中性粒细胞胞外诱捕网放大脂多糖诱导的肺泡巨噬细胞炎症反应
抗菌肽LL37对脂多糖诱导的大鼠肺泡巨噬细胞炎性损伤的保护作用_
空 白孔,每孔培养液为 100μ
l。37 ℃ 孵育 12h 后,
加入 CCK810μ
l,37 ℃ 继续孵育 4h 后在 450nm
处测量吸光 度 值 (
A450nm)。 细 胞 活 力 (% ) =
(给 药 组 A450nm- 空 白 A450nm)/ (细 胞 对 照
组 A450nm- 空白 A450nm) ×100% 。
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(美国)。
1 2 实验方法
121 细 胞 培 养 与 分 组 干 预
10 mg/L LL37 的 培 养 液 培 养 12 h, 实 验 组 在
中性粒细胞外诱捕网与炎症性肠病关系的研究进展
中性粒细胞外诱捕网与炎症性肠病关系的研究进展炎症性肠病（Inflammatory Bowel Disease, IBD）是一类临床常见的慢性肠道炎症性疾病，包括溃疡性结肠炎（Ulcerative Colitis, UC）和克罗恩病（Crohn's Disease, CD）。
中性粒细胞（Neutrophil）是机体炎症过程中的重要成分之一，而中性粒细胞外诱捕网（Neutrophil Extracellular Traps, NETs）则是中性粒细胞发挥杀菌和调控炎症反应的重要机制。
本文将探讨中性粒细胞外诱捕网与炎症性肠病之间的关系，并对该领域的研究进展进行总结。
一、中性粒细胞外诱捕网的形成与功能中性粒细胞外诱捕网是由中性粒细胞释放出的一种细丝状结构，其中包含DNA、组蛋白颗粒以及各种细胞内和细胞外分子。
中性粒细胞外诱捕网的形成主要依赖于一系列分子和信号通路的激活，如肌动蛋白聚合、ROS（Reactive Oxygen Species）产生等。
中性粒细胞外诱捕网在抵御病原微生物、调控炎症反应、促进血液凝块形成等方面具有重要功能。
二、中性粒细胞外诱捕网与炎症性肠病的关系近年来的研究表明，中性粒细胞外诱捕网在炎症性肠病的发生和发展中起到了重要作用。
首先，炎症性肠病患者中中性粒细胞外诱捕网的水平明显升高，且与炎症程度呈正相关。
其次，中性粒细胞外诱捕网参与了炎症性肠病的免疫调控过程，通过释放抗菌肽和相关细胞因子，调控了炎症反应的平衡。
此外，中性粒细胞外诱捕网的形成还可以导致肠道上皮屏障的破坏，加剧炎症性肠病的程度。
三、中性粒细胞外诱捕网与炎症性肠病的调控机制中性粒细胞外诱捕网与炎症性肠病之间的调控机制涉及多个信号通路和细胞因子的参与。
研究发现，IL-17和TNF-α等炎症因子能够诱导中性粒细胞外诱捕网的形成，并增强其杀菌活性。
另外，炎症性肠病患者中一些关键的信号通路如NLRP3炎症小体和Toll样受体通路的活化也与中性粒细胞外诱捕网的形成密切相关。
免疫细胞在缺血性脑卒中炎症反应中作用的研究进展
缺血性脑卒中（ischemic stroke，
IS）是全球第二大
［1］
死亡原因，也是导致残疾的主要原因 。根据血流减
少的严重程度将缺血脑组织分为缺血核心和半暗带。
缺血核心神经元在几分钟内迅速发生死亡，
所致神经
死核心神经元发生坏死，
释放损伤相关分子模式分子
（danger associated molecular pattern molecules，
·758·
化学信号，向缺血核心和半暗带聚集。在动物大脑
中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO）
模型中，小胶质细胞在缺血 1 h 后即可在缺血半暗带
中被检测到，并在缺血 2~4 h 到达缺血核心，再灌注
子，来破坏 M1 型小胶质细胞的功能，或增加诱导小
胶质细胞向 M2 型转化的细胞因子水平，可以限制炎
［9］
胶质细胞再生和轴突重塑等 。小胶质细胞的极化
复阶段，胶质瘢痕可能会阻碍轴突再生，从而降低功
规 律 在 小 鼠 MCAO 模 型 中 被 初 步 验 证 。 在 小 鼠
能结果［15］。
1 d 就出现在缺血半暗带，在 3~5 d 达到高峰，7 dபைடு நூலகம்开
其偶联的细胞内分子的变化，并通过其受体的激活
增加，并持续升高至缺血后 14 d。以上实验表明，在
IS 发生后，缺血核心和半暗带的损伤细胞产生
扩散［7］。
能，活化的小胶质细胞还可极化为促炎表型（M1 型）
或抗炎表型（M2 型）。经典活化的 M1 型小胶质细胞
稳态。
和释放 DAMPs、细胞因子和活性氧，激活星形胶质
细胞的受体并改变其表型，从而诱导“反应性星形胶
中性粒细胞胞外诱捕网及其在肺部炎症性疾病中的作用研究进展
种杀菌方式，即中性粒细胞胞外诱捕网（ＮＥＴｓ）。ＮＥＴｓ 主要由组蛋白、ＤＮＡ 和弹性蛋白酶以及髓过氧化物酶
（ＭＰＯ）等酶类构成，其形成和降解受多种因素的影响，形成过程受多种信号通路的调控。ＮＥＴｓ 是把“双刃剑”，其
形成和降解失衡可影响疾病的最终转归。异常形成的ＮＥＴｓ 参与急性肺损伤／ 急性呼吸窘迫综合征、慢性阻塞性肺
及髓过氧化物酶（ＭＰＯ）等酶类构成，在机体抗感染 １ ＮＥＴｓ 的形成、降解与信号通路
防御过程中发挥至关重要的作用［１］。当机体受到 １． １ ＮＥＴｓ 的形成与降解 ＮＥＴｓ 的形成与降解过
病原微生物入侵时，ＮＥＴｓ 可以借助于其特殊的以 程复杂，目前仍未完全阐明。研究发现，诸多因素可
ＤＮＡ 为主体的纤维丝网状结构来快速、有效的捕获 以诱导中性粒细胞形成ＮＥＴｓ，如病原微生物（细菌、
病原体，限制炎症扩散，发挥强大的免疫防御等功 病毒等）、１２十四酸佛波酯１３乙酸盐（ＰＭＡ）、脂多
能［２］。最新研究发现，ＮＥＴｓ 与炎症相关性疾病、自 糖（ＬＰＳ）、白细胞介素８（ＩＬ８）、高迁移率族蛋白Ｂ１
身免疫性疾病、肿瘤等的发生发展过程密切相关，已 （ＨＭＧＢ１）等［６～８］。最新研究发现，血清淀粉样蛋白
ｕｌｉｎ ｉｎ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｄｕｒｉｎｇ ｃｏｒｎｅａｌ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｗｏｕｎｄ
［］ ， ， （）： ｈｅａｌｉｎｇ Ｊ ． Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ ２０１２ ５３ ４ ２４１４． ［ ］ ， ， ， ２５ Ｖａｌｌｉèｒｅｓ Ｎ Ｂａｒｒｅｔｔｅ Ｂ Ｗａｎｇ ＬＸ ｅｔ ａｌ． Ｂｅｔａｃｅｌｌｕｌｉｎ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ
［］ ， ， （ ）： ＴＧＦα Ｊ ． Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ ２０１１ ４１２ １ １０９
中性粒细胞胞外诱捕网在肝移植术后并发症诊疗中的作用
· 综述·中性粒细胞胞外诱捕网在肝移植术后并发症诊疗中的作用刘彦尧 秦小琰 吴忠均【摘要】 肝移植术后并发症的防治对于维护移植肝功能，改善移植受者预后至关重要。
中性粒细胞胞外诱捕网（NET ）是由中性粒细胞激活后释放到胞外的一种以DNA 为骨架，多种组蛋白和颗粒蛋白构成的纤维网状结构，研究表明肝移植术后供肝内中性粒细胞激活和NET 的释放参与了包括缺血-再灌注损伤、急性排斥反应、急性肝衰竭和肝细胞癌复发在内的多种肝移植相关并发症的发生。
本文将重点探讨NET 对肝移植术后并发症的影响，详述NET 作为肝移植术后并发症防治潜在靶点的研究进展，以期为肝移植受者术后并发症的防治提供参考，提高临床肝移植疗效，改善肝移植受者预后。
【关键词】 肝移植；中性粒细胞胞外诱捕网；缺血-再灌注损伤；急性排斥反应；急性肝衰竭；肝细胞癌；肽基精氨酸脱亚胺酶4（PAD4）；髓过氧化物酶（MPO ）【中图分类号】 R617, R392.12 【文献标志码】 A 【文章编号】 1674-7445（2023）05-0015-09The role of neutrophil extracellular trap in the diagnosis and treatment of complications after liver transplantation Liu Yanyao *, Qin Xiaoyan, Wu Zhongjun. *Department of Hepatobiliary Surgery , the First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University , Chongqing 400016, ChinaCorresponding author: Wu Zhongjun, Email: **************【Abstract 】 Prevention and treatment of complications after liver transplantation play a significant role in maintaining liver graft function and improving clinical prognosis of the recipients. Neutrophil extracellular trap (NET) are fibrous net-like structures composed of DNA as the skeleton and histones and granular proteins released by activated neutrophils. Studies have shown that the activation of neutrophils and the release of NET in donor liver after liver transplantation are involved in the incidence of multiple liver transplantation-related complications including ischemia-reperfusion injury, acute rejection, acute liver failure and recurrence of hepatocellular carcinoma, etc . In this article, the effect of NET on the complications after liver transplantation was mainly assessed, and research progress on NET as a potential target for the prevention and treatment of complications after liver transplantation was reviewed, aiming to provide reference for the prevention and treatment of complications after liver transplantation, enhance clinical efficacy of liver transplantation and improve clinical prognosis of the recipients.【Key words 】 Liver transplantation; Neutrophil extracellular trap; Ischemia-reperfusion injury; Acute rejection;Acute liver failure; Hepatocellular carcinoma; Peptide arginine deiminase 4 (PAD 4); Myeloperoxidase (MPO)DOI: 10.3969/j.issn.1674-7445.2023093基金项目：国家自然科学基金（82170666）；重庆医科大学附属第一医院博士后培育项目（CYYY-BSHPYXM-202303）作者单位： 400016 重庆，重庆医科大学附属第一医院肝胆外科（刘彦尧、吴忠均）；重庆医科大学附属儿童医院渝中院区普通创伤外科（秦小琰）作者简介：刘彦尧（ORCID ：0000-0002-2130-2716），博士研究生，住院医师，研究方向为肝移植、肝移植术后免疫损伤，Email ：*********************通信作者：吴忠均（ORCID ：0000-0002-1627-0633），博士研究生导师，主任医师，研究方向为肝移植、肝移植术后免疫损伤，Email: **************第 14 卷 第 5 期器官移植Vol. 14 No.5 2023 年 9 月Organ Transplantation Sep. 2023 肝移植是各种终末期肝病的唯一有效治疗手段[1]。
低密度中性粒细胞介导的中性粒细胞胞外诱捕网在SLE的作用机制研究进展
低密度中性粒细胞介导的中性粒细胞胞外诱捕网在SLE的作用机制研究进展王旋; 付萍【期刊名称】《《皮肤病与性病》》【年(卷),期】2019(041)005【总页数】4页(P652-655)【关键词】低密度中性粒细胞; 中性粒细胞胞外诱捕网; 系统性红斑狼疮; 靶向治疗【作者】王旋; 付萍【作者单位】昆明医科大学第二附属医院云南昆明650101【正文语种】中文【中图分类】R593.24+1; R751.02中性粒细胞是人体血液中计数最多的白细胞，约占外周血白细胞总数的50%～70%，具有趋化、吞噬、杀菌等多种生物学功能，是宿主防御病原体的第一道防线，其杀灭微生物的作用受多种方式调节，例如通过脱颗粒释放中性粒细胞颗粒中的抗菌肽〔包括髓过氧化物酶（Myeloperoxidase，MPO）、中性粒细胞弹性蛋白酶（Neutrophil elastase，NE）、基质金属蛋白酶〕，通过产生活性氧（Reactive oxygen species，ROS）在溶酶体里吞噬和降解细菌，以及通过释放一种称为中性粒细胞胞外诱捕网（Neutrophil extracellular traps，NETs）的由染色质与颗粒肽结合形成的网状组织，从而固定和清除微生物并激活其他免疫细胞[1]。
中性粒细胞形成NETs结构并发生自身死亡的过程被称为NETosis，中性粒细胞和NETosis在健康个体的先天性免疫防御中具有重要的生理作用。
然而如果由于NETs的过量产生或吞噬系统障碍而导致清除功能下降，生物个体将面临大量的化学性和酶促修饰，继而产生免疫学上的新表位，易于导致抗组蛋白、抗DNA 抗体、抗中性粒细胞胞质抗体（Antineutrophil cytoplasmic antibodies，ANCA）的生成。
系统性红斑狼疮（Systemic lupus erythematosus，SLE）是一种以致病性自身抗体和免疫复合物形成并介导器官、组织损伤的自身免疫病。
自噬在脂多糖诱导的A549细胞炎症反应中的作用及机制研究
自噬在脂多糖诱导的A549细胞炎症反应中的作用及机制研究时佳;陶慧娴;郭艳;邹芸苏;王木子;卢志涛;丁溢芳;许卫东;周晓光【期刊名称】《中国当代儿科杂志》【年(卷),期】2022(24)10【摘要】目的探讨自噬在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人肺泡上皮A549细胞炎症反应中的作用及机制。
方法用LPS刺激A549细胞建立炎症反应模型,按浓度(0、1、5、10μg/mL)和时间(0、4、8、12、24h)分组(各组n=3)。
用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)处理细胞,分为对照组、LPS 组、3-MA组、3-MA+LPS组(各组n=3);用自噬激动剂雷帕霉素(rapamycin,RAPA)处理细胞,分为对照组、LPS组、RAPA组、RAPA+LPS组(各组n=3)。
通过Toll样受体4 (Toll-like receptor 4,TLR4)过表达质粒和siRNA转染A549细胞,实验分为两部分,每部分各分4组(各组n=3):TLR4过表达对照组、TLR4过表达组、TLR4过表达对照+LPS组、TLR4过表达+LPS组;TLR4沉默对照组、TLR4沉默组、TLR4沉默对照+LPS组、TLR4沉默+LPS组。
采用CCK-8法检测细胞存活率,免疫印迹法检测炎症指标(NLRP3、Caspase-1、ASC)、自噬指标(LC3B、Beclin-1、P62)、TLR4蛋白表达水平。
结果1μg/mL浓度的LPS刺激12h后,炎症指标(NLRP3、Caspase-1、ASC)、自噬指标(LC3B、Beclin-1、P62)和TLR4蛋白表达均明显升高并达峰值(P<0.05)。
与LPS组比较,3-MA+LPS组自噬相关蛋白表达降低,炎症相关蛋白表达升高,TLR4蛋白表达上调;RAPA+LPS组自噬相关蛋白表达升高,炎症相关蛋白表达降低,TLR4蛋白表达下调(P<0.05)。
细胞对脂多糖的反应
脂多糖（LPS）是一种内毒素，对细胞反应的具体表现：1.对中性粒细胞的反应：脂多糖能引起人体血液中中性粒细胞的增多。
这是人体对内毒素反应最敏感的指标之一。
亚致热量（Subpyrogenicdose）即可引起中性粒细胞的减少，并伴之以粘连性增加，数小时后，中性粒细胞明显增多。
2.对血小板的影响：对实验动物注射足量的脂多糖后，均能导致动物血液中血小板明显减少，这是由于动物血小板膜上有脂多糖的免疫粘连受体，故易与脂多糖发生结合反应。
但在大剂量注入后，也可引起血小板减少。
3.对单核细胞和巨噬细胞的作用：单核细胞和巨噬细胞对脂多糖很敏感，仅ng量就可引起反应。
脂多糖作用于巨噬细胞和单核细胞后，能促使细胞内非溶酶体酶（如乳酸脱氢酶、亮氨酸萘胺酶）和酸性磷酸酶、β-N-乙酰葡萄胺酶等溶酶体酶的增加，增强吞噬和巨噬细胞的杀菌能力。
4.对B淋巴细胞的作用：脂多糖直接作用于B淋巴细胞，增加DNA合成，从而促使B淋巴细胞分裂，故脂多糖为B淋巴细胞的非特异性有丝分裂原。
脂多糖具有免疫原性，即能够刺激B淋巴细胞产生特异性抗体。
5.对细胞信号转导的影响：当脂多糖与这些受体结合时，会引起一系列的细胞信号反应，如细胞膜通透性改变、促炎细胞因子释放等。
这些信号反应对于身体对抗感染、细胞增殖和分化、免疫应答等过程至关重要。
其次，脂多糖的作用机制还包括信号转导过程。
一旦脂多糖与受体结合，会启动一系列的细胞信号转导途径。
6.对MPS系统的影响：MPS系统是ET作用的主要靶细胞，是产生ET耐受的主要效应细胞。
主要表现为基因和蛋白表达水平的改变，细胞因子、细胞表面抗原、转录因子和信号转导相关受体的表达水平、细胞周期和凋亡相关蛋白、细胞信号转导分子等发生改变（并非一定是减少）。
中性粒细胞外诱捕网与炎症性肠病关系的研究进展
中性粒细胞外诱捕网与炎症性肠病关系的研究进展①马雪妮许慧梅程龙杨一蕃张德奎（兰州大学第二医院消化内科，兰州730030）中图分类号R574文献标志码A文章编号1000-484X（2021）23-2937-05［摘要］中性粒细胞外诱捕网（NETs）是中性粒细胞受到刺激后释放到胞外的一种以DNA为骨架，其间镶嵌多种颗粒蛋白、蛋白水解酶、抗菌肽及组蛋白等物质的网状结构。
随着对NETs研究的深入，其在自身免疫/炎症性疾病发生发展过程中的调控作用近年来受到广泛关注，而炎症性肠病作为胃肠道自身炎症性疾病，其具体发病机制尚未完全阐明。
本文重点就NETs与炎症性肠病关系的最新研究进展进行综述，旨在为炎症性肠病的发病机制和治疗方案提供新思路。
［关键词］中性粒细胞外诱捕网；炎症性肠病；进展Advances in study of neutrophil extracellular traps and inflammatory bowel diseaseMA Xue-Ni，XU Hui-Mei，CHENG Long，YANG Yi-Fan，ZHANG De-Kui.Department of Gastroenterology，the Second Hospital of Lanzhou University，Lanzhou730030，China［Abstract］Neutrophil extracellular traps（NETs）is a kind of DNA-based skeleton released by neutrophils to outside of the cell，in which a variety of granular proteins，proteolytic enzymes，antibacterial peptides，histones，and other network structures are embedded.With the in-depth study of NETs，its regulatory role in occurrence and development of autoimmune or autoinflammation diseases has received widespread attention in recent years.As an autoinflammation disease of the gastrointestinal tract，the specific pathogenesis of inflammatory bowel disease is not completely clarified.This article focuses on the latest research progress on relation‐ship between NETs and inflammatory bowel disease，and aims to provide new ideas for the pathogenesis and treatment of inflammatory bowel disease.［Key words］Neutrophil extracellular traps；Inflammatory bowel disease；Progress炎症性肠病（inflammatory bowel disease，IBD）是常见的慢性、反复发作性、非特异性胃肠道自身炎症性疾病，主要包括克罗恩病（Crohn's disease，CD）和溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）［1］。
脓毒症时中性粒细胞胞外诱捕网的研究进展完整版
脓毒症时中性粒细胞胞外诱捕网的研究进展完整版脓毒症（sepsis）是由感染引起的全身炎症反应，严重时可导致多器官功能衰竭、脓毒性休克，甚至死亡。
当前，脓毒症的发病率和病死率仍然居高不下，在美国，脓毒症在危重患者致死因素中居首位，每年有75 万新增脓毒症患者，而其中又有21 万患者因脓毒症而死亡。
脓毒症的发病机制十分复杂，至今仍未完全阐明，脓毒症早期，感染部位招募大量中性粒细胞，通过吞噬病原菌、脱颗粒释放蛋白酶等物质来达到杀菌的作用。
此外，中性粒细胞还具有另外一个特殊的效应机制，即“中性粒细胞胞外诱捕网”（NETs），使得中性粒细胞在胞外仍然具有有效的捕获及杀伤病原菌的能力，从而对机体产生重要的保护作用。
但是近年来的研究表明，脓毒症时NETs 的产生也可以导致病情加重。
现对NETs 的形成、结构、杀菌机制及其对脓毒症的作用进行系统阐述，以进一步探讨脓毒症的发病机制，为脓毒症的治疗提供新的思路和方向。
1 NETs 的形成2004 年，Brinkmann 等首次报道了中性粒细胞特有的杀菌机制——NETs。
NETs 的产生是中性粒细胞特殊的细胞死亡过程，这种过程称作NETosis ［9］。
NETs 主要由成熟的中性粒细胞产生，未成熟的中性粒细胞因为缺少了对刺激信号的反应能力而不能形成NETs ［10］。
研究表明，革兰阴性菌、革兰阳性菌以及真菌等均可以引发中性粒细胞产生NETs。
脓毒症时，在多种刺激物的作用下中性粒细胞活化，通过还原型辅酶Ⅱ（NADPH）氧化酶途径产生大量活性氧簇（ROS），进而启动NETosis ［11］。
中性粒细胞内嗜天青颗粒中储存的中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）、髓过氧化物酶（MPO）转位至细胞核内，NE 降解接头蛋白H1 及核心组蛋白（histone），MPO 则对此过程具有促进作用。
此外，在精氨酸脱亚氨酶4（PAD4）的作用下，组蛋白H3 精氨酸残基瓜氨酸化，组蛋白H3 构象改变。
脂多糖对大鼠肺泡巨噬细胞分泌一氧化氮和氧化应激的影响
脂多糖对大鼠肺泡巨噬细胞分泌一氧化氮和氧化应激的影响杨学东;张新勇;赵怀兵;尹明;钱小顺;王士雯【期刊名称】《中华老年多器官疾病杂志》【年(卷),期】2007(006)003【摘要】目的探讨细菌内毒素脂多糖(LPS)对SD大鼠肺泡巨噬细胞产生一氧化氮(NO)和氧化应激的影响.方法采用支气管肺泡灌洗和细胞差速贴壁的方法分离大鼠肺泡巨噬细胞(AM),分别测定AM培养上清液NO含量、一氧化氮合酶(NOS)活性、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性.结果在5,10,20,50mg/LLPS分别干预下,大鼠AM培养上清液NO含量、NOS活性和MDA含量均显著升高,SOD活性显著降低,并且具有浓度依赖性.结论 LPS促进大鼠AM分泌NO,并诱导AM脂质过氧化损伤,这可能是内毒素诱发肺部炎症反应不易控制和急性肺损伤的机制之一.【总页数】3页(P189-191)【作者】杨学东;张新勇;赵怀兵;尹明;钱小顺;王士雯【作者单位】100853,北京市,解放军总医院老年心血管病研究所;100853,北京市,解放军总医院老年心血管病研究所;100853,北京市,解放军总医院老年心血管病研究所;100853,北京市,解放军总医院老年心血管病研究所;100853,北京市,解放军总医院老年心血管病研究所;100853,北京市,解放军总医院老年心血管病研究所【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.氯胺酮对脂多糖诱导的大鼠肺泡巨噬细胞氧化应激的影响 [J], 顾达民;陈宇;张小宝;付诚章2.山莨菪碱对脂多糖诱导的大鼠肺泡巨噬细胞氧化应激的影响 [J], 杨学东;张新勇;赵怀兵;钱小顺;尹明;王士雯3.氯胺酮对脂多糖诱发的大鼠肺泡巨噬细胞一氧化氮及氧自由基生成的影响 [J], 张小宝;朱敏敏;黄海慧;傅诚章4.氯胺酮对脂多糖诱导的大鼠肺泡巨噬细胞氧化应激的影响 [J], 顾达民; 陈宇; 张小宝; 付诚章5.氯胺酮对脂多糖诱导的大鼠肺泡巨噬细胞氧化应激的影响 [J], 顾达民; 陈宇; 张小宝; 付诚章因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
中性粒细胞细胞外诱捕网的研究进展
细 胞细 胞外 诱 捕 网 （ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｔｒａｐｓ，ＮＥＴｓ）。该 机 制 主 要 通 过 活 性 氧 和 肽 酰 基 精 氨 酸 脱 亚 氨 酶 ４等
影 响 因 子刺 激 中 性 粒 细 胞 形 成 以 ＤＮＡ 为 骨 架 的 网状 结 构 ，内含 有 多 种 蛋 白 酶 ，能 非 特 异 性 捕 获 杀 伤 病 原 体 ，还 能
中 图 分 类 号 ：Ｒ３９２．１
文 献 标 识 码 ：Ａ
文 章 编 号 ：１６７１—７２３６（２０１８）０１ ０２０６ ０６
Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｎ Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ Ｔｒａｐｓ
ＺＨＡＮＧ Ｋａｉ ，ＣＨＥＮ Ｈｏｎｇｙｕ ，ＬＩ Ｊｉａｏ。，ＢＡＯ Ｌｉ。，ＤＵＡＮ Ｐｉｎｇ ，ＪＩＡＮＧ Ｎｉｎｇ （１．Ｌｉａｏｎｉｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｚｏｏｎｏｓｉｓ，Ｌｉａｏｎｉｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ
Ｚｏｏｎｏｓｉｓ，Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍ ｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｓｈｅｎｙａｎｇ １ １０８６６，Ｃｈｉｎａ；２．Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｌｉａｏｎｉｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ １ １００４４，Ｃｈｉｎａ）
中至 关 重 要 ，是 构 成 机 体 内抵 御 微 生 物 入 侵 的第 一 道 防 线 。 近 年 来 ，人 们 发 现 中 性 粒 细 胞 除 了经 典 的通 过 胞 吞 作
用 吞 噬病 原 微 生 物 、释 放 嗜天 青 颗 粒 及 产 生 并 分 泌 抑 菌 杀 菌 物 质 外 ，还 具 有 抵 抗 微 生 物 入 侵 的新 机 制 — — 中性 粒
中性粒细胞胞外诱捕网形成的分子机制研究进展
中性粒细胞胞外诱捕网形成的分子机制研究进展①蒋瑶邢艳（川北医学院附属医院检验科，南充637000）中图分类号R392.6文献标志码A文章编号1000-484X（2022）10-1272-06［摘要］中性粒细胞作为固有免疫的一线细胞，其死亡形式-中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）过度形成过程中因释放大量胞内成分而参与包括自身免疫性疾病在内的多种疾病发生。
自身免疫性疾病以自身抗原暴露、免疫耐受缺失为特征，且目前治疗仍以改善症状为主，如能抑制自身抗原产生将为其根治提供新的可能。
本文主要对参与NETs形成的分子进行综述，包括ROS、PAD-4、自噬以及相关信号通路，以期促进NETs相关疾病治疗策略的开发。
［关键词］中性粒细胞胞外诱捕网；分子机制；研究进展Progress on molecular mechanism of neutrophil extracellular traps formationJIANG Yao，XING Yan.Department of Clinical Laboratory，Affiliated Hospital of North Sichuan Medical College，Nanchong637000，China［Abstract］As first-line cells of innate immunity，neutrophils release a large number of intracellular components in process of over-formation of neutrophil extracellular traps（NETs），which participates in occurrence of multiple diseases including autoimmune diseases.Autoimmune diseases are characterized by autoantigen exposure and loss of immune tolerance，whose treatment is still mainly to improve symptoms at present.If production of autoantigens can be inhibited，it will provide a new possibility for cure.This article will review molecules involved in formation of NETs，including ROS，PAD-4，autophagy and its related signal pathways，and aim to promote development of treatment strategies for NETs-related diseases.［Key words］Neutrophil extracellular traps；Molecular mechanism；Progress中性粒细胞是人体内含量最多的固有免疫细胞，通过抵御病原体入侵而在固有免疫中起重要作用，经典杀菌方式包括吞噬和脱颗粒。
巨噬细胞胞外诱捕网诱导成纤维样滑膜细胞活化作用在类风湿关节炎发病中的机制
巨噬细胞胞外诱捕网诱导成纤维样滑膜细胞活化作用在类风湿关节炎发病中的机制黄赛赛;赵成;梁军;卢先艳;王世颖【期刊名称】《实用临床医药杂志》【年(卷),期】2022(26)23【摘要】目的研究巨噬细胞胞外诱捕网(METs)对成纤维样滑膜细胞(FLSs)的作用和相关机制。
方法采用人源单核细胞白血病细胞(THP-1)系体外诱导成巨噬细胞,分别使用脂多糖(LPS)和干扰素γ(IFN-γ)诱导METs形成。
采用Sytox标记外泄的DNA水平;采用Western blot和免疫荧光法检测METs主要蛋白成分NE和MPO。
纯化METs蛋白组分,将人FLSs细胞系分为对照组、METs组、C29组、IAXO-102组和C29+IAXO-102联合干预组,除对照组外,其余组均将纯化的METs 蛋白组分加入FLSs培养液中,C29组同时加入Toll样受体(TLR)2抑制剂C29,IAXO-102组加入TLR4抑制剂IAXO-102,C29+IAXO-102联合干预组同时加入C29和IAXO-102。
24 h后,检测FLSs细胞活力、迁移和侵袭能力。
酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养上清中白细胞介素6(IL-6)、基质金属蛋白酶1(MMP-1)、基质金属蛋白酶3(MMP-3)和基质金属蛋白酶13(MMP-13)水平。
结果LPS诱导METs能力强于IFN-γ,差异有统计学意义(P<0.05);METs蛋白可以显著增强FLSs细胞活力、滑膜细胞迁移和侵袭能力(P<0.05);与对照组相比,METs蛋白处理组上清中IL-6、MMP-1、MMP-3和MMP-13升高,差异有统计学意义(P<0.05)。
C29和IAXO-102单用或联用干预能显著降低滑膜细胞的活力、迁移和侵袭能力(P<0.05);与METs组相比,C29+IAXO-102联合干预组上清中IL-6、MMP-1、MMP-3和MMP-13水平下降,差异具有统计学意义(P<0.05),且IAXO-102抑制能力强于C29(P<0.05)。
NETs与急性呼吸窘迫综合征的研究进展
( 重庆医科大学附属第二医院 呼吸与危重症医学科ꎬ 重庆 ４０００１０)
摘要:中性粒细胞胞外诱捕网( ＮＥＴｓ) 是一种新型抗菌形式ꎬ但过量的 ＮＥＴｓ 也能通过直接或者间接的方式造成肺
损伤ꎬ促进炎性反应ꎮ ＮＥＴｓ 与急性呼吸窘迫综合征( ＡＲＤＳ) 病情进展息息相关ꎬ可为其治疗带来新的线索ꎮ
１０４８
基础医学与临床 Ｂａｓｉｃ ＆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ
研究热点ꎮ 以下为 ＮＥＴｓ 与 ＡＲＤＳ 的研究进展综述ꎮ
１ ＮＥＴｓ 概述
在各种病原体、钙离子
[１]
、佛波醇 １２￣十四酸酯￣
１３￣乙酸酯(ｐｈｏｒｂｏｌ １２￣ｍｙｒｉｓｔａｔｅ １３￣ａｃｅｔａｔｅꎬ ＰＭＡ) [２] 、
的前炎性细胞因子的分泌和 Ｍ１ 标志物的上调ꎬＭ２
标志物下调 [９] ꎮ Ｍ１ 型细胞产生的炎性介质 ＩＬ￣１βꎬ
ＴＮＦ￣α 等均能引起 ＮＥＴｓ 的生成ꎮ 在脓毒血症诱导
急性肺损伤大鼠模型中ꎬ可以检测出大量 ＮＥＴｓ 和炎
性介质ꎬ向小鼠注射 ＤＮＡ 酶破坏 ＮＥＴｓ 后ꎬ高迁移率
族蛋 白 Ｂ１ ( ｈｉｇｈ ｍｏｂｉｌｉｔｙ ｇｒｏｕｐ ｐｒｏｔｅｉｎ １ꎬ ＨＭＧＢ１)、
作用ꎮ 髓过氧化物酶会破坏肺泡和支气管上皮细胞
胞质ꎬ具有多种酶ꎬ它能产生中性粒细胞弹性蛋白酶
接损伤肺上皮ꎮ
染色体加速解聚ꎮ 嗜天青颗粒是一种溶酶体ꎬ位于
的 ＤＮＡꎬ中性粒细胞弹性酶具有的细胞毒性也能直
( ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ｅｌａｓｔａｓｅꎬＮＥ) 和髓过氧化物酶( ｍｙｅｌｏｐｅｒ￣
２ ２ ＮＥＴｓ 对肺组织的间接损伤
ＲＯＳ 能够向肽酰基精氨酸脱亚胺酶 ４( ｐｅｐｔｉｄｙｌａｒｇｉｎ￣
胞浆内线粒体DNA在脂多糖诱导肺泡巨噬细胞炎症反应时的变化
胞浆内线粒体DNA在脂多糖诱导肺泡巨噬细胞炎症反应时的变化曾振国;钱克俭;刘芬;李勇;黄彩雪;邓文刚【期刊名称】《南昌大学学报（医学版）》【年(卷),期】2014(000)001【摘要】目的：观察胞浆内线粒体 DNA（mitochondrial DNA，mtDNA）在脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导的NR8383肺泡巨噬细胞炎症反应时的动态变化，以初步探讨胞浆内 mtDNA在肺泡巨噬细胞炎症反应中的作用。
方法将体外培养的大鼠肺泡巨噬细胞（NR8383）用终浓度为1μg·mL-1的 LPS刺激0、3、6、12和24 h后收集细胞培养上清液及细胞，采用差速离心法分离胞浆中的mtDNA，实时荧光定量聚合酶链反应（real-time PCR）检测胞浆中mtDNA表达情况，采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞培养上清液中 IL-1β蛋白水平。
结果 LPS刺激后3、6、12和24 h IL-1β及胞浆中mtDNA的含量均显著高于0 h组（P＜0．01）。
结论 LPS刺激肺泡巨噬细胞后，胞浆中mtDNA含量升高，推测其可能参与了肺泡巨噬细胞的炎症反应。
%Objective To observe the dynamic changes in cytoplasmic mitochondrial DNA (mtDNA)in lipopolysaccharide (LPS)-induced alveolar macrophage inflammatory response,and to explore the role of mtDNA in alveolar macrophage inflammatory response.Methods Alveolar macrophages(NR8383)were stimulated with LPS(1μg·mL-1)in vitro.Culture supernatants and cells were collected after treatment for 0,3,6,12 and 24 hours,and cytoplasmic mtDNA was isolated by differential centrifugation.The expression of mtDNA wasdetected by real-time PCR, and the level of interleukin-1β(IL-1β)in the supernatants was measured by ELISA.Results The levels of IL-1βin supernatants and mtDNA in cytoplasm after LPS stimulation for 3,6,12 and 24 hours were significantly higher than those at the beginning of LPS stimulation (P<0.01).Con-clusion The expression of mtDNA in the cytoplasm of alveolar macrophages increases after stim-ulation with LPS,suggesting that mtDNA may be involved in alveolar macrophage inflammatory response.【总页数】4页(P4-6,26)【作者】曾振国;钱克俭;刘芬;李勇;黄彩雪;邓文刚【作者单位】南昌大学第一附属医院重症医学科，南昌 330006;南昌大学第一附属医院重症医学科，南昌 330006;南昌大学第一附属医院重症医学科，南昌330006;南昌大学第一附属医院肿瘤科，南昌 330006;南昌大学第一附属医院重症医学科，南昌 330006;南昌大学第一附属医院重症医学科，南昌 330006【正文语种】中文【中图分类】R-332【相关文献】1.MicroRNA-132转染对脂多糖诱导的肺泡巨噬细胞炎症反应的作用 [J], 蓝琳友;洪溪屏;蔡元晖2.线粒体DNA诱导肺泡巨噬细胞炎症反应的实验研究 [J], 刘芬;曾振国;李勇;黄彩雪;赵宁;钱克俭3.线粒体DNA诱导肺泡巨噬细胞炎症反应的实验研究 [J], 刘芬;曾振国;李勇;黄彩雪;赵宁;钱克俭;4.胞浆内线粒体DNA在脂多糖诱导肺泡巨噬细胞炎症反应时的变化 [J], 曾振国;钱克俭;刘芬;李勇;黄彩雪;邓文刚;5.中性粒细胞胞外诱捕网放大脂多糖诱导的肺泡巨噬细胞炎症反应 [J], 赵宁;李勇;邵强;杨云;陈家泉;彭巍;胡世林;钱克俭;刘芬因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
中性粒细胞胞外诱捕网对单核细胞分泌炎症介质的影响
中性粒细胞胞外诱捕网对单核细胞分泌炎症介质的影响贾庆龄;杨琨;唐莎;张静波;袁发焕;张莹【期刊名称】《中国中西医结合肾病杂志》【年(卷),期】2017(018)005【摘要】目的:探讨中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)对单核细胞分泌炎症介质的影响.方法:采用健康人中性粒细胞体外诱导NETs形成,用该NETs刺激单核细胞,LEGENDplex人炎症因子试剂盒检测培养上清多种炎症介质的变化.结果:单核细胞与NETs共培养12 h后,NETs组与对照组相比,IL-1β诱生量分别为(97.60±60.11) pg/ml、＜1.17 pg/ml,IFN-α诱生量分别为(208.90±77.38)pg/ml、＜1.17 pg/ml,TNF-α诱生量分别为(218.88 ±86.27) pg/ml、＜0.17 pg/ml,MCP-1诱生量分别为(1 063.25±740.01)pg/ml、(157.16 ±3.86)pg/ml,IL-6诱生量分别为(67.76±15.51) pg/ml、(2.76±0.47)pg/ml,差异均具有统计学意义(P＜0.05),IL-10、IL-12表达水平差异无统计学意义.结论:NETs 能显著促进单核细胞分泌IL-1β、IFN-α、TNF-α、MCP-1、IL-6.%Objective:Oevaluate the effect of neutrophil extracellular traps (NETs) on the human monocytes proinflammationtory cytokinesrelease.Methods:Neutrophils isolated from healthy human peripheral blood were stimulated with phorbol myristate acetate(PMA) to induce NETs production.After stimulated with NETs,the concentrations of interleukin-1β (IL-1β),interferon -α (IFN-α),tumor necrosis factor-α (TNF-a),monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1),interleukin-6 (IL-6),interleukin-10 (IL-10) and interleukin-12 (IL-12) in supernatant wereanalyzed using LEGENDplex reagents.Results:After twelve hours' culture,the proinflammatory cytokines' secretion of monocytes stimulated by NETs was significantly higher than that non-stimulated byNETs,including IL-1β [(97.60 ± 60.11) pg/ml vs ＜ 1.17 pg/ml],IFN-α [(208.90 ± 77.38) pg/ml vs ＜1.17 pg/ml],TNF-α[(218.88 ±86.27)pg/ml vs ＜0.17 pg/ml],MCP-1[(1 063.25 ±740.01)pg/ml vs(157.16 ±3.86)pg/ml] and IL-6 [(67.76 ±15.51) pg/ml vs 2.76±0.47)pg/ml],P ＜0.05.IL-10 and IL-12 levels in both groups had no significant difference.Conclusion:NETs can significantly increase proinflammationtory cytokines' secretion of monocytes,including IL-1β,IFN-α,TNF-o,MCP-1 and IL-6.【总页数】5页(P389-392,后插1)【作者】贾庆龄;杨琨;唐莎;张静波;袁发焕;张莹【作者单位】第三军医大学新桥医院肾内科重庆 400037;第三军医大学新桥医院肾内科重庆 400037;第三军医大学新桥医院肾内科重庆 400037;第三军医大学新桥医院肾内科重庆 400037;第三军医大学新桥医院肾内科重庆 400037;第三军医大学新桥医院肾内科重庆 400037【正文语种】中文【相关文献】1.糖尿病创面中性粒细胞胞外诱捕网生成增加对巨噬细胞黑色素瘤缺乏因子2炎症体的影响 [J], 刘丹; 郜敏; 余天漪; 杨沛琅; 张萌; 张杰; 刘琰; 章雄; 施燕2.中性粒细胞胞外诱捕网及其参与的免疫炎症性疾病研究进展 [J], 刘春晓;胡庆华3.中性粒细胞胞外诱捕网及其参与的免疫炎症性疾病研究进展 [J], 刘春晓;胡庆华4.异丙酚对脓毒症小鼠中性粒细胞胞外诱捕网生成和炎症因子表达的影响 [J], 杨鹤;郑莉;张晔;佟家祺;岳郅劼5.中性粒细胞胞外诱捕网在炎症性疾病中的研究进展 [J], 李福兴;张自华;李雪梅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
细胞粘附分子与肺部炎症性疾病
细胞粘附分子与肺部炎症性疾病
谢敏
【期刊名称】《国外医学：呼吸系统分册》
【年(卷),期】1996(016)003
【摘要】细胞粘附分子（ＣＡＭｓ）是一类能介导细胞与细胞、细胞与细胞外基
质相互粘附的糖蛋白。
在炎症反应中，介导白细胞与内皮细胞的粘附及跨内皮转移。
本文简要综述粘附分子，在维持正常肺结构及参与肺部炎症性疾病发病机制中的作用。
【总页数】4页(P159-162)
【作者】谢敏
【作者单位】华西医科大学附属第一医院
【正文语种】中文
【中图分类】R563.190.2
【相关文献】
1.PARP-1在肺部炎症性疾病中的作用研究进展 [J], 罗超;喻鹏久
2.HMGB1在肺部炎症反应性疾病中的研究进展 [J], 张琳琳;刘艳茹
3.中性粒细胞胞外诱捕网及其在肺部炎症性疾病中的作用研究进展 [J], 杨霞;宁宗
4.白细胞介素36与肺部炎症性疾病的相关性研究 [J], 张绍开;李富增;赵佳慧;许媛媛
5.姜黄素在肺部炎症性疾病中的免疫调节作用 [J], 顾艳利;宋勇;张方
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中性粒细胞胞外诱捕网放大脂多糖诱导的肺泡巨噬细胞炎症反应赵宁;李勇;邵强;杨云;陈家泉;彭巍;胡世林;钱克俭;刘芬【摘要】Objective To observe the amplification effect of neutrophil extracellular traps (NETs) on inflammatory response ofalveolar macrophages induced by lipopolysaccharide (LPS). Methods Neutrophils were isolated and extracted from peripheral bloodof C57 BL/6 mice by using a mouse peripheral blood neutrophil separation kit. NETs were induced by PMA (100 nmol/L). Observa-tion of NETs by fluorescence microscopy and scanning electron microscopy. NR8383 rat alveolar macrophages were cultured invitro and divided into ⑴controlgroup:adding equal volume PBS;⑵NETs group:adding prepared (1.7×106 cell/ml) NETs;⑶LPSgroup: adding 1 mg/L LPS; ⑷LPS+NETs group:LPS combined with NETs co-stimulation. All groups were stimulated for 12 hours.Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was used to detect the contents of interleukin-1β (IL-1β) and tumor necrosis fac-tor-α (TNF-α) in the supernatant of cells. Results Fluorescence microscopy showed that the nucleus of neutrophils in the controlgroup was complete, and there was no extracellular co-localized reticular structure between DNA and NETs. DNA reticular struc-ture could be seen in PMA stimulation group and co-localized with NETs. Scanning electron microscopy also showed that thechromatin of neutrophils was released into extracellular structure, suggesting that the formation of NETs was successfully inducedby PMA.LPS and NETs were used to stimulate alveolar macrophages for 12 hours respectively, the contents of IL-1β and TNF-αin supernatant of alveolar macrophages were significantly higher than those in control group.The contents of IL-1β in supernatantof LPS+NETs group were significantly higher than those of LPS group (P＜0.05). There was no significant difference in TNF-α insupernatant between LPS +NETs group and LPS group (P＞0.05). Conclusion NETs can amplify LPS-induced inflammation inalveolar macrophages. NETs increased LPS-induced alveolar macrophage inflammatory factor release, suggesting that NETs canamplify LPS-induced alveolar macrophage inflammatory response.%目的观察中性粒细胞胞外诱捕网 (NETs) 对脂多糖 (LPS) 诱导的肺泡巨噬细胞炎症反应的放大作用.方法采用小鼠外周血中性粒细胞分离试剂盒分离提取C57BL/6小鼠外周血中性粒细胞.采用佛波酯 (PMA) (100nmol/L) 诱导中性粒细胞形成NETs, 采用荧光显微镜及扫描电子显微镜观察NETs.体外培养大鼠肺泡巨噬细胞NR8383, 分为⑴对照组:加入等体积PBS;⑵NETs组:加入制备好的 (1.7×106个/ml) NETs;⑶LPS组:加入1mg/L LPS;⑷LPS+NETs组:LPS联合NETs共刺激, 各组均刺激12h.采用酶联免疫吸附试验 (ELISA) 检测细胞上清液中白细胞介素-1β (IL-1β) 、肿瘤坏死因子-α (TNF-α) 含量.结果荧光显微镜下观察示对照组中性粒细胞核形态完整, 无DNA与NETs的胞外共定位网状结构, PMA刺激组可见DNA网状结构, 且与NETs共定位;扫描电子显微镜下也观察到中性粒细胞染色质呈网状结构释放至胞外, 提示PMA诱导NETs形成成功.采用LPS、NETs分别刺激肺泡巨噬细胞12h, 细胞上清液中的IL-1β、TNF-α含量均较对照组显著升高, LPS+NETs组上清液中的IL-1β含量较LPS 组显著升高 (P＜0.05), 上清液中的TNF-α较LPS组相比差异无统计学意义 (P＞0.05).结论 NETs增加LPS诱导的肺泡巨噬细胞炎症因子释放, 提示NETs可以放大LPS诱导的肺泡巨噬细胞炎症反应.【期刊名称】《江西医药》【年(卷),期】2019(054)001【总页数】4页(P23-26)【关键词】中性粒细胞胞外诱捕网;肺泡巨噬细胞;炎症反应白细胞介素-1β;肿瘤坏死因子-α【作者】赵宁;李勇;邵强;杨云;陈家泉;彭巍;胡世林;钱克俭;刘芬【作者单位】南昌大学第一附属医院重症医学科, 南昌 330006;南昌大学第一附属医院肿瘤科, 南昌 330006;南昌大学第一附属医院重症医学科, 南昌 330006;南昌大学第一附属医院重症医学科, 南昌 330006;南昌大学第一附属医院重症医学科, 南昌 330006;南昌大学第一附属医院重症医学科, 南昌 330006;南昌大学第一附属医院重症医学科, 南昌 330006;南昌大学第一附属医院重症医学科, 南昌 330006;南昌大学第一附属医院重症医学科, 南昌 330006【正文语种】中文【中图分类】R-332中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）是中性粒细胞受到炎症刺激后，细胞核内组分如解聚的DNA、组蛋白和颗粒蛋白等释放至细胞外形成的一种网状纤维结构[1]。
NETs最初被认为是抵抗病原微生物的一种有效策略，它通过丝状纤维结构和高浓度的抗菌物质抓捕并杀灭病原体，能够预防病原体的传播[2]，但越来越多的研究显示NETs也会造成宿主的自身免疫和组织损伤等不利影响，由于NETs在肺泡中极易扩散，所以NETs的致病性在肺部炎症疾病中尤为显著[3-5]。
Grégoire等[6]发现ARDS患者与正常人相比，肺泡灌洗液中含有更多的NETs，并会对支气管上皮细胞造成损伤，对ARDS的进展及预后造成不良影响。
众所周知，肺泡巨噬细胞在维持肺部内环境稳定和抵抗病原微生物侵袭中发挥关键作用[7]。
当外来微生物入侵时，肺泡巨噬细胞被过度激活而失控性释放炎症因子，是脓毒症肺损伤的根本原因[8，9]。
已有研究表明[10-14]，在创伤、失血性休克以及脓毒血症等病理条件下，中性粒细胞和巨噬细胞之间的交互作用是调控炎症反应的一个重要因素，如Warnatsch等[15]证实人血中性粒细胞来源的NETs能够诱导单核巨噬细胞产生更多的细胞因子，从而促进炎症以及动脉粥样硬化的进展。
然而，NETs能否放大肺泡巨噬细胞炎症反应，加重脓毒症肺损伤未见报道。
本研究采用佛波酯(PMA)诱导小鼠外周血中性粒细胞形成NETs，将NETs加入脂多糖（LPS）预刺激的肺泡巨噬细胞中，观察细胞上清液中白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的变化，探讨NETs对肺泡巨噬细胞炎症反应的放大作用，为治疗脓毒症肺损伤提供新思路。
1 材料与方法1.1 实验材料 C57BL/6小鼠购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司（许可证号SCXK （湘）2016-0002）。
大鼠肺泡巨噬细胞NR8383购自中国科学院细胞库；小鼠外周血中性粒细胞分离试剂盒购自中国索莱宝公司。
胎牛血清购自美国Gibco公司。
Ham’s F-12K培养基购自美国Sigma公司。
RPMI1640培养基购自以色列BI公司。
PMA购自美国Sigma公司。
Anti-Histone H3(citrullineR2+R8+R17)抗体购自英国abcam公司。
Alexa Flour 594抗山羊荧光抗体购自中国Bioss公司，DAPI染料购自中国Bioss公司。
Triton X-100购自中国索莱宝公司。
即用型正常山羊血清购自中国博士得生物公司。
大鼠IL-1β、TNF-α酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒购自上海依科赛科技实业有限公司。
1.2 小鼠外周血中的中性粒细胞的分离提取采用小鼠外周血中性粒细胞分离试剂盒分离提取C57BL/6小鼠外周血中性粒细胞，按说明书步骤进行操作。
1.3 NETs的诱导使用含5%胎牛血清的RPMI1640培养基重悬中性粒细胞。
接种5×105个细胞于置有14mm圆形细胞爬片的24孔板，每孔500μl。
分别加入PMA（100nmol/L）及等体积的培养基孵育3h，细胞爬片用于免疫荧光染色及扫描电子显微镜观察。