PCR 实验室污染的排除
PCR实验室污染与对策
PCR实验室污染与对策PCR（Polymerase Chain Reaction）实验室是进行核酸分析和生物学研究的重要场所。
然而，由于PCR实验室使用高灵敏度的技术，可能会受到外源性DNA污染的影响，导致结果的失真甚至错误。
因此，PCR实验室污染的问题需要引起重视，并采取相应的对策来减少对实验结果的影响。
外源性污染主要指的是在实验室环境中引入外部DNA污染源。
这些污染源可能包括实验室用具（如罗氏管、管盖、显微镜片等）、实验材料（如引物、模板DNA等）、工作人员（如手部皮肤上的DNA）以及空气中的微生物等。
为了减少外源性污染，可以采取以下对策：1.消毒和清洁实验室：实验室应定期进行彻底的清洁和消毒，包括工作台、工具和设备等。
使用消毒剂对工作台和设备进行彻底的消毒，防止污染源的交叉感染。
3.使用无DNA污染的试剂和材料：选用经过严格筛选和检测的PCR试剂和材料，确保其无DNA污染。
同时，使用专门为PCR实验设计和包装的罗氏管和管盖，减少外源性DNA污染的可能。
4.严格的实验室操作规范：建立和执行严格的实验室操作规范，包括实验室的通风设施、培训工作人员、制定标准操作流程等。
工作人员应按照规范操作，遵守实验室操作规程，确保实验的准确性和可靠性。
内源性污染是指实验过程中引入的内源性DNA污染。
内源性污染通常是由前一PCR扩增反应的产物污染了下一PCR反应。
1.严格控制实验操作的顺序：按照从低到高浓度的样品进行PCR扩增。
首先进行阴性对照，检测PCR反应体系中是否存在污染。
然后进行低浓度样品的扩增，最后进行高浓度样品的扩增，以减少内源性污染的可能。
2.应用反转录酶酶和RNA不是DNA模板：在RNA模板的PCR扩增反应中，可以使用反转录酶酶将RNA转录成cDNA。
由于RNA是DNA的模板，反转录过程不会引入外部DNA污染，从而减少内源性污染的可能。
3.使用消除污染酶：在每一PCR扩增反应中加入消除污染酶，可以在扩增反应结束后对DNA污染进行降解。
如何避免和预防PCR污染
如何避免和预防PCR污染PCR污染是在聚合酶链反应（PCR）实验中经常遇到的问题。
它可能导致错误的结果，干扰实验的准确性和可重复性。
下面是一些预防和避免PCR污染的方法：1.分开PCR前和PCR后的实验区域：PCR前和PCR后的实验区域要有明显的分离，确保样品处理和扩增区域的物品不混在一起。
这样可以避免PCR反应过程中的污染物接触到未扩增的样品。
2. 使用专用试剂和实验器材：使用经过严格验证的无核酸酶或经过特殊处理的试剂和实验器材，例如使用新酶切片或带有DNase的试剂盒，以确保没有外源性DNA污染。
3.清洗和消毒实验区域：每次实验前都要仔细清洗实验区域，并使用酒精或其他消毒剂进行彻底消毒。
这样可以减少无意中将外源性DNA引入PCR反应体系的机会。
4.严格使用正控和空白对照：每次进行PCR实验时都要使用正控和空白对照。
正控可以验证实验条件是否正确，空白对照可以检测是否存在外源性DNA污染。
5.分装试剂和样品：将试剂和样品分装成小份，使用一次性耐污染的试管或器皿，避免交叉污染。
6.搭建风罩或使用避光罩：在PCR反应过程中，使用风罩或避光罩可以减少样品暴露在外界环境中的机会，降低污染的可能性。
7.避免频繁开盖：在扩增反应过程中尽量避免频繁开盖，以防止空气中的污染物进入PCR反应体系。
8.使用滤芯和屏蔽盖：在制备PCR反应混合物时，可以使用滤芯和屏蔽盖，以防止酶切片、试剂盒或其他实验器材中的DNA污染进入PCR反应体系。
9.定期更换实验工作区域和器皿：定期更换实验工作区域和器皿，避免由于反复使用导致的DNA污染。
10.使用低能量紫外线消毒器进行消毒：在消毒实验器材时，可以使用低能量紫外线消毒器进行消毒。
低能量紫外线可以杀灭细菌和病毒，减少污染的风险。
总结起来，预防和避免PCR污染需要严格控制实验条件、配备专用试剂和实验器材、分装试剂和样品、避免频繁开盖以及定期更换实验工作区域和器皿。
这些方法可以减少PCR污染的发生，并保证实验结果的准确性和可重复性。
pcr实验室净化工程原理
pcr实验室净化工程原理PCR实验室净化工程原理PCR（聚合酶链式反应）是一种重要的分子生物学技术，广泛应用于基因检测、疾病诊断和遗传学研究等领域。
在进行PCR实验时，实验室环境的洁净度对实验结果的准确性和可重复性具有重要影响。
PCR实验室净化工程就是为了创造一个洁净、无污染的实验环境，以确保PCR实验的准确性和可靠性。
PCR实验室净化工程的原理主要包括以下几个方面：1. 空气净化：空气中的微生物和颗粒物是PCR实验室中主要的污染源之一。
为了减少空气中的微生物和颗粒物含量，可以采用高效空气过滤器（HEPA）和超净工作台等设备。
HEPA过滤器可以有效地去除0.3微米以上的颗粒物，超净工作台则通过向工作区提供无菌环境来减少微生物污染。
2. 消毒杀菌：PCR实验室中，常常需要对工作台、实验器皿和试剂等进行消毒杀菌，以防止交叉污染。
常用的消毒剂有酒精、漂白粉和紫外线等。
酒精可以迅速杀灭细菌和病毒，漂白粉则具有较强的氧化能力，能够有效杀灭细菌和真菌。
紫外线具有较高的杀菌效果，可以对PCR实验室中的空气和物体进行消毒。
3. 人员防护：PCR实验室中，人员是主要的污染源之一。
为了减少人员对实验环境的污染，应建立严格的操作规范和人员培训制度。
人员在进入实验室前，应进行手部消毒，并穿戴干净的实验服、手套和口罩等防护用品，以防止污染物进入实验环境。
4. 废物处理：PCR实验中产生的废物包括实验器皿、试剂和生物样品等。
这些废物可能含有致病微生物或遗传物质，对环境和人员健康造成潜在风险。
因此，应制定科学合理的废物处理方案，对废物进行分类、包装和消毒处理，以确保不会对环境和人员造成污染和伤害。
PCR实验室净化工程的实施需要综合考虑实验室环境、设备、人员和废物处理等多个方面的因素。
通过科学合理的设计和有效的操作管理，可以最大程度地减少污染源，提高实验环境的洁净度和稳定性，保证PCR实验的准确性和可靠性。
PCR实验室净化工程是为了创造一个洁净、无污染的实验环境，以确保PCR实验的准确性和可靠性。
PCR室实验室污染分析流程
PCR室实验室污染分析流程一、试剂污染：1、排除方法1）重新取用新的试剂盒进行检测，考虑当天用试剂盒污染。
2）重新进新批次试剂盒进行检测，考虑本批次试剂污染。
3）换用其他医院用试剂盒进行检测，考虑本实验室试剂保存不当污染。
2、整改措施1)若当天使用试剂污染，则查询污染原因，并采取相应措施消除污染影响，并重新取用新的试剂进行检测。
2）若本批次试剂污染，则除查找实验室试剂库房可能导致污染的原因，并与厂家联系，溯源污染原因并及时更换试剂，进行检测。
二、操作污染1、排除方法1）调换操作人员进行检测。
2）评价操作人操作是否规范化。
3）使用耗材是否无菌，更换手套、枪头是否及时。
微量管开盖、闭盖是否规范。
4）加样枪操作是否规范到位。
2、整改措施1）加强操作技能培训。
2）加强学习人员操作技能考核。
三、实验室及耗材污染1、排除方法1）更换实验室对同一批标本进行检测。
2）采用反应管，一支开盖放置30-60min，另一只闭盖，然后同时作为反应用管加入反应液进行扩增检测。
3）使用棉签蘸取生理盐水后，擦涂房间内把手、台面、设备表面、加样枪末端等处，作为样本进行检测。
4）检测消毒用酒精、巴士消毒液、次氯酸钠等有效性。
5）检测室内或生物安全柜内紫外灯管效能。
6）更换规范灭菌后耗材进行检测。
2、整改措施1）各实验室分区日常清洁工作按照要求进行，各区用品清洁用抹布、拖把不可以混用。
2）及时更换紫外灯管。
3）定时对实验用金属浴或水浴箱进行消毒处理。
4）定期浸泡实验用试管架及标本存放盘。
5）按照规定进行实验室内消毒工作。
6）采用10%次氯酸钠及75%酒精同时对实验室或耗材进行有效消毒。
7）加强人员培训，提高职工防污染意识。
PCR实验室发生污染后处理方法
PCR实验室发生污染后处理方法PCR实验室发生污染后处理方法一、确定污染类型1、PCR实验室发生污染后主要表现为：1）所有同批次标本及阴阳对照全部为阳性；2）阴阳对照正常，所有标本检测均为阳性；3）除了CT值靠前的标本其余标本及阴性对照CT值接近临界值，都有微弱翘尾。
出现以上三种情况，均可判为发生污染。
PCR污染类型分为样本污染和产物污染。
所谓样本污染一般发生在操作2区，由使用被污染的耗材和样本交叉污染产生；产物污染有PCR扩增产物引起，一般发生在扩增分析区，即3区，由于PCR反应体系没有完全闭合或者扩增后的体系没有及时安全清理引起。
2、确认污染类型才能有效清除污染。
发生污染后，更换所有一次性耗材即移液枪及使用新拆分试剂。
有两种简易方法如下：1）不加内标重复实验，检测结果如果内标没有扩增，可判为样本污染，反之为产物污染。
2）分A和B两组，A组在上机前，八联管开盖在2区放置10min 左右，B组闭合八联管直接上机。
检测结果中若A组发生污染B组正常，则为气溶胶污染。
气溶胶污染有两个来源，其一为扩增产物引起，其二为浓度较高的标本在制备过程中外释累积形成。
二、污染处理措施一般而言，发生产物形成的气溶胶污染是很难在短时间内及时清理掉的，这是由PCR反应的特点决定的，及其微小的污染物都可以作为模板扩增，释放出巨大荧光信号。
因此，很多试剂厂商都有相应的防污染试剂产品，可以有效防止产物污染，其原理为UNG酶对产物核酸片段的有效降解，而不影响我们从标本制备来的核酸模板。
但是，彻底消除污染，降低对UNG酶的依赖，还需要一套消除污染的体系来应对。
具体如下：1、全面规范操作：1）进行PCR操作时，工作人员应该严格遵守SOP操作规程。
2）试剂准备、标本制备区、PCR扩增区及分析区设计要合理，要有一定的方向性。
工作人员要谨循由试剂准备→标本制备→PCR扩增区及分析区的工作流程。
3）任何一间的产物及器材不要拿到其它两个工作区。
PCR防污染措施
PCR防污染措施PCR（聚合酶链反应）是一种重要的分子生物学技术，广泛应用于基因检测、疾病诊断和基因工程等领域。
然而，PCR试验的进行容易被外源污染影响，导致实验结果的错误解读和不准确性。
因此，为了确保PCR实验的准确性和可靠性，必须采取一系列严格的防污染措施。
首先，实验室环境的净化非常重要。
实验室应该具备洁净的条件，不受外界环境污染物的干扰。
实验室门口应设置自动门，并设有空气帘，以减少外界空气的进入。
另外，实验室内应安装高效过滤器，筛选空气中的微小颗粒和粉尘，以防止其进入实验区域。
其次，在实验操作过程中，必须遵循严格的操作规程，包括实验人员的着装要求、实验器具的清洁消毒、试剂的使用及存储等。
首先，实验人员必须穿戴专业的实验服，并佩戴带有面罩和手套的个人防护装备，以防止身体的细胞、气溶胶和细菌污染样品。
其次，所有实验器具必须经过高温和化学消毒处理，以保证实验过程中不发生交叉污染。
此外，试剂应储存于干燥、阴凉、无菌的条件下，以保持其有效性和纯度。
第三，实验材料的选择也十分重要。
实验室应选择经过质检合格的高质量实验材料，避免带有细菌、真菌或其他污染物的材料。
特别是PCR试剂盒、试剂和酶，应选择具有高纯度、无外源DNA污染和无核酸酶活性的产品，以避免试剂本身对PCR反应的污染。
此外，对实验区域的划分和操作步骤的规范也是防污染的重要措施。
实验室应根据实验需求合理划分清洁区、PCR试验区和污染区，严格实施区域间的物品和人员流动控制。
清洁区是指进行物品清洗、消毒、储存的区域；PCR试验区是指进行预PCR、PCR扩增的区域；污染区是指处理和存放PCR产物、样品的区域。
在任何情况下，这些区域都应有明确的标识和严格的操作流程，以防止交叉污染。
最后，实验过程中采取的一些技术手段也可以有效地防止PCR反应的污染。
例如，利用分光光度计和荧光传感器实时监测PCR反应，可以及时发现污染，保证结果的准确性。
此外，在PCR反应的每个步骤中都应有一个阴性对照组，以排除外源污染的影响。
PCR防污染措施
【分享】PCR污染与对策PCR污染与对策PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生.污染原因(一)标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染.(二)PCR试剂的污染:主要是由于在PCR试剂配制过程中，由于加样枪、容器、双蒸水及其它溶液被PCR 核酸模板污染.(三)PCR扩增产物污染.这是PCR反应中最主要最常见的污染问题.因为PCR产物拷贝量大(一般为1013拷贝/ml)，远远高于PCR检测数个拷贝的极限，所以极微量的PCR产物污染，就可造成假阳就可形成假阳性.还有一种容易忽视，最可能造成PCR产物污染的形式是气溶胶污染；在空气与液体面摩擦时就可形成气溶胶，在操作时比较剧烈地摇动反应管，开盖时、吸样时及污染进样枪的反复吸样都可形成气溶胶而污染.据计算一个气溶胶颗粒可含48000拷贝，因而由其造成的污染是一个值得特别重视的问题.(四)实验室中克隆质粒的污染:在分子生物学实验室及某些用克隆质粒做阳性对照的检验室，这个问题也比较常见.因为克隆质粒在单位容积内含量相当高，另外在纯化过程中需用较多的用具及试剂，而且在活细胞内的质粒，由于活细胞的生长繁殖的简便性及具有很强的生命力.其污染可能性也很大.污染的监测一个好的实验室，要时刻注意污染的监测，考虑有无污染是什么原因造成的污染，以便采取措施，防止和消除污染.对照试验1.阳性对照:在建立PCR反应实验室及一般的检验单位都应设有PCR阳性对照，它是PCR 反应是否成功、产物条带位置及大小是否合乎理论要求的一个重要的参考标志.阳性对照要选择扩增度中等、重复性好，经各种鉴定是该产物的标本，如以重组质粒为阳性对照，其含量宜低不宜高(100个拷贝以下).但阳性对照尤其是重组质粒及高浓度阳性标本，其对检测或扩增样品污染的可能性很大.因而当某一PCR试剂经自己使用稳定，检验人员心中有数时，在以后的实验中可免设阳性对照.2.阴性对照:每次PCR实验务必做阴性对照.它包括①标本对照:被检的标本是血清就用鉴定后的正常血清作对照;被检的标本是组织细胞就用相应的组织细胞作对照.②试剂对照:在PCR试剂中不加模板DNA或RNA，进行PCR扩增，以监测试剂是否污染.3.重复性试验4.选择不同区域的引物进行PCR扩增防止污染的方法一．污染的预防进行PCR操作时，操作人员应该严格遵守一些操作规程，最大程度地降低可能出现的PCR污染或杜绝污染的出现。
PCR实验室污染原因分析与排除方法
PCR实验室污染原因分析与排除方法摘要：目的分析PCR实验室的污染原因及排除方法。
方法通过TMA技术与PCR技术实施实验分析；通过物理及化学方法针对实验室的相关物品、空气与设备实施消毒处理；结合实验室的空间规划布局与核酸扩增实验室可能会产生污染的区域执行布点操作，消毒后试验开始前针对核酸实验室通过表面擦拭方法与空气沉降方法实施取样和消毒有效性的确认。
结果确定污染之后针对实验室实施彻底的消毒，消毒有效性确认都呈现阴性，说明实验室污染源获取了较为有效地防治，之后实验室中的假阳性率显著降低。
结论 PCR实验室存在比较容易污染的特点，然而污染源能够采用相关物理方法和化学方法获取较为有效地防治。
关键词：PCR；污染原因；排除方法本次研究针对PCR工作开展过程中遇到的部分与“实验室疑似污染和PCR实验室污染防治”存在一定关联的问题加以归纳分析，保证实验室的环境与核酸检测工作的实际要求相契合。
1材料和方法1.1 标本来源本次实验标本来源于无偿献血，通过常规检测，样本中疑似假阳性的相应标本。
1.2 实验方法（1）原理。
采用AmpliSTAR核酸检测分析系统、ABI7500实时荧光定量PCR 仪，对于样本检测工作的实施，主要采用样本汇集、核酸提取、PCR扩增检测和结果判定几个步骤实施。
系统判定的基本流程：首先，初检（8in1）POOL呈现阴性，对相应标本进行放行。
其次，初检（8in1）POOL呈现阳性，实施拆分检测处理，确立出其中的阳性标本。
再次，通过拆分检测呈现阴性的标本，对标本进行放行。
最后，通过拆分检测呈现阳性的标本，对标本作出报废处理。
（2）原理。
采用TIGRIS全自动核酸检测分析系统，对于样本检测工作的实施，采用特异性病毒核酸捕获、TMA、涮动力学化学发光检测、结果输出以及扩增产物最终灭活几个步骤实施。
系统判定的基本流程：首先，通过联检方法呈现阴性，对标本进行放行。
其次，通过联检方法呈现阳性，采用鉴别检测对其中的阳性项目加以确立。
PCR实验室消除污染操作步骤
PCR实验室消除污染操作步骤1、物料准备（1）购买喷壶（能够喷出雾状水汽的即可）；（2）购买市面上有效氯消毒片，根据要求配制不同浓度的消毒液，或者购买成品次氯酸钠消毒液配制合适浓度消毒水；（3）购买核酸气溶胶污染清除剂（DNA AWAY®原液/MediClean®稀释100倍）；（4）无纺布/无尘纸等。
2、处理方法（1）清理废液缸并且对废液缸用有效氯含量为2000mg/L消毒水浸泡消除核酸污染；（2）用有效氯含量为2000mg/L消毒水对移液枪进行擦洗，关键部位为移液枪前端易污染部位，清洁干净后用洁净水再擦拭一遍；（3）将离心管架、扩增管架、扩增管架底板、吸嘴盒及其他相关物品用有效氯含量为500mg/L的消毒水浸泡2小时后，用清水冲洗干净晾干后使用；（4）对污染区域内的设备如扩增仪、全自动提取仪等，使用核酸气溶胶污染清除剂进行反复处理；对生物安全柜等含有空气过滤系统的设备，需更换过滤网；（5）用有效氯含量为500mg/L的消毒液对整个实验室（地板、墙面、天花板、门、窗户等地方）进行清洁，并且用用有效氯含量为1000mg/L的消毒水对实验室进行喷雾消毒(重点部位为操作区)，有效降解空气中的气溶胶与附着在实验台表面的核酸污染；同时加大通风量（内循环无用，尽可能外循环）；（6）待污染区域及设备器件清理完成后，常用设备和操作台面使用移动紫外消毒车近距离辐照1小时；实验室内则使用室内紫外灯整晚辐照。
步骤（1）-（6）必须坚持每天进行，确保消除实验室污染；3、污染消除判断标准设计阴性对照组，根据阴性对照确认污染情况。
可使用敞开后隔夜放置操作区的阴性对照进行实验（在单独的实验室验证），若连续三天阴性对照没有起跳，则说明污染得到控制，可恢复正常实验。
当然，为最大程度的降低可能出现的PCR污染或杜绝污染的出现，在实验室前期设计及日常实验室管理和操作中，就需要进行合理的规划以及严格执行实验室SOP，把污染的可能性扼杀在摇篮中。
避免PCR实验室交叉污染的预防措施
避免PCR实验室交叉污染的预防措施PCR实验室交叉污染是一个常见但严重的问题。
交叉污染可能导致错误的实验结果，并浪费大量的时间和资源。
为了避免PCR实验室交叉污染，以下是一些预防措施：1.设立区域：按照操作流程将实验室划分为不同的区域。
例如，将制备PCR反应体系的区域和扩增反应的区域分隔开来，确保实验者在不同的区域操作。
2.空间隔离：确保设备、试剂和操作区域的有效隔离。
使用独立的PCR工作站，在每个工作站上进行不同的PCR实验，并且在不同的PCR实验之间进行清洁和消毒。
3.重复实验器具：在进行PCR实验之前，确保所有实验器具都进行彻底的清洁和消毒。
最好为每个PCR实验使用新的试剂盒和器具。
4.清洁实验台和仪器：在每次实验之前和之后，对实验台和设备进行彻底的清洁和消毒。
使用含酒精的消毒剂对实验台面、机器表面和仪器的每个部分进行清洁，并确保完全干燥。
5.使用负控制：为了确保结果的准确性，应该在每次PCR实验中设置负对照。
负对照通常是使用无DNA模板的反应体系。
这有助于排除实验中的任何污染。
6.分离样品：在进行PCR实验之前，确保每个样品都在不同的管子中操作，并在操作过程中避免将不同样品的器具接触。
每次更换样品时，应彻底清洁操作区域。
8.操作员培训和规范操作：确保所有操作员都经过PCR实验室的培训，并且了解交叉污染的风险和如何避免。
开展定期的回顾培训，以确保操作员持续遵循规范操作。
9.使用控制措施：避免使用可能产生污染的物品，例如手套、实验室衣、口罩等。
确保动作轻柔，减少颗粒物和污染的产生。
10.定期消毒实验室：除了日常清洁之外，定期对实验室进行消毒，以减少细菌和病毒的存在。
特别应关注常接触的表面，如门把手、操作台面等。
通过采取上述预防措施，实验者可以最大程度地减少PCR实验室交叉污染的风险，准确获取实验结果，并确保实验的可靠性。
PCR实验室污染的原因分析、处理及整改措施
PCR实验室污染的原因分析、处理及整改措施2022年5月29日中午12:30开始PCR实验室假阳性频率增高,考虑可能出现实验室污染，检测工作立即停止，首先，查找污染源和明确污染范围。
经排查本次实验室污染的主要来源可能是部分配置好的反应体系放置时间过久、实验室二区出现扩增产物的污染。
一、发生污染的原因分析。
1.核酸检测工作频次过高，导致每批样本检测之间没有足够时间消毒。
2、核酸检测人员短缺，检测人员需要多次往返二区、三区，极容易导致扩增产物的污染。
二、实验室污染的处理：1.生物安全柜的操作台消毒处理：使用5000mg∕L含氯消毒剂进行喷洒消毒。
消毒液需要现用现配，24小时内使用。
2.实验室台面、地面、物体表面等的消毒处理：立即使用润湿有5000mg∕L含氯消毒剂的毛巾擦拭、消毒。
清洁、消毒通风系统滤网。
采用房间固定和可移动紫外灯进行紫外照射2小时以上。
3.清理污染物时：严格遵循活病毒生物安全操作要求，采用压力蒸汽灭菌处理，并进行实验室换气等，防止次生危害。
整改措施：1.严格实验室功能分区确保实验室人、物及空气单向流动核酸检测实验室的人、物及空气流向按照试剂储存和准备区一样本制备区T扩增和产物分析区，防止扩增产物随人流、物流及空气进入扩增前的区域。
空气流向应按照从试剂储存和准备区一样本制备区一扩增区一扩增产物分析区方向空气压力递减的方式进行。
2、力口强实验室检测安全管理(1)基本要求核酸检测应当在生物安全二级实验室进行，并应在生物安全风险评估的基础上，采取适当的个体防护措施，包括手套、口罩和隔离衣等。
开展新冠病毒核酸检测的实验室应当制定实验室生物安全相关程序文件及实验室生物安全操作失误或意外的处理操作程序，并有记录。
(2)实验室前安全要求应使用2000mg∕L含氯消毒剂或75%酒精进行桌面、台面及地面消毒。
消毒液需每天新鲜配制，不超过24小时。
转运至实验室的标本转运桶应在生物安全柜内开启。
转运桶开启后，使用2000mg∕L含氯消毒剂或75%酒精对转运桶内壁和标本采集密封袋进行喷洒消毒。
PCR分子实验室污染分析及解决对策
PCR分子实验室污染分析及解决对策聚合酶链反应（PCR）是一种体外核酸扩增技术，它具有特异、敏感、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点，能在几个小时内完成从一块组织、一根毛发，甚至一个细胞中扩增出足量的目的产物供分析研究和检测鉴定，所以，近年来PCR技术被广泛应用于人和动物的多种传染病早期诊断和食品/饲料中特定成分的检测。
PCR反应虽然具有较强扩增能力和极高的灵敏性等优点，但是也存在一个令人头痛的问题——易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的结果。
如果形成气溶胶污染扩散，则可引起整个PCR实验室的污染，处理起来非常棘手，严重的甚至要关闭实验室。
一、污染种类PCR实验室污染主要是下面三个方面：（一）标本间交叉污染：主要是在采（取）样的过程中，由于取样工具之间的交叉造成污染；或者在核酸提取的过程中，由于移液器、离心管等使用不当导致的污染。
（二）PCR试剂的污染：主要是在PCR试剂配制过程中，由于移液器、容器、阴性对照及其它试剂被核酸模板或阳性对照污染。
（三）PCR扩增产物污染：这是PCR反应中最主要最常见的污染问题。
因为PCR产物拷贝量大（一般为1013copies/mL），远远高于PCR检测数个拷贝的极限，所以极微量的PCR产物污染，就可造成假阳就可形成假阳性。
还有一种容易忽视，最可能造成PCR产物污染的形式是气溶胶污染。
二、污染的监测一个好的实验室，要时刻注意污染的监测，考虑有无污染，是什么原因造成的污染，以便采取措施，防止和消除污染。
1、对照试验①阴性质控对照a) 提取空白对照：核酸提取过程中不加样品的空白管；b) PCR试剂对照：不含DNA/cDNA模板的PCR扩增反应液试剂；c) 阴性目标DNA对照：即为内源基因对照，是不含外源目标核酸序列片段的模板。
可使用阴性标准物质，并与测试样品等同处理进行核酸提取及PCR扩增。
②阳性质控对照a) 弱阳性对照：使用已知的弱阳性样品作为阳性质控样品，并与测试样品等同处理进行核酸提取及PCR扩增；b) 阳性目标DNA对照：使用含有目标DNA/RNA序列片段的阳性标准物质和（或）质粒。
第三方检验检测机构PCR检测室防核酸污染措施
第三方检验检测机构PCR检测室防核酸污染措施在第三方检验检测机构的PCR检测室中，防核酸污染是非常重要的一个环节。
以下是该检测室常见的防核酸污染措施：1. 空气净化：为了减少室内空气中的核酸污染物质，PCR检测室应配备高效的空气净化设备，如空气过滤器、换气系统等，有效去除空气中的微尘、细菌、病毒等污染物。
2. 严格的空间分离：PCR检测室应设置为无菌室，并与其他实验室和办公区域进行严格的空间分隔，避免污染物交叉传播。
应制定严格的人员通行规程，避免人员在污染室内外之间频繁穿梭。
3. 严密的门窗密封：PCR检测室应配备严密的门窗密封设备，确保室内空气不会因为通风导致外部污染物进入室内。
4. 严格的工作流程：PCR检测室需要建立严格的工作流程，包括标本接收、提取核酸、装管、扩增等环节。
每个环节都应制定具体的操作规程和标准操作规范，避免操作失误引入污染。
5. 周期性清洁和消毒：PCR检测室应定期进行清洁和消毒，包括室内的工作台、仪器设备、耗材等，以降低细菌和病毒污染的风险。
清洁和消毒应按照相关标准和要求进行，使用专门的消毒剂和设备。
6. 个人防护装备：PCR检测室的工作人员需要佩戴适当的个人防护装备，包括实验服、手套、口罩、护目镜等，以保护自身免受核酸污染的影响。
7. 回收处理：PCR检测室应有严格的废弃物处理制度，包括废弃标本、试剂、装置、耗材等的回收和处理流程。
废弃物应按照相关规定进行分类存放和处置，避免二次污染。
8. 监测和评估：PCR检测室应建立定期监测和评估体系，对室内空气、水质、工作人员健康状况等进行检测和评估，及时发现问题并采取相应措施。
PCR检测室的防核酸污染措施包括空气净化、空间分离、门窗密封、严格的工作流程、周期性清洁和消毒、个人防护装备、废弃物处理、监测和评估等方面。
这些措施的落实可以降低核酸污染的风险，保证PCR检测结果的准确性和可靠性。
PCR实验室防污染措施及应急处理方法
PCR实验室防污染措施及应急处理方法一、PCR实验室的污染来源1、样本间交叉污染：收集样本的容器被污染或样本密封不严外溢；不同样本移液时忘记更换枪尖或未使用带滤芯枪尖；移液器等实验器具及耗材未及时消毒灭菌；不同样本同时开盖或样本剧烈震荡、反复吹吸导致气溶胶形成扩散，相互交叉污染。
2、实验试剂污染：主要是在PCR 组分试剂加样过程中，由于移液器、容器、阴性对照及其它试剂被核酸模板或阳性对照污染。
加样过程中，因为 PCR 试剂对温度十分敏感，需要通过冰浴使得 PCR 试剂和 PCR 板/管处于 0℃，但这个过程也是充满了污染的风险的。
3、扩增产物污染：大量拷贝的产物泄漏或扩增后的PCR反应管意外开盖，这是 PCR 反应中最主要最常见的污染问题。
因为 PCR 产物拷贝量大，远远高于 PCR 检测数个拷贝的极限，所以极微量的 PCR 产物污染，就可形成假阳性。
4、克隆质粒污染：作为阳性质控品的克隆质粒外溢。
二、PCR实验室的防污染方法按照实验室的安全工作制度或安全标准操作程序，所有操作符合《实验室生物安全通用要求》（GB19489-2008）。
1、严格执行各区功能划分：试剂储存和准备区：贮存试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混合液的准备，以及离心管、吸头等消耗品的贮存和准备。
标本制备区：核酸（RNA、DNA）提取、贮存及其加入至扩增反应管。
对于涉及临床样本的操作，应符合生物安全二级实验室防护设备、个人防护和操作规范的要求。
扩增区：cDNA合成、DNA扩增及检测。
扩增产物分析区：扩增片段的进一步分析测定，如杂交、酶切电泳、变性高效液相分析、测序等。
试剂准备区、样本制备区和扩增区内的实验用品，包括移液器等器具应专用，空气、物品流向依次为：试剂准备区、样本制备区、扩增区、产物分析区，不可逆行。
2、清洁的实验用品：实验室自配试剂（去离子水、缓冲液等）和所有使用器具在使用之前均应高压灭菌或紫外杀菌。
枪尖、反应管等实验耗材应一次性使用。
PCR实验室消除污染操作步骤
PCR实验室消除污染操作步骤1.开始之前在进行任何实验之前，必须仔细清洗所有使用的器皿、仪器和试剂，并确保其没有任何污染和残留物。
此外，实验人员必须正确佩戴实验枣、手套和仪器保护罩，避免污染发生。
2.工作台清洁在实验室进行任何操作之前，首先要清洁工作台表面。
可以使用酒精和漂白剂溶液来擦拭工作台表面，确保没有任何污染物。
3.试剂和材料所有需要用到的试剂和材料都必须经过检查，确保其未受到任何污染。
如果发现有污染，必须及时更换。
4.DNA污染处理如果实验期间有可能出现DNA污染，能够有效去除DNA污染的方法包括使用紫外线照射、使用DNA降解酶处理、加入DNA脱附剂等等。
根据具体实验情况，选择合适的方法进行处理。
5.试剂复用防止污染为了避免试剂的交叉污染，必须标志清楚试剂的使用记录，避免使用同一管筒或器皿装入不同试剂。
6.使用无菌操作所有实验操作需要在无菌条件下进行，使用无菌工具和试剂，以避免细菌和其他污染物的引入。
7.反应管清洗在进行PCR反应之前，一定要确保反应管内部是干净的，并且没有任何污染。
8.防止交叉污染为了防止不同试剂和样品之间的交叉污染，应该使用单独的试剂和样品管，避免任何接触。
9.废弃物处理所有废弃物必须正确处理，特别是含有DNA和RNA的废弃物。
废弃物应放入相应的容器中，避免对环境造成污染。
10.彻底清洁实验室所有实验结束之后，实验室必须进行彻底清洁，包括擦拭工作台、清洗仪器和试剂瓶等。
确保实验室处于干净整洁的状态。
11.实验室空气净化实验室中可以安装空气过滤器和消毒器，以净化实验室的空气，降低污染的风险。
总之，PCR实验室的消除污染操作步骤包括准备实验前清洁、工作台清洁、DNA污染处理、试剂和材料清洁、无菌操作、反应管清洗、防止交叉污染、废弃物处理、实验室清洁和空气净化等。
只有严格按照这些操作步骤进行消除污染操作，才能保证PCR实验的准确性和可靠性。
PCR检测时对实验室DNA污染的清除
PCR检测时对实验室DNA污染的清除30 60 120 30 60 120 30 60 1201：1 ×103 ×103 ×103 ×107 ×107 ×107 ×107 ×107 ×1061：10 ×102 ×102 ×102 ×106 ×106 ×106 ×106 ×106 ×1051：100 ×10 ×10 ×10 ×105 ×105 ×105 ×105×104 ×1041：1000 0 ×104 ×104 ×104 ×104 ×103 ×1031：10000 0 0 0 ×103 ×103 ×103 ×102 ×102×101：100000 0 0 0 ×10 ×10 ×10 ×10 ×103 讨论PCR测定出现假阳性结果通常是由外源性DNA污染所致，病人标本中的病毒颗粒、阳性对照均是造成实验室严重污染的主要因素。
紫外线可以降解DNA或使DNA发生突变、失活和破坏DNA结构、阻断DNA的复制。
所以经紫外线照射后DNA难以扩增。
紫外线照射方便易行，消毒面广，对室内仪器设备影响较小。
因此被广泛应用于各实验室消毒。
但是紫外线消毒效果受灯管的辐射强度、照射时间、微生物的种类、有机物的含量、温度和湿度的影响[1,4]。
为了解紫外线消毒状况和有效范围，选择正确的消毒方法和时间，以减少实验室PCR检测外源性DNA污染，我们将HBV－DNA阳性标本进行了相关试验。
结果显示，HBV－DNA阳性血清标本和HBV阳性参控品经低温干燥后，用紫外线照射2小时，HBV－DNA高拷贝数的血清标本下降比例高于低拷贝数的血清标本，同样拷贝数的HBV阳性参控品显著高于血清标本；各种标本随着稀释倍数的增加，经紫外线照射后HBV －DNA的下降比例明显增加，说明标本中有机物如蛋白质等含量的高低直接影响到紫外线的照射效果。
PCR实验室发生污染后处理方法
PCR实验室发生污染后处理方法1.环境消毒：将PCR实验室中的每个工作台面、设备、工具等物品进行彻底的清洁和消毒，消毒方法可以使用70%酒精擦拭，对于无法擦拭的设备可用消毒液浸泡消毒。
2.更换耗材：将被污染的耗材（例如：PCR试管、吸嘴、移液器等）清理或隔离，以防止二次污染，同时更换新的耗材。
3.换气处理：开窗通风，确保实验室内外的空气流通，将可能存在的污染物排除。
4.建立严格的规范操作流程：加强对操作人员的培训，确保实验室操作符合规范，减少操作过程中对实验室环境造成的污染。
5.定期检测：定期对PCR实验室进行污染检测，使用空白对照进行负控实验。
如果检测到污染，应及时采取措施清除污染物，并做好记录。
6.样品检测方法：对样品进行进一步分析，确认是否被污染，如果样品已经被污染，应剔除使用，重新采集新的样品进行实验。
7.剔除污染源：如果PCR实验室中存在大量污染源，如陈旧的试剂、过期的耗材等，应及时清除和替换。
8.质量控制：建立质量管控体系，要求实验室人员在每次实验开始前，对PCR实验室的工作台、设备进行检查，确保实验环境符合要求。
9.合理使用实验室设备：合理使用PCR仪器和其他实验室设备，定期对仪器进行维护和保养，确保其正常工作，减少设备对实验室环境的污染。
10.建立实验室安全管理体系：加强实验室安全意识，建立实验室安全管理制度，定期进行实验室安全隐患排查，及时处理储存存在风险的试剂和化学品。
总结：PCR实验室污染的处理方法主要包括环境消毒、更换耗材、换气处理、建立规范操作流程、定期检测、样品检测方法、剔除污染源、质量控制、合理使用实验室设备和建立实验室安全管理体系等。
通过采取合适的处理措施，可以有效避免PCR实验室污染对实验结果的干扰。
PCR实验室污染的排除
PCR实验室污染的排除【关键词】 PCR［关键词］ PCR；污染；HBVPCR［1］技术是一种体外模拟自然DNA复制过程的核酸扩增技术，该技术通过重复高温变性、低温退火、中温延伸等简单的3个温度循环，能将靶DNA扩增数百万倍，获得极高的检测敏感性。
但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的结果［2］。
如果形成气溶胶污染而扩散，则可引起整个PCR实验室的污染，处理起来非常麻烦，严重的甚至要关闭PCR实验室。
我实验室也曾经遭遇过气溶胶的污染，所幸的是经过一段时间的处理，最终将PCR实验室污染排除掉了。
现将经过向大家报告如下。
1 实验室情况1.1 实验室设置实验室分为试剂准备区、标本制备区、扩增区三个区，试剂存放在试剂准备区，标本是在标本制备区处理，处理完的标本置于扩增区上机扩增。
1.2 使用试剂试剂是由中山大学达安基因股分有限公司提供的乙型肝炎病毒(HBV)荧光定量PCR试剂。
1.3 操作人员均经过卫生部临检中心或区临检中心理论和操作培训并通过考试取得合格证。
2 污染的发现2004年8月12日，我实验室按正常的操作规程检测HBVDNA 标本，同时设立了阴性对照和阳性对照(均为试剂盒中配备)，扩增结束分析结果时，发现HBVDNA所有的标本及阴、阳性对照均为阳性，提示操作过程中出现污染，但具体是什么原因引起的污染还不清楚。
3 污染源的追踪出现污染后，我们首先考虑可能是试剂的污染，更换新批号的HBV试剂重新检测后，结果仍然为全部标本阳性。
将HBV标本拿到其他正规的PCR实验室检测，结果标本中阴、阳性结果都有，阴性对照是阴性，阳性对照是阳性，说明标本没有被污染。
将两种批号的HBV试剂拿到其他正规的PCR实验室检测，也显示试剂没有问题。
我实验室用消毒液擦拭工作台面后，打开所有的紫外灯照射一天，将所使用微量进样器、离心管、枪头、手套、记号笔、记录本等都更换掉，再将HBV标本进行检测，结果全部标本仍然为阳性。
PCR污染原因与检测方法
PCR污染原因与检测方法PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生。
污染原因一、标本间交叉污染：标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染；标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染；有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染。
二、PCR试剂的污染：主要是由于在PCR试剂配制过程中，由于加样枪、容器、双蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染。
三、PCR扩增产物污染：这是PCR反应中最主要最常见的污染问题。
因为PCR产物拷贝量大（一般为1013拷贝/ml）,远远高于PCR检测数个拷贝的极限，所以极彳量的PCR产物污染，就可造成假阳就可形成假阳性。
还有一种容易忽视，最可能造成PCR产物污染的形式是气溶胶污染。
在空气与液体面摩擦时就可形成气溶胶，在操作时比较剧烈地摇动反应管，开盖时、吸样时及污染进样枪的反复吸样都可形成气溶胶而污染。
据计算一个气溶胶颗粒可含48000拷贝，因而由其造成的污染是一个值得特别重视的问题。
四、实验室中克隆质粒的污染：在分子生物学实验室及某些用克隆质粒做阳性对照的检验室，这个问题也比较常见。
因为克隆质粒在单位容积内含量相当高，另外在纯化过程中需用较多的用具及试剂，而且在活细胞内的质粒，由于活细胞的生长繁殖的简便性及具有很强的生命力。
其污染可能性也很大。
污染的监测一个好的实验室，要时刻注意污染的监测，考虑有无污染是什么原因造成的污染,以便采取措施，防止和消除污染。
对照试验一、阳性对照：在建立PCR反应实验室及一般的检验单位都应设有PCR阳性对照，它是PCR反应是否成功、产物条带位置及大小是否合乎理论要求的一个重要的参考标志。
阳性对照要选择扩增度中等、重复性好，经各种鉴定是该产物的标本，如以重组质粒为阳性对照，其含量宜低不宜高（100个拷贝以下）。
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『PCR 实验室污染的排除』
[关键词]PCR；污染；HBV
PCR技术是一种体外模拟自然DNA复制过程的核酸扩增技术，该技术通过重复高变性、低退火、中延伸等简单的3个度循环，能将靶DNA扩增数百万倍，获得极高的检测敏感性。
但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的结果凹]。
如果形成气溶胶污染而扩散，则可引起整个PCR实验室的污染，处理起来非常麻烦，严重的甚至要关闭PCR实验室。
我实验室也曾经遭遇过气溶胶的污染，所幸的是经过一段时间的处理，最终将PCR实验室污染排除掉了。
现将经过向大家报告如下。
1 实验室情况
1．1 实验室设置实验室分为试剂准备区、标本制备区、扩增区三个区，试剂存放在试剂准备区，标本是在标本制备区处理，处理完的标本置于扩增区上机扩增。
1．2 使用试剂试剂是由中山大学达安基因股分有限公司提供的乙型肝炎病毒（HBV）荧光定量PCR试剂。
1．3 操作人员均经过卫生部临检中心或区临检中心理论和操作培切I并通过考试取得合格证。
2 污染的发现
2004年8月12日，我实验室按正常的操作规程检测HBV-DNA标本，同时设立了阴性对照和阳性对照（均为试剂盒中配备），扩增结束分析结果时，发现HBV DNA所有的标本及阴、阳性对照均为阳性，提示操作过程中出现污染，但具体是什么原因引起的污染还不清楚。
3 污染源的追踪
出现污染后，我们首先考虑可能是试剂的污染，更换新批号的HBV试剂重新检测后，结果仍为全部标本阳性。
将HBV标本拿到其他正规的PCR实验室检测，结果标本中阴、阳性结果都有，阴性对照是阴性，阳性对照是阳性，说明标本没有被污染将两种批号的HBV试剂拿到其他正规的PCR实验室检测，也显示试剂没有问题。
我实验室用消毒液擦拭工作台面后，打开所有的紫外灯照射一天，将所使用微量进样器、离心管、枪头、手套、记号笔、记录本等都更换掉，再将HBV标本进行检测，结果全部标本仍然为阳性。
用消毒液擦拭工作台面后，打开所有的紫外灯照射一天，将HBV标本重新检测，同时设置了两个阴性对照（A和B），A 阴性对照为将试剂的反应管从试剂盒中拿，打开反应管的盖子，在空气中暴露10 min，盖上盖子，上机检测；B阴性对照为将试剂的反应管从试剂盒中拿，不开盖子，直接上机检测。
结果是全部标本和A阴性对照为阳性，而B阴性对照为阴性。
至此，虽然还查找不到污染源是什么，但有一点可以肯定，PCR实验室污染是气溶胶扩散而引起的后来经过调查，发现污染是南于我实验窒新来了一个清洁工人，没有经过培训就直接上岗，在打扫实验室卫生时，用扩增区的扫笤和拖把打扫了标本制备区的卫生引起。
4 污染的排除
在确定了污染的原因后。
我们就开始着手排除污染，每天都打开整个PCR 实验室的门窗和排气扇，让整个实验室通风，用消毒液擦拭整个PCR实验室，打开所有的紫外灯照射。
每隔3 d按3．5步骤检测一次，一直这样处理了一个多月，A阴性对照才转为阴性。
连续检测三次A和B阴性对照，每次结果都均为阴性，才确定PCR实验室恢复正常。
5 体会
通常我们对PCR实验室污染的预防是采取隔离不同操作区、分装试剂、改进实验操作等规则，对污染的处理是用稀盐酸擦拭或浸泡；紫外线照射法等 ]。
而对于实验室的通风方面没有给予足够的重视，为了防止实验区间之间的相互污染，各个实验区间都是尽可能的密闭，从而使得实验室出现PCR产物留污染的几率增大。
从本次PCR实验室污染排除的过程来看．我觉得污染得以排除的一个关键是通风。
适当的给予实验室通风，可起到空气稀释的作用，有利于PCR产物留量的减少，加快实验室污染的排除。
现将我们PCR实验室的经验教训报告给大家，是想引起各位同行对实验室通风给予足够的重视，不要再有我们的情况发生。