重要动物组织切片制作技术

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3、击头法
如大、小鼠，可用重物击头后部或将其头后部猛撞桌沿，最 好一击而死。
4、断头法
青蛙、小鼠等小动物，可用剪刀剪去其头部，较大动物如兔 子等，可用斧头迅速砍头致死。
5、股动脉放血法
动物经吸入乙醚或氯仿稍麻醉后，立即切开股动脉放血。 注意：上述各法，应根据制片需要选用，如空气栓塞法不宜
用作血管注射标本的制作；乙醚麻醉对丘脑下神经部分泌物 染色标本不利；股动脉放血法有利于肠系膜铺片的制作。
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第一章：取材及固定
一、 动物致死法
1、麻醉法
可将浸有乙醚或氯仿的棉球连同小动物一起密封于钟罩或有 盖玻璃瓶内进行麻醉；也可用4%戊巴比妥作静脉注射，剂 量按动物体重1ml/kg；或用20%氨基甲酸乙脂作腹腔注射， 剂量一般按动物体重5ml/kg。
2、空气栓塞法
如家兔可用50ml注射器将空气由耳静脉推入，使动物很快 死亡。
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（3）醋酸：亦名乙酸，能与酒精、水、氯仿等多 种试剂混合，故为许多混合固定液成分之一，其 穿透速度很快，固定小组织仅1h即可，对组织和 细胞有膨胀作用，且不能凝固细胞质中的蛋白质， 一般与引起收缩的固定液一起使用，以达到平衡 目的。
（4）苦味酸：苦味酸能沉淀蛋白质，对脂肪、类 脂无作用，渗透力较弱，很少单独使用，固定后 收缩明显，用含苦味酸的固定液固定组织一般不 宜超过24小时。
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二、 取材注意事项
1、材料Baidu Nhomakorabea鲜
最好是动物心脏还在跳动时取材，立即投入固定液内，脏器 的上皮组织最易变质，应争取在死后半小时内处理完毕。
2、组织块力求小而薄
组织块的厚度以不超过5毫米为宜，较理想的厚度为2毫米 左右，主要目的是使固定液迅速而均匀的渗入组织块内部。
3、勿使组织块受挤压
切取组织块时刀剪要锋利，不要来回挫动，夹取组织时切勿 猛压，取材时组织块可稍大，以便固定后修块。
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三、 组织固定法
（一）、固定的方法
1、小块组织固定法：从人体和动物取下的小块组织，立即置 入液态固定剂中进行固定，这是应用最广泛最经常的方法。 2、注射、灌注固定法：某些组织块由于体积过大或固定液 极难渗入内部或需要对整个脏器或整个动物进行固定。这时 宜采用注射固定法，将固定液注入血管，经血管分支到达整 个组织和全身，从而得到充分的固定。
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2、单纯固定液 （1）酒精：既是配制混合固定液的基本成分，又
可作为单纯固定液使用。用于固定时以80%95%浓度为好。缺点是经酒精固定的组织容易 变硬，对组织收缩较大。 （2）甲醛水溶液：常用的甲醛水溶液即市售的福 尔马林，常用浓度为10%，指以10ml的商品甲 醛（37%-40%甲醛水溶液）加入90ml水配成 的，此液实际上只有4%的甲醛。
3、蒸汽固定法:比较细小而薄的标本，可用锇酸或甲醛蒸汽 固定。主要用于血液或细胞涂片以及某些薄膜组织的固定。
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（二）、固定的目的 1、迅速阻止组织、细胞的死后变化，防止自溶与腐 败，使之尽量保持生前的状态与结构。 2、使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等成分转变 为不溶性物质，以保持其原有状态。 3、使组织内各种物质成分产生不同的折光率，以便 染色后易于鉴别和观察。
色瓶，最好用双蒸水配制，锇酸穿透力弱，且易
使组织硬脆，因此它固定的组织必须小而薄，体
积最好在3×3×2mm以内。
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（7）铬酸：铬酸能沉淀蛋白质，适用于核蛋白的 固定，并能增强核的染色能力，穿透速度慢，一 般组织块的固定，需经12-24h，硬化程度中等， 收缩显著，除用作固定液外，万分之一的铬酸水 溶液，可制作分离标本。
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4、使组织块在脱水、包埋、切片、染色等过程 中不易损坏。 5、使不同组织成分对染料有不同的亲和力，经 染色处理后易于辨认。 6、防止细胞过度收缩或膨胀而失去其原有形态 结构。 7、使组织块硬化，便于制作薄片。
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（三）、注意事项及影响固定的因素
1、组织块不易过大，一般以厚度5mm，长宽不超 过15×15mm。 2、固定液的量一般以组织块大小的20倍为宜。 3、必须选择渗透力强，又不使组织过渡收缩或膨胀 的试剂作为固定液。 4、有的固定剂是由氧化剂与还原剂混合而成，如甲 醛（还原剂）与重铬酸钾（氧化剂）混合成的 Helly液等。
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（5）重铬酸钾：其穿透速度快，对组织收缩小并 稍有膨胀，重铬酸钾常备水溶液为3-5%。其混合 固定液，如Zenker液、Helly液及Regaud液等 被广泛用于组织学，凡经重铬酸钾、铬酸、铬酸 盐固定的组织，必须以流水冲洗后方能转入脱水 剂。
（6）锇酸：锇酸一般只用于某些特殊染色或电镜
切片染色或固定，配制时要用洗涤干净的玻塞棕
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4、尽量保持组织的原有形态
新鲜组织经固定后，或多或少产生收缩现象，为此可将组织 展平，以尽可能维持原形。
5、要熟悉取材部位
要能准确的按解剖部位取材，如胰腺，一般取胰岛较多的胰 腺尾部；肺应取有细支气管及带有软骨片的小支气管部。
6、动物品种的选择
如观察肥大细胞，以大、小鼠皮下组织及肠系膜、大网膜铺 片为佳，欲观察运动终板，可用小鼠的肋间肌等。
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5、固定时间的长短视固定剂的不同要求而定， 也与气温、组织块的大小有关。温度高时则时 间缩短，组织块过大则应延长固定时间。 6、软组织或较大组织可先经2-3小时固定后再修 整成小块重新投入新配制的固定液内继续固定。 7、特殊要求的组织，常需要特殊的固定液，所 以，取组织之前应做好准备。如各种神经组织 因显示内容不同，需不同的固定液与固定方法。
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7、选好组织块的切面
熟悉某些器官组织成分安排，然后决定其切面的走向；如一 长管状器官以横切面较好。
8、保持材料的清洁
组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用生理 盐水冲洗，然后再入固定液，但要注意防止组织损伤。
9、切除不需要的部分
特别是组织周围的脂肪等，应尽可能清除掉，否则给固定、 脱水、浸蜡、切片等带来一些不必要的问题。
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（四）、固定液
1、固定液种类：一类是单纯固定液，即只有一种试 剂；另一类是混合固定液，由两种或两种以上试剂 组成。
作为较好的固定液，应有下列特性，首先，有强 渗透力，能迅速的渗入组织内部；其次，不使组织 过渡收缩或膨胀，并能使组织内欲观察的成分得以 凝固为不溶性物质；最后，能使组织达到一定的硬 度并获得较佳的折光率和对某些染料具有较强的亲 和力。