 6-benzylaminopurine in bean-sprout by high performance liquid chromatography LiXiao-ping1, Chen Xiao-hong1, Yao Xun-ping1, JinMi-cong1, Jiang Jing-wei2(1.NingboMunicipalCenter for Disease Control and Prevention，Ningbo 315010，China；2.Ningbo Municipal Institute for Health Inspection and Supervision，Ningbo 315010，China)[Abstract]Objective：To establish an analytical method for determination of 6-benzylaminopurine(6 -BA)in bean–sprout by high performance liquid chromatography. Methods：Column：Zorbax SB C18column (250 mm×4.6 mm×5μm)，the mobile phase：CH3OH +CH3CN+0.1%HAC(60+5+35)，the flow rate：1.0 ml/min；the UV detector wavelength：267 nm. The bean-sprout samples were extracted by acidic CH3OH firstly and then perseverated by centrifugal precipitation. Results：The linear range was 0～2.0 mg /L and the limit of detection was 0.04 mg /kg. Extraction recoveries were between 81.3%～87.5%，RSD were less than 6%.Conclusion：Thismethod is found to be sensitive，fastand accurate.Therefore，itcan be successfully used for determination of6 -BA in bean -sprout.[Key words]Bean -sprout；6 -Benzylaminopurine；High performance liquid chromatography6-苄基腺嘌呤(6-benzylaminopurine)又称N-苄基腺苷，简科6-BA，分子式为C12H11N5，其结构式为，是一种人工合成的植物生长激素，对植物的生长、发育有着促进与调节作用，但如果人体过量摄入会刺激皮肤黏膜，并出现食道和胃黏膜损伤、恶心、呕吐等现象。
豆芽中6-苄基腺嘌呤检测
豆芽中6-苄基腺嘌呤检测--科标检测科标化工分析检测中心通过市场调查和实验结果，发现豆芽中激素添加超标现象严重，其中以6-苄基腺嘌呤尤为普遍。
6-苄基腺嘌呤（6-benzylaminopurine）简称6-BA，分子式为C12H11N5，是目前国内外广泛使用的植物生长调节剂，用于诱导细胞分裂、调节细胞分化、延缓蛋白质和叶绿素的降解，其水溶液能使豆芽粗壮且无根。
人体摄入过量的6-BA会刺激皮肤黏膜，伤害食道和胃黏膜，出现恶心、呕吐等现象。
卫生部《关于〈食品添加剂使用标准〉(GB2760-2011)有关问题的复函》，国家质检总局决定从2011年11月14日起，各省质量技术监督局不再受理6-苄基腺嘌呤作为食品添加剂的生产许可申请，已批准的生产许可证书，由监管部门撤回并注销，并于2011年12月20日前完成。
科标化工分析检测中心可依照ISO、ASTM、DIN、GB、HB等标准完成食品、饲料、药品、纺织品、农业、高分子材料、生物产品、建筑材料以及微生物产品理化性能、力学性能、电气性能等测试。
中心通过了中国国家认证认可监督管理委员会和中国合格评定国家认可委员会的二合一（CMA、CNAS）实验室认证认可，能出具权威的第三方检测报告。
豆芽中6-苄基腺嘌呤检测(高效液相色谱法)一、实验原理科标化工分析检测中心参照国标GB/T23381-2009食品中6-苄基腺嘌呤高效液相色谱法，试样经粉碎后用甲醇溶液提取、浓缩、固相萃取小柱净化，反相液相色谱柱分离测定，紫外检测器检测，外标法定量分析。
二、仪器和试剂Thermo scientific高效液相色谱仪带紫外检测器，RE-52AA旋转蒸发仪，HH-4数显恒温水浴锅，LG10-24A高速台式离心机；甲醇为色谱纯试剂，实验用水为超纯水。
三、试验方法1、提取称取经匀浆机捣碎的豆芽约10g（精确到0.01g）于50ml离心管中，加入20ml甲醇，超声提取15min，4000r/min离心10min，上清液转入50ml梨形瓶中，样品再次用20ml甲醇超声提取15min，离心合并上清液，用旋转蒸发仪（不超过60℃）浓缩近干。
DB11_T379-2006豆芽中4-氯苯氧乙酸钠、6-苄基腺嘌呤、2,4-滴、赤霉素、福美双的测定
ICS 67.080.20DB B 31备案号：19170-2006北京市地方标准北京市质量技术监督局发布目 次前 言 (II)1 范围 (1)2 4-氯苯氧乙酸钠残留量的测定 (1)3 6-苄基腺嘌呤残留量的测定 (3)4 2,4-滴（2,4-二氯苯氧乙酸）残留量的测定 (5)5 赤霉素残留量的测定 (7)6 福美双残留量的测定 (9)前 言本标准由通州区质量技术监督局提出。
本标准起草单位：北京市海淀区产品质量监督检验所（国家食品质量安全监督检验中心）。
本标准主要起草人：曹红、金瑛、刘艳琴、许华、王浩、田艳玲、林立。
豆芽中4-氯苯氧乙酸钠、6-苄基腺嘌呤、2,4-滴、赤霉素、福美双的测定1 范围本标准规定了豆芽中4-氯苯氧乙酸钠、6-苄基腺嘌呤、2,4-滴、赤霉素、福美双的测定方法。
本标准适用于豆芽中4-氯苯氧乙酸钠、6-苄基腺嘌呤、2,4-滴、赤霉素、福美双的残留量分析。
2 4-氯苯氧乙酸钠残留量的测定2.1 原理试样中的4-氯苯氧乙酸钠用稀碱提取后，在酸性条件下用固相萃取柱将样品中的4-氯苯氧乙酸吸附，使其与基体干扰物分离，再用甲醇洗脱并用高效液相色谱法测定，以保留时间定性，外标法峰面积定量。
2.2 试剂与材料2.2.1 2.2.2 2.2.3 2.2.4 2.2.5 2.2.6 2.2.7 2.2.8 2.2.9 2.2.10 2.2.11 2.2.12 2.3.1 2.3.2 2.3.3 2.3.4 2.3.5 2.4.1 氢氧化钠（AR）。
盐酸（AR）。
磷酸（AR）。
冰醋酸（AR）。
甲醇（HPLC）。
氢氧化钠溶液（0.01 mol/L）：称取0.40 g 氢氧化钠，溶于水并稀释至1000 mL。
亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾[K 4Fe(CN)6 ·3H 2O]溶于少量水中，并用水稀释至100 mL。
乙酸锌溶液：称取22.0 g乙酸锌[Zn(CH 3COO)2]溶于少量水中，然后加入3 mL冰醋酸并加水稀释至100 mL。
有毒添加剂滥用,好“品相”豆芽中枪
有毒添加剂滥用，好“品相”豆芽中枪
2013年8月初，山东省滨州市惠民县公安局对市场上的豆芽进行抽样检测。
后来，经山东省分析测试中心检测，在送样的崔某生产的豆芽中检测出6-苄基腺嘌呤、4-氯苯氧乙酸钠等有毒、有害物质。
使用国家严格禁用的非食品添加剂生产豆芽，这可是严重的违法犯罪行为，那么崔某又是从哪里得到的这些添加剂呢？原来，王某是黄豆、绿豆批发商，他在明知国家禁止在发制豆芽过程中添加有毒有害添加剂的情况下，购进非食品添加剂无根豆芽素、AB粉剂、209增长剂，并将上述添加剂搭配黄豆、绿豆销售给豆芽生产零售商崔某等人。
自2011年至案发时止，王某已销售上述添加剂数千支。
作为豆芽生产零售商，崔某也是明知无根豆芽素、AB粉剂、209增长剂对人体有危害，但他为增加豆芽品相，从王某处购买国家禁止添加的上述添加剂添加在豆芽生产中，并在当地菜市场及学校销售，每天销售豆芽约300斤。
幸好天网恢恢，疏而不漏，毒豆芽的检出不仅有效地打击了一些不法分子的违法犯罪行为，也为民众的健康构筑了一道绿色的屏障。
6苄基腺嘌呤检测标准
6-苄基腺嘌呤检测标准6-苄基腺嘌呤（6-Benzylaminopurine，简称6-BA）是一种植物生长调节剂，属于嘌呤类细胞分裂素，具有促进细胞分裂、增大和诱导芽分化等生理作用。
在农业生产中，6-苄基腺嘌呤常被用于促进植物生长、提高产量和改善品质等方面。
为了保证6-苄基腺嘌呤的质量和效果，需要对其制定相应的检测标准。
本文将对6-苄基腺嘌呤的检测标准进行详细介绍。
二、检测项目及指标根据《6-苄氨基嘌呤原药的要求、试验方法、以及标志、标签、包装、贮运》，6-苄基腺嘌呤原药的检测项目主要包括：外观、6-苄氨基嘌呤质量分数、乙醇不溶物、PH值、水分质量分数等。
具体指标如下：外观：应是稳定的白色结晶粉末。
6-苄氨基嘌呤质量分数：≥98.5%。
乙醇不溶物：≤0.2%。
PH值：范围在5.0～8.0之间。
水分质量分数：≤0.5%。
三、检测方法抽样方法：按照《商品原药采样方法》进行抽样。
用随机数表方法确定抽样的包装件；最终抽样量一般不少于50g。
鉴别试验：本鉴别试验可与6-苄氨基嘌呤含量的测定同时进行。
在相同的色谱操作条件下，试样溶液主（色谱）峰的保留时间与标样溶液6-苄氨基嘌呤色谱峰的保留时间，其相对差值应在1.5%以内。
6-苄氨基嘌呤含量的测定：a. 方法提要：试样用甲醇溶解，甲醇+水为流动相，使用以C18为填料的液相色谱柱和紫外检测器对试样中的6-苄氨基嘌呤进行反相高效液谱的分离和测定。
b. 操作步骤：准确称取一定量的6-苄氨基嘌呤原药，加入适量的甲醇溶解，然后按照液相色谱的常规方法进行分离和测定。
记录6-苄氨基嘌呤色谱峰的峰高或峰面积，根据标准曲线或校正因子计算6-苄氨基嘌呤的质量分数。
c. 结果计算：根据测定的峰高或峰面积，对照标准曲线或校正因子，计算出6-苄氨基嘌呤的质量分数。
质量分数（%）=（测定的峰高或峰面积/标准峰高或峰面积）×标准质量分数（%）×100%。
其他检测项目：乙醇不溶物、PH值和水分质量分数等项目的检测方法可参照相关标准进行。
6-苄基腺嘌呤对黄豆芽生长的影响及其残留量测定
6-苄基腺嘌呤对黄豆芽生长的影响及其残留量测定黄少文;杨婕;孙远明;汤彦蔚;杨怀杰;柳春红【摘要】【目的】探讨不同浓度6-苄基腺嘌呤（6-BA）对黄豆芽生长的影响，并通过测定黄豆芽中6-BA残留水平对其安全性进行评价。
【方法】分别采用喷洒法和浸泡法培育黄豆芽，豆芽收获后测定其鲜重、轴长、轴径、发芽率和产率，并参照DB S22/003-2012食品安全地方标准，对豆芽及豆芽机内营养液的6-BA残留进行测定。
【结果】喷洒法中1.0 mg/L 6-BA处理组黄豆芽产率最高，为6.96，而浸泡法中5.0 mg/L 6-BA处理组黄豆芽产率最高，为7.15。
各处理组成熟黄豆芽样品中均未检出6-BA，而喷洒法中3.0 mg/L组豆芽机内营养液的6-BA残留随处理时间延长呈下降趋势，第3 d开始未检出6-BA。
【结论】适宜浓度的6-BA对豆芽生长有促进作用，且6-BA在豆芽培育过程中可逐渐降解以致消除，安全性较高。
%Objective]The effects of different concentrations of 6-Benzylaminopurine(6-BA) treatments on soybean sprouts growth were evaluated and the safety was measured by detecting the residues of 6-BA in soybean sprouts.[Method]Spraying and soaking methods were respectively used to cultivate soybean sprouts , and fresh weight , axis length, axis diameter, germination rate and yield were measured after cultivation. 6-BA residues were determined with reference to DB S22/003-2012 in bean sprouts and nutrient solution of 6-BA. [Result]The results showed that the best yield was 6.96 for 1.0 mg/L group in spraying method and the best yield in soaking method was 7.15 for 5.0 mg/L group. No 6-BA residue was detected in each group of bean sprouts. 6-BA was in downtrend in 3.0 mg/L group nutri-ent solution and no 6-BA residue wasdetected since the third day. [Conclusion]Suitable concentration of 6-BA has an positive effect on soybean sprouts growth. 6-BA could be degraded and eliminated in nurturing process of soybean sprouts, hence 6-BA is proved to be of high safety.【期刊名称】《南方农业学报》【年(卷),期】2015(000)002【总页数】5页(P255-259)【关键词】6-苄基腺嘌呤;黄豆芽;产率;残留【作者】黄少文;杨婕;孙远明;汤彦蔚;杨怀杰;柳春红【作者单位】华南农业大学食品学院，广州 510642;华南农业大学食品学院，广州 510642;华南农业大学食品学院，广州 510642;华南农业大学食品学院，广州510642;华南农业大学食品学院，广州 510642;华南农业大学食品学院，广州510642; 农业部农产品贮藏保鲜质量安全风险评估实验室，广州 510642【正文语种】中文【中图分类】R155.540 引言【研究意义】豆芽是由绿豆或黄豆发育而来，含有7种人体必需氨基酸及大量的蛋白质和多种维生素（Mostafa etal.，1987；Alonso et al.，1998，2000）。
花生芽中6-苄基腺嘌呤的测定方法研究
图1 6-苄基腺嘌呤的吸收光谱图图1中发现在210nm 及267nnri 处均有吸收顶点， 210nm 处受到的干扰较大，因此选择267nm 为6-苄基腺 嘌呤的检测波长。
流动相的选择选择纯甲醇、甲醇-20mmo [/L 乙酸按 溶液（50:50, V /V )和甲醇-水（50:50, v /v )三种不同 体系的流动相作比较，流速均为为1.0mL /min ，进样浓度 为1.0mg /L 的6-苄基腺嘌呤标准溶液，结果见图2。
离心机（sigma 公司）；超纯水系统（德国MHtipore 公司）； 刀片式均质器(德国IKA 公司）；超声波提取器(上海比朗）。
6-苄基腺嘌呤标准品纯度均大于99% (德国Dr .Erenstorfer 公司）；甲醇（色谱纯，美国CNW 公司）；乙酸铵（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）。
仪器条件流动相：甲醇：20mmot /L 乙酸铵溶液 (50:50, v /v ),等度洗脱〇流速:1.0mL /min ;色谱柱温度: 40°C ;检测器：二极管阵列检测器，波长267nm ;进样量:2〇m L 〇结果与讨论检测波长的确定二极管阵列检测器能从190n m 到 900n m 的全波段检测，要检测6-苄基腺嘌呤首先要确 定其检测波长。
配制6-苄基腺嘌呤的标准溶液，浓度为 10.0mg /L ,上机测定，从测定结果的光谱色谱三维图发现 在5.8分钟有明显的响应，提取该时间点的吸收光谱图， 结果见图1。
保留时间 ：5.824 m in 化合物名：6-苄基腺嘌吟建立了高效液相色谱法测定花生芽中6-苄基腺嘌呤含 量的方法。
6-苄基腺嘌呤的检测波长为267nm ;流动相为 甲薛-20mmol /L 乙酸铵溶液（50:50，v /v );前处理的提 取方式为超声波提取法；高效液相色谱法测定花生芽中6- 节基腺嘌呤含星的在l -50mg /L 范围线性良好，相关系数 为0.9998,检出限为O .lm g /kg ,精密度为1.82%,用该方 法测定花生芽中6-苄基腺嘌吟含量的回收率在90%以上。
高效液相色谱-串联质谱法检测豆芽中的6-苄基腺嘌呤含量
理论研究|THEORY66食品安全导刊 2016年8月6-苄基腺嘌呤（6-benzylaminopurine，6-BA）是一种人工合成的细胞分裂素，与植物内源性激素具有相似的结构及性质，为一种植物生长调节剂[1]。
如果人体摄入过量会刺激皮肤黏膜，出现食道和胃黏膜损伤、恶心、呕吐等症状。
目前，测定豆芽中6-BA的方法主要有高效液相色谱法、液相色谱-大气压化学源质谱法及液相色谱—串联质谱法[2-4]等。
本研究采用LC-MS/MS法来测定豆芽中的6-BA，提取试剂为酸化甲醇，以乙腈及水（含0.1%甲酸）为流动相进行梯度洗脱，经过反相色谱分离后以多反应监测方式进行检测。
材料和方法仪器 API 4000型三重四极杆串联质谱仪，LC-20A 液相色谱仪（包括二元输液泵及自动进样器)。
药品及试剂 6-BA标准品（含量97.0%）,甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
标准储备溶液 精密称取6-BA 0.1000g于100mL 容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，作为标准储备溶液。
此标准储备溶液每毫升相当于1.0mg 6-BA。
色谱柱：Symmetry C18柱，3.5m，150×2.1mm I.D.，waters公司；流动相：乙腈-水（含0.1%甲酸）；流速：0.25 mL/min；柱温：25℃；进样量：10μL。
梯度洗脱条件见表1。
表1 梯度洗脱条件时间（min）水相有机相0.090%10%290%10%75%95%8.55%95%时间（min）水相有机相9.590%10%1290%10%质谱条件 采用电喷雾离子化源；离子喷射电压：5500V；温度：500℃；源内气体1（GS1，N2）压力：55psi；气体2（GS2，N2）压力：55psi；气帘气体（N2）压力：15psi；正离子方式检测；6-BA的解簇电压（DP）为70V，碰撞能量（CE）为80eV；用于定量分析的离子反应为m/z 226.2→m/z 64.9，6-BA结构及[M+H]+的产物离子扫描质谱图见图1。
6-ba残留标准
6-BA（6-苄基腺嘌呤）在不同国家的残留标准不同。
在欧盟，6-BA的残留限量标准是每千克体重0.01毫克，比世界卫生组织的标准严格5倍。
按照模拟实验中的最大残留量推算，这差不多相当于每天至少吃4千克豆芽，而实际平均下来，一般人每天能吃到25克就很不错了。
在我国，6-BA被列入《食品添加剂使用卫生标准》（GB2760）进行管理，曾经被作为食品生产加工助剂安全使用，无需限定使用量、残留量。
但在2011年新出台的标准中，6-BA被从《食品添加剂使用卫生标准》中删除，原因是卫生部认为“不具有食品添加剂工艺必要性”，也就是说它不应该按食品添加剂管理。
以上内容仅供参考，可以查阅国家食品安全风险评估中心官网发布的《食品中6-苄基腺嘌呤（6-BA）残留量的测定高效液相色谱法》（征求意见稿）了解更多信息。
吉林省食品安全地方标准 豆芽中植物激素6-苄氨基嘌呤的测定
1.1.1.1.1.31就ICS ： 标准分类号： 备案号：豆芽中植物激素6-苄氨基嘌呤的测定-高效液相色谱法Determination of p lant hormones-6-Benzylaminopurine i n bean sprouts-High performanceliquid chromatography method(送审稿)DBS22吉林省卫生厅发布前言本标准按照GB/T 1.1-2009和GB/T 20001.4-2001标准编写规则第4部分:化学分析方法给出的规则起草。
本标准的附录A为资料性附录。
本标准由吉林省质量技术监督局提出并归口。
本标准起草单位：国家农业深加工产品质量监督检验中心、吉林省产品质量监督检验院。
本标准主要起草人：石金娥、华蕾等。
豆芽中植物激素6-苄氨基嘌呤的测定1范围本标准规定了豆芽中植物激素6-苄氨基嘌呤测定的高效液相色谱方法。
本标准适用于豆芽中6-苄氨基嘌呤的含量测定。
本标准方法检出限为0.05 mg/kg。
2规范性引用文件本标准内容引用了下列文件中的条款。
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。
凡是不注明日期的引用文件，其有效版本适用于本标准。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法3原理试样中的6-苄氨基嘌呤经酸化乙腈-水溶液超声提取后，高效液相色谱法测定，以保留时间定性，外标法定量。
4试剂和材料除另有说明外，所有试剂均为分析纯，实验用水为GB/T6682规定的一级水。
4.1乙腈：色谱纯。
4.2甲醇：色谱纯。
4.3冰醋酸。
4.46-苄氨基嘌呤：含量≥97%。
4.5乙腈-水溶液：量取60mL乙腈（4.1），加入40 mL水中，混匀。
4.6样品提取液：每100 mL乙腈水溶液（4.5）中加入乙酸50μL。
4.76-苄氨基嘌呤标准储备液（1.0 mg/mL）：准确称取0.0500 g 6-苄氨基嘌呤标准品，用甲醇（4.2）溶解并定容于50.0 mL容量瓶中，4℃下保存，有效期2个月。
HPLC法测定豆芽中6_苄基腺嘌呤残留研究
的生长 、发育有着进与调节作用 ,但如果人体过量摄入会刺 激皮肤 黏 膜 ,并出现食道和胃黏膜损伤 、恶心 、呕吐等现象 。 目前虽然 GB2760 - 1996已将 6 - BA 作为允许使用的食品添 加剂并列入国家标准 ,同时也规定了豆芽中 6 - BA 的最高允 许使用量 (0101 g / kg)和最高允许残留量 ( 0120 mg/ kg) ,但至 今尚未建立豆芽中 6 - BA 残留量的标准检测方法 ,这给卫生 监督 与 监 测 工 作 带 来 了 极 大 的 困 难 。本 文 根 据 有 关 文 献 [1～3 ] ,建立了豆芽中 6 - BA 残留的快速 、灵敏 、准确的 HPLC 检测方法 ,并用于实际样品的监测 ,获得了满意的结果 。
中国卫生检验杂志 2005年 2月 第 15卷 第 2期 Chinese Journal of Health Laboratory Technology, Feb 2005; Vol 15 No 2
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【研究报告 】
HPLC法测定豆芽中 6 - 苄基腺嘌呤残留研究
李小平 1 ,陈晓红 1 ,姚浔平 1 ,金米聪 1 ,蒋经纬 2
称取经组织捣碎机捣碎的豆芽样品 10 g (精确至 0101 g) 于 50 m l离心管中 ,加入 15 m l酸化甲醇 ,用 U ltra - Turrax搅拌 器混匀 3 m in,超声振荡 15 m in,以 4 500 r/m in 离心 10 m in,上 清液转入 50 m l容量瓶中 ,样品再用 15 m l酸化甲醇提取 ,超声 振荡 15 m in,并再次离心 。合并上清液 ,并定容至刻度 ,摇匀 ,取 25 m l此溶液用旋转蒸发仪浓缩至 510 m l,经 012μm PVDF滤 膜过滤至自动进样器样品瓶中 ,供 HPLC分析 。
豆芽中植物生长调节剂的测定(BJS 201703)
附件3豆芽中植物生长调节剂的测定BJS 2017031范围本方法规定了豆芽中11种植物生长调节剂的高效液相色谱-串联质谱测定方法。
本方法适用于豆芽中6-苄基腺嘌呤、4-氯苯氧乙酸、赤霉素、吲哚乙酸、吲哚丁酸、2,4-二氯苯氧乙酸、4-氟苯氧乙酸、异戊烯腺嘌呤、氯吡脲、多效唑和噻苯隆的检测。
2原理试样经含1%甲酸的乙腈溶液匀浆提取，脱水，离心后，上清液经分散固相萃取净化，用高效液相色谱-串联质谱测定，外标法定量。
3试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682 规定的一级水。
3.1试剂3.1.1甲醇：色谱纯。
3.1.2乙腈：色谱纯。
3.1.3甲酸：色谱纯。
3.1.4乙酸铵：色谱纯。
3.1.5无水硫酸镁。
3.1.6无水乙酸钠。
3.1.7十八烷基键合硅胶吸附剂（C18）：粒径范围为40 μm—60 μm。
3.2试剂配制3.2.1含1%甲酸的乙腈溶液：量取10 mL甲酸，加乙腈稀释至1000 mL，混匀。
3.2.2含0.1%甲酸的5 mmol/L乙酸铵溶液：称取0.3854 g乙酸铵，用水溶解并稀释至1000 mL，加入1 mL甲酸，混匀。
3.3标准品6-苄基腺嘌呤、4-氯苯氧乙酸、赤霉素、吲哚乙酸、吲哚丁酸、2,4-二氯苯氧乙酸、4-氟苯氧乙酸、异戊烯腺嘌呤、氯吡脲、多效唑、噻苯隆标准品，纯度均≥90%。
标准品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量详见附录A中的表A.1。
—22 —3.4标准溶液的配制3.4.1植物生长调节剂标准储备液（1 mg/mL）：精密称取6-苄基腺嘌呤、4-氯苯氧乙酸、赤霉素、吲哚乙酸、吲哚丁酸、2,4-二氯苯氧乙酸、4-氟苯氧乙酸、异戊烯腺嘌呤、氯吡脲、多效唑、噻苯隆标准品（3.3）各10 mg，分别置于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度各为1 mg/mL标准贮备液，-20℃保存。
3.4.2混合标准中间液A（10 μg/mL）：分别精密量取11种植物生长调节剂标准储备液（1 mg/mL）（3.4.1）各1 mL，置于同一100 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，制成浓度均为10 μg/mL 的混合标准中间液A。
单6-苄基腺票吟前处理实验
单6—苄基腺票吟前处理实验
GBT 23381—2009液相色谱法检测豆芽中的6—苄基腺嘌呤6—苄氨基嘌呤（6—BA）是一种人工合成的细胞分裂素，与植物内源激素具有相似的结构和性质，能够抑制植物叶内叶绿素、核酸和蛋白质分解，广泛用作无根豆芽的生长调节剂。
它是一种能使豆芽细胞快速分裂的激素类农药，同氮肥一样对人体都有致癌、致畸的作用。
超量摄入激素类药品后，会对人体产生一定的危害，如便儿童发育早熟、女性生理发生改变、老年人骨质疏松等等。
即便有些危害不会在短时间内出现，但是长久沉积必然会给健康带来不利影响。
试剂：0.02mol/L醋酸铵水（0.1%乙酸）：1.0L超纯水中加入
1.54g醋酸鈘和1.0mL冰醋酸，混匀超声，过0.45pm滤腹备用；
2.5%甲酸水：2.5mL甲酸加入水中，定容至100mL；20%氨水甲醇：20mL氨水加入甲醇定容至100mL；20%甲醇水：量取20mL甲醇、纯水定容至100mL，混匀备用；混合型阳离子交换柱；60mg，3ml，使用前分别用3mL甲醇、3mL2.5%甲酸水活化；方法原理6—苄氨基嘌呤：豆芽样品经粉碎后在酸化的乙腈水溶液提取条件下提取效率高、能消除干扰。
高效液相色谱测定，紫外检测器检测，以保留时间定性，峰面积或峰高定量。
前处理条件称取样品10.0g至50mL离心管，加入20mL甲醇，超声提取15m。
超高效液相色谱-质谱法测定豆芽中6-苄基腺嘌呤的方法研究
超高效液相色谱-质谱法测定豆芽中6-苄基腺嘌呤的方法研究武婷;薛园园;赵小珍【摘要】[目的]建立超高效液相色谱-质谱联用法(UPLC-MS/MS)测定豆芽中6-苄基腺嘌呤(6-BA)的方法.[方法]豆芽样品经过酸化甲醇提取,高速离心沉淀分离后,采用超高效液相色谱柱WATERS ACQUITY C18(50 mm×2.1 mm,1.7 μm)分离,乙腈和0.1％甲酸水溶液进行梯度洗脱.[结果]6-BA在1.0～200.0 ng/ml范围内,线性关系良好,回归系数R2为0.998 4,回收率达到85.3％～93.0％,精密度达到1.39％～2.75％.[结论]该方法稳定,操作简便、快速,提取效率高,重现性好,对豆芽样品中6-BA的检测提供了有力的技术支持,有很高的实用价值.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2015(000)034【总页数】3页(P88-89,91)【关键词】超高效液相色谱-质谱法;豆芽;6-苄基腺嘌呤【作者】武婷;薛园园;赵小珍【作者单位】山西省分析科学研究院,山西太原030006;山西省分析科学研究院,山西太原030006;山西省分析科学研究院,山西太原030006【正文语种】中文【中图分类】S-036-苄基腺嘌呤(6-Benzylaminopurine，6-BA)是一种人工合成的细胞分裂素，是使用非常广泛的生长调节剂。
6-BA作为植物促长剂和果蔬保鲜剂的主要成分，已在国内外进入应用阶段。
目前，6-BA的应用已经拓展到果树栽培和园艺等领域。
作为植物促长剂使用，6-BA能提高种子发芽率，促进幼苗生长，最终提高产率，常被用于促进豆芽的生长。
用6-BA配成不同浓度的水剂，对于农作物可起到调节生长的作用，使水稻和黄瓜增产、增收，并使黄豆芽粗壮且无根。
据报道，市场上豆芽中6-BA添加超标现象严重。
人体摄入过量的6-BA会刺激皮肤黏膜，伤害食道和胃黏膜，出现恶心、呕吐等现象。
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豆芽中6-苄基腺嘌呤检测--科标检测
科标化工分析检测中心通过市场调查和实验结果，发现豆芽中激素添加超标现象严重，其中以6-苄基腺嘌呤尤为普遍。
6-苄基腺嘌呤（6-benzylaminopurine）简称6-BA，分子式为C12H11N5，是目前国内外广泛使用的植物生长调节剂，用于诱导细胞分裂、调节细胞分化、延缓蛋白质和叶绿素的降解，其水溶液能使豆芽粗壮且无根。
人体摄入过量的6-BA会刺激皮肤黏膜，伤害食道和胃黏膜，出现恶心、呕吐等现象。
卫生部《关于〈食品添加剂使用标准〉(GB2760-2011)有关问题的复函》，国家质检总局决定从2011年11月14日起，各省质量技术监督局不再受理6-苄基腺嘌呤作为食品添加剂的生产许可申请，已批准的生产许可证书，由监管部门撤回并注销，并于2011年12月20日前完成。
科标化工分析检测中心可依照ISO、ASTM、DIN、GB、HB等标准完成食品、饲料、药品、纺织品、农业、高分子材料、生物产品、建筑材料以及微生物产品理化性能、力学性能、电气性能等测试。
中心通过了中国国家认证认可监督管理委员会和中国合格评定国家认可委员会的二合一（CMA、CNAS）实验室认证认可，能出具权威的第三方检测报告。
豆芽中6-苄基腺嘌呤检测(高效液相色谱法)
一、实验原理
科标化工分析检测中心参照国标GB/T23381-2009食品中6-苄基腺嘌呤高效液相色谱法，试样经粉碎后用甲醇溶液提取、浓缩、固相萃取小柱净化，反相液相色谱柱分离测定，紫外检测器检测，外标法定量分析。
二、仪器和试剂
Thermo scientific高效液相色谱仪带紫外检测器，RE-52AA旋转蒸发仪，HH-4数显恒温水浴锅，LG10-24A高速台式离心机；甲醇为色谱纯试剂，实验用水为超纯水。
三、试验方法
1、提取
称取经匀浆机捣碎的豆芽约10g（精确到0.01g）于50ml离心管中，加入20ml甲醇，超声提取15min，4000r/min离心10min，上清液转入50ml梨形瓶中，样品再次用20ml甲醇超声提取15min，离心合并上清液，用旋转蒸发仪（不超过60℃）浓缩近干。
2、净化
将浓缩近干的提取液以2ml/min流速通过预先活化的固相萃取柱，用约2ml水洗涤梨形瓶，洗液过固相萃取柱，再用5ml水洗涤固相萃取柱，去除杂质后用甲醇洗脱并定容至5.0ml，混匀后用0.45µm滤膜过滤，滤液进高校液相色谱仪检测。
3、色谱条件
色谱柱：Thermo scientific-C18(250×4.6mm，粒径5μm);
检测波长：267nm；
流动相:甲醇-0.02mol/L乙酸铵溶液=1:1；
流速：1.0mL/min
进样量：10μL。
检出限：0.02mg/kg
图1.6-苄基腺嘌呤标准品图谱
图2.豆芽样品图谱
四、结果计算与评价
科标化工分析检测中心利用外标法计算6-苄基腺嘌呤含量。
附图
1、样品粉碎
2、高速离心机
3、检测仪器--超高效液相色谱仪。