牛奶抗生素检测试剂E50说明书
牛奶中抗生素残留的几种常用检测方法
牛奶中抗生素残留的几种常用检测方法(总6页)--本页仅作为文档封面，使用时请直接删除即可----内页可以根据需求调整合适字体及大小--牛奶中抗生素残留的几种常用检测方法随着奶牛饲养业的发展，抗生素在预防和治疗奶牛疾病方面得到广泛的应用。
生鲜牛奶中抗生素的来源主要是：第一，治疗泌乳期病牛时使用的抗生素会从奶牛体内移行到乳腺残留进入牛奶中，资料表明治疗后的奶牛，其挤出的牛奶5天内都有抗生素残留；其二，为了预防奶牛疾病并提高产量，在奶牛饲料中添加抗生素也会造成牛奶中抗生素的残留；第三，由于牧场管理不善，挤奶、储奶没有严格的卫生制度和配套的设施，人为添加或造成牛奶抗生素的污染。
牛奶中含有抗生素，不仅对人的健康造成很大的危害，而且对乳品加工企业带来经济损失（因无法生成酸奶和奶酪）。
因此必须严格控制牛奶中抗生素残留，除了要做好科学饲养、精心管理；正确挤奶和预防疾病外，还要规范抗生素的使用，按国标中有关规定，用药后的奶牛5天后所产的牛奶才可作为原料乳，并且要检测其残留。
世界粮农组织（FAO）、世界卫生组织（WHO）、欧盟（EC）及美国的食品和药品管理局（FDA）等对食品中抗生素最大残留量都有明确的规定，我国也有鲜奶中抗生素残留量检验标准（—94）。
目前，鲜奶中抗生素残留的检测方法大致分为三类：生物测定法（微生物测定法、放射受体测定法）、免疫法（放射免疫法、荧光免疫法、酶联免疫法）、理化分析法（波谱法、色谱及联用技术）。
下面介绍几种常用的牛奶中抗生素残留检测方法。
TTC法TTC法是我国鲜奶中抗生素残留量检验标准（—94）的检测法，属生物检测法。
其测定原理基于抗生素对微生物的抑制作用。
如果牛奶中含有抗生素，则加入菌种（嗜热链球菌）经培育~3小时后,加入TTC指示剂(三苯基四氮唑)不发生还原反应,所以样品呈无色状态;如果牛奶中不含抗生素,则样品呈红色.这样实验后样品颜色不变的为阳性,样品染成红色的为阴性。
TTC法的具体操作步骤:1.菌液制备:将单菌种(嗜热链球菌)以脱脂乳为培养基,在36±1℃培养箱中培养15小时后,再以脱脂乳以至于1:1稀释待用;2.取待检样液9mL,在80℃水浴加热5分钟后冷却到37℃以下,加活菌液1mL,在36℃±1℃水浴2小时,加入4%的TTC指示剂, 36℃±1℃水浴培养30分钟;3.若样液颜色不变为阳性,呈红色为阴性;若阳性的样液,再置于水浴中培养30分钟,不显色的为阳性,呈红色为阴性.TTC法测定各种抗生素的灵敏度为:青霉素:4ppb,链霉素:500ppb,庆大霉素:400ppb,卡那霉素:5000ppb.它具有费用低,易开展的优点;缺点是耗时长，要求操作人员需有一定专业知识且实验过程中菌液的制备、水浴过程控制都要求严格遵守操作规程，否则易出现假阳性，以致出现检验结果的不稳定性。
HLB-牛奶中氯霉素的检测-0
牛奶中氯霉素的检测参考方法：/产品名称：HPSW HLB 规格：60mg/3ml 【概述】氯霉素类抗生素，属于抑菌性广谱抗生素，常见的氯霉素类药物主要包括：氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考等。
氯霉素类药物曾被广泛应用于动物疾病的治疗，但其毒害性较大，禽、蛋、肉等食品中的氯霉素残留会直接损害消费者的健康。
2019年12月27日，氯霉素被列入食品动物中禁止使用的药品及其他化合物清单。
【标液配置】甲砜霉素标准使用液(30μg/mL)，临用前用乙腈配置。
【样品提取】牛奶:取本品，取约5g ，精密称定，置具塞离心管中，加入1.5g 氯化钠，精密加入乙腈10ml ，涡旋，离心，5000转/分离心5分钟，取上清液置15ml 氮吹管中，残渣再加5ml 乙腈重复提取一次，合并上清液，45℃氮吹干，加4ml 甲醇水（2+8），加4ml 正己烷，涡旋，5000转/分离心2分钟，弃去正己烷层，水层待净化。
【净化】HPSW HLB （60mg/3ml ） （1）活化：5ml 甲醇，5ml 水（2）上样淋洗：取提取液过柱，弃去流出液。
用3ml 甲醇水（2+8）润洗氮吹管，洗液过柱，弃去流出液，吹干小柱。
（3）洗脱：用5ml 甲醇洗脱小柱，收集洗脱液。
45℃氮吹干，加甲醇-水（4+6）定容至1ml ，涡旋， 过0.22μm 有机滤膜，上机。
【参考仪器条件】 仪器：Waters UPLC色谱柱：Morphling WD -C18(4.6mm×250mm,5μm) 检测器：PDA ，检测波长：275nm流速：1.0ml/min 进样体积：10μL 柱温：35℃【实验结果】标准溶液图1样品图2加标图3【注意事项】 /【产品订购信息】。
微生物对生乳残留抗生素降解趋势的研究
微生物对生乳残留抗生素降解趋势的研究刘彬;许应萍;李洪军;王蓉【摘要】[目的]研究生乳中残留抗生素在保存过程中微生物增殖后的变化规律.[方法]采用了SNAP(E50)检测方法,对10万CFU/mL以下、49万和120万CFU/mL 菌落总数不同的生鲜奶,进行了抗生素残留检测分析.对微生物菌落总数含量不同的生鲜奶在保存过程中抗生素残留变化进行分析,研究生鲜奶中残留抗生素与存放时间的降解变化趋势.[结果]试验表明,生鲜奶中的微生物越多,抗生素降解就越快.随着保存时间的延长,生鲜奶中的微生物不断增多,进而加快了生鲜乳残留抗生素的降解.[结论]该研究可为生乳的质量控制提供更科学的方法.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2018(046)032【总页数】3页(P164-166)【关键词】微生物;生鲜奶;抗生素;降解趋势【作者】刘彬;许应萍;李洪军;王蓉【作者单位】重庆市天友乳业股份有限公司,重庆404100;西南大学食品科学学院,重庆400715;重庆市天友乳业股份有限公司,重庆404100;西南大学食品科学学院,重庆400715;重庆市天友乳业股份有限公司,重庆404100【正文语种】中文【中图分类】TS252牛乳是乳畜产犊后由乳腺分泌出的一种具有胶体的特性、均匀的、乳黄色或乳白色生物学液体，即乳汁，奶牛的泌乳期一般为10个月。
牛乳中含有脂肪、蛋白质、乳糖、多种维生素和微量元素，是营养价值极其丰富的全价食品。
受环境的影响，奶牛易患乳房炎、口蹄疫等疾病，奶牛生病后，有的需要用抗生素药物进行治疗，泌乳期的奶牛使用抗生素兽药后，通过泌乳期奶牛机体的血液在一段时间内残留在牛奶中。
对于经常饮用含有抗生素残留牛奶的人而言，等于长期间接地吸收低剂量抗生素。
残留在奶牛体内的抗生素药物，会引起病原菌对多种抗生素产生耐药性，影响胃肠道细菌群的平衡，从而影响人体健康。
其次，牛奶中的抗生素会影响奶制品的品质，如果用含抗生素的奶做酸奶或乳酪等，则残留在其中的抗生素会抑制细菌的发酵，使产量和质量降低，造成乳制品生产企业的经济损失。
抗生素检测试纸说明
β-内酰胺类抗生素快速检测试纸条使用说明书原理β-内酰胺类抗生素快速检测试纸条基于胶体金免疫层析技术，用于快速筛查β-内酰胺类抗生素超标的牛奶。
将检测液加入试纸卡上的样品孔，检测液中的β-内酰胺类抗生素与胶体金垫上的金标抗体结合形成复合物，若β-内酰胺类抗生素在检测液中浓度低于4ng/mL，未结合的金标抗体流到T区时，被固定在膜上的β-内酰胺类抗生素-BAS偶联物结合，逐渐凝集成一条可见的T线；若β-内酰胺类抗生素浓度高于4ng/mL，金标抗体全部形成复合物，不会再与T线处的β-内酰胺类抗生素-BAS偶联物结合，从而也就不显示T线。
未固定的复合物流过T区被C区的二抗捕获形成可见的C线。
C线出现则表示免疫层析发生，即试纸是有效的。
灵敏度4ng/mL提供材料1.10份快速检测试纸卡（内带两个吸管1包干燥剂）2.10份样品离心管3.1条微孔条（10个反应小杯）所需材料1.5mL转头离心机（3000-8000转/分钟）注意事项1. 如果购买时发现过期，破损，污染，无效的产品，请不要使用。
2. 所有试纸启封后一小时内使用。
3. 本品为一次性产品，请勿重复使用。
4. 样品不需要放入冰箱冷藏，室温保存即可。
5. 请勿用饮水，自来水，纯水，冲调奶粉等做阴性对照，最好使用明确阴性鲜牛奶作对照；青霉素分解酶对结果产生干扰。
保存和稳定性4-30°C阴凉干燥处保存，不可冷冻，避免日光直射，保质期18个月。
测试步骤1. 将采集的牛奶样品编号，置于常温（20°C-30°C）室内。
（低温牛奶应该放置至室温再进行检测）2. 摇匀牛奶，用吸管吸取1mL加入到离心管中，7000转/分钟离心3-4分钟至分离出脂肪层。
3. 再用吸管透过脂肪层，准确吸取脂肪层下5毫米处液体（即脱脂牛奶）至吸管刻度线位置。
4. 从微孔板上取下所需数目的小杯，撕去杯面上的密封膜，固定到支架上。
5. 将吸管吸取的脱脂牛奶全部滴入反应小杯内，然后用另一支吸管对其进行反复吸放，直至小杯内的红色物质全部溶解并混合均匀后，等待约1分钟，即得到待检样品。
利普斯50(E50)牛奶抗生素检测试剂操作规范
利普斯50(E50)牛奶抗生素检测试剂操作规范一．操作步骤1. 用美工刀切割试剂单孔，先纵向割开一条(8个)，再横向割一个或两个、三个……(沿两孔之间缝隙割)。
2. 取出割好的检测单孔，做好相应样品标记(可以在侧面用细水笔标记数字)，揭开密封铝箔。
3. 使用取样枪按样品顺序吸取各样品(50μl)，加到相应单孔中。
注意：每个取样头对应一个样品，用过的取样头扔掉。
4．全部样品添加完毕后，剪取相应密封条对检测单孔进行密封。
(密封条已经对应单条截好，只需用手撕取，检测量不到一条8个的，再对应用剪刀剪取)。
5．将密封后的检测单孔放入水浴锅或者恒温培养器内进行培养，培养时间2小时30分钟左右。
6．取出培养后的检测，从侧面观测单孔颜色，记录检测结果。
注：结果判读黄色到浅黄绿色包括绿色为阴性结果范围蓝绿色到紫色为阳性结果范围7.为了保证每次检测的准确性以及找到错误结果的原因，每次检测建议做一个阴性对照(用无抗奶作为阴性对照)，如果有条件同时也可以做一个阳性对照(10ppb的青霉素样品作为阳性对照，为了确保试剂是否正常)。
二．试剂保存1．保存温度：4-12℃(一般冰箱的保鲜柜即可满足保存条件)2．避光保存：本产品对阳光敏感，一般不要长时间暴露在阳光下，或者灯光下。
注：试剂不可冷冻保存，经过冷冻的试剂内部成分将被破坏；试剂及样品要恢复到室温后才可开始检测操作，但是需要把剩余的检测小孔马上放回冰箱，以免重复多次后影响试剂的性能。
三．注意点1．培养的工具，可以使用恒温水浴锅，或者生化培养箱，温度必须严格控制在65℃±1℃，超过此温度条件，检测结果会受到影响，严重的就会有假阳性和假阴性结果出现。
2.每板未使用完的试剂一定要马上要放回盒子里面，并在冰箱保存，注意要用原来的塑料袋继续封好。
另外不要把已经撕开的小孔或者不小心弄破铝薄纸的小孔继续放回冰箱待用，如果不小心弄破小孔后要用粘胶纸封好，并且在最快时间内使用完。
牛奶总抗生素检测试剂盒试用方法
牛奶及中性液态乳制品中抑菌素检测试剂盒(总抗生素检测试剂盒)产品编号：SW-5001【简介】华益精点牛奶及中性液态乳制品中抑菌素检测试剂盒是用来检测牛、羊的原奶和巴杀奶等中性液态奶中的抗生素。
试剂盒提供的微孔中有细菌培养基和pH 指示剂，向微孔中加入奶样，如果样品中没有抗生素，孵育一定时间后，细菌产酸，使指示剂从紫色变为黄色；如果样品中有抗生素，则细菌不产酸，指示剂没有颜色变化。
【检测对象】本产品是一种使用灵活，操作方便的抑菌素定性检测试剂盒，用于牛、羊等生乳、经加工处理的中性液态乳制品及乳粉中抑菌素（如残留抗生素等）的定性检测。
【产品组成】1.96孔微孔板2块；2.粘性胶膜2张；3.说明书1份。
【产品性能】以下为对应的抗生素检出限：青霉素-G：1-2ng/mL 阿莫西林：1-2ng/mL氨苄西林：1-2ng/mL 哌拉西林：3-4ng/mL苯唑西林：5ng/mL 头孢哌酮：20ng/mL头孢氨苄：20ng/mL 盐酸四环素：75ng/mL强力霉素：75ng/mL 土霉素：50ng/mL林可霉素：100-150ng/mL 链霉素：500-1000ng/mL庆大霉素：50ng/mL 卡那霉素：100ng/mL【检测步骤】1、根据所检测样品的数量，先用刀将铝箔分割线切开，再将所需的微孔切下。
注意不要将剩余微孔上的铝膜破坏，不然会导致培养基变干失去检测作用。
并将剩余的检测微孔放回4℃左右的冰箱保存；2、将取下的微孔板的铝膜撕掉，向每个微孔中加入50微升的待测样品。
同时用其中一个微孔作为阴性对照，加入50微升不含抑菌素的阴性对照样品；3、用粘性胶膜小心地将板孔封上，并置于64±0.5℃环境下孵育，如水浴锅或培养箱。
可在孵育2.5-3h之间观察，如阴性对照组未变黄则继续培养直到阴性对照组变黄停止培养。
水浴及培养箱的温度波动均会导致更长的检测时间，并会影响检测的灵敏度。
【判断标准】1、黄色表示不含抗菌物质或抗菌物质的浓度在检出限以下，结果判为检测阴性；2、蓝色或紫色表明所检测的待测样品中含有抗菌物质，结果判为检测阳性。
关于β-内酰胺酶快速检测试纸条的使用说明——牛奶
关于β-内酰胺酶快速检测试纸条的使用说明——牛奶β-内酰胺酶快速检测试纸条使用说明书（乳品）【检测原理】β-内酰胺酶快速检测试纸条是采用间接竞争法，利用β-内酰胺酶可分解β-内酰胺类抗生素的原理，快速测定牛奶中β-内酰胺酶的含量。
本产品用于快速检测乳品中β-内酰胺酶残留，适用于各类企业、检测机构、监督部门的现场快速检测。
【检测限】1~2 U/mL【适用范围】生鲜乳、灭菌乳（巴氏奶、UHT奶）、全脂奶粉【试剂组成】β-内酰胺酶快速检测试纸条（40份/盒,5桶）；微孔试剂A（白色，40份/盒）；微孔试剂B（红色，40份/盒）；一次性手套；说明书【需要未提供的仪器】干式加热器【样品处理】1.奶粉复原：称取1g样品，加入9mL纯净水溶解混合均匀后检测；2.其余样本：直接检测。
【检测程序】1.使用前将试纸条、微孔试剂A、微孔试剂B和待检样品恢复至室温；将所需微孔试剂置于空微孔板架中；一次检测样品数量不要超过8 个；如果一次检测样品数量超过8 个，请按照8个一组，分批检测。
2.用微量移液器吸取250μL回温后的待测样品于微孔试剂A中，缓慢吸打至待测样品与微孔试剂A充分混匀。
3.将微孔试剂A放入干式加热器中，45℃保温20min。
4. 将微孔试剂A移至室温，回温5min。
5. 取出所需数量的微孔试剂B和试纸条并做好标记，请在30min 内使用。
6. 用微量移液器吸取200μL含微孔试剂A的待测样品溶液于微孔试剂B中，缓慢吸打至充分混匀后，开始计时。
7. 室温孵育3min后，将标记好的试纸条插入微孔试剂B中。
8. 反应5min，取出试纸条并在1分钟内根据示意图进行结果判断，其他时间判断结果无效。
【结果判读】（1）阴性（－）：T线显色比C线浅、T线不显色、T线显色与C线显色一致，表示样本中β-内酰胺酶浓度低于检测限浓度。
（2）阳性（＋）：T 线显色比C 线深，表示牛奶样本中β-内酰胺酶浓度高于检测限浓度。
（3）无效： C 线未显色，说明操作过程不正确或试纸条已失效。
牛奶中抗生素残留的检测
牛奶中抗生素残留的检测摘要研究了链霉素与1.5%硫酸铁铵的0.25mol/L硫酸液的显色反应。
利用链霉素的特有性质（麦芽酚）反应[1]，链霉素在碱性溶液中，链霉糖经重排使环扩大形成麦芽酚，麦芽酚与硫酸链霉素溶液形成紫红色配位化合物[2]。
本实验据此分析得到在NaOH的溶液中，以硫酸铁铵为显色剂在525nm波长下用分光光度法测定硫酸链霉素的含量。
回归方程A=0.0882C+0.0003，相关系数r=0.9998，链霉素在0.5～3.0μg/mL的浓度范围具有良好线性关系。
该方法操作简便快捷，结果稳定可靠。
关键词分光光度；抗生素；残留；牛奶0 引言随着抗生素在乳畜饲养业中的广泛应用，牛奶中抗生素残留问题日益受到国际社会的重视。
而硫酸链霉素是常用氨基糖苷类抗生素，主要对结核杆菌，多种革兰氏阴性杆菌有效，在较低浓度时抑菌，较高浓度时则杀菌，在兽药抗生素领域广泛应用[3]。
目前抗生素的残留检测方法多样，而笔者采用硫酸链霉素与硫酸铁铵发生显色反应，并采用分光光度法测定硫酸链霉素的含量，该方法操作简单，方便快捷，适合在实际工作中运用。
1 实验部分1.1主要仪器及试剂723型分光光度计台式电动离心机注射用硫酸链霉素山东鲁抗医药股份有限公司提供国家准字H37020187 产品批号：110715 1g（100万个单位）；1.5%硫酸铁铵的0.25mol/L硫酸液；冰醋酸；0.2mol/LNaOH。
1.2实验方法取样品50mL水浴加热至40℃，取1mL冰醋酸滴加于其中，边加边搅拌直到沉淀析出完全，冷却至室温，离心。
取3mL离心后的清液于试管中，并加入4mLNaOH，在60℃水浴加热10min，冷却后，移入25mL容量瓶中，加入3mL 显色剂，定容。
静置20分钟，于525nm下测定吸光度。
通过工作曲线，得到相应硫酸链霉素的浓度[4]。
2 结果与讨论2.1吸收曲线精密称取链霉素标准品0.0504g溶于水，置50ml容量瓶中定容，即得1mg/mL 链霉素标准液。
关于β-内酰胺酶快速检测试纸条的使用说明——牛奶
β-内酰胺酶快速检测试纸条使用说明书（乳品）【检测原理】β-内酰胺酶快速检测试纸条是采用间接竞争法，利用β-内酰胺酶可分解β-内酰胺类抗生素的原理，快速测定牛奶中β-内酰胺酶的含量。
本产品用于快速检测乳品中β-内酰胺酶残留，适用于各类企业、检测机构、监督部门的现场快速检测。
【检测限】1~2 U/mL【适用范围】生鲜乳、灭菌乳（巴氏奶、UHT奶）、全脂奶粉【试剂组成】β-内酰胺酶快速检测试纸条（40份/盒,5桶）；微孔试剂A（白色，40份/盒）；微孔试剂B（红色，40份/盒）；一次性手套；说明书【需要未提供的仪器】干式加热器【样品处理】1.奶粉复原：称取1g样品，加入9mL纯净水溶解混合均匀后检测；2.其余样本：直接检测。
【检测程序】1.使用前将试纸条、微孔试剂A、微孔试剂B和待检样品恢复至室温；将所需微孔试剂置于空微孔板架中；一次检测样品数量不要超过8 个；如果一次检测样品数量超过8 个，请按照8个一组，分批检测。
2.用微量移液器吸取250µL回温后的待测样品于微孔试剂A中，缓慢吸打至待测样品与微孔试剂A充分混匀。
3.将微孔试剂A放入干式加热器中，45℃保温20min。
4. 将微孔试剂A移至室温，回温5min。
5. 取出所需数量的微孔试剂B和试纸条并做好标记，请在30min内使用。
6. 用微量移液器吸取200µL含微孔试剂A的待测样品溶液于微孔试剂B中，缓慢吸打至充分混匀后，开始计时。
7. 室温孵育3min后，将标记好的试纸条插入微孔试剂B中。
8. 反应5min，取出试纸条并在1分钟内根据示意图进行结果判断，其他时间判断结果无效。
【结果判读】（1）阴性（－）：T线显色比C线浅、T线不显色、T线显色与C线显色一致，表示样本中β-内酰胺酶浓度低于检测限浓度。
（2）阳性（＋）：T 线显色比C 线深，表示牛奶样本中β-内酰胺酶浓度高于检测限浓度。
（3）无效： C 线未显色，说明操作过程不正确或试纸条已失效。
β-内酰胺类抗生素快速检测
β-内酰胺类抗生素荧光快速检测卡说明书【产品简介】本产品用于快速检测生鲜奶中β内酰胺类抗生素的残留，整个检测过程只需要6分钟左右，适用于各类企业及检测机构。
表1部分β内酰胺类药物检出限（μg/kg）药物名称检出限药物名称检出限青霉素G2苯唑西林20阿莫西林8头孢噻呋80氨苄西林8头孢喹肟20氯唑西林20头孢氨苄50【产品组成】1、β内酰胺类抗生素免疫胶体金快速检测卡（40份/盒）2、说明书（1份/盒）3、IC卡（1个）【使用步骤】1、将荧光读数仪开机，预热10min，并插入本批次产品所对应的IC卡；2、将检测卡和待测奶样恢复至室温；2、从原包装袋中取出检测卡，水平放置于观察者正面，打开后请立即使用；3、用移液器取100μL奶样于加样孔中，加样后开始计时6min；4、6min后将检测卡插入荧光读数仪中读数。
【结果判断】◆阴性（-）：检测结果≥1.0为阴性；◆阳性（+）：检测结果＜1.0为阴性；◆无效：读数仪报错，则本次检测无效，需重新测试；【注意事项】1、检测卡请在保质期内一次性使用；2、检测时请插入本批次产品所对应的IC卡，不同批次产品不能混用IC卡；3、尽量不要触摸检测卡中央的白色膜面；【特异性】本产品与氯霉素、链霉素、磺胺类等其他类药物无交叉反应。
【精密度】同时使用本产品和β内酰胺类抗生素ELISA检测试剂盒对800份样品包括365份阴性样品和435份阳性样品进行检测，检测结果表明本产品与β内酰胺类抗生素ELISA检测试剂盒的结果符合率为98.6%。
【储存及有效期】原包装应储存于2-8℃，阴凉避光干燥处，切勿冷冻；有效期12个月。
有效期及批号见外包装。
美兰及E50
美蓝实验原理：牛奶中的微生物分泌出还原酶，使美兰还原而褪色，还原反应的速度和所存在的细菌数量有关，根据美兰退色的时间估计牛乳中的细菌总数来评定牛乳的品质。
1、药品：亚甲基蓝（分析纯）；蒸馏水；95%酒精2、玻璃棒；容量瓶（200ml，100ml）；烧杯；试管（20ml）若干；塞子；天平；吸管（10ml，1ml）若干，水浴锅3、溶液配置：饱和溶液的配置：用天平准确称取2g亚甲基蓝（分析纯），倒于烧杯中，用95%酒精进行溶解，后将其倒入100ml容量瓶中，定容至100ml，盖盖，反复颠倒。
用10ml吸管吸取以上溶液5ml到200ml容量瓶中，用蒸馏水定容到200ml，将该溶液放冰箱中保存，一周内用完。
（即按比例5：195进行配比）（二）．操作步骤1．用灭菌的10ml吸管吸取20ml被检乳样于灭菌试管内。
2．用灭菌的1ml吸管吸取配好的美兰溶液1ml，塞上塞子。
3．上下倒转试管几次，使其混合均匀。
4．置于37±2℃水浴锅内，不同时段看美兰退色与否并记录时间，根据时间长短，来判定细菌总数的含量。
（三）计数：裉色时间相当每毫升牛乳中的细菌总数20分钟＞2000万20-40分钟 1000万-2000万40分钟-1小时 500万-1000万1小时-2小时 400万-500万2小时-3小时 300万-400万3小时-4小时 200万-300万4小时-5小时 100万-200万5小时-5.5小时 50万-100万5.5小时-6.5小时 30万-50万6.5小时-7.5小时 10万-30万＞7.5小时〈10万（四）注意事项：1.水浴的水面要应不低于试管内乳样高度。
2.底部或表层余有少许蓝色者也应算其褪色完毕。
3.严格记录褪色时间。
4、溶液放冰箱中保存，一周内用完5、灭菌的吸管，灭菌试管E50操作注意：1、试剂保存：4-8度，不可冻，温度不可长时间高于此温度2、操作注意：不可用手接触针头；密封严密，不可进水；牛体样需冷却到10度以下方可进行化验采样后需摇匀方可进行吸样取样量：取样枪有两个档位，深档位吸取，浅档位挤样，一般情况2滴到3滴3、时间及判定：2小时40分钟（从水浴锅培养温度为64-66度，开始计时），如下方黄色或绿色，但仍有蓝色或紫色，继续培养20分钟，如仍有蓝色或紫色，判为阳性。
使用ECLIPSE 50试剂盒检测牛奶中抗生素残留
使用ECLIPSE 50试剂盒检测牛奶中抗生素残留
王桂杰;韩洪莉
【期刊名称】《黑龙江畜牧兽医》
【年(卷),期】2009()8
【总页数】1页(P71-71)
【关键词】抗生素残留;试剂盒;牛奶;检测;琼脂培养基;pH指示剂;β-内酰胺类;大环内酯类
【作者】王桂杰;韩洪莉
【作者单位】海林农场畜牧科;黑龙江省福康生物科技有限公司
【正文语种】中文
【中图分类】S859.84;TS252.1
【相关文献】
1.戴尔沃牛奶广谱抗生素检测试剂盒在生鲜乳抗生素残留检测中的应用 [J], 崔晨光
2.ECLIPSE50试剂盒法与TTC法检测乳中抗生素残留的比较 [J], 武波波;李文献;李梅芝;王少武;刘燕;李红
3.ECLIPSE 50试剂盒检测生鲜牛乳中抗生素残留结果误判的研究 [J], 张建宇;黄义彬
4.牛奶中β-内酰胺类抗生素残留检测试剂盒的研制 [J], 刘冬梅;郭均;梁洁英;吴晖;余以刚;李晓凤;唐语谦
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牛奶抗生素检测试剂E50说明书
一，检测原理
本试剂为微生物抑制法检测牛奶中抗生素含量。
每个微孔中散播了芽孢杆菌孢子，含有琼脂培养基和pH指示剂。
当在65度下培养时，微孔内的芽孢发育生长，该细菌生长时产酸，从而降低了培养基的pH值。
pH的改变使指示剂由原来的蓝紫色变成黄绿色。
若加入的牛奶中含有抗生素，抗生素会抑制微生物的生长，从而不会产酸，指示剂不会变色。
试剂将保持原来的蓝紫色。
最终依据颜色的变化，可以判定牛奶样品中是否含有抗生素。
二，操作过程
1，确定要检测的样品数，用小刀沿微孔条间缝隙划开金属薄膜。
取出对应数量的微孔。
准备进行实验。
注意防止划破剩余的微孔板上的金属薄膜。
2，从塑料框上取下要进行检测的微孔，放在一个空的塑料框上。
剩余的微孔板需立即放回塑料袋中，4-8℃下冷藏保存。
3，将要使用的微孔上的胶粘金属膜揭去，在每个微孔中加入50μl牛奶样品。
建议使用自动微量取样枪添加样品。
4，用试剂盒内的胶粘纸小心地密封微孔板(条)，将其垂直放入到已经预热到65℃的水浴锅或孵育器中。
必须确保微孔已经完全密封。
若在培养过程中有水渗入到微孔中，将会产生错误的检测结果。
5，培养时间参照试剂盒盖子上所标时间。
在实验时建议做好阴性和阳性的控制样。
若有阴性控制样，则以阴性控制样变为黄色的时间为准。
6，培炎结束后，取出微孔，从微孔侧面观察结果。
绿-黄色或者黄色表示样品中不含抗生素(阴性)，蓝-紫色表示样品中含有抗生素(阳性)。
绿-蓝色表示抗生素浓度接近试剂盒的检测限，此时建议重做检测
三，注意事项
1.我们推荐使用阴性控制样品(无抗奶)和阳性控制样品(含有较高浓度的抗生素如10mg/L青霉素-G的牛奶)来确定加热培养所需的最佳时间
2. 本试剂盒对抗生素和其他抗菌物质如清洁剂和消毒剂异常敏感。
必须防止样品被此类物质所污染。
3. 微孔板需密封在塑料袋中以防止微孔干结，并在4-8℃下冷藏存放
4.牛奶中少量的天然抑制剂不会影响到试剂盒的检测结果。
但初乳、哺乳期末期和乳腺炎牛奶中的抑制物质将会有所增加，此时检测结果将会受到影响。
5.如果要分析含有防腐剂的牛奶，培养时间需适当延长几分钟
6.正确的结果判读要看小孔的侧面。