重要动物组织切片制作技术
兽医病理学诊断技术
兽医病理学诊断技术
兽医病理学诊断技术是兽医学中非常重要的一环，它涉及到对动物疾病病因、发病机制、病理变化和疾病发展过程的研究。
以下是一些常见的兽医病理学诊断技术：
1. 尸体剖检技术：这是兽医病理学中最基本的诊断技术之一，通过对动物尸体的剖解，观察其内部器官的形态、颜色、质地以及病理变化，以确定疾病的类型和严重程度。
2. 组织切片制作技术：组织切片是将病变组织或器官进行固定、包埋、切片和染色的过程，以便在显微镜下观察其结构和病理变化。
3. 显微镜检查技术：显微镜检查是通过显微镜观察组织切片或其他样本的方法，可以观察到细胞的形态、结构和病理变化，是诊断疾病的重要手段。
4. 生化检测技术：生化检测是对动物体内的生化物质进行检测，以了解其生理和病理状态。
例如检测血液中的血糖、血脂、肝功、肾功等指标，以评估动物的健康状况。
5. 免疫学诊断技术：免疫学诊断是通过检测动物体内免疫系统的反应来诊断疾病的方法。
例如检测抗体、抗原等，以确定疾病的类型和严重程度。
6. 分子生物学诊断技术：分子生物学诊断是通过检测动物体内的基因和蛋白质的表达情况，以了解疾病的病因和发病机制。
例如检测基
因突变、表达谱分析等。
7. 细胞培养技术：细胞培养是将动物组织或细胞在体外进行培养的技术，可以用于研究疾病的发病机制和药物筛选等。
8. 动物实验技术：动物实验是通过实验动物来模拟人类或动物疾病的发病过程，以研究疾病的病因、发病机制和治疗方法。
例如复制某种传染病的动物模型、药物疗效观察等。
这些诊断技术在兽医病理学中发挥着重要的作用，可以帮助兽医正确地诊断和治疗动物疾病，提高动物的健康水平和生产效益。
动物组织的包埋切片染色及显微镜观察
动物组织的包埋切片染色及显微镜观察具体来说，动物组织的包埋、切片、染色及显微镜观察包括以下几个步骤：1.组织准备：选择合适的动物组织样本，如皮肤、肌肉、肝脏等。
将组织样本取出并快速进行处理，这样可以避免组织的腐坏或细胞结构的破坏。
2.固定组织：将组织样本放入一种适当的固定剂中进行固定。
常用的固定剂包括福尔马林、布洛佐液等。
固定剂的选择取决于研究需求和组织类型。
3.组织包埋：将固定后的组织进行包埋，这样可以使组织成为一个坚硬的块，便于后续的切片。
常用的包埋剂包括蜡和冰。
4.切片：将包埋好的组织块用切片机切割成薄片，厚度通常为几微米至几十微米。
切片的厚度取决于研究需要和组织类型，较薄的切片适用于一些细胞结构的观察，较厚的切片适用于组织结构的观察。
5.染色：为了增强组织的对比度和细胞结构的可见度，需要对切片进行染色。
常用的染色剂有伊红、尼氏染色、嗜酸性染色等。
不同的染色剂能够染出不同部分的细胞结构，使其更容易被观察和分析。
6.显微镜观察：将染色好的切片放置在显微镜的载玻片上，用显微镜进行观察。
显微镜可以放大切片，并通过透射光或荧光来帮助观察者对细胞结构进行观察和分析。
通过以上步骤，研究人员可以观察到动物组织的细胞结构和组织结构，并进一步研究细胞或组织的功能。
这些观察结果可以提供有关动物生物学、疾病病理学和药物研发等方面的重要信息。
总结起来，动物组织的包埋、切片、染色及显微镜观察是一项重要的实验技术，可以帮助研究人员观察和研究动物的细胞和组织结构，并进一步了解其功能和相关的生物学过程。
它在生物学研究中起着重要的作用，为科学家们提供了对动物组织结构和功能进行深入研究的手段和工具。
组织切片操作流程(肝脏切片)
组织切片操作流程(肝脏切片)---本文旨在介绍肝脏切片的操作流程，为科研人员提供参考。
肝脏切片是一种常见的组织切片技术，在研究肝脏病变、疾病机制等方面具有重要意义。
以下是肝脏切片的操作流程。
准备工作1. 样本采集：从实验动物或患者中获得肝脏样本。
确保样本新鲜且符合研究要求。
2. 样本固定：将肝脏样本放入10%中性缓冲福尔马林中进行固定。
固定时间一般为24小时，可根据需求适当延长。
3. 脱水：将固定的肝脏样本进行脱水处理，依次放入浓度递增的乙醇中（例如70%、80%、90%、95%、100%），每次脱水时间约为1小时。
切片操作1. 组织包埋：将脱水的肝脏样本置于熔点为60摄氏度左右的石蜡中，温度控制在55-60摄氏度，使其充分浸渍石蜡。
2. 石蜡固化：将包埋的肝脏样本在冷却台上冷却，使石蜡固化。
3. 切片：使用旋转式切片机将石蜡固化的肝脏样本切割成薄片，常见厚度为3-5微米。
4. 切片传送：用切片刷将切好的肝脏切片均匀地传送到预涂玻片上。
5. 干燥：将玻片置于60摄氏度的烤箱中进行干燥，通常需要2-3小时，直至切片完全贴附于玻片上。
6. 染色：根据需要进行染色处理，在肝脏切片上滴加适当染色剂，如血液学染色剂、免疫组织化学染色剂等。
7. 盖片：将已染色的肝脏切片背面朝上覆盖玻片盖片，确保切片封装完整。
8. 固定：使用适当的固定剂（如蜡胶）将玻片和盖片固定在一起。
存储和保存1. 标记：在玻片上标记样本信息，如标本编号、日期等。
2. 包装：使用专用的玻片包装袋将肝脏切片包装好，避免切片受损。
3. 存储：将包装好的肝脏切片存放在冷藏箱中，温度控制在4摄氏度左右，确保切片的保存时间。
4. 归档：按照项目或实验的顺序对肝脏切片进行归档，便于后续查找和分析。
以上是组织切片操作流程(肝脏切片)的详细步骤。
在进行实际操作时，请严格按照实验室的安全规范操作，并根据具体实验要求适当调整流程。
希望本文对您的科研工作有所帮助。
动物组织石蜡切片法
至水：将从二甲苯（Ⅱ）中取出的切片依次经过：
二甲苯与无水乙醇混合液（1:1）→无水乙醇（Ⅰ）
→无水乙醇（Ⅱ）→95%乙醇→85％乙醇→70％乙
醇各3～5分钟，最后在蒸馏水中浸5分钟，即可进
行染色。
③切片由蒸馏水中转入苏木精染液染色5～10分钟， 使细胞内的嗜碱性物质着色。
④用自来水洗去切片上残余的染液。 ⑤0.5～1％盐酸溶液分色数十秒钟。 ⑥放入自来水中15～20分钟、蓝化。 ⑦臵入70％、85％乙醇中各3～5分钟。 ⑧臵入伊红染液中染色1～2分钟，使细胞中嗜酸性 物质着色。 ⑨依次进入95％乙醇（Ⅰ）、（Ⅱ）→100％乙醇 （Ⅰ）、（Ⅱ），各5分钟，以除去切片上水份。 ⑩透明：切片入无水乙醇与二甲苯混合液（1:1）→ 二甲苯（Ⅰ）、（Ⅱ）（Ⅲ），各5分钟。
5、染色与封固
（1）染色：染色后可增加细胞和组织中各结构间色 彩的对比以便于观察。切片的染色方法很多，常
用的是苏木精（hematoxylin）〃伊红(eosin)染色，
简称HE染色。染色的具体步骤如下：
①脱蜡：将切片放入二甲苯（Ⅰ）、（Ⅱ）中，各
臵5～10分钟，溶去切片上的石蜡。
②将脱蜡的切片经各级浓Байду номын сангаас乙醇（由高到低）下行
动物组织石蜡切片法 制作过程
组织经石蜡包埋后制成的蜡块，用切 片机制成切片的过程称为石蜡切片法。一 般切5-8微米的厚度，要观察病变的连续性 可制作连续切片。除此之外，石蜡包埋的 组织块便于长期保存，因此，石蜡切片仍 是目前各种切片制作方法中最常用，最普 遍的一种方法。
1、取材与固定
（1）取材：从动物体取下所需的器官材料。取材的
固定的目的
1、迅速阻止组织、细胞的死后变化，防止自溶与腐败，使之尽量保持生
重要 动物组织切片制作技术
脂无作用，渗透力较弱，很少单独使用，固定后
收缩明显，用含苦味酸的固定液固定组织一般不
宜超过24小时。
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（5）重铬酸钾：其穿透速度快，对组织收缩小并
稍有膨胀，重铬酸钾常备水溶液为3-5%。其混合 固定液，如Zenker液、Helly液及Regaud液等被 广泛用于组织学，凡经重铬酸钾、铬酸、铬酸盐 固定的组织，必须以流水冲洗后方能转入脱水剂。
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（四）、固定液
1、固定液种类：一类是单纯固定液，即只有一种
试剂；另一类是混合固定液，由两种或两种以上试
剂组成。 作为较好的固定液，应有下列特性，首先，有 强渗透力，能迅速的渗入组织内部；其次，不使组 织过渡收缩或膨胀，并能使组织内欲观察的成分得 以凝固为不溶性物质；最后，能使组织达到一定的 硬度并获得较佳的折光率和对某些染料具有较强的
一般厚度约 5mm 的实质性器官，总的浸蜡时间约 2-
3h，均在恒温箱内进行。较理想的的浸蜡温度是石
蜡刚溶化的温度，或在蜡杯底部尚残留一小部分未 熔完蜡时的温度，浸蜡完成后，即做成包有组织的 蜡块。包埋蜡块的器材有专用的包埋框，也有自己 制作的包埋盒，只要是具有一定形状的容器，我们
都可以把它用作包埋盒。包埋的具体过程详述。
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4、使组织块在脱水、包埋、切片、染色等过程 中不易损坏。 5、使不同组织成分对染料有不同的亲和力，经 染色处理后易于辨认。 6、防止细胞过度收缩或膨胀而失去其原有形态 结构。
7、使组织块硬化，便于制作薄片。
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（三）、注意事项及影响固定的因素
1、组织块不易过大，一般以厚度5mm，长宽不超过
15×15mm。 2、固定液的量一般以组织块大小的20倍为宜。 3、必须选择渗透力强，又不使组织过渡收缩或膨 胀的试剂作为固定液。 4、有的固定剂是由氧化剂与还原剂混合而成，如 甲醛（还原剂）与重铬酸钾（氧化剂）混合成的 Helly液等。
动物组织标本制作技术
动物组织标本制作技术动物组织标本制作技术是一项重要且常用的生物学实验技术，它可以有效地保存动物组织的结构和形态，为科学研究和教学提供了重要的参考材料。
本文将介绍动物组织标本制作的基本步骤以及相关的注意事项。
一、动物组织标本制作的基本步骤1. 动物标本的收集：首先需要选择合适的动物标本进行采集，可以选择已死亡的动物标本，也可以通过活体组织切片的方式进行制作。
在采集过程中需要注意保持标本的完整性，避免损坏或变形。
2. 组织固定：采集到的动物标本需要进行组织固定，以保持组织的结构和形态。
常用的组织固定剂有福尔马林、乙醛等，根据实验需要选择适当的固定剂进行处理。
3. 组织切片：固定后的动物组织需要进行切片，以便观察组织的细胞结构和形态。
切片的厚度一般为5-10微米，可以使用专用的切片刀或者切片机进行切割。
4. 切片染色：切片完成后，需要进行染色处理，以使组织结构更加清晰可见。
常用的染色方法有血液染色、组织染色等，可以选择适当的染色方法根据实验的需要。
5. 覆盖玻片：染色完成后，需要将切片放置在玻片上，并在上方加上透明的覆盖玻片。
覆盖玻片的目的是保护切片，防止切片脱落或受到污染。
6. 标本保存：制作完成的动物组织标本需要进行保存，以便长期保存和使用。
标本可以保存在特制的盛放容器中，也可以进行冷冻保存或者石蜡包埋保存。
二、动物组织标本制作的注意事项1. 样本选择：选择合适的动物标本对于制作高质量的组织标本非常重要。
标本的选择应尽量保持完整无损、结构清晰、形态规整，以有利于后期的观察和分析。
2. 组织固定剂的选择：不同的固定剂会对组织产生不同的影响，因此需要根据实验的需要选择合适的固定剂。
固定剂浓度和固定时间也需要进行合理的控制，避免过度固定导致组织结构的改变。
3. 切片技术的掌握：切片技术对于制作高质量的组织标本至关重要。
切片时需要注意切割均匀、厚度一致，避免切片过厚或过薄，以免影响观察结果。
4. 染色方法的选择：染色方法可以增强组织标本的对比度和清晰度，但染色过程中也需要注意方法的选择和操作的规范性，避免染色不均匀或染色剂超出时间导致结果不准确。
组织切片制作方法
组织切片制作方法引言组织切片是一种将组织样本分割成薄片以供显微镜观察的常用技术。
它广泛应用于医学研究、生物学研究以及组织学等领域。
本篇文档将介绍组织切片制作的基本方法和步骤。
步骤1. 材料准备在开始制作组织切片之前，需要准备好以下材料：•组织样本：通常是从动物（如小鼠、大鼠）或人体中取得。
样本应该是新鲜的，并以生理盐水或缓冲液保存。
•定向切片机：用于将组织样本定向并切割成薄片。
可以是手动操作的或自动化的设备。
•切片刀片：高质量的切片刀片，通常是钻石刀片或碳钢刀片。
•组织固定液：通常是甲醛或琼脂糖。
•组织染色剂：用于染色和增强组织的可见性。
常用的有血红蛋白染色剂、溴甲蓝和伊红。
2. 组织固定将组织样本浸泡在组织固定液中，处理时间视样本大小和种类而定。
通常情况下，固定时间在4-48小时左右。
固定的目的是使组织保持其原有的结构和形态，同时防止细胞的腐解和坏死。
3. 组织处理经过固定后，将组织样本进行脱水和澄清处理。
这个步骤的目的是去除组织中的水分，使组织样本透明并易于切割。
脱水通常使用逐渐浓度递增的酒精溶液，如70%、80%、95%和100%的酒精。
澄清则是使用透明剂，如苯胶和二甲苯，去除酒精并降低组织折射率。
4. 定向和切割定向和切割是制作组织切片的关键步骤。
首先，将经过处理的组织样本放置在定向切片机上，调整切片机使样本达到最佳切片位置。
然后，使用切片刀片进行切割。
切割时要注意手法和切割角度，以保证切割出的组织切片薄而均匀。
5. 切片染色制作好的组织切片需要进行染色，以增加组织的可见性和对比度。
常用的染色方法包括血红蛋白染色、溴甲蓝和伊红染色等。
染色时应该根据需要选择合适的染色剂和方法，并注意染色时间和温度的控制。
6. 切片保存制作好的组织切片应该进行适当的保存，以保证其质量和稳定性。
通常情况下，切片应该放置在保存瓶中，使用无水酒精或二甲苯进行封存。
同时，切片应该存放在干燥、阴凉和避光的地方，以防止切片变形和褪色。
动物组织的石蜡切片制作及HE染色
• 返蓝作用 苏木素在酸性环境下成红色，在碱性环境下成蓝色。因 此分化后，细胞核成红色，用弱碱性水，可是细胞核成蓝色，增强 对比。
• 细胞浆染色 伊红为酸性染料，带负电荷，与胞浆中的带正电荷的蛋 白结合，使胞浆成红色。
实验流程：
1.取材
2. 固定、脱水、透明
3. 浸蜡
4. 包埋
5. 切片
6. 展片
石蜡切片法广泛应用于医学、农学、动植物学等学科。是教学、 科研中的常用实验技术。
实验原理：
苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合染色，简称HE染色， 是病理学常规制片中最基本的染色方法，应用极其广泛。苏木精是从 洋苏木中提取出来的浅黄褐色的结晶，是一种碱性染色剂，它在被氧 化后生成苏木素，同媒染剂(常用的是三价的铝或盐铁)一起使用，能 够使细胞核染色。在H.E.染色的组织切片中，细胞核呈蓝色，细胞浆 呈红色，二者形成鲜明的对比，易于观察分析。
动物组织的石蜡切片制作 及H.E.染色
实验目的：
1. 掌握动物材料的石蜡切片制作方法。 2. 学习H.E.染色方法。
实验原理：
石蜡切片法，是以石蜡作为包埋剂的一种显微制片方法，是形 态学观察最基本、最经典的技术之一。
一般来说，凡是可以经受石蜡法中各试剂处理的材料都可以用石 蜡法制片。石蜡切片一般要经过取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包 埋、切片、展片、粘片、复水、染色、封藏等过程。
鼠肝组织-脱蜡前 40×
鼠肝组织-脱蜡后 40×
鼠肝组织-苏木素染色 400×
鼠肝组织-伊红B染色 1000×
实验结果
学生实验结果
注意事项：
• 使用试剂时注意戴好口罩、手套，必要时使用通风橱。 • 包埋过程尽量连贯、快速。 • 操作切片机时，务必注意安全，防止刀片伤手。 • 展片过程中确保组织蜡片始终正面朝上。 • 粘附载玻片只在正面涂有粘片剂，样品要粘在正面。 • 吸水后观察样品应紧贴在玻片上，方可避免在后续的处理中样品丢
小鼠部分组织的石蜡切片制作
小鼠部分组织的石蜡切片制作一、实验原理：利用脱水剂除去组织中的水分，再用透明剂二甲苯可以去除脱水剂酒精，而二甲苯可以溶解石蜡并将其导入到已脱水的组织细胞中，然后用熔化的石蜡对组织进行包埋，冷却后即可将柔软的组织包埋在石蜡中，使其具有一定硬度，且不改变其大小和形状。
用旋转切片机可将其切为极薄的薄片，经染色、脱水、装片后在显微镜下可以清晰地观察其组织结构。
二、材料与用具1．材料：小鼠肝脏、脾脏等。
2．用具：溶蜡箱、蜡杯、不同熔点的石蜡、酒精灯等。
三、实验内容与步骤1．取材及固定取小鼠，采用拉颈处死或麻醉处死法将其杀死，取其脾脏和肝脏，切为边长约为0.5cm的组织块。
用先用0.85％的生理盐水漂洗以洗去血液与污渍，如果是管状组织则必须把管腔中污物洗净，可用注射器自一端向管腔中注射生理盐水数次，使其管腔冲洗干净，切忌不可用刀或其他器具刮之。
由动物身上切取的组织必须是新鲜的，材料越新鲜越好，一般不应超过死后24 hr。
如果是管状器官或是其中有分泌之消化液，则死后应迅速采取，以免组织自溶或上皮剥落。
取下的材料马上进行固定，采用FAA固定液，固定液的用量与组织块体积之比一般在20:1，固定时间2 hr以上，超过24hr时可继续浸泡或转入70%酒精中保存。
不应使组织块贴于容器壁上，应记录固定液的名称，材料的种类，动物品种及开始固定的时间。
2．冲洗固定后的组织块在进行脱水前用70%酒精洗去固定液。
3．脱水和硬化经过固定后的组织在水洗后要进行脱水，脱水的目的将组织内的水分用酒精或其他溶剂置换出来，使组织逐渐变硬，便于油类或其他透明及浸入，为熔化的石蜡浸渗到组织中创造条件。
常用的脱水剂是不同浓度的酒精，因为酒精与水有很大的亲和力，酒精浓度可以逐渐升高，置换出组织中的水。
脱水必须充分，脱水不充分会影响透明和浸蜡。
脱水过程要逐级上升，不能操之过急，跳级脱水会引起组织块强烈的收缩变形。
脱水所用的酒精浓度及过程如下：30％—→50％—→70％—→80％—→90％—→95％—→100％(Ⅰ)—→100％(Ⅱ)组织块在各级较低浓酒精（小于70％）中脱水的时间应视组织块的大小而定，大小不超过0.5立方厘米的组织块脱水时间为6～12 hr，在高浓度酒精中（大于70％）脱水时间为3 hr 左右。
重要动物组织切片制作技术
注意组织的新鲜度和 保存方式，避免组织 腐败和自溶。
根据实验需求选择适 当的组织部位，如肝 脏、肾脏、心脏等。
动物组织的固定
01
固定是制作切片的关键步骤，有助于保持组织结构的完整性。
02
选择适当的固定剂，如甲醛、乙醇等，根据组织类型和实验要
求进行固定。
固定时间要适当，不宜过长或过短，以确保组织结构和细胞形
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态的清晰度。
动物组织的脱水
脱水是去除组织中多余水分的过程，为后续的包 埋做准备。
选择适当的脱水剂，如乙醇、丙酮等，逐步替换 组织中的水分。
注意脱水时间和程度，避免组织过度干燥和结构 破坏。
动物组织的包埋
包埋是将脱水后的组织包裹在包埋剂 中，以便于切片操作。
包埋过程中要保持组织结构的完整性 ，避免产生气泡和裂痕。
选择染色剂
根据观察目的选择适当的染色剂，如苏木精-伊红 染色、银染色等。
染色过程
按照染色剂的要求进行染色，控制染色时间和温 度等参数。
复染
在染色后进行复染，以提高染色效果和对比度。
切片的观察与记录
显微镜观察
使用显微镜观察切片，记 录组织结构和形态等信息 。
图像采集
使用图像采集设备将观察 到的切片图像保存下来。
切片制作技术还可以用于土壤污染监测。通过对土壤中的 动植物组织进行切片制作，可以观察到土壤污染对生物的 影响，为土壤污染治理提供支持。
切片制作技术在法医学中的应用
在法医学中，切片制作技术主要用于 对死因的鉴定和物证分析。通过对死 者的组织和器官进行切片制作，可以 了解死因和死亡方式，为刑事案件的 侦破提供依据。
标准化和规范化
为了提高切片制作技术的准确性和可靠性，标准化和规范化的操作流 程和技术标准正在不断完善和推广。
大鼠肝脏组织病理切片的制作和 HE 染色
大鼠肝脏组织病理切片的制作和HE 染色步骤如下：（一）固定与修块取组织块放入Bouin氏液中，组织块的直径应小于7mm。
6小时左右后用双面刀片将组织块修剪成3-5mm3大小。
（二）脱水与透明1．75%乙醇50分钟2．85%乙醇50分钟3．95%乙醇（I）30分钟4．95%乙醇（II）30分钟5．100%乙醇（I）30分钟6．100%乙醇（II）30分钟7 1/2 二甲苯（乙醇与二甲苯等体积）20分钟8．二甲苯（I）20分钟9．二甲苯（II）10分钟（可依据透明效果而定）若脱水不好，二甲苯溶液颜色会变混浊。
在每一步骤之后，要充分滤干组织块，一般用筒纸吸干组织块上的液体，以免影响其他液体的浓度，但也要防止组织块干燥。
全过程约需要5h。
（三）浸蜡、包埋与修蜡块1．浸蜡：将60℃恒温箱打开，使石蜡充分溶解，待脱水与透明结束后，将组织块转入石蜡里，放置于60℃恒温箱120分钟。
2．包埋：将60℃的石蜡倒入纸盒内，然后用小镊子将各组织块按一定的顺序排列好，使切面朝下。
不同组别的同一组织包埋于一个蜡块中，以保证切片和染色条件相同。
为防止倒入纸盒内的石蜡底部立刻凝固，可将纸盒置于一玻璃板上（或大培养皿内），然后将玻璃板置于80-90℃左右热水上，包埋时蜡盒底部要放平，做蜡块的蜡要反复冻融较好。
3．修蜡块：待纸盒内蜡凝固后，用刀片将其修成梯形，组织块与蜡块边缘之间的距离不得小于2mm。
（四）切片在载玻片上擦少量甘油蛋白。
可滴半滴甘油蛋白于载玻片上，用手指充分抹匀，呈半干状为佳。
切片厚约4-8μm，将切片在55℃左右水浴中展开，展开程度以带黄颜色的组织完全摊平为准。
用涂有甘油蛋白的载玻片从水浴中捞取切片，放入37℃烘箱中过夜。
每个组织块捞片2张。
过夜后，将载玻片置于玻片架上，进行下面的实验。
（五）脱蜡、染色与脱水倾斜玻片架，将玻片架和载玻片下缘的试剂用筒纸吸干，减轻对其他试剂浓度的影响。
全过程约需要60分钟。
1．脱蜡（1）二甲苯（I）15分钟（2）二甲苯（II）15分钟（3）100%乙醇2分钟（4）95%乙醇（I）1分钟（5）95%乙醇（II）1分钟（6）蒸馏水浸洗1分钟2．染色（7）苏木精30秒钟（8）自来水冲洗60秒。
动物组织切片观察
动物组织切片观察为了进行动物组织切片观察，首先需要制备切片。
制备切片的方法有多种，其中一种常用的方法是石蜡包埋法。
首先，用解剖刀将待观察的组织切割成合适的大小，然后将组织用一系列浓度递增的酒精进行脱水处理。
接下来，组织被浸泡在熔化的石蜡中，使其浸渍均匀，然后固化石蜡使其成为坚硬的块状。
固化后的石蜡块用切片机切割成薄片，最后用载玻片将切片收集起来。
制备好的切片可以用不同的染色方法进行染色，以增强对组织的观察效果。
常用的染色方法有苏木精-伊红染色、嗜酸性和嗜碱性染色、免疫组织化学染色等。
经过染色后，切片中的细胞和组织结构将更加清晰可见。
通过对动物组织切片的观察，可以发现不同类型的组织具有不同的形态和结构。
例如，肌肉组织通常由纤维束组成，细胞排列有序，并且具有明显的纵横条纹。
神经组织由神经元和胶质细胞构成，神经元具有明显的细胞体、突触和轴突。
结缔组织由胶原纤维和胶原质基质组成，具有较高的胶原纤维含量。
此外，还可以观察到血管、腺体、骨骼、皮肤等各种不同的组织类型。
动物组织切片观察的结果可以为不同领域的研究提供重要的参考和依据。
例如，在医学领域中，对病理组织切片的观察可以帮助医生诊断疾病。
一些疾病的病理变化可以通过观察切片进行初步判断，如癌细胞的异型性、细胞密度的增加等。
在生理学和药理学研究中，切片观察可以帮助研究人员了解不同组织的功能和反应。
在动物学研究中，切片观察可以提供动物组织的细胞学和解剖学特征信息，为动物分类和进化研究提供参考。
总之，动物组织切片观察是一种有效的方法，可以揭示动物组织之间的结构和功能差异。
通过制备切片、染色和观察，可以获得详细的细胞和组织结构信息，为各个领域的研究提供有价值的数据。
生物解剖学实验中的组织切片技术
生物解剖学实验中的组织切片技术在生物解剖学实验中，组织切片技术是一项重要的技术手段。
通过组织切片，可以将生物体的组织结构进行细致观察和研究。
下面将介绍组织切片技术的步骤和注意事项。
一、材料准备在进行组织切片实验的时候，需要准备以下材料：1. 组织样本：可以是动物组织、植物组织或人体组织。
要确保样本新鲜且保存良好。
2. 切片刀：选择合适的切片刀能够提高切片的质量。
3. 碘酒：用于消毒和标记切片。
4. 显微镜：用于观察切片的显微结构。
5. 切片贴片：用于固定和保存组织切片。
二、切片步骤1. 样本固定：将组织样本放入含有适当浓度的缓冲液中进行固定。
固定能够保持组织结构的完整性，同时防止样本中的酶活性继续进行。
常用的固定液有福尔马林和氯乙酸。
2. 组织处理：在固定后的组织中，需要去除多余的水分，并使组织透明化。
可以使用甲醛、丙酮等试剂来进行处理。
3. 组织切片：将透明化后的组织放置在切片刀上，用切片刀沿着想要切片的方向进行切割。
要注意刀的角度和切割的速度，以保证切片的质量。
4. 切片贴片：将切好的组织切片用镊子取出，轻轻放在切片贴片上。
要避免切片的叠加和重叠，确保切片的平整和清晰。
5. 切片染色：切片染色是为了增强切片的对比度，使组织结构更加清晰可见。
可使用常见的组织染色剂，如伊红、伊红苏木、溴化乙锐等。
6. 保存和贮存：将染色好的切片放在切片贴片上，用封条封住，放置在保存盒中。
要放置在阴凉干燥的地方，避免阳光直射和湿气的侵蚀。
三、注意事项1. 操作前要熟悉实验步骤，并严格按照操作规程进行。
2. 对于有毒或易燃易爆的试剂，要注意安全操作，避免事故发生。
3. 在操作过程中要保持实验台面的清洁，避免污染样本。
4. 切片刀要保持锋利，切割时可以用适量的甘油润滑刀片。
5. 观察切片时，要调整显微镜的焦距和光线，以获得最佳的观察效果。
通过组织切片技术，可以观察和研究生物体的组织结构，进而了解其功能和生理特征。
这项技术在生物解剖学领域的应用广泛，并且在医学研究、病理诊断等领域也起到了重要的作用。
动物肝脏切片实验报告
一、实验目的1. 学习并掌握动物肝脏组织的切片技术。
2. 观察并识别肝脏组织的结构特征。
3. 了解肝脏的生理功能和病理变化。
二、实验原理肝脏是人体重要的代谢和解毒器官，其组织结构复杂，具有丰富的血管和细胞。
通过切片技术，可以观察肝脏的细胞结构、血管分布以及病理变化等特征。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜动物肝脏组织。
2. 仪器：切片机、显微镜、切片刀、石蜡、切片架、载玻片、盖玻片、封片剂等。
四、实验步骤1. 组织固定：将新鲜肝脏组织置于4%多聚甲醛溶液中固定，4℃保存24小时。
2. 脱水：将固定后的肝脏组织依次置于50%、70%、80%、90%、95%和100%乙醇溶液中脱水，每级乙醇处理30分钟。
3. 透明：将脱水后的肝脏组织置于丙酮溶液中透明，处理60分钟。
4. 包埋：将透明后的肝脏组织浸入熔化的石蜡中，冷却后制成石蜡块。
5. 切片：将石蜡块固定在切片机上，按照所需厚度（如5μm）进行切片。
6. 展片：将切片展平在载玻片上，用切片刀轻轻刮去多余的切片。
7. 染色：将切片放入苏木精染液中染色5-10分钟，然后用自来水冲洗切片。
8. 分化：将切片放入伊红染液中分化1-2分钟，然后用自来水冲洗切片。
9. 封片：将切片放入封片剂中封片，制成玻片。
五、实验结果通过显微镜观察，可以观察到以下肝脏组织结构：1. 肝小叶：肝脏的基本单位，由肝细胞、胆管和血管组成。
2. 肝细胞：呈多边形，细胞核较大，位于细胞中央。
3. 血管：包括门静脉、肝动脉和肝静脉，分别负责将营养物质和氧气输送到肝脏，以及将代谢废物和二氧化碳排出肝脏。
4. 胆管：负责将胆汁输送到肠道。
此外，还可以观察到以下病理变化：1. 脂肪变性：肝细胞内脂肪含量增多，细胞体积增大，呈气球样变性。
2. 肝炎：肝细胞肿胀、坏死，细胞核溶解，炎症细胞浸润。
3. 肝硬化：肝细胞排列紊乱，纤维组织增生，肝小叶结构破坏。
六、实验讨论1. 肝脏切片技术是研究肝脏组织结构和病理变化的重要方法。
小鼠部分组织的石蜡切片制作
小鼠部分组织的石蜡切片制作一、实验原理：利用脱水剂除去组织中的水分，再用透明剂二甲苯可以去除脱水剂酒精，而二甲苯可以溶解石蜡并将其导入到已脱水的组织细胞中，然后用熔化的石蜡对组织进行包埋，冷却后即可将柔软的组织包埋在石蜡中，使其具有一定硬度，且不改变其大小和形状。
用旋转切片机可将其切为极薄的薄片，经染色、脱水、装片后在显微镜下可以清晰地观察其组织结构。
二、材料与用具1．材料：小鼠肝脏、脾脏等。
2．用具：溶蜡箱、蜡杯、不同熔点的石蜡、酒精灯等。
三、实验内容与步骤1．取材及固定取小鼠，采用拉颈处死或麻醉处死法将其杀死，取其脾脏和肝脏，切为边长约为0.5cm的组织块。
用先用0.85％的生理盐水漂洗以洗去血液与污渍，如果是管状组织则必须把管腔中污物洗净，可用注射器自一端向管腔中注射生理盐水数次，使其管腔冲洗干净，切忌不可用刀或其他器具刮之。
由动物身上切取的组织必须是新鲜的，材料越新鲜越好，一般不应超过死后24 hr。
如果是管状器官或是其中有分泌之消化液，则死后应迅速采取，以免组织自溶或上皮剥落。
取下的材料马上进行固定，采用FAA固定液，固定液的用量与组织块体积之比一般在20:1，固定时间2 hr以上，超过24hr时可继续浸泡或转入70%酒精中保存。
不应使组织块贴于容器壁上，应记录固定液的名称，材料的种类，动物品种及开始固定的时间。
2．冲洗固定后的组织块在进行脱水前用70%酒精洗去固定液。
3．脱水和硬化经过固定后的组织在水洗后要进行脱水，脱水的目的将组织内的水分用酒精或其他溶剂置换出来，使组织逐渐变硬，便于油类或其他透明及浸入，为熔化的石蜡浸渗到组织中创造条件。
常用的脱水剂是不同浓度的酒精，因为酒精与水有很大的亲和力，酒精浓度可以逐渐升高，置换出组织中的水。
脱水必须充分，脱水不充分会影响透明和浸蜡。
脱水过程要逐级上升，不能操之过急，跳级脱水会引起组织块强烈的收缩变形。
脱水所用的酒精浓度及过程如下：30％—→50％—→70％—→80％—→90％—→95％—→100％(Ⅰ)—→100％(Ⅱ)组织块在各级较低浓酒精（小于70％）中脱水的时间应视组织块的大小而定，大小不超过0.5立方厘米的组织块脱水时间为6～12 hr，在高浓度酒精中（大于70％）脱水时间为3 hr 左右。
大鼠乳腺组织石蜡切片的制作
大鼠乳腺组织石蜡切片的制作大鼠乳腺组织HE染色，是关于大鼠乳腺方面的实验研究的一项简单而又常用的检测指标，而大鼠乳腺因其体积较小，肉眼观察难以与其周围组织区分，加上乳腺组织富含大量脂肪和结缔组织，难以完全脱水，为大鼠乳腺组织的病理切片制作带来了一定的困难。
笔者在实验中自我摸索总结了一些制做大鼠乳腺组织石蜡切片的方法，效果良好。
现报道如下：1 材料成年雌性大鼠，10%中性甲醛，80%酒精，90%酒精,95%酒精，无水酒精，二甲苯，切片石蜡 2 方法2.1取材麻醉动物，去毛，取大鼠乳头周围1cm左右的组织2.2固定10%中性甲醛中固定24小时，流水冲洗组织30分钟2.3 修剪组织固定后的大鼠乳腺较固定前容易区分乳腺组织，可修剪出一个大约0.3cm*0.3cm*0.3cm大小的组织块2.4脱水，透明80%乙醇1小时→ 90%乙醇小时→ 95%乙醇过夜→无水乙醇I 1小时→无水乙醇II 1小时→二甲苯I 0.5小时→二甲苯II 0.5小时浸润石蜡I 1小时→ 浸润石蜡II 3小时2.5 包埋、切片、展片如需观测乳腺导管走行则立面，如需观察乳腺小叶则平埋切片厚度为4um—5um，于43℃水中展片，捞片。
2.6染色切片后放入60℃烘干箱内1小时→放入二甲苯I中脱蜡15 min→放入二甲苯II中脱蜡15min→无水乙醇10分钟→95%乙醇2分钟→90乙醇2min→85%乙醇2分钟→自来水冲洗2分钟→苏木精10min，取出自来水冲洗2min；入盐酸乙醇分化5s，自来水冲洗2 min；入伊红1分钟，自来水冲洗1min；入梯度乙醇80%酒精1分钟→90%酒精1分钟→95%酒精1分钟→100%酒精2分钟；入二甲苯Ⅰ15分钟→二甲苯Ⅱ15分钟，中性树胶封片。
3 结果制片效果良的好，切片完整易切，平整不脱片，结构清晰透明，核质着色良好。
镜下观察：组织结构完整，细胞形态清晰，着色均匀。
4 讨论4.1 取材是决定制作病理切片好坏的重要因素之一，大鼠乳腺体积较小与周围组织连接紧密，取材时应轻柔，不要暴力取材以免过度牵拉撕扯组织。
裸鼠组织切片的制作技巧与质量控制
裸鼠组织切片的制作技巧与质量控制陈莹;黄萱;刘丽江【期刊名称】《临床与实验病理学杂志》【年(卷),期】2014(030)010【总页数】2页(P1179-1180)【关键词】裸鼠;组织切片;制作技巧;质量控制【作者】陈莹;黄萱;刘丽江【作者单位】江汉大学医学院病理学与病理生理学教研室,武汉430056;江汉大学医学院病理学与病理生理学教研室,武汉430056;江汉大学医学院病理学与病理生理学教研室,武汉430056【正文语种】中文【中图分类】R361+.2裸鼠是目前科研工作中常用的实验动物，裸鼠组织与人体组织相比，具有稚嫩柔软，水分多、纤维成分少等特点[1-3]。
在制片过程中不易掌握脱水、透明、浸蜡的时间，容易造成组织收缩变脆，结构不能保持完整，出现人工裂隙等问题，应根据其自身的组织结构特点，不同组织采用不同的处理程序。
本文主要探讨裸鼠不同组织切片的制作技巧与质量控制。
1 材料与方法1.1 材料选取裸鼠心、肝、脾、肺、肾、脑、胃、肠、胰、肌肉、皮肤等组织，甲醛、乙醇和二甲苯(国药集团化学试剂公司)，50～60 ℃石蜡(广东茂名切片石蜡)。
隔水式电热恒温培养箱(GSP-781)。
组织切片机(Leica RM2235)，组织摊片机(Leica HI1210)，组织烤片机(Leica HI1220)及一次性刀片均为德国Leica公司产品。
1.2 方法 (1)实验材料：根据组织脱水、透明和浸蜡时间长短不同分成3组。
第一组：肝、脾、肾；第二组：肺、脑；第三组：心、胰、胃、肠、肌肉、皮肤。
(2)组织固定与取材：选用10%中性缓冲福尔马林进行全器官固定，固定时间6～24 h，取材后再进行二次固定，固定时间2～4 h，取材大小1 cm×1 cm×0.2 cm。
(3)组织脱水、透明、浸蜡程序，详见表1。
(4)包埋：熔点56～58 ℃石蜡包埋。
(5)常规切片，HE染色。
2 结果将裸鼠不同组织进行分组，采用不同程序进行处理，均取得良好的效果。
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二、 取材注意事项
1、材料新鲜
最好是动物心脏还在跳动时取材，立即投入固定液内，脏器 的上皮组织最易变质，应争取在死后半小时内处理完毕。
2、组织块力求小而薄
组织块的厚度以不超过5毫米为宜，较理想的厚度为2毫米 左右，主要目的是使固定液迅速而均匀的渗入组织块内部。
3、勿使组织块受挤压
切取组织块时刀剪要锋利，不要来回挫动，夹取组织时切勿 猛压，取材时组织块可稍大，以便固定后修块。
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（3）醋酸：亦名乙酸，能与酒精、水、氯仿等多 种试剂混合，故为许多混合固定液成分之一，其 穿透速度很快，固定小组织仅1h即可，对组织和 细胞有膨胀作用，且不能凝固细胞质中的蛋白质， 一般与引起收缩的固定液一起使用，以达到平衡 目的。
（4）苦味酸：苦味酸能沉淀蛋白质，对脂肪、类 脂无作用，渗透力较弱，很少单独使用，固定后 收缩明显，用含苦味酸的固定液固定组织一般不 宜超过24小时。
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4、尽量保持组织的原有形态
新鲜组织经固定后，或多或少产生收缩现象，为此可将组织 展平，以尽可能维持原形。
5、要熟悉取材部位
要能准确的按解剖部位取材，如胰腺，一般取胰岛较多的胰 腺尾部；肺应取有细支气管及带有软骨片的小支气管部。
6、动物品种的选择
如观察肥大细胞，以大、小鼠皮下织及肠系膜、大网膜铺 片为佳，欲观察运动终板，可用小鼠的肋间肌等。
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（四）、固定液
1、固定液种类：一类是单纯固定液，即只有一种试 剂；另一类是混合固定液，由两种或两种以上试剂 组成。
作为较好的固定液，应有下列特性，首先，有强 渗透力，能迅速的渗入组织内部；其次，不使组织 过渡收缩或膨胀，并能使组织内欲观察的成分得以 凝固为不溶性物质；最后，能使组织达到一定的硬 度并获得较佳的折光率和对某些染料具有较强的亲 和力。
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（5）重铬酸钾：其穿透速度快，对组织收缩小并 稍有膨胀，重铬酸钾常备水溶液为3-5%。其混合 固定液，如Zenker液、Helly液及Regaud液等 被广泛用于组织学，凡经重铬酸钾、铬酸、铬酸 盐固定的组织，必须以流水冲洗后方能转入脱水 剂。
（6）锇酸：锇酸一般只用于某些特殊染色或电镜
切片染色或固定，配制时要用洗涤干净的玻塞棕
3、蒸汽固定法:比较细小而薄的标本，可用锇酸或甲醛蒸汽 固定。主要用于血液或细胞涂片以及某些薄膜组织的固定。
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（二）、固定的目的 1、迅速阻止组织、细胞的死后变化，防止自溶与腐 败，使之尽量保持生前的状态与结构。 2、使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等成分转变 为不溶性物质，以保持其原有状态。 3、使组织内各种物质成分产生不同的折光率，以便 染色后易于鉴别和观察。
色瓶，最好用双蒸水配制，锇酸穿透力弱，且易
使组织硬脆，因此它固定的组织必须小而薄，体
积最好在3×3×2mm以内。
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（7）铬酸：铬酸能沉淀蛋白质，适用于核蛋白的 固定，并能增强核的染色能力，穿透速度慢，一 般组织块的固定，需经12-24h，硬化程度中等， 收缩显著，除用作固定液外，万分之一的铬酸水 溶液，可制作分离标本。
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4、使组织块在脱水、包埋、切片、染色等过程 中不易损坏。 5、使不同组织成分对染料有不同的亲和力，经 染色处理后易于辨认。 6、防止细胞过度收缩或膨胀而失去其原有形态 结构。 7、使组织块硬化，便于制作薄片。
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（三）、注意事项及影响固定的因素
1、组织块不易过大，一般以厚度5mm，长宽不超 过15×15mm。 2、固定液的量一般以组织块大小的20倍为宜。 3、必须选择渗透力强，又不使组织过渡收缩或膨胀 的试剂作为固定液。 4、有的固定剂是由氧化剂与还原剂混合而成，如甲 醛（还原剂）与重铬酸钾（氧化剂）混合成的 Helly液等。
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3、击头法
如大、小鼠，可用重物击头后部或将其头后部猛撞桌沿，最 好一击而死。
4、断头法
青蛙、小鼠等小动物，可用剪刀剪去其头部，较大动物如兔 子等，可用斧头迅速砍头致死。
5、股动脉放血法
动物经吸入乙醚或氯仿稍麻醉后，立即切开股动脉放血。 注意：上述各法，应根据制片需要选用，如空气栓塞法不宜
用作血管注射标本的制作；乙醚麻醉对丘脑下神经部分泌物 染色标本不利；股动脉放血法有利于肠系膜铺片的制作。
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2、单纯固定液 （1）酒精：既是配制混合固定液的基本成分，又
可作为单纯固定液使用。用于固定时以80%95%浓度为好。缺点是经酒精固定的组织容易 变硬，对组织收缩较大。 （2）甲醛水溶液：常用的甲醛水溶液即市售的福 尔马林，常用浓度为10%，指以10ml的商品甲 醛（37%-40%甲醛水溶液）加入90ml水配成 的，此液实际上只有4%的甲醛。
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三、 组织固定法
（一）、固定的方法
1、小块组织固定法：从人体和动物取下的小块组织，立即置 入液态固定剂中进行固定，这是应用最广泛最经常的方法。 2、注射、灌注固定法：某些组织块由于体积过大或固定液 极难渗入内部或需要对整个脏器或整个动物进行固定。这时 宜采用注射固定法，将固定液注入血管，经血管分支到达整 个组织和全身，从而得到充分的固定。
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7、选好组织块的切面
熟悉某些器官组织成分安排，然后决定其切面的走向；如一 长管状器官以横切面较好。
8、保持材料的清洁
组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用生理 盐水冲洗，然后再入固定液，但要注意防止组织损伤。
9、切除不需要的部分
特别是组织周围的脂肪等，应尽可能清除掉，否则给固定、 脱水、浸蜡、切片等带来一些不必要的问题。
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第一章：取材及固定
一、 动物致死法
1、麻醉法
可将浸有乙醚或氯仿的棉球连同小动物一起密封于钟罩或有 盖玻璃瓶内进行麻醉；也可用4%戊巴比妥作静脉注射，剂 量按动物体重1ml/kg；或用20%氨基甲酸乙脂作腹腔注射， 剂量一般按动物体重5ml/kg。
2、空气栓塞法
如家兔可用50ml注射器将空气由耳静脉推入，使动物很快 死亡。
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5、固定时间的长短视固定剂的不同要求而定， 也与气温、组织块的大小有关。温度高时则时 间缩短，组织块过大则应延长固定时间。 6、软组织或较大组织可先经2-3小时固定后再修 整成小块重新投入新配制的固定液内继续固定。 7、特殊要求的组织，常需要特殊的固定液，所 以，取组织之前应做好准备。如各种神经组织 因显示内容不同，需不同的固定液与固定方法。