第二章蛋白质化学2(1)
2第二章蛋白质
O2N
R
室温
F ＋ H2N CH COOH
O2N
pH8～9
NO2
R HN CH COOH＋ HF
NO2
DNFB
DNP - 氨基酸 此反应最初被Sanger 用于测定
肽链 N-端氨基酸种类和数目
第二节 蛋白质的构件组成单位-氨基酸
蛋白质的水解（了解）
根据蛋白质的水解程度，可分为完全水解和部分 水解两种情况： —完全水解或彻底水解，得到的水解产物是各种 氨基酸的混合物； —部分水解（不完全水解），得到的产物是各种 大小不等的肽段和氨基酸.
① 酸水解：常用6 mol/L的盐酸或4 mol/L的硫酸在105110℃条件下进行水解，反应时间约20小时。
极 性 中 性 氨 基 酸
带负电荷的氨基酸 带正电荷的氨基酸
练习题 1：下列含有两个羧基的氨基酸是： A．精氨酸 B．甘氨酸 D．色氨酸 E．谷氨酸
练习题 2：下列含有咪唑环的氨基酸是： A．精氨酸 B．组氨酸 D．色氨酸 E．谷氨酸 练习题 3：下列哪种氨基酸为亚氨基酸： A．精氨酸 B．脯氨酸 D．色氨酸 E．谷氨酸
1899 1901 1901 1901 1904 1922 1935
Morner Fischer Fischer Hopkins Erhlich Mueller McCoy et al
牛角 奶酪 奶酪 奶酪 纤维蛋白 奶酪 奶酪
氨基酸的名称与符号
alanine
丙氨酸
AlaLeabharlann Aarginine
精氨酸
Arg
练习题：测得某一蛋白质样品的氮含量为0.40g，此 样品约含蛋白质多少？ A．2．00g B．2．50g C．6．40g D．3．00g
第二章蛋白质化学2
第二章核酸的结构和功能一、选择题1、热变性的DNA分子在适当条件下可以复性，条件之一是（B）。
A、骤然冷却B、缓慢冷却C、浓缩D、加入浓的无机盐2、在适宜条件下，核酸分子两条链通过杂交作用可自行形成双螺旋，取决于（D）。
A、DNA的Tm值B、序列的重复程度C、核酸链的长短D、碱基序列的互补3、核酸中核苷酸之间的连接方式是（C）。
A、2’，5’—磷酸二酯键B、氢键C、3’，5’—磷酸二酯键D、糖苷键4、tRNA的分子结构特征是（A）。
A、有反密码环和3’—端有—CCA序列B、有反密码环和5’—端有—CCA序列C、有密码环D、5’—端有—CCA序列5、下列关于DNA分子中的碱基组成的定量关系（D）是不正确的。
A、C+A=G+TB、C=GC、A=TD、C+G=A+T6、下面关于Watson-Crick DNA双螺旋结构模型的叙述中（A）是正确的。
A、两条单链的走向是反平行的B、碱基A和G配对C、碱基之间共价结合D、磷酸戊糖主链位于双螺旋内侧7、具5’－CpGpGpTpAp-3’顺序的单链DNA能与下列（C）RNA杂交。
A、5’-GpCpCpAp-3’B、5’-GpCpCpApUp-3’C、5’-UpApCpCpGp-3’D、5’-TpApCpCpGp-3’8、RNA和DNA彻底水解后的产物（C）。
A、核糖相同，部分碱基不同B、碱基相同，核糖不同C、碱基不同，核糖不同D、碱基不同，核糖相同9、下列关于mRNA描述，（A）是错误的。
A、原核细胞的mRNA在翻译开始前需加“PolyA”尾巴。
B、真核细胞mRNA在3’端有特殊的“尾巴”结构C、真核细胞mRNA在5’端有特殊的“帽子”结构D、原核细胞mRNA在5’端有特殊的“帽子”结构10、tRNA的三级结构是（B ）。
A、三叶草叶形结构B、倒L形结构C、双螺旋结构D、发夹结构11、维系DNA双螺旋稳定的最主要的力是（C）。
A、氢键B、离子键C、碱基堆积力D范德华力12、下列关于DNA的双螺旋二级结构稳定的因素中（A）是不正确的。
动物生物化学 第二章 蛋白质
蛋白质分子为右手-螺旋。
（1）-螺旋
-螺旋
表 几种螺旋结构参数
结构类型 残基/圈 1个氢键环的原子数 每个残基高度（nm） Φ Ψ
310螺旋 3.0
位 置
及顺序分析，
的 然后同其它方法分析的肽段进行比较，
确 确定二硫键的位置。
定
2.4 蛋白质的高级结构
2.4.1 肽单位平面结构和二面角
O
O
O
H
H
H
H2N
C
C
N H
C
C
N H
C
C
R
R
R
N端
肽单位
肽单位
O
H
H
NH C C N C COOH
H
R
R
C端
肽单位： 主肽链中的重复单位
肽键平面—由于肽键的双键性质，使得形成肽键的N、C原子以及它们相 连的四个原子形成一个平面，这个平面就叫肽键平面。
蛋白质构件分子是氨基酸。 氨基酸是蛋白质的基本单位。 自然界存在的氨基酸有300多 种，但合成蛋白质的氨基酸只 有20种，都属于α-氨基酸，其 中除甘氨酸外，其余都是L-α氨基酸。
蛋白质分子中的20种 氨基酸在DNA分子中有它 们特异的遗传密码相对应，
因而也称编码氨基酸 （Coding amino acid）。 新近发现的硒代半胱氨酸 （SeCys）也是一种编码 氨基酸。
由 两 个 氨 基 酸 组 成 的 肽 称 为 二 肽 ， 由 多 个 氨 基酸组成的肽则称为多肽。因为多肽呈链状， 所以又称为多肽链。组成多肽的氨基酸单元称 为氨基酸残基。
第二章 蛋白质
第二节 氨基酸
(2)碱法水解 (3)酶法水解 选择合适的蛋白酶，在适当的 pH和温度条件下与蛋白质溶液混匀，保温， 经一定时间得到所需的水解产物。 啤酒工业中用蛋白酶水解大分子蛋白质可 除去蛋白质混浊。增加产品稳定性。 (4)稀酸、稀碱水解
第二节 氨基酸
二、氨基酸的结构和分类 1、常见氨基酸 2、蛋白质分子中的稀有氨基酸
第一节 概述
二、蛋白质的化学组成 1、元素组成： 主要有C、H、O、N和少量S 有些蛋白质还有P、Cu、Fe、Mn、Mo、Co、 Zn、Mg、Ca等矿质元素
蛋白质换算系数
第一节 概述
2、蛋白质大分子的化合物组成 两种类型：单纯蛋白质和结合蛋白质
第一节 概述
单纯蛋白质：完全水解产物只有α-氨基酸。 结合蛋白质：由单纯蛋白质与耐热的非蛋白 质物质结合而成的，其非蛋白质部分称为 辅基。 结合蛋白质分子＝单纯蛋白质+辅基
第二章 蛋白质
第一节 概述
一、蛋白质的概念 二、蛋白质的化学组成 三、蛋白质的分类 四、蛋白质的分布和生物学意义
第一节 概述
一、什么是蛋白质 蛋白质是一切生物体中普遍存在的， 由天然氨基酸通过肽键连接而成的生物大 分子；其种类繁多，各具有一定的相对分 子质量、复杂的分子结构和特定的生物功 能；是表达生物遗传性的一类主要物质。
第一节 概述
2、蛋白质的生物学作用 (1)形态学功能：生物体的各种组织结构都有 蛋白质参加构成，如动物的角、毛、肉等 形态结构的干物质主要成分都是蛋白质。 (2)生理活性功能：如酶的催化作用，糖蛋白 的细胞识别作用 (3)外氨基酸
一、蛋白质的水解 二、氨基酸的结构和分类 三、氨基酸的理化性质 四、氨基酸的分离制备和分析鉴定
2.7.1第二章蛋白质化学常见的蛋白质沉淀方法
④ 金属离子沉淀法
• 当溶液pH大于等电点时，蛋子等）结合形成不 溶性盐的沉淀。
• 应用：误服重金属盐的病人可口服大量牛乳或豆浆等蛋白质 溶液进行解救，就是利用了蛋白质能与重金属离子形成不溶 性盐，然后再服用催吐剂把它排除体外的原理。
2）影响蛋白质溶解度的因素
蛋白质分子大小，氨基 酸组成，氨基酸序列，可 离子化的氨基酸残基数量， 极性/非极性残基比率， 极性/非极性残基分布， 氨基酸残基的化学性质均 会影响蛋白质水化层的厚 度，从而影响蛋白质的溶 解度。
水溶液的水活度的影响
2）影响蛋白质溶解度的因素
蛋白质自身性质
✓ 蛋白质一级结构：分子大小 ，氨基酸组成，氨基酸序列 ，可离子化的氨基酸残基数 量，极性/非极性残基比率， 极性/非极性残基分布，氨基 酸残基的化学性质
思考
• 蛋白质沉淀在生活中有哪些应用呢？
参考书目
生物化学原理.杨荣武主编，北京:高等教育出版社出 版，2012.
生物化学简明教程（第四版）.罗纪盛等主编，北京: 高等教育出版社出版,2009.
生物化学（第三版）.王镜岩、朱圣庚等主编，北京: 高等教育出版社. 2002.
基 础 生 物 化 学 . 陈 惠 主 编 ， 北 京 : 中 国 农 业 出 版 社 ， 2014.
Nelson D L, lehninger Principles of Biochemistry. 4th
ed. New York: W. H. Freeman,2004.
• 注意：低浓度的中性盐不但不会导致蛋白质沉淀，还会促 进蛋白质的溶解，称为盐溶。
• 优点：盐析沉淀一般不会导致蛋白质的变性，通过透析或 者超滤的方法去除蛋白质溶液中的中性盐后，蛋白质可重 新溶解形成蛋白质溶液。
生物化学第二章蛋白质知识点归纳
一、概述
结合蛋白：由简单蛋白与其它非蛋白成分结合而成。按辅基种类分为： 1 核蛋白（nucleoprotein ） 核酸 2 脂蛋白（lipoprotein ） 脂质 3 糖蛋白（glycoprotein） 糖 4 磷蛋白（phosphoprotein） 磷酸基 5 血红素蛋白（hemoprotein ） 血红素 6 黄素蛋白（flavoprotein ） FAD 7 金属蛋白（metallaprotein ） 金属
据R基团 极性分类
例外：
COO+α
H3N C H
R
Gly —— 没有手性
构型与旋光方向没有直接对应关系，L-α-氨基酸有的为左旋，有的为右旋， 即使同一种L-α-氨基酸，在不同溶剂也会有不同的旋光度或不同的旋光方向。
二十种常见蛋白质氨基酸的分类、结构及三字符号
据R基团化学 结构分类
脂肪族ＡA（烃链、含羟基或巯基、羧基、碱性基团） 杂环ＡＡ(His、Pro) 芳香族ＡA(Phe、Tyr、Trp)
6 结构蛋白（structural protein）
7 防御蛋白（defense protein） 8 异常蛋白 (exotic protein)
二
氨基酸
1.蛋白质的水解 2.氨基酸的结构与分类 3.氨基酸的理化性质
一、蛋白质水解
完全水解得到各种氨基酸的混合物； 部分水解通常得到肽片段及氨基酸的混合物。 氨基酸是蛋白质的基本结构单元。 大多数的蛋白质都是由20种氨基酸组成，这20种
一、概述
按生物功能分：
1 酶（enzyme）
2 调节蛋白（regulatory protein）
3 转运蛋白（transport protein） 4 储存蛋白（nutrient and storage
大学生物化学课件 第2章 蛋白质化学
肽链上的氨基酸不是完整的氨基 酸，因而称为氨基酸残基（Amino acid residues）。 一条肽链有两端。 具有游离氨基的一端称为氨基末端 （Amino terminal,或叫N端）。 具有游离羧基的一端称为羧基末端 （Carboxyl terminal，或叫C端）。
3. 肽的书写方法 Calligraph of peptides 书写肽链时，习惯把N端写在左 边，把C端写在右边。 两个氨基酸之间用·或-分开，也 可以用圆圈将氨基酸符号圈开。
4.
二 . 蛋白质的分类 Classification of proteins
1. 根据蛋白质的分子形状分类 Classification according to the shape of protein molecules 球状蛋白质 Globulins 纤维状蛋白质 Fibrins
2. 根据蛋白质的功能分类 Classification according to the functions of proteins 活性蛋白质 Active proteins 酶，转运蛋白，调节蛋白，信号蛋 白，防御蛋白等。 非活性蛋白质 Passive proteins 结构蛋白等。 3. 根据组成分类 Classification according to the composition of proteins 简单蛋白质 Simple proteins 结合蛋白质 Conjugated proteins
2. 由氨基和羧基参与的几种重要化学反应 Several important reactions of amino acids 1）茚三酮反应 Ninhydrin reaction 茚三酮 + 氨基酸 蓝紫色化合物
*
茚三酮反应
生物化学选择题(1)
生物化学选填题第二章蛋白质的结构与功能2.1蛋白质的分子组成1.组成天然蛋白质的氨基酸共有（）A.10种B.20种C.30种D.40种正确答案：B2.测得某一蛋白质样品的含氮量为2.4g，该样品约含蛋白质多少克？A.12B.13C.14D.15正确答案：D3.组成蛋白质的基本单位是A.L-α-氨基酸B.D-α-氨基酸C.L-β-氨基酸D.D-β-氨基酸正确答案：A4.在组成蛋白质的20中氨基酸中，碱性氨基酸有（）种，酸性氨基酸分别是（）和（）。
正确答案:(1)三；3(2)天冬氨酸(3)谷氨酸5.在蛋白质分子中，一个氨基酸的α碳原子上的（）与另一个氨基酸碳α原子上的（）脱去一分子水形成的键叫（），它是蛋白质分子中的主键。
正确答案:(1)氨基；羧基(2)羧基；氨基(3)肽键；酰胺键6.不同蛋白质的含—量颇为相近，平均含量为（）％正确答案:167.一条多肽链通常有两个游离末端，一端称为氨基端，另一端称为（）端正确答案:羧基端8.生物体内能合成许多具有各种重要生物学活性的小分子肽，称为（）正确答案:生物活性肽2.2蛋白质的分子结构1.维持蛋白质分子二级结构稳定的主要化学键是（）A.二硫键B.盐键C.氢键D.疏水键正确答案：C2.蛋白质的α-螺旋和β-折叠都属于A.一级结构B.二级结构C.三级结构D.四级结构正确答案：B3.蛋白质的三级结构是指（）A.亚基的立体排布B.多肽链的主链构象C.多肽链的侧链构象D.蛋白质所有原子的构象正确答案：D4.有关亚基的描述，哪一项不恰当:A.每种亚基都有各自的三维结构B.亚基内除肽键外还可能会有其它共价键存在C.一个亚基（单位）只含有一条多肽链D.亚基单位独立存在时具备原有生物活性正确答案：D5.有关蛋白质四级结构的描述错误的是A.具有两条多肽链以上的蛋白质一定具有四级结构B.维系蛋白质四级结构的化学键不包括二硫键C.蛋白质四级结构就是亚基通过共价键缔合而成D.四级结构的蛋白质分子中亚基可以相同，也可不同正确答案：A这道题大家选择A或者C都可以，题目不太严谨6.一个完整的蛋白质分子至少必需具有A.一级结构B.二级结构C.三级结构D.四级结构正确答案：C7.β折叠是A.β-折叠中氢键与肽链的长轴平行B.氢键只在不同肽链之间形成C.主链骨架呈锯齿状形成折叠的片层D.只有反平行式结构，没有平行式结构正确答案：C8.蛋白质二级结构的形式包括（）正确答案:α-螺旋、β-折叠、β-转角和无规卷曲9.蛋白质四级结构中具有独立三级结构的多肽链称为（）正确答案:亚基10.蛋白质的一级结构是指蛋白质多肽链中氨基酸的（）正确答案:排列顺序2.3蛋白质的分子结构与功能的关系1.“分子病”是蛋白质什么结构的改变:A.一级B.二级C.三级D.四级正确答案：A2.镰刀形红细胞贫血症的发病机制是：A.血红蛋白β链上6号氨基酸为谷氨酸B.血红蛋白β链上6号氨基酸为缬氨酸C.血红蛋白α链上6号氨基酸为谷氨酸D.血红蛋白α链上6号氨基酸为缬氨酸正确答案：B3.蛋白质分子中-S-S-断裂的方法是A.加尿素B.透析法C.加过甲酸D.加重金属盐正确答案：A4.蛋白质一级结构与功能关系的特点是：A.相同氨基酸组成的蛋白质,功能一定相同。
南开大学：生化课件02蛋白质化学
D/L标记法 标记法
甘油醛 D/L 分型为参考标准
球棍式
透视式
投影式
二、氨基酸的分类和结构
基团结构分： 依R基团结构分： 基团结构分 非极性氨基酸（ 非极性氨基酸（Nonpolar Amino Acids）9种 ） 种 极性，不带电荷氨基（Polar,Uncharged 极性，不带电荷氨基（ Amino Acids）6/7种 ） 种 酸性氨基酸 (-)（Acidic Amino Acids）2种 （ ） 种 碱性氨基酸 (+)（Basic Amino Acids）3种 （ ） 种
含非极性R基团的氨基酸 含非极性 基团的氨基酸
（甲硫氨酸） 甲硫氨酸）
含极性不带电荷R基团的氨基酸 含极性不带电荷 基团的氨基酸
含带负电荷（酸性） 基团的氨基酸 含带负电荷（酸性）R基团的氨基酸
含带正电荷（碱性） 基团的氨基酸 含带正电荷（碱性）R基团的氨基酸
4-羟脯氨酸 羟脯氨酸 3-甲基组氨酸 甲基组氨酸 5-羟赖氨酸 羟赖氨酸
ε—N-N-N-三甲基赖氨酸 三
甲状腺素
三、蛋白质 中修饰性氨 基酸
γ-羧基谷氨酸 羧基谷氨酸 α-氨基己二酸 氨基己二酸 氨基己二 焦谷氨酸
ε-N-甲基赖氨酸 甲基赖氨酸
磷酸丝氨酸 磷酸苏氨酸 磷酸丝氨酸 磷酸苏氨酸 磷酸酪氨酸 磷酸酪氨酸
N-甲基精氨酸 甲基精氨酸
N-乙酰 赖氨酸
四、非蛋白质氨基酸
[质子供体] 质子供体]
pK值 ：指某种解离基团有一半被解离时的 值。 值 指某种解离基团有一半被解离时的pH值
pK1
pK2
甘氨酸酸 碱滴定曲线
2.34
9.60
Gly等电点的计算 等电点的计算
1 第二章 蛋白质化学作业及答案.
班级学号姓名第二章《蛋白质化学》作业及参考答案第一部分试题1．氨基酸的侧链对多肽或蛋白质的结构和生物学功能非常重要。
用三字母缩写形式列出其侧链为如下要求的氨基酸：（a）含有一个羟基；b）含有一个氨基；c）含有一个具有芳香族性质的基团；（d）含有分支的脂肪族烃链；（e）含有硫；（f）含有一个在pH 7－10范围内可作为亲核体的基团或原子，指出该亲核基团或原子。
2．某种溶液中含有三种三肽：Tyr - Arg - Ser , Glu - Met - Phe 和Asp - Pro - Lys , α- COOH基团的pKa 为3.8; α-NH3基团的pKa为8.5。
在哪种pH（2.0,6.0或13.0）下，通过电泳分离这三种多肽的效果最好？3．利用阳离子交换层析分离下列每一对氨基酸，哪一种氨基酸首先被pH7缓冲液从离子交换柱上洗脱出来。
（a）Asp和Lys；（b）Arg和Met；c）Glu和Val；（d）Gly和Leu（e）Ser和Ala4．胃液（pH＝1.5）的胃蛋白酶的等电点约为1，远比其它蛋白质低。
试问等电点如此低的胃蛋白酶必须存在有大量的什么样的官能团？什么样的氨基酸才能提供这样的基团？5．一个含有13个氨基酸残基的十三肽的氨基酸组成为：Ala, Arg,2 Asp, 2Glu, 3Gly, Leu, 3Val。
部分酸水解后得到以下肽段，其序列由Edman降解确定，试推断原始寡肽的序列。
（a）Asp - Glu - Val - Gly - Gly - Glu - Ala（b）Val - Asp - Val - Asp - Glu（c）Val - Asp - Val（d）Glu - Ala -Leu - Gly -Arg（e）Val - Gly - Gly - Glu - Ala - Leu（f）Leu - Gly - Arg6．由下列信息求八肽的序列。
（a）酸水解得Ala，Arg，Leu，Met，Phe，Thr，2Val（b）Sanger试剂处理得DNP-Ala。
生物化学问答题
⽣物化学问答题第⼆章蛋⽩质化学1、举例说明蛋⽩质的⼀级结构、空间结构与功能的关系。
答：⼀级结构是空间结构和功能的基础。
⼀级结构相似其功能也相似，例如不同哺乳动物的胰岛素⼀级结构相似，仅有个别氨基酸差异，故它们都具有胰岛素的⽣物学功能；⼀级结构不同，其功能也不同；⼀级结构发⽣改变，则蛋⽩质功能也发⽣改变，例如⾎红蛋⽩由两条α链和两条β链组成，正常⼈β链的第六位⾕氨酸换成了缬氨酸，就导致分⼦病--镰⼑状红细胞贫⾎的发⽣，患者红细胞带氧能⼒下降，易出⾎。
空间结构与功能的关系也很密切，空间结构改变，其理化性质与⽣物学活性也改变。
如核糖核酸酶变性或复性时，随之空间结构破坏或恢复，⽣理功能也丧失或恢复。
变构效应也说明空间结构改变，功能改变。
2、什么是多肽链的N末端和C末端？如何测定N末端？答：c端是羧基端，n端是氨基端。
测定N末端可⽤2,4-⼆硝基氟苯法、丹磺酰氯法和Edman降解法。
3、维持蛋⽩质溶液稳定的因素是什么？实验中常⽤来沉淀蛋⽩质的⽅法有哪些？答：1）蛋⽩质的⽔化作⽤（⽔膜或⽔化层）2）蛋⽩质颗粒在⾮等电点时带有相同电荷沉淀蛋⽩质的主要⽅法有:1、加⾼浓度中性盐（盐析）2、重⾦属盐沉淀蛋⽩质3、⽣物碱试剂和某些酸类沉淀蛋⽩质4、有机溶剂沉淀蛋⽩质5、加热凝固4、什么是蛋⽩质的变性作⽤和复性作⽤？蛋⽩质变性后哪些性质会发⽣改变？答：蛋⽩质的变性作⽤是指在某些因素的影响下，蛋⽩质分⼦的空间构象被破坏，并导致其性质和⽣物活性改变的现象。
除去变性因素，某些蛋⽩质变性后在适当条件下可恢复其原来的三维结构和⽣物活性，这个过程称为蛋⽩质的复性。
变性发⽣的改变：①⽣物活性丧失②理化性质改变，包括：溶解度降低，结晶能⼒丧失，光学性质改变③⽣物化学性质改变，分⼦结构伸展松散，易被蛋⽩酶分解5、试⽐较蛋⽩质的⼀、⼆、三、四级结构及维持其稳定的化学键。
答：（1）多肽链中氨基酸的数⽬、排列顺序和连接⽅式称为蛋⽩质的⼀级结构，维系蛋⽩质⼀级结构中的主要化学键是肽键，有些蛋⽩质还包含⼆硫键。
第二章蛋白质化学蛋白质的结构(共67张PPT)
肽键为一平面
相邻的a碳原子呈反式构型
3、肽的命名及结构
• 1、根据所含AA数目：二肽、三肽、四肽等 • 2、根据来源和功能：如，脑啡肽、短杆菌肽S等。 • 3、肽结构：自然界中存在的肽有开链式结构和
环状结构。环状结构中没有游离的氨基末端和 游离的羧基末端，微生物中常见，如，短杆菌 肽S 。
4、多肽链的表达式
〔1〕组成蛋白质的多肽链数目； 2、根据来源和功能：如，脑啡肽、短杆菌肽S等。
2、亚基间呈特定的三维空间排布，依赖次级键维持其结构稳定 ．
〔2〕多肽链的氨基酸顺序； 3、蛋白质分子中亚基可相同，也可不相同。
常用的有巯基乙醇(mercaptoethanol) 、巯基乙酸(mercaptoacetic acid) 、二硫苏糖醇(dithiothreitol, DTT)等。 硼氢化锂〔LiBH4〕
2H2O
GSSG
NADP+
GSH复原酶
NADPH+H+
2. 多肽类激素及神经肽
• 体内许多激素属寡肽或多肽
• 神经肽(neuropeptide)
(三)蛋白质一级结构的测定
要求
• 样品必须是均一的。纯度在>97%以上 • 知道蛋白质的相对分子质量
• (1)组成蛋白质的多肽链数目 (2)多肽链的氨基酸种类、数目及排列顺序; (3)多肽链内或链间二硫键的数目和位置。 ★其中最重要的是多肽链的氨基酸顺序，它是蛋白 质高级结构及其生物功能的根底。
化学裂解法
溴化氰法〔CNBr〕:特异性水解对Met羧基形成的 肽键 羟胺法:羟胺专一裂解Asn-Gly的肽键，酸性条件下 裂解Asn-Pro肽键。
酶水解法〔专一性高，水解产率高〕
胰蛋白酶: 胰凝乳蛋白酶〔糜蛋白酶〕: 胃蛋白酶:
生理生化2第二章(1)蛋白质
第二章蛋白质蛋白质（Protein)是最基本的生命物质之一,是细胞中含量最丰富、功能最多的生物大分子。
它参与动物、植物、微生物的几乎所有生命结构和生命过程,它在细胞结构、生物催化、物质运输、运动、防御、调控以及记忆、识别等各个方面起着极其重要的作用。
恩格斯<<自然辨证法>>：生命是蛋白体存在的方式无论在什么地方，只要我们遇到生命，我们就会发现生命是和某种蛋白体相联系的;并且无论在什么地方,只要我们遇到不处于解体过程的蛋白体,我们也无例外地发现生命。
一、元素组成：蛋白质主要含有C、H、O、N，有的还含有S、P等，蛋白质元素组成与糖、脂不同的是含有N，而且大多数蛋白质含N量相当接近，约为15—17%，平均为16%，所以在任何生物样品中，每克N的存在大约表示该样品含有100/16=6.25g蛋白质(蛋白质指数）,因此,只要测定生物样品中的含N量,就能计算出蛋白质的大致含量。
例如测定100克面粉中含有2gN，说明100克面粉里含有2×6.25=13.25g蛋白质,面粉的蛋白质含量=13.5%。
三聚氰胺（英文名：Melamine），是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，重要的氮杂环有机化工原料。
简称三胺，俗称蜜胺、蛋白精，又叫2 ,4 ,6-三氨基-1,3,5-三嗪、1,3,5-三嗪-2,4,6-三胺、2,4,6-三氨基脲、三聚氰酰胺、氰脲三酰胺。
它是白色单斜晶体，几乎无味，微溶于水。
不溶於丙酮、醚类、对身体有害，不可用於食品加工或食品添加物。
然而，近日青海、甘肃、吉林等省再现三聚氰胺超标奶粉，超标500余倍。
很可能是对尚未完全销毁的“三鹿问题奶粉”进行加工、销售。
二、蛋白质是高分子物质结构复杂，分子量大，一般都在一万道尔顿（D）以上，蛋白质可被酸、碱和蛋白酶催化水解，使蛋白质分子断裂，分子量逐步变小，最后水解成AA。
L -和L 或 D -α－氨基酸的混合物完全水解酸或碱催化水解几种蛋白酶催化水解部分水解得到多肽片段L-α－氨基酸的混合物蛋白质酸水解：在体外加5—10倍20%Hcl水解蛋白质24hr，即可使蛋白质水解成AA（举例：猪毛制备AA，胱aa、赖aa、精aa等）碱水解：毛发蛋白6molNaOH溶液中煮沸6hr 水解成AA酶水解在生物体内，蛋白质主要是在蛋白酶的催化下分解的，在水解过程中由于水解方法和条件不同，可以得到不同程度的降解物。
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第二章核酸的结构和功能一、选择题1、热变性的DNA分子在适当条件下可以复性，条件之一是（B）。
A、骤然冷却B、缓慢冷却C、浓缩D、加入浓的无机盐2、在适宜条件下，核酸分子两条链通过杂交作用可自行形成双螺旋，取决于（D）。
A、DNA的Tm值B、序列的重复程度C、核酸链的长短D、碱基序列的互补3、核酸中核苷酸之间的连接方式是（C）。
A、2’，5’—磷酸二酯键B、氢键C、3’，5’—磷酸二酯键D、糖苷键4、tRNA的分子结构特征是（A）。
A、有反密码环和3’—端有—CCA序列B、有反密码环和5’—端有—CCA序列C、有密码环D、5’—端有—CCA序列5、下列关于DNA分子中的碱基组成的定量关系（D）是不正确的。
A、C+A=G+TB、C=GC、A=TD、C+G=A+T6、下面关于Watson-Crick DNA双螺旋结构模型的叙述中（A）是正确的。
A、两条单链的走向是反平行的B、碱基A和G配对C、碱基之间共价结合D、磷酸戊糖主链位于双螺旋内侧7、具5’－CpGpGpTpAp-3’顺序的单链DNA能与下列（C）RNA杂交。
A、5’-GpCpCpAp-3’B、5’-GpCpCpApUp-3’C、5’-UpApCpCpGp-3’D、5’-TpApCpCpGp-3’8、RNA和DNA彻底水解后的产物（C）。
A、核糖相同，部分碱基不同B、碱基相同，核糖不同C、碱基不同，核糖不同D、碱基不同，核糖相同9、下列关于mRNA描述，（A）是错误的。
A、原核细胞的mRNA在翻译开始前需加“PolyA”尾巴。
B、真核细胞mRNA在 3’端有特殊的“尾巴”结构C、真核细胞mRNA在5’端有特殊的“帽子”结构D、原核细胞mRNA在5’端有特殊的“帽子”结构10、tRNA的三级结构是（ B ）。
A、三叶草叶形结构B、倒L形结构C、双螺旋结构D、发夹结构11、维系DNA双螺旋稳定的最主要的力是（C）。
A、氢键B、离子键C、碱基堆积力 D范德华力12、下列关于DNA的双螺旋二级结构稳定的因素中（A）是不正确的。
A、3'，5'－磷酸二酯键 C、碱基堆积力B、互补碱基对之间的氢键D、磷酸基团上的负电荷与介质中的阳离子之间形成的离子键13、Tm是指（C）情况下的温度。
A、双螺旋DNA达到完全变性时B、双螺旋DNA开始变性时C、双螺旋DNA结构失去1/2时D、双螺旋结构失去1/4时14、稀有核苷酸碱基主要见于（C）。
A、DNAB、mRNAC、tRNAD、rRNA15、双链DNA的解链温度的增加，提示其中含量高的是（D）。
A、A和GB、C和TC、A和TD、C和G16、核酸变性后，可发生的效应是（B）。
A、减色效应B、增色效应C、失去对紫外线的吸收能力D、最大吸收峰波长发生转移17、某双链DNA纯样品含15％的A，该样品中G的含量为（A ）。
A、35％B、15％C、30％D、20％18、预测下面（B ）基因组在紫外线照射下最容易发生突变。
A、双链DNA病毒B、单链DNA病毒C、线粒体基因组D、细胞核基因组19、下列关于cAMP的论述（B ）是错误的。
A、是由腺苷酸环化酶催化A TP产生B、是由鸟苷酸环化酶催化A TP产生的C、是细胞第二信息物质D、可被磷酸二酯酶水解为5'-AMP20、下列关于Z型DNA结构的叙述（D）是不正确的。
A、它是左手螺旋B、每个螺旋有12个碱基对，每个碱基对上升0.37nmC、DNA的主链取Z字形D、它是细胞内DNA存在的主要形式21、下列关于DNA超螺旋的叙述（B ）是不正确的。
A、超螺旋密度α为负值，表示DNA螺旋不足B、超螺旋密度α为正值，表示DNA螺旋不足C、大部分细胞DNA呈负超螺旋D、当DNA分子处于某种结构张力之下时才能形成超螺旋22、下列（B）技术常用于检测凝胶电泳分离后的限制性酶切片段。
A、Eastern blottingB、Southern blottingC、Northern blottingD、Western blotting23、下列复合物中除（C）外，均是核酸与蛋白质组成的复合物。
A、核糖体B、病毒C、核酶D、端粒酶24、胸腺嘧啶除了作为DNA的主要组分外，还经常出现在（ B ）分子中。
A、mRNAB、tRNAC、rRNAD、hnRNA25、艾滋病病毒HIV是一种（D）病毒。
A、双链DNA病毒B、单链DNA病毒C、双链RNA病毒D、单链RNA病毒26、对DNA片段作物理图谱分析，需要用（C）。
A、核酸外切酶B、DNase IC、限制性内切酶D、DNA聚合酶I27、引起疯牛病（牛海绵脑病）的病原体是（ C ）。
A、一种DNAB、一种RNAC、一种蛋白质D、一种多糖28、RNA经NaOH水解，其产物是（D）。
A、5’－核苷酸B、2’－核苷酸C、3’－核苷酸D、2’－核苷酸和3’－核苷酸29、下述DNA中（B）是单拷贝DNA。
A、组蛋白基因B、珠蛋白基因C、rRNA基因D、tRNA基因30、snRNA的功能是（B）。
A、作为mRNA的前身物B、促进mRNA的成熟C、催化RNA的合成D、使RNA的碱基甲基化31、在mRNA中，核苷酸之间（D ）连接。
A、磷酸酯键B、氢键C、糖苷键D、磷酸二酯键32、真核细胞RNA帽样结构中最多见的是（B ）。
A、m7ApppNmp(Nm)pNB、m7GpppNmp(Nm)pNC、m7UpppNmp(Nm)pND、m7CpppNmp(Nm)pN33、DNA变性后理化性质有下述那个改变（B ）。
A、对260nm紫外光吸收减少B、溶液粘度下降C、磷酸二酯键断裂D、糖苷键断裂34、决定tRNA携带氨基酸特异性的关键部位是（A）。
A、-XCCA 3'末端B、TψC环C、HDU环D、反密码环35、下列单股DNA片段中（C）在双链状态下可形成回文结构。
A、ATGCCGTAB、ATGCTACGC、GTCATGACD、GTATCTAT36、下列对环核苷酸的描述（D）是错误的。
A、是由5'-核苷酸的磷酸基与核糖C-3'上的羟基脱水缩合成酯键,成为核苷的3',5'-环磷酸二酯B、重要的环核苷酸有cAMP及cGMPC、cAMP在生理活动及物质代谢中有重要的调节作用,被称之为第二信使D、环核苷酸的核糖分子中碳原子上没有自由的羟基37、DNA携带生物遗传信息这一事实意味着（C）。
A、不论哪一物种的碱基组成均应相同B、病毒的侵染是靠蛋白质转移至宿主细胞来实现的C、同一生物不同组织的DNA,其碱基组成相同D、DNA的碱基组成随机体年龄及营养状态而改变38、下列关于核酸的描述（C）是错误的。
A、核酸分子具有极性B、多核苷酸链有两个不相同的末端C、多核苷酸链的3'-端为磷酸基D、多核苷酸链的5'-端为磷酸基39、自然界游离核苷酸中的磷酸最常位于（C）。
A、核苷的戊糖的C-2'上B、核苷的戊糖的C-3'上C、核苷的戊糖的C-5'上D、核苷的戊糖的C-2'及C-3'上40、核酸（C）。
A、是生物小分子B、存在于细胞内唯一的酸C、是遗传的物质基础D、是组成细胞的骨架二、是非题（在题后括号内打√或×）1、杂交双链是指DNA双链分开后两股单链的重新结合。
×2、tRNA的二级结构是倒L型。
×3、DNA分子中的G和C的含量愈高，其熔点（Tm）值愈大。
√4、Z型DNA与B型DNA可以相互转变。
√5、在tRNA分子中，除四种基本碱基（A、G、C、U）外，还含有稀有碱基。
√6、一种生物所有体细胞的DNA，其碱基组成均是相同的，这个碱基组成可作为该类生物种的特征。
√7、核酸探针是指带有标记的一段核酸单链。
√8、DNA是遗传物质，而RNA则不是。
×9、真核生物成熟mRNA的两端均带有游离的3ˊ－OH。
√10、核糖体不仅存在于细胞质中，也存在于线粒体和叶绿体中。
√11、基因表达的最终产物都是蛋白质。
×12、毫无例外从结构基因中的DNA序列可以推出相应的蛋白质序列。
×13、对于提纯的DNA样品，测得OD260/OD280＜1.8，则说明样品中含有RNA。
×14、在所有病毒中，迄今为止还没有发现既含有RNA又含有DNA的病毒√15、生物体内，天然存在的DNA多为负超螺旋。
√16、由两条互补链组成的一段DNA有相同的碱基组成。
×17、所有生物的染色体都具有核小体结构。
×18、核酸是两性电解质，但通常表现为酸性。
√19、真核生物成熟tRNA的两端均带有游离的3′-OH。
×20、用于核酸分离的凝胶电泳有琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。
√三、问答题：1、某DNA样品含腺嘌呤15.1%（按摩尔碱基计），计算其余碱基的百分含量。
答：根据碱基互补配对原则A=T=15.1% C=G=（1-15.1%）/2所以结果是：A(腺嘌呤)：15.1% T(胸腺嘧啶): 15.1%C（细胞嘧啶）: 34.9% G（鸟嘌呤）: 34.9%2、DNA和RNA的结构和功能在化学组成、分子结构、细胞内分布和生理功能上的主要区别是什么？答：1）DNA化学组成：组成DNA的碱基有A、T、C、G四种，戊糖为D-2-脱氧核糖。
分子结构：DNA分子常为双链结构，包括一级结构、二级结构、三级结构等。
细胞内分布：DNA在细胞内主要分布于细胞核，组成染色质(染色体)，此外线粒体中也有少部分DNA。
生理功能：主要是作为遗传物质，通过复制将遗传信息由亲代传给子代。
2）RNA化学组成：组成RNA的碱基有A、U、C、G这四种，戊糖为D-核糖。
分子结构：RNA为单链线形分子，可自身回折形成局部双螺旋（二级结构），进而折叠（三级结构）。
细胞内分布：RNA分为三类：tRNA、rRNA和mRNA，分布于细胞质中的核糖体上。
生理功能：RNA的功能是与遗传信息在子代的表达有关，如转录、翻译。
某些病毒的基因组为RN A，此外RNA还有催化功能。
3、DNA双螺旋结构有些什么基本特点？这些特点能解释哪些最重要的生命现象？答：1）（1）两条反向平行的多聚核苷酸链沿一个假设的中心轴右旋相互盘绕而形成。
（2）磷酸和脱氧核糖单位作为不变的骨架组成位于外侧，作为可变成分的碱基位于内侧，链间碱基对形成氢键，按A—T，G—C配对（碱基配对原则，Chargaff定律）（3）螺旋直径2nm，沿螺旋的中心轴形成大沟和小沟交替出现。
（4）相邻碱基平面垂直距离0.34nm,螺旋结构每隔10个碱基对（base pair, bp）重复一次，间隔为3.4nm。
2）解释生命活动：双螺旋DNA是储存遗传信息的分子，通过半保留复制，储存遗传信息；通过转录和翻译表达出生命活动所需信息。