超声波辅助法

超声波法-有机溶剂法提取薰衣草中的多酚

一实验原理

溶剂提取法是根据天然产物中各种化学成分在溶剂中的溶解性质，选用对活性成分溶解度大，对不需要的溶出成分溶解度小的溶剂，将有效成分从药材组织内溶解出来的方法。本实验选取有机溶剂做提取液。

超声波法利用外力强化提取，超声波使提取液不断振荡，有助于溶质扩散，可以明显加速植物中有效成分的提取。

二实验材料及仪器（简略）

（1）材料：优质薰衣草

（2）试剂：无水乙醇、蒸馏水、福林试剂、碳酸钠

（3）仪器：烘箱、可见分光光度仪、粉碎机、60目筛、电子天平、超声波萃取仪、pH计、移液管、容量瓶、玻璃棒、、烧杯

三实验步骤

1 样品的预处理

薰衣草用粉碎机粉碎并过60目筛，以提高提取效率，处理后的薰衣草粉末装袋密封冷藏保存，备用。

2 多酚提取率的测定

2.1没食子酸标准品溶液的制备

精确称没食子酸0.0250g，蒸馏水溶解，定容至1000ml容量瓶中，室温放置，储存。

2.2没食子酸标准曲线的建立

分别精确吸取没食子酸标准液0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml、6.0ml、7.0ml、8.0ml转入25ml比色管中，加入1ml福林试剂，再加入4ml15%NaHCO3，蒸馏水定容至刻线，摇匀，避光保存60min。测定没食子酸标准品在760nm波长处的吸光度值，以多酚浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程。

2.3供试品的制备

超声波法-有机溶剂法提取薰衣草中的多酚，过滤，得提取液，悬蒸至无乙醇味，定容至100ml容量瓶。

2.4（1）根据标准曲线可得供试品的质量浓度

(2)绿原酸的提取率：X=(C×25×200)/m

3 提取条件的优化

3.1乙醇浓度对提取率的影响

准确称取薰衣草干粉1.0000g，平行5份，分别置于100ml圆底烧瓶中，料液比为1:30（30ml），置于超声波仪中、超声功率500W，温度50℃、时间为25min，乙醇体积分数为40％、50％、60％、70％、80％时提取薰衣草干粉中的多酚。研究乙醇浓度提取对提取率的影响。

3.2料液比对提取率的影响

准确称取薰衣草干粉1.0000g，平行5份，分别置于100ml圆底烧瓶中，以体积分数为60％乙醇，置于超声波仪中，超声功率500W、温度50℃、时间25min，料液比分别为1:10、1:20、1:30、1:40、1:50时提取薰衣草干粉中的多酚。研究料液比对提取率的影响。

3.3温度对提取率的影响

准确称取薰衣草干粉1.0000g，平行5份，分别置于100ml圆底烧瓶中，以体积分数为60％乙醇，料液比为1:30（30ml），置于超声波仪中、超声功率500W，时间25min、温度分别30℃、40℃、50℃、60℃、70℃为时提取薰衣草干粉中的多酚。研究温度对提取率的影响。3.4超声波处理时间对提取率的影响

准确称取薰衣草干粉1.0000g，平行5份，分别置于100ml圆底烧瓶中，以体积分数为60％乙醇，料液比为1:30（30ml），置于超声波仪中、超声功率500W，温度50℃、时间分别为15min、20min、25min、30min、35min时提取薰衣草中的多酚。研究超声波处理时间对提取率的影响。

3.5超声波功率对提取率的影响

准确称取薰衣草干粉1.0000g，平行5份，分别置于100ml圆底烧瓶中，以体积分数为60％乙醇，料液比为1:30（30ml），pH值为4，置于超声波仪中，温度50℃、时间25min，超声功率分别为300W、400W、500W、600W、800W时提取薰衣草干粉中的多酚。研究超声波功率对提取率的影响。

4.薰衣草中提取多酚的正交试验

以多酚的提取率为考察标准，以单因素试验的结果为基础，分析乙醇的料液比、超声波功率、提取时间、乙醇体积分数4个因素的适宜条件，每个因素分别选择3个较好水平，设计L9(34)正交试验。

5.雪菊中绿原酸乙醇提取工艺的响应面法条件优化

二、提取液抗氧化活性的测定

2.1 DPPH自由基清除能力的测定

准确量取一定浓度的样品溶液0.50 mL于10 ml比色管，再加入0.2 mmol/L的DPPH(二苯代苦肼自由基)乙醇溶液3.5mL，摇匀后，在室温黑暗处放置30 min。用无水乙醇调零，测定517 nm处的吸光值。

A0：3.50 mL DPPH +0.05 mL无水乙醇

AX：3.50 mL DPPH+0.05 mL样品

AX0：3.50 mL DPPH与0.05 mL无水乙醇

DPPH自由基清除率(%)=[ A0－(AX－AX0）] / A0×100。

2.2 ABTS自由基的清除能力( ABTS )

首先用pH为7.4磷酸缓冲溶液配制ABTS标准液（50 mL，2 mmol/L），将此溶液与K2S2O8水溶液（200 mL，70 mmol/L）充分混合后再暗处放置15 h~16 h（过夜）。随后用蒸馏水调节ABTS·+溶液在734 nm的吸光度为0.700 ±0.030。移取不同浓度的样品溶液与ABTS·

+溶液按照一定比例室温下混合，避光静置3 min后734 nm下测定其吸光度（Atest），并测定不加任何提取液的ABTS溶液的吸光度（Acontrol）。通过下列公式计算自由基清除率SC%：自由基清除率SC=（[Acontrol-Atest）/Acontrol]×100 %。