红细胞血型检测
血型的鉴定方法及操作
方法学评价
灵敏度和准确性高，实验结果重复性好，可长时间保存 自动化程度高，实验过程标准化，ISO9000/CE认证 成本高
03
间接Coomb’s（indirect antiglobulin test, IDAT）
DAT：检查红细胞是否致敏
IDAT：检测血清中不完全抗体
原理和方法 低离子强度盐溶液（low ionic strength salt solution, LISS)：降低介质离子强度，增加抗原抗体结合 聚凝胺：中和红细胞表面负电荷，使红细胞发生非特异性凝集。 重悬液（resuspension)
正反定型不一致的可能原因（三）
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规则抗体和不规则抗体
规则抗体：ABO系统产生抗Ａ、抗Ｂ是有规律的。
Landsteiner规律： Ａ型－抗Ｂ，Ｂ型－抗Ａ，Ｏ型－抗Ａ，抗Ｂ
不规则抗体：除ABO 系统外，其他系统产生的抗体均不符合上述规律。
正常人血液中一般没有不规则抗体，又称为意外抗体（unexpected antibody）。
完全抗体和不完全抗体
血型（blood type)
红细胞血型原理与检测策略
红细胞血型原理与检测策略引言：红细胞血型是指红细胞表面的抗原和血清中的抗体的特异性反应。
根据不同的抗原和抗体的存在与否，可以将人类的红细胞血型分为A、B、AB和O型。
了解红细胞血型具有重要的临床意义，包括输血、器官移植和孕产妇管理等方面。
本文将介绍红细胞血型的原理以及常用的检测策略。
一、红细胞血型的原理红细胞血型是由红细胞表面的抗原和血清中的抗体决定的。
抗原是一种能够刺激机体产生抗体的物质，而抗体则是一种能够与抗原特异性结合的免疫球蛋白。
根据红细胞表面抗原的不同，人类的红细胞血型可分为A、B、AB和O型。
1. ABO血型系统：ABO血型系统是最常见和最重要的红细胞血型系统之一。
根据红细胞表面是否存在A抗原和B抗原，人类可以分为A型、B型、AB 型和O型。
A型红细胞表面有A抗原，B型红细胞表面有B抗原，AB型红细胞表面同时具有A抗原和B抗原，而O型红细胞表面则没有A抗原和B抗原。
2. Rh血型系统：Rh血型系统是另一个重要的红细胞血型系统。
Rh血型系统中最重要的抗原是Rh因子，也称为D抗原。
如果红细胞表面有Rh因子，则为Rh阳性；如果没有Rh因子，则为Rh阴性。
二、红细胞血型的检测策略红细胞血型的检测通常包括血型鉴定和抗体筛查两个方面。
1. 血型鉴定：血型鉴定是指确定个体的ABO血型和Rh血型。
常用的血型鉴定方法包括直接血细胞法和血清试剂法。
直接血细胞法是通过将被测血液与已知血型的抗血清混合，观察凝集反应来确定血型。
例如，将被测血液与抗A血清混合，如果出现凝集反应，则说明被测血液为A型；如果与抗B血清混合后出现凝集反应，则说明被测血液为B型。
血清试剂法是通过将被测血液与已知血型的红细胞混合，观察凝集反应来确定血型。
例如，将被测血液与A型红细胞混合，如果出现凝集反应，则说明被测血液为B型。
2. 抗体筛查：抗体筛查是为了检测血清中是否存在与红细胞抗原相对应的抗体，以避免输血引起的不良反应。
常用的抗体筛查方法包括交叉试验和抗人球蛋白试验。
血型鉴定操作步骤
血型鉴定操作步骤
血型鉴定，主要是通过红细胞凝集试验来进行，操作步骤如下：
1、准备材料：包括清洁玻片、抗A和抗B血清、待测红细胞样本等。
2、划线分组：在玻片上用蜡笔划成几个区域，分别标明抗A、抗B等。
3、滴血清：在相应的区域滴上抗A、抗B血清。
4、加红细胞：在血清上滴上待测红细胞样本。
5、混合：用玻片轻轻转动，使血清与红细胞充分混合。
6、观察：静置一段时间后，观察红细胞是否发生凝集现象。
7、判断结果：根据红细胞凝集情况，判断血型。
此外还有试管法血型鉴定，其操作步骤类似，只是在观察凝集现象时使用试管代替玻片。
血型检测实验报告结论(3篇)
第1篇一、实验目的本次实验旨在通过血液学检测方法，对受试者的血型进行鉴定，了解其血型特征，为临床输血、器官移植等医疗活动提供科学依据。
二、实验原理血型鉴定是依据人类红细胞表面抗原的差异进行分类的。
根据不同的抗原，血型可分为A、B、O、AB四种类型。
本实验采用凝集反应原理，通过观察红细胞与抗血清之间的反应，判断受试者的血型。
三、实验材料1. 受试者血液样本2. 抗A、抗B标准血清3. 抗A、抗B、抗AB混合抗血清4. 生理盐水5. 试管、滴管、显微镜等实验器材四、实验步骤1. 将受试者血液样本加入试管中，加入生理盐水，混匀后取少量置于玻片上。
2. 分别用滴管滴加抗A、抗B标准血清至玻片上，观察红细胞是否发生凝集。
3. 重复步骤2，加入抗A、抗B、抗AB混合抗血清，观察红细胞是否发生凝集。
4. 根据凝集情况，判断受试者的血型。
五、实验结果1. 当受试者血液与抗A血清发生凝集，与抗B血清不发生凝集时，可判定其为A 型血。
2. 当受试者血液与抗B血清发生凝集，与抗A血清不发生凝集时，可判定其为B 型血。
3. 当受试者血液与抗A、抗B血清均发生凝集时，可判定其为AB型血。
4. 当受试者血液与抗A、抗B血清均不发生凝集时，可判定其为O型血。
六、实验结论通过本次实验，我们成功鉴定了受试者的血型。
实验结果表明，受试者的血型为____型（A型、B型、AB型或O型）。
在临床输血、器官移植等医疗活动中，了解受试者的血型具有重要意义，可以有效避免输血反应和移植排斥等不良反应。
此外，本次实验过程中，我们还发现以下问题：1. 实验操作过程中，应严格控制试剂的添加量和操作时间，以确保实验结果的准确性。
2. 在观察凝集现象时，应使用高倍显微镜，以便更清晰地观察红细胞与抗血清之间的反应。
3. 在实验过程中，应保证实验器材的清洁和消毒，以防止交叉污染。
针对以上问题，我们提出以下改进措施：1. 在实验操作过程中，严格按照实验步骤进行，确保试剂的添加量和操作时间准确。
红细胞血型检测课件
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主要程序：
1、受血者血液标本的处理； 2、ABO血型和RhD血型定型； 3、红细胞同种抗体筛查和鉴定； 4、交叉配血试验； 5、血小板输注前的抗体检查和配合试验； 6、不规则抗体的筛选和鉴定； 7、交叉配血结果的报告和发血等。
定为无细菌污染的生理盐水洗涤红细胞； • 5、应用抗-AB、抗-A1或抗-H检测红细胞； • 6、分析O型筛选细胞检测结果，确定是否是同种异型或冷自
身抗体干扰正反定型结果。
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• ABO正反定型的临床应用 • 1、实施输血治疗的首要步骤； • 2、组织器官移植； • 3、母、子ABO系统血型不合造成的新生儿溶血病的筛查
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1.ABO定型 最适的反应温度为4℃，但在室温反应良好，所以常 规的ABO定型试验仅在室温进行。
(1)定型方法：正、反定型的试管离心方法目前仍被认为是最可 信赖的ABO定型方法。
1)定型试剂：有些ABO血型诊断试剂是以人的血清汇聚而制成的 ，但必须具备以下条件： 第一，高效价(1：128)的IgM抗A或抗B。 第二，具较好的亲和性并不含冷凝集素。 第三，必需具有检测A2，A2B血型的能力。 第四，血清必须通过HIV，HCV，HBV等检查或经病毒灭活。另 外一些ABO定型试剂是由来自培养细胞株的单克隆抗体所制成 。
关爱生命 呵护健康 目录 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。
第一节 输血前免疫学检查 第二节 盐水介质试验技术 第三节 酶处理试验技术 第四节 抗球蛋白试验技术 第五节 聚凝胺介质试验技术 第六节 微柱凝集试验技术 第七节 吸收放散技术 第八节 凝集试验技术 第九节 红细胞血型分子生物学检测技术
红细胞血型抗体效价测定标准操作规程
红细胞血型抗体效价测定标准操作规程本文介绍了红细胞血型抗体效价测定标准操作规程，以规范输血科医务科护理部的技术操作，并适用于评估母婴血型不合的新生儿溶血病的风险程度及产前检查等其他临床需要。
在材料和设备方面，需要3%～5%的A、B型反定型试剂红细胞、0.2 mol/L二巯基乙醇(2-Me)应用液、抗球蛋白试剂、待检者血标本、微柱凝胶抗球蛋白卡等。
在检测环境方面，室温应控制在18-27℃，湿度应控制在30%-70%。
在检测原理方面，对于IgM类红细胞血型抗体，将受检血清经连续倍比稀释后与表达检测目标抗体对应抗原的试剂红细胞反应，以受检血清凝集试剂红细胞的最高稀释倍数的倒数作为受检血清中检测目标抗体的效价，并根据“红细胞凝集强度与评分标准”评分，完成对IgM类红细胞抗体效价的测定。
对于IgG类红细胞血型抗体，则先用巯基试剂2-Me裂解其中的IgM型抗体，经巯基试剂2-Me处理后再测定IgG类红细胞血型抗体。
在操作步骤方面，盐水介质法测定IgM类红细胞血型抗体效价。
具体操作为将受检血清加入一系列稀释盐水中，分别加入A、B型反定型试剂红细胞，静置30分钟后观察凝集情况，以受检血清凝集试剂红细胞的最高稀释倍数的倒数作为受检血清中检测目标抗体的效价，并根据“红细胞凝集强度与评分标准”评分，完成对IgM类红细胞抗体效价的测定。
7.1.1.对12支试管进行排列编号，第2至第12管每管加入0.1ml生理盐水，第1管及第2管分别加入受检者血清0.1ml，混匀后吸出0.1ml移至第3管内，以此类推，连续倍比稀释至第12管（2048倍）。
7.1.2.在12支试管中，分别加入3%检测目标抗体对应抗原的试剂红细胞50μl，轻摇试管架。
7.1.3.使用血型血清学专用离心机进行离心，离心速度为120g，离心时间为1min，观察并记录有无溶血及凝集情况。
7.1.4.结果判读：镜检呈“1+”凝集的最高稀释倍数的倒数即为检查目标抗体的效价，根据“红细胞凝集强度与评分标准”进行评分。
红细胞血型检测技术
2）结果保存时间长：在室温条件下，凝胶试剂卡一 般可保存数天甚至数周，也可以拍照保留试验结果图 像存档备用。
3）标本用量少：标本用量为试管法的1/10～1/5，尤 其有利于新生儿及某些特殊血液标本的检测。
第二章 红细胞血型检测技术 P36
血型血清学检验的重要性
血型血清学检验是输血前检查的必要内容，是 输血安全的重要保证，同时也是新生儿溶血病、 器官移植等重要的实验室检查。
红细胞抗原抗体反应基本理论
红细胞抗原与相应抗体无论是在体内或是在体 外，均可发生反应。
体外试验红细胞抗原抗体反应的本质是凝集反 应，其中抗体以前多从人血清中提取（但现在 的抗A、抗B试剂一般为基因工程制备的单克 隆抗体），又称为血清学试验。
微柱凝胶试剂卡分类
应用
中性凝胶试剂卡：用于ABO血型正反定型、RhD抗原 测定、其他血型抗原鉴定及盐水介质交叉配血等；
特异性凝胶试剂卡：用于ABO血型正定型、RhD抗原 测定和其他血型鉴定；
抗球蛋白凝胶试剂卡：用于IgG抗D抗体鉴定RhD抗原， 红细胞不规则抗体筛查和交叉配血等。
卡式法的优点：
2. 原理 ：葡聚糖凝胶颗粒-凝胶微柱-微柱凝胶卡。
是利用凝胶颗粒之间的间隙形成的分子筛作用，在微柱凝胶介质 中红细胞与相应抗体结合，经低速离心，凝集成块的红细胞因体 积大被凝胶阻滞不能通过凝胶层，留于凝胶介质的上层或中间， 即阳性反应；未凝集游离红细胞因体积小而通过凝胶之间的间隙 沉积于微柱凝胶检测管底部，形成细胞扣，即阴性反应。
7）药物：药物如低分子右旋糖酐、聚乙烯吡 咯烷酮及静脉注射某些造影剂，血液粘滞性增 高，可使红细胞凝集而类似凝集表现。
红细胞血型检测
7)疾病因素导致抗原减弱：某些白血病患者和难治性贫血患 者中，ABO血型系统的抗原性可受到抑制，检出困难。
8)红细胞多凝集现象：红细胞因遗传或获得性的表面异常， 发生多凝集现象。
9)获得性B：由于革兰阴性杆菌的作用，红细胞可获得“类B” 的活性。
4. 若受血者使用右旋糖酐、PVP等治疗，应注意洗 涤被检红细胞。
5. 每次输血后，受血者和供血者的标本必须保存于 2~8℃至少7天。
红细胞血型检测
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二、受血者和供血者ABO和Rh定型
（一）、原理
根据红细胞膜表面上有无A 抗原或B抗原，将血型分为 A型 、B型、AB型、O型4种。A型人血清中含有抗-B抗体，B 型人血清中含有抗-A抗体，O型人血清中含有抗-A抗体和 抗-B抗体，AB型人血清中不含ABO抗体。
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三、不规则抗体筛选和鉴定
5. 微柱凝胶卡式检测法
三、不规则抗体的鉴定
抗体筛选试验用的试剂筛选红细胞，通常是2或3个人份的 O型红细胞成为一套试剂，每套试剂筛选红细胞中至少有 以下常见的抗原：D、C、E、c、e、M、N，条件不足的 实验室不一定具备Lua、V、Cw、Kpa、Jsa 类的抗原。 一旦抗体被检出，应作抗体鉴定试验，以确定其特异性。 抗体鉴定实验包含以下主要内容： (1)自身细胞检查：观察患者(受者)的血清与患者(受者)自 身细胞的反应情况，确定血清内是否有自身抗体或自身抗 体和同种抗体二者同时存在。 (2)普红细胞：使用试剂细胞中的谱细胞，应用各种抗体检 查技术，检测患者的血清，确定其抗体的特异性。
正定型：用抗-A及抗-B试剂与被检红细胞反应，检测红细胞 表面是否存在A抗原或B抗原。
最新03第二章-红细胞血型检测教学讲义ppt
关二爱、生命受血呵护者健和康 供血者ABO和Rh定型
关爱生命 呵护健康
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上述两种试验可以互相验证，如果两个结果不符，应通过 进一步试验确认血型。
新生儿和出生后6个月之内的婴儿由于血液中无ABO抗体 或抗体很弱，该人群可只做正定型。新生儿血浆中可能存在来 自母体的抗体，应注意鉴别。
关爱生命 呵学护健习康要求
• 1.输血前检查主要包括哪些内容？ • 2.受血者标本接受时的注意事项有哪些？ • 3.ABO血型和RhD血型鉴定时的注意事项有哪些？ • 4.抗体筛选的目的和意义是什么？ • 5.交叉配血试验的影响因素有哪些？ • 6.抗球蛋白试验的临床应用有哪些方面？ • 7.微柱凝聚试验技术的原理是什么？ • 8.常见的吸收放散试验的方法有哪些？ • 9.红细胞血型分子生物学检测技术主要有哪些？
1)技术和管理错误：这是ABO定型中产生异常结果的主要原因 ，包括：标本或试剂搞错；器材不洁；试剂污染或失效；离 心过度或不足；阳性反应产生溶血现象未能识别；漏加试剂 ；结果记录或判断错误；细胞与血清间比例不适当。
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• 正反定型不符分析的基本程序 • 1、出现正反定型不符时，首先重复试验； • 2、重新采集血液标本； • 3、查询受血者既往病史及输血史和用药史等； • 4、多次洗涤标本红细胞或试剂红细胞，应换用新开启的确
定为无细菌污染的生理盐水洗涤红细胞； • 5、应用抗-AB、抗-A1或抗-H检测红细胞； • 6、分析O型筛选细胞检测结果，确定是否是同种异型或冷自
（二）标本的接收
输血科技师接收血样标本时，应认真核对受血者的相关信息， 尽可能了解受血者有无输血史、药物史、妊娠史等情况。如果 有输血史，这有必要进一步了解最后一次输血的日期，若3个月 内输过血，那么供血者的红细胞没有完全代谢消失，可能依然 存在于血液循环中，导致血型定型试验中出现混合凝集的结果
红细胞血型检测
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红细胞血型检测的挑战 与展望
检测技术的改进
自动化检测
随着科技的发展，红细胞血型检 测正在逐步实现自动化，减少人
为误差，提高检测效率。
微流控技术
微流控芯片技术可以用于红细胞血 型检测，具有快速、准确、高通量 的优点，为血型检测提供了新的手 段。
分子生物学技术
利用分子生物学技术，如基因测序 ，可以更准确地确定红细胞血型， 为稀有血型和不规则抗体的检测提 供有力支持。
详细描述
AB型血的人可以接受任何类型的血液，因为他们的红细胞表 面同时存在抗原A和抗原B，不会与任何其他血型的抗体发生 反应。然而，AB型血的人只能给A型、B型或AB型的人捐献 血液。
04
红细胞血型检测的应用
输血配型
输血前必须进行血型检测，以确 保供血者和受血者的血型相容。
血型检测可以预防因血型不匹配 而引起的输血反应，如溶血反应 ，对患者的生命安全至关重要。
检测。
缺点
准确度不高，易受环境 温度、盐浓度等因素影
响。
酶法
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原理
利用酶促反应，使红细胞表面 的抗原或抗体与相应试剂发生
反应，从而判断血型。
步骤
将待测血液与酶反应试剂混合 ，观察红细胞的反应情况，从
而确定血型。
优点
准确度高，特异性好，适用于 多种血型抗原的检测。
缺点
操作相对复杂，成本较高，需 要专业人员操作。
进行准确的血型检测。
新技术的应用与展望
人工智能与机器学习
人工智能和机器学习技术在红细胞血型检测中具有广阔的 应用前景，可以通过数据分析和模式识别提高检测的准确 性和效率。
生物信息学
红细胞血型鉴定分析
红细胞血型鉴定分析1.1.1正向定型(细胞定型)取洁净小试管(内径10×75mm)2支，分别标明抗-A、抗- B，抗-A B(供选择)，用滴管分别加入抗-A、抗-B和抗-A B定型试剂各2滴于试管，再分别加入受检者的2%～5%红细胞盐水悬液1滴，轻摇混合；以3 000r/min(900～1 000g)离心15s；将试管轻轻摇动，使细胞扣悬起观察有无凝集及溶血现象[1]。
1.1.2反向定型(血清定型)取洁净小试管(内径10mm×75mm)3支，分别标明A、B和O型细胞，用滴管分别加入受检者血清2滴于试管，再分别加入2%～5%A、B及O型试剂红细胞悬液1滴；以3000r/min(900～1 000g)离心15s；将试管轻轻摇动，使细胞扣悬后观察有无凝集及溶血现象[3]。
1.2注意事项1.2.1观察结果时若试管中出现溶血现象，表明存在抗原抗体反应并激活了补体，应视为阳性结果。
1.2.2ABO血型试验产生问题，一般见于正、反定型不一致，这里有技术问题，也有标本红细胞或血清本身的问题，主要有：技术和事务工作的错误这是ABO定型中产生异常结果的主要原因，例如：离心过度或不足，细胞与血清间比例不适当，阳性反应产生溶血现象未能识别，导致假阴性结果；红细胞致敏；嵌合体血型(开米粒，chimerism)定型时可以出现“混合外观凝集”现象；某些白血病患者和难治性贫血疾病因素导致抗原减弱[2]；红细胞多凝集现象：红细胞因遗传或获得性的表面异常，发生多凝集现象；血型特异性物质过高可中和抗A和抗B定型试剂；异常的血浆蛋白；受检者血浆中异常的白蛋白、球蛋白比例，高浓度的纤维蛋白原等问题，能导致缗钱状形成，造成假凝集现象；ABO血型抗体以外的不规则抗体存在，与试剂A、B细胞上的抗原起反应；右旋糖酐及静脉注射某些造影剂等药物因素可引起红细胞聚集而类似凝集；年龄因素：在尚未产生自己的抗体的婴儿，或由母亲被动获得抗体的婴儿，或抗体水平下降的老人，试验时可出现异常的结果；单克隆定型试剂与人源多克隆定型血清在判读和分析弱抗原，特别是ABO亚型抗原时，会有差异。
红细胞血型检测
红细胞血型检测摘要】目前红细胞血型至少已发现有26个血型系统，400多种血型抗原。
ABO血型是最早发现的一个血型系统，也是对人类影响最大的一个系统。
本节重点介绍ABO和Rh两个血型系统。
【关键词】红细胞类型检验(一)ABO血型系统1.ABO血型的分类人类红细胞表面有两种抗原，分别为A抗原和B抗原，A型红细胞表面含A抗原；B型红细胞表面含B抗原，AB型红细胞表面含有A和B两种抗原，O型红细胞既不含有A抗原也不含有B抗原。
在人的血清中，存在着两种天然抗体，一种叫抗A抗体，一种叫抗B抗体，在A型人的血清中含有抗 B抗体，在B型人的血清中含有抗A抗体，在AB型人的血清中既不含有抗A抗体也不含有抗B抗体，O型人的血清中含有抗A和抗B两种抗体。
两种抗体可分别与相应的A或B抗原发生免疫反应。
2.ABO抗原与血型物质 ABO系统的血型抗原有A、B、H三种，它们属于多糖类抗原，主要存在于红细胞表面，与脂质、蛋白质结合在一起，不溶于水，可溶于乙醇，抗原成分由多糖和多肽组成。
多肽部分决定血型的抗原性，多糖部分决定血型的特异性，H抗原是A、B抗原基础物质。
ABO各型红细胞上都有H抗原，O型最多，其顺序分别为O>A2>A2 B>B>Al B。
ABH抗原在胎儿37天时便能检出，以后反应的敏感性不断增强，至出生时红细胞 ABH抗原的敏感性已是成人的20％，至20岁时达高峰，抗原性终生不变，所以，初生儿不易鉴定血型。
3.ABO血型抗体 ABO血型系统抗体若按产生的原因又分、为“天然抗体”和“免疫性抗体”。
(1)天然抗体：没有可以觉察的抗原刺激，在体内自然存在的抗体称为天然抗体，如人体血清中的抗A、抗B抗体，就属于天然抗体。
天然抗体大多数都是IgM，分子量100万，分子的长度为95 nm，由于分子量大，不能通过胎盘，不耐热，70℃加热l小时便破坏，能在等渗盐水中与含有相应抗原的红细胞发生凝集，因此，又叫凝集素或盐水抗体或完全抗体。
(整理)红细胞血型血清学试验
红细胞血型血清学试验安徽省合肥市第一人民医院输血科林正民江建锋陈玲梁晓浏IgG抗A（B）测定【原理】血清以巯基乙醇（2-mercaptoethanol,简称2-me）处理后，IgM抗体分子裂解为6-7 S 亚单位。
此种亚单位虽然仍保持与抗原结合的能力，但已失去与相应红细胞凝集的作用。
IgG 抗体分子则不被2-me灭活，保持与相应红细胞致敏的血清学特性。
IgA抗体分子可部分被灭活（7S亚单体不受影响，9 S及11 S多聚体被灭活）。
【试剂】1、0.2mol/L 2-巯基乙醇应用液取巯基乙醇1.6ml以pH 7.4 PBS（KH2PO4 1.73g, Na2HPO4·12H2O 19.35g, NaCl 8g加蒸馏水至100ml）稀释到100ml，分装安瓿，每支1ml或2ml,冰箱保存备用。
2、受检者血清。
3、5%A型和B型红细胞PBS（或生理盐水）悬液。
4、抗人球蛋白血清。
【操作】1、吸取受检者血清0.4ml，加2-me应用液0.4ml，混合，将试管口塞紧，置37℃水浴中2h。
2、排列小试管（10mm×60mm）两排，每排10支，第一排每管各加pH 7.4的PBS 0.4ml。
3、第1排第1管加2-me处理血清0.4ml，混合，吸出0.6ml，移0.2ml至第2排第1管内，其余0.4ml移入第1排第2管内，混合。
以此类推，作倍量稀释至第10管，每管内留有1:2, 1:4, …1:1024不同稀释度的血清各0.2ml。
4、第1排每管各加5%A型红细胞悬液0.2ml，第2排每管各加5%B型红细胞悬液0.2ml，置37℃水浴温育1h。
5、结果观察如在前几管内发现有红细胞凝集者，是由于高效价IgG抗A(B)或IgA抗A(B)所引起，称为“盐水效价”。
6、其余红细胞未见凝集的试管，再以pH 7.4 PBS洗涤3次，除去洗涤液，留取压实红细胞。
7、每管各加pH 7.4的PBS 2滴，混合。
红细胞血型检测
另加染液，以区别。 A亚型应用抗A1抗体鉴定。
(2)单克隆抗体：
• 近年来血型单克隆抗体作为新型的诊断试剂取代了传统人血 清制备的抗体，进一步确保了输血安全。
• 优点： （1）特异性抗体，不含其它血型抗体、冷凝集素，使结果更 准确，不受干扰。 （2）不含HBV、HCV、HIV等病毒，避免了使用者受感染。 （3）可以形成工业性生产，节约了大量人血清的原料。
4、ABO血型鉴定出现异常的原因
1、原因： 技术和管理上的问题：
责任心方面 技术方面 标本红细胞或血清本身的问题： 血清方面（抗体效价低或被抑制、假凝集） 红细胞方面（弱A、类B）
(1) 假凝集（串钱状凝集）
较多见，本身不是抗原与抗体的反应。 原因：
A 某些肝病、肾病等所致的纤维蛋白原及球 蛋白的增高。
• 第二阶段
真凝集阶段
直接法可检查受检者的红细胞是否已被不完全抗体致敏； 间接法可用于鉴定Rh血型及血清中是否存在不完全抗体
间接抗球蛋白试验
假阳性 抗球蛋白试剂不纯 红细胞洗涤已凝集
红细胞质量 不抗凝标本 漏加试剂 离心过度 盐水保存不当 红细胞直抗阳性
假阴性
红细胞、血清 及试剂质量
洗涤不充分 操作过程不连 续
血型鉴定和交叉配血
目的：选择与患者血型配合的各种血液成分， 使之能在患者体内有效地存活，无不良反应， 从而达到安全、有效输血的目的。
输血前实验室检测
输血前实验室检测内容包括以下几方面。
一、患者的病史和标本等的检查、核对及 处理 二、受血者和献血者ABO和Rh 血型鉴定 三、交叉配血试验 四、特殊不规则抗体的筛选和鉴定 五、血小板输注前的检查配血 六、标签和发血
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实验方法
•经典的血清学试验方法，主要用于检测 IgG、IgA等抗体参与的抗原-抗体反应， 也可测定补体组分C3、C4片段参与的免疫 反应。 •直接抗球蛋白试验和间接抗球蛋白试验
DAT用于检测在患者体内致敏红细胞的不完全抗体和 （或）补体。 IAT用于检测血清中的不完全抗体，即在体外将人血 清与红细胞致敏，再与抗球蛋白试剂反应。
实验原理
• 常用：木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶 • Rh、Kidd血型系统的检出效果最好 • 对M、N、S、s、Fya、Fyb抗原破坏较显著
实验方法
• 一步法 在血清和红细胞反应体系中直接加 入酶液促进抗体与相应红细胞反应，敏感 性较差 • 二步法 用酶液消化红细胞后，洗涤去净酶 液，增强红细胞抗原性，使不完全抗体与 之发生反应，出现特异性凝集
• RhD血型鉴定：红细胞上存在D抗原时，可与抗D分型血清产生特异性的抗原抗体反应，出现红 细胞凝集为RhD阳性，不凝集者为RhD阴性。
不规则抗体的筛查和鉴定
• 不符合ABO血型系统Landsteiner法则的血型抗体， 即抗-A、抗-B之外的血型抗体 • ABO系统中的亚型，变异型的抗-A1或某种抗-B等 抗体 • 包括同种抗体和自身抗体 • 实验方法：盐水介质法、白蛋白介质法、低离子 强度介质法(LISS)、酶技术、抗球蛋白试验、凝 聚胺(polybrene)促凝技术和凝胶试验（Gel test） 等
目 录
• • • • • • 第一节 输血前免疫血液学检查 第二节 盐水介质试验技术 第三节 酶介质试验技术 第四节 凝聚胺介质试验技术 第五节 抗球蛋白试验技术 第六节微柱凝胶介质试验技术
目 录
• 第七节 吸收放散试验技术 • 第八节 凝集抑制试验技术 • 第九节 红细胞血型分子生物学检测
第一节 输血前免疫血液学检查
结果判读
• 阳性结果 红细胞出现凝集反应或溶血 • 阴性结果 红细胞呈游离的混悬状态 • 溶血 阳性结果
第三节
酶介质试验技术
重点提示
• 实验原理 • 实验方法
实验原理
• 作用于红细胞表面的多糖链，减少红细胞 表面负电荷，缩短细胞间距，增强IgG抗体 与红细胞表面抗原的凝集反应 • 改变红细胞表面结构，暴露出某些隐蔽抗 原，使IgG类不完全抗体可以与酶处理的红 术相结合的产物 •游离红细胞和凝集红细胞是否能通过特 殊结构的凝胶介质，从而使不同状态的红 细胞得以分离
阴性反应 离心力作用下，未与抗体结合的游离红细 胞因体积小通过凝胶层，沉淀于底部，形成“细胞扣” 阳性反应 与特异性抗体结合的红细胞因体积大被凝 胶阻滞不能通过凝胶层，留于凝胶介质的顶部或悬浮于 凝胶中
临床应用
• DAT：胎母血型不合新生儿溶血病的诊断、 免疫溶血性输血反应的调查、自身免疫性 溶血性贫血的诊断及药物诱发型溶血病的 诊断 • IAT：血型鉴定、交叉配血、器官移植、妊 娠所致免疫性血型抗体以及自身免疫性血 型抗体的检出和鉴定
第六节
微柱凝胶介质试验技术
重点提示
• 实验原理 • 适用范围 • 优点
适用范围
多用于抗球蛋白试验、ABO血型正/反定 型、交叉配血及其他血型系统抗原检测。 •中性胶 不含抗体，相当于试管的作用 •特异性胶 含特异性抗体，如抗-A、抗-B， 可进行AB抗原检测 •抗球蛋白胶 含抗球蛋白，可进行IgG类抗体 的检测
优点
操作简便、结果准确、灵敏度高、便于 保存、节约标本、标准化、使用安全
实验方法
• 两步：红细胞去电荷、红细胞复电荷 • 无抗体致敏的红细胞可在试验过程中产生 可逆的非特异性凝集，抗体致敏的红细胞 产生的凝集则不可逆 • 试剂：低离子介质、凝聚胺溶液、重悬液
第五节
抗人球蛋白试验技术
重点提示
• 实验原理 • 实验方法 • 临床应用
实验原理
• 大部分IgG抗体与具有相应抗原的红细胞在 盐水介质中能够特异性结合，但不发生肉 眼可见的凝集反应，该类抗体称为不完全 抗体 • 抗球蛋白分子的Fab片段可与包被在红细胞 上的球蛋白分子的Fc片段结合，从而通过 抗球蛋白分子的搭桥作用使不完全抗体与 具有相应抗原的红细胞产生肉眼可见的凝 集反应
重点提示
• ABO血型和RhD血型鉴定 • 不规则抗体的筛查和鉴定 • 交叉配血试验
ABO血型和RhD血型鉴定
• 原理：利用抗原与抗体之间特异性结合的凝集反 应来完成。 • ABO血型鉴定：正定型、反定型。
正定型，检测红细胞表面是否存在A抗原和(或)B抗原；反 定型，检测血清中是否存在抗-A／抗-B抗体（凝集素）。
第二节
盐水介质试验技术
重点提示
• 实验原理 • 实验方法 • 结果判读
实验原理
• 在盐水介质（saline medium）中，IgM类天 然抗体分子链较长可直接与含有相应抗原 的红细胞结合，并呈现肉眼可见的凝集。 • 仅能检出IgM类抗体，无法检出IgG类抗体。
实验方法
• 平板法 应用于常规ABO血型和RhD抗原定 型，易出现假阳性或假阴性结果。 • 试管法 定型试验或半定量试验，如测定抗 体效价，结果准确、可靠。
结果判读
• 阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，被检管出 现凝集为阳性，不出现凝集判定为阴性。 • 阳性对照管不凝集或（和）阴性对照管出现凝集， 试验失败。分析原因，重新试验。
第四节
凝聚胺介质试验技术
重点提示
•实验原理 •实验方法
实验原理
• 凝聚胺是一种高价阳离子季铵盐多聚物， 可中和红细胞表面的负电荷，引起正常红 细胞可逆性的非特异性聚集。加入柠檬酸 重悬液(中和液)后，仅由凝聚胺引起的非特 异性聚集会因电荷中和而消失 • 灵敏度高，可检出IgM和IgG类抗体
交叉配血试验
1. 主侧交叉配血：受血者血清(浆)与供者红细胞 反应，检测受血者体内是否存在针对供者红细 胞的抗体。 2. 次侧交叉配血：受血者红细胞与供者血清(浆) 反应，检测供者血液中是否存在针对受血者红 细胞的抗体。 3. 自身对照：受血者红细胞与自身血清(浆)反应， 以排除自身抗体、直接抗球蛋白试验阳性及红 细胞缗钱状假凝集等干扰试验结果的因素。