乳酸菌的检测
乳酸菌检测方法_综述_
中图分类号 :R15 ; TS20116 文献标识码 : E 文章编号 :1004 - 8456 (2002) 01 - 0047 - 07
乳酸菌检测方法 (综述)
张一凡 冉 陆 罗雪云 (卫生部食品卫生监督检验所 北京 100021)
乳酸菌是一类能利用可发酵糖产生大量乳酸的 细菌总称 ,这个名称就细菌分类学而言是一非正式 、 非规范的名称 。目前在自然界已发现的这类菌在细 菌分类学上划分出至少 23 个属 ,涉及到的有关属则 更多 ,包括乳杆菌属 、双歧杆菌属 、链球菌属 、肠球菌 属等 。而相当多的乳酸菌对人 、畜的健康起着有益 的作用 。近年来 ,随着微生态学研究的不断发展 ,越 来越多的实验证明有益细菌对人体健康的重要作 用 ,微生态制剂也因此应运而生 。目前我国微生态 制剂利用的益生菌近 10 种 ,其中除了乳杆菌和乳酸 链球菌有国家的标准检验方法外 ,大部分菌种均无 统一的标准方法 ,难于对该类产品进行质量控制 ,保 证其安全性 。故急需建立规范的标准检验方法 ,以 便对微生态制剂进行监督管理 ,保障其功能 、安全性 及质量 ,以保护消费者的健康和利益 。本文即对目 前国内外用于乳酸菌检测的方法做一综述 。
离子色谱法和气相色谱法从分析厌氧菌的代谢 产物结果来看 ,在总体上无明显差异 ,但离子色谱法 具有以下优点 :[4]
酸乳中乳酸菌的测定
实验乳及乳制品中乳酸菌的测定一、目的1、解酸乳中乳酸菌分离原理2、学习并掌握酸乳中乳酸菌菌数的检测方法。
二、原理活性酸奶需要控制各种乳酸菌的比例，有些国家将乳酸菌的活菌数含量作为区分产品品种和质量的依据。
由于乳酸菌对营养有复杂的要求，生长需要碳水化合物、氨基酸、肽类、脂肪酸、酯类、核酸衍生物、维生素和矿物质等，一般的肉汤培养基难以满足其要求。
测定乳酸菌时必须尽量将试样中所有活的乳酸菌检测出来。
要提高检出率，关键是选用特定良好的培养基。
采用稀释平板菌落计数法，检测酸奶中的各种乳酸菌可获得满意的结果。
三、材料1、培养基改良MC培养基（MRS培养基，改良CHALMERS培养基，M17培养基）。
2、仪器和器具无菌移液管（25ml,1ml），无菌水（225ml带玻璃珠三角瓶，9ml试管），无菌培养皿，旋涡均匀器，恒温培养箱。
四、流程酸奶→稀释→制平板→培养→检查计数五、方法1、样品稀释先将酸奶样品搅拌均匀，用无菌移液管吸取样品25ml加入盛有225ml无菌水的三角瓶中，在旋涡均匀器上充分振摇，务必使样品均匀分散，即为10-1的样品稀释液，然后根据对样品含菌量的估计，将样品稀释至适当的稀释度。
2、制平板选用2~3个适合的稀释度，培养皿贴上相应的标签，分别吸取不同稀释度的稀释液1ml 置于平皿内，每个稀释度作2个重复。
然后用溶化冷却至45℃左右的MC培养基倒平皿，迅速转动平皿使之混合均匀，冷却成平板。
3、培养和计数将平皿倒置于37℃恒温箱内培养72h，观察长出的细小菌落，计菌落数目，按常规方法选择30~300个菌落平皿进行计算。
六、结果1、指示剂显色反应乳酸菌的菌落很小，1~3mm，圆形隆起，表面光滑或稍粗糙，呈乳白色、灰白色或暗黄色。
由于产酸菌落周围能使CaCO3产生溶解圈，酸碱指示剂呈酸性显色反应。
2、镜检形态必要时，可挑取不同形态菌落制片镜检确定是乳杆菌或乳链球菌。
保加利亚乳杆菌呈杆状，成单杆、或双杆菌或长丝状。
酸奶中乳酸菌的微生物学检验与酸奶的制作_2
酸奶中乳酸菌的检测与酸奶的制作综合性实验报告组员：摘要：以奶粉为原料，蒙牛酸奶为接种剂自制酸奶并进行感官评价。
用稀释倒平皿法和划线分离法分离出蒙牛酸奶中的乳酸菌。
分别用改良MC培养基和改良TJA培养基培养一段时间后观察菌落形态并进行菌落计数。
再挑取少许不同培养基上的菌落用革兰氏染色法染色，观察乳酸菌的个体形态。
关键词：酸奶制作、乳酸菌菌落形态及总数、MC培养基、TJA培养基、革兰氏染色、乳酸菌个体形态1 前言酸奶是以新鲜的牛奶为原料经过巴氏杀菌后再向牛奶中添加有益菌（发酵剂），经发醇后，再冷却灌装的一种牛奶制品。
按是否加糖，酸奶可分为淡酸奶和加糖酸奶两种，我国常见的酸奶制品是加糖酸奶，即在制作酸奶的原料乳中加入一定量的白糖进行发酵得到的酸奶产品。
酸奶营养丰富，其蛋白质和钙质较鲜乳更易消化吸收，抑制腐败细菌的繁殖，降低肠道内毒素浓度。
酸奶内含乳酸菌并在发酵过程中产生乳酸及族维生素等,能增强消化，促进肠道蠕动和机体物质的代谢，提高人的免疫力, 长期饮用即可保证钙质的需求, 又可健肠胃, 是一种对人体肠胃非常有益的保健食品。
2 材料与方法2.1 仪器与器材温箱：47℃、冰箱： 4℃、电磁炉、锅吸管：容量为1，10和25mL、广口瓶或三角瓶：容量为500mL、平皿：直径为9cm、试管（带试管塞）：18×180mm、显微镜、带玻璃珠的三角瓶、移液枪、移液管、恒温箱、电磁炉、平底锅、2个奶瓶、保鲜膜、接种环、酒精灯。
2.2 培养基和试剂培养基：改良MC 培养基,改良TJA培养基。
材料：番茄汁、革兰氏染色液、蒙牛酸奶、脱脂奶粉、白砂糖。
2.3 方法2.3.1 无菌水和培养基的制备(1)无菌水：将20支试管分别用移液枪注入9ml的自来水，塞上试管塞，分10支捆成一扎并用牛皮纸包好。
将2个三角瓶分别注入150ml的自来水，塞上瓶塞，分别用牛皮纸封好。
将上述的试管以及三角瓶一起高压蒸汽灭菌。
(2)培养基：MC培养基:称取16g改良MC培养基粉末加200mL水置于电炉上小火加热溶解；TJA培养基:称取12g改良TJA培养基粉末加10mL茄汁和200mL水置于电炉上小火加热溶解，分别制得。
酸奶乳酸菌及其发酵活力测定实验结论
酸奶乳酸菌及其发酵活力测定实验结论
在测定不同品牌酸奶中的乳酸菌数量及其发酵活力的实验中,我们得出以下结论：
1. 不同品牌酸奶中乳酸菌的种类和数量存在差异,且有些品牌标注的乳酸菌种类与实际检测结果不一致。
2. 发酵时间、发酵温度和发酵条件对乳酸菌数量的影响不同,不同品牌酸奶发酵后乳酸菌数量存在差异。
3. 通过比较同品牌不同批次酸奶的乳酸菌数量和发酵活力,发现同品牌酸奶之间存在一定的差异,可能是由于生产工艺、原料来源等因素导致的。
综合以上结论,建议消费者在购买酸奶时,应注重产品的乳酸菌种类和数量,选择口感好、营养丰富、质量可靠的品牌和产品。
同时应在规定保质期内饮用,且注意保存条件,以保证酸奶的营养成分和品质。
乳酸菌菌株鉴定
分子生物学实验作业——用分子生物学方法鉴定菌株专业：生物化工姓名：王晓娜学号：1043111039鉴定一株乳酸菌菌株一、实验目的和方法采用RAPD指纹图谱方法鉴定一株乳酸菌菌株二、实验材料2.1 菌株实验给定的菌株2.2 试剂Taq DNA聚合酶、DNA电泳buffer、引物、dNTP、模板DNA2.3 仪器台式离心机，PCR仪，稳压稳流电泳仪，紫外检测仪，凝胶成像系统三、实验步骤3.1 制备细菌DNA样品收集菌悬液于1.5mlepp管中，5 000r/min离心5min。
去上清，在沉淀中加入567微升 TE缓冲液、30微升10％的SDS、5微升10mg/ml 的溶菌酶后，37℃水浴3h。
再加入3微升20mg/ml的蛋白酶K，37℃水浴lh。
加入100微升5mol/l NaCl，80微升CTAB/NaCl溶液，65℃水浴10min。
加入等体积的氯仿／异戊醇，12 000r/min离心5min。
取上清，加入等体积酚／氯仿／异戊醇，12 000r／min离心5min。
取上清，加入2倍体积的冰乙醇，12 000r/min离心10rnin，沉降DNA。
去上清，将沉淀吹干，用100微升TE缓冲液(pH8．0)溶解。
取l微升 DNA样品，稀释200倍后，紫外测定0D260和0D280。
选取浓度1．8≤0D26l／0D280≤2．0的样品。
然后，将DNA浓度稀释至48ng/µl作为模板备用。
3.2 PCR反应扩增体积为25µl (含TapDNA聚合酶2u，10×PCR reaction buffer 2µl，dNTP 2µl，引物lµl，模板DNA 1µl)。
扩增程序为：94℃预变性5min，94℃变性1min，38℃复性lmin，72℃延伸2min，进行40个循环后72℃延伸10min。
取12µl扩增产物进行电泳，电压为100V，琼脂糖凝胶为l％(0．5×TBE)电泳30—40min，用凝胶成像系统观察电泳结果并拍照。
乳酸菌的分离与筛选具体实验流程
乳酸菌的分离与筛选具体实验流程1. 引言1.1 背景介绍乳酸菌是一类广泛存在于自然界中的细菌，它们能够以乳酸为代谢产物进行无氧发酵，并且在食品工业、农业和医学领域具有重要的应用价值。
乳酸菌不仅能够促进食品品质的改善和保鲜，还对人体健康具有积极影响。
然而，目前市面上存在许多商业化的乳酸菌制剂，其有效成分及效果并不尽相同。
因此，研究和筛选出优质活性的乳酸菌种类，具有重要意义和广阔前景。
1.2 研究意义本研究旨在通过分离与筛选方法得到高活性的乳酸菌。
通过该研究可以加深我们对乳酸菌及其作用机制的理解，并为特定领域如食品工业、农业等提供先进的技术支持和解决方案。
此外，筛选出具有优良特性的乳酸菌株也将为开发新型功能性食品、生物农药等领域的产品提供重要支持。
因此，本研究对于推动食品工业、农业发展具有积极意义。
1.3 实验目的本实验主要目的如下：- 收集和处理样品：收集富含乳酸菌的样品，并经过适当处理以提高分离效果。
- 选择与制备分离培养基：根据乳酸菌的特性选择适合的培养基并进行制备。
- 设定分离培养条件：通过调控温度、pH值等参数，确定适宜的乳酸菌分离培养条件。
- 鉴定活性乳酸菌指标：确定评价乳酸菌活性和质量的指标，并进行相关试验和检测。
- 设计与实施筛选试验：根据所选指标设计筛选试验，并在实验中采用相应方法进行实施。
- 可行性评估与结果分析：对筛选试验结果进行评估和分析，并总结可行性及相关优化建议。
通过以上实验流程，我们旨在深入了解乳酸菌的特点及其在不同领域中应用潜力，并为进一步研究和开发具有市场竞争力的乳酸菌产品提供理论和实践基础。
2. 乳酸菌的分离方法2.1 样品收集与处理在乳酸菌的分离研究中，样品的选择和处理十分重要。
我们可以选择不同来源的样品，如发酵食品、生态环境等。
收集样品后，需要进行适当的处理以消除非目标微生物对于乳酸菌生长和筛选的干扰。
常见的样品处理方法包括冷藏、过滤、稀释等。
2.2 分离培养基选择与制备为了促进乳酸菌的分离和生长，在实验中需要选择适宜的分离培养基。
乳酸菌检测方法
一、乳酸菌检测方法植物乳杆菌的检验1原理植物乳杆菌能在相应的厌氧培养条件下，于MRS培养基表面生长成白色、细密、圆形光滑突起的菌落，根据长出的菌落数和稀释倍数，计算出活菌数。
2仪器与试药2.1 仪器超净工作台、高压蒸汽灭菌器、恒温干燥箱、电冰箱、恒温培养箱（60℃±1℃）、恒温水浴锅、显微镜（10x—100x）、架盘天平（0—500g，精确至0.5g）、250ml锥形瓶、250ml 盐水瓶、灭菌吸管：1ml(具0.01ml刻度）、10ml(具0.1ml刻度）、灭菌平皿（直径90mm）、灭菌试管（15mm×160mm）、灭菌L型玻璃棒等。
2.2 试药酪蛋白胨、牛肉浸膏、酵母提取物、琼脂等均为生化试剂；无水乙酸钠、柠檬酸三胺、硫酸镁、硫酸锰、葡萄糖、磷酸氢二钾、碳酸钙、吐温-80、氯化钠等均为分析纯；水为双蒸馏水，其他化学试剂均为分析纯。
2.3 MRS琼脂培养基的组成与制备2.3.1培养基的组成酪蛋白胨10g、牛肉浸膏10g、酵母提取物5g、葡萄糖20g、无水乙酸钠5g、柠檬酸三胺3g、硫酸镁0.5g、硫酸锰0.2g、磷酸氢二钾2.0g、碳酸钙20g、吐温-801ml、琼脂15g、蒸馏水1000ml。
2.3.2培养基制备将上述的各组分在80～90℃加热使溶解，校正pH6.2，加蒸馏水至1000ml中，摇匀，分装于盐水瓶，每瓶100ml。
在121℃高压灭菌20分钟，冷却后备用。
2.4营养琼脂平板的制备取冷至45℃左右的MCA琼脂培养基，在无菌的条件下倒入无菌的培养皿中，每平皿各约15ml，待冷却凝固后，备用。
2.5无菌生理盐水的制备称取氯化钠9.0g，用蒸馏水溶解并定容于1000ml量瓶中，摇匀，分装于250ml三角瓶中，每瓶装90ml. 在121℃高压灭菌20分钟，冷却后备用。
3供试品溶液的制备以无菌操作法取检品10.0g，加入盛有90ml无菌生理盐的三角瓶中，充分振荡10分钟，制成1﹕10样品悬液。
酸奶中乳酸菌的分离检测及纯化ppt课件
【实验材料、仪器与试剂】
实验材料：市售乳酸饮料或酸奶。 实验仪器：保温箱、高压蒸汽灭菌锅、水浴锅、 培养皿、试管、涂布器、酒精灯等。 实验试剂：脱脂乳试管、脱脂奶粉、5%蔗糖水、 1.6%溴甲酚紫、95%乙醇溶液、酵母膏、 琼脂、无菌水
【实验步骤】
1、1.6%溴钾酚紫牛乳培养基的制备
2、脱脂乳试管的制备
3、酸奶中乳酸菌的分离 4、乳酸菌的检测、纯化培养
（1）、1.6%溴甲酚紫牛乳培养基的制备
配料： （A）液：脱脂奶粉100g，水500ml，加入1.6%溴甲酚紫、乙醇溶液1ml， 80℃灭菌20min。 （B）液：酵母膏10g，水500ml，琼脂20g ，pH6.8， 121℃湿热灭菌20min。 操作： （1）、按照配方正确称取所需药品放于烧杯中，在搪瓷杯中加入所需水 量，玻棒搅匀，加热溶解，用1N NaOH或1N HCl调pH，加琼脂溶化，加 热过程要不断搅拌，可适当补水。琼脂完全溶解后 倒入250mL的锥形 瓶中，贴上标签，在高压锅中灭菌20min。 （2）、灭好菌的A液和B液趁热充分混合，并在酒精灯的附近趁热倒平板 。
10ml 1.0ml 1.0ml 1.0ml 1.0ml 1.0ml 1.0ml
10-1
花园酸奶 90ml无菌水 9ml无菌水 9ml无菌水 9ml无菌水 9ml无菌水 9ml无菌水 9ml无菌水
10-2
10-3
10-4
10-5
10-6
10-7
另留一管不稀释留作对照（CK）
（2）、分离方法
A．平板划线 接种环挑取10-1菌液，按无菌操作对标有”10-1”的3个平板进 行划操作；划线完毕后，盖上皿盖，倒置放在40℃恒温培养箱中培 养48小时。
B．平板涂布
发酵乳酸中乳酸菌数的检测
稀释液移入平皿后，将冷却至 48℃的MRS琼脂培养基倾注入 平皿约15mL，转动平皿使混合 均匀。
述 ）
ΣC ——平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和； n1——第一稀释度（低稀释倍数）平板个数； n2——第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；
d——稀释因子（第一稀释度）。
N=
2.结果表述
技 能 点
（3）若所有稀释度的平板上菌落数均大于300CFU，则对稀释度最高的平板进行计 数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。
）
（3）按上述操作程序，制备10倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1
支1mL无菌吸管。
2.乳酸菌计数培养条件的选择及结果说明见下表
技
样品中所包括乳酸菌菌属
培养条件的选择及结果说明
能 点
仅包括乳杆菌属
按照d操作。结果即为乳杆菌属总数
（
仅包括嗜热链球菌
按照c操作。结果即为嗜热链球菌总数
乳 酸
（7）无菌锥形瓶：500mL、250mL。
2．培养基和试剂
（1）生理盐水
实
（2）MRS（Man Rogosa Sharpe）培养基及莫匹罗星锂盐和半胱氨酸盐酸盐改良
验
MRS培养基
准
（3）MC培养基（Modified Chalmers培养基）
备
二、检测步骤
1.制备10倍稀释系列样品匀液
技
能 点
（1）以无菌吸管吸取25mL样品至盛有225mL无菌稀释液（蒸馏水或生理盐水或磷
乳酸菌的鉴定
乳酸菌的鉴定吲哚试验1）.试管标记：取装有蛋白胨水培养基的试管2支，分别标记乳酸菌和空白对照。
2）.接种培养：以无菌操作分别接种少量菌苔到标记乳酸菌的试管中，标记有空白对照的不接种，置37摄氏度恒温箱中培养24~48小时。
3）.观察记录：在培养基中加入乙醚1~2 ml ,经充分振荡，使吲哚萃取至乙醚中，静置片刻后乙醚层浮于培养液的上面，此时沿管壁缓慢加入5~10滴吲哚试剂，如有吲哚存在，乙醚层呈玫瑰色，此为吲哚试验阳性反应，否则为阴性反应。
糖发酵试验1）.试管标记：取分别装有葡萄糖，蔗糖发酵培养液试管各2支，每种糖发酵试管中分别标记乳酸菌和空白对照。
2）.接种培养：以无菌操作分别接种少量菌苔至以上各相应试管中，每种糖发酵培养液的空白对照均不接菌。
将装有培养液的杜氏小管倒置试管中，置37摄氏度恒温培养箱中培养24小时，观察结果。
3）.观察记录：与对照管比较，若接种培养液保持原由颜色，其反映结果为阴性；如果培养液呈黄色，反映结果为阳性。
培养液中的杜氏小管内有气泡为阳性反应，杜氏小管内没有气泡为阴性反应。
1.2.3 乳酸的检测选用已经分离的菌种做小型发酵实验，取发酵液的上清液约10 ml于试管中，加入10%硫酸1 ml ,再加2%高锰酸钾 1 ml ,此时乳酸转化为乙醛，把事先在含氨的硝酸银溶液中侵泡的滤纸条搭在试管口中，微火加热试管至沸，观察滤纸变化。
1.结果和分析2.1 乳酸菌的分离提纯在平板上出现了圆形稍扁平的黄色菌落，周围培养基变为黄色，初步定为乳酸菌⑴，取出少量在显微镜下观察到了链球状和杆状两种形状（如图一2.2乳酸菌的鉴定该菌种的菌落为圆形稍扁平的黄色菌落，有杆状和链球状两种形状。
在吲哚试验中，加入菌种的试管无任何变化，证明为阴性反应（如图二）。
说明该菌不具有分解色氨酸产生吲哚的能力。
也说明此菌种不是大肠杆菌，因为大肠杆菌的吲哚试验证明为阳性。
在糖发酵试验中，在加入葡萄糖的发酵培养液中加入菌种后，培养液变为黄色，反应结果为阳性，且杜氏小管内无气泡（如图三）；加入蔗糖的发酵培养液中加入菌种后的反应结果也为阳性且杜氏小管内无气泡（如图四）。
乳酸杆菌实验报告
一、实验目的1. 掌握乳酸杆菌的分离与纯化方法。
2. 了解乳酸杆菌的形态特征和生理特性。
3. 鉴定乳酸杆菌的种类。
二、实验原理乳酸杆菌是一种革兰氏阳性菌，属于乳酸菌，广泛存在于自然界中，如土壤、水体、植物和动物体内。
在人体肠道中，乳酸杆菌具有重要的生理功能，如调节肠道菌群平衡、增强机体免疫力、降低胆固醇、促进消化等。
本实验通过分离纯化乳酸杆菌，观察其形态特征和生理特性，并对其进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 土壤样品- MRS培养基- 琼脂糖- 酵母提取物- 葡萄糖- 乳糖- 麦芽糖- 蛋白胨- 氯化钠- 酚红指示剂- pH试纸- 显微镜- 高压蒸汽灭菌器- 灭菌平板计数器2. 实验仪器：- 灭菌锅- 灭菌培养箱- 灭菌移液器- 灭菌镊子- 灭菌培养皿- 灭菌试管- 灭菌剪刀- 灭菌烧杯四、实验方法1. 土壤样品的处理- 取一定量的土壤样品，加入适量的无菌水，充分振荡后静置。
- 取上层悬液作为实验样品。
2. 乳酸杆菌的分离与纯化- 将MRS培养基在高压蒸汽灭菌器中灭菌后，倒入培养皿中制成平板。
- 将处理好的土壤样品悬液用无菌移液器取适量，涂布在MRS平板上。
- 将培养皿放入培养箱中，在适宜的温度下培养。
3. 乳酸杆菌的形态特征观察- 取分离得到的单菌落，在显微镜下观察其形态。
4. 乳酸杆菌的生理特性检测- 将分离得到的单菌落接种到含有不同糖类的培养基中，观察其在不同糖类上的生长情况。
- 用pH试纸检测培养基的酸碱度变化。
5. 乳酸杆菌的鉴定- 根据乳酸杆菌的形态特征、生理特性和生化反应，将其与已知菌种进行比对，确定其种类。
五、实验结果与分析1. 乳酸杆菌的分离与纯化- 成功分离得到多个单菌落，表明土壤样品中存在乳酸杆菌。
2. 乳酸杆菌的形态特征观察- 分离得到的乳酸杆菌为杆状，大小约为0.5～1.0μm×1.0～2.0μm。
3. 乳酸杆菌的生理特性检测- 分离得到的乳酸杆菌在葡萄糖、乳糖、麦芽糖培养基上均能生长，表明其可以利用这些糖类作为碳源。
乳酸菌的耐药检测方案
试验方案：一、样品的取样在青岛胶州市的正规超市购买5种酸奶，进行实验时均处于产品保质期内。
对这几种样品分别进行取样。
二、样品的稀释在无菌工作台上用灭菌过的移液管直接从酸奶样品中吸取1mL装入9ml无菌生理盐水试管中，快速震荡试管，，使其呈1:10的均匀稀释液，同法继续稀释成10-2、10-3、10-4、10-5、10-6稀释度，选取合适的三个稀释度（如：10-1、10-2、10-3）按此操作依次制备成A1-A2-A3、B1-B2-B3、C1-C2-C3、D1-D2-D3、E1-E2-E3的样品稀释液。
三、样品的分离鉴定1、分别用移液枪吸取A-E的样品稀释液250μL置于MRS固体培养基（MRS培养基成分：蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母粉5g，K2HPO4 2g，柠檬酸二铵2g，乙酸钠5g，葡萄糖20g，吐温80 1mL，MgSO4·7H2O 0.58g，MnSO4·4H2O 0.25g，（琼脂15～20g），蒸馏水1000mL）平板上，涂布均匀后置于37℃培养箱培养24h，观察培养结果及细菌的生长情况。
用接种环在各平板上挑取出现不同菌落形态大小的单一黄色菌落，分别在平板上划线，37℃倒置培养24h。
2、根据菌落的大小、颜色、光泽和透明程度等，从培养24h的每个平板中选取单菌落，在MRS固体平板上反复划线纯化，反复进行此操作步骤以使最终培养出的每个菌落都为单一菌种菌落，37℃培养24h。
然后依次进行菌体形态观察、过氧化氢酶试验、淀粉水解试验、明胶液化试验、乙酰甲基甲醇试验、产气试验、碳水化合物发酵试验、乳酸定性检测。
（1）菌体形态的观察将划线平板上培养了24h的各菌株在载玻片上涂片及固定后，进行革兰氏染色。
先用草酸铵结晶紫初染色，1分钟后水洗载玻片，然后碘液媒染1分钟，水洗、吸干。
95%乙醇脱色直到滴加的酒精不出现紫色，接着水洗、吸干。
最后用0.5%的番红染色液再染色10-30秒，水洗，干燥，置于光学显微镜下观察其形态特点及染色结果。
乳酸菌检测报告
乳酸菌检测报告引言乳酸菌是一类广泛存在于自然界和人体内的细菌，以革兰氏阳性菌为主，能够发酵碳水化合物并产生乳酸。
乳酸菌具有许多益生作用，如改善肠道菌群平衡、增强免疫力、促进食物消化等。
因此，对乳酸菌进行检测具有非常重要的意义。
本报告旨在介绍乳酸菌检测的方法和结果。
检测方法样品收集乳酸菌检测的样品可以包括食品、饮料和生物样本等。
收集样品时，首先需要保持卫生条件，避免外界环境的污染。
然后，选择合适的容器收集样品，并尽快送至实验室进行分析。
菌落计数菌落计数是一种常用的乳酸菌检测方法。
该方法通过将合适稀释的样品涂布在琼脂平板上，经培养后根据菌落的数量进行计数。
具体步骤如下：1.将样品进行系列稀释，以获得合适的菌落计数范围。
2.取适量的稀释液，均匀涂布在琼脂平板上。
3.将平板倒置放置在恒温培养箱中，通常在30-37摄氏度下培养24-48小时。
4.检查平板上的菌落数量，并根据菌落的形态和颜色等特征进行初步鉴别。
5.计算菌落计数值，并根据所在单位面积的菌落数量转换为CFU/mL。
PCR检测PCR（聚合酶链式反应）是一种基因检测技术，可以通过扩增目标基因区域来间接检测乳酸菌。
该方法适用于检测数量较少的乳酸菌，并可以对乳酸菌的种类进行鉴定。
具体步骤如下：1.收集样品，并进行细菌的提取。
可以使用商用的细菌提取试剂盒，或者自行制备细菌提取缓冲液。
2.通过PCR扩增目标基因区域。
根据乳酸菌的保守序列设计引物，将待检样品的DNA与引物进行反应，产生特定大小的DNA片段。
3.将PCR产物进行电泳分析。
将PCR产物与DNA标记物一起加载到琼脂糖凝胶上进行电泳分离，根据标记物的迁移情况判断是否存在乳酸菌DNA片段。
4.根据PCR产物的大小和电泳图谱进行结果解读。
与已知的乳酸菌DNA片段进行比对，可以确定乳酸菌的种类和数量。
检测结果菌落计数根据菌落计数的结果，我们发现样品中乳酸菌的数量为XXXX CFU/mL。
通过初步鉴别，确定所检测的乳酸菌为XXXX属。
乳酸菌的培养检测方案
品质管理检测项目细菌形态学分类一乳酸杆菌乳酸杆菌的基本属性：乳酸菌为一群可发酵碳水化合物以获取能量，并生成大量乳酸的一类细菌的总称。
利用发酵技术保藏食品，最典型的是通过乳酸菌的发酵。
这在发酵乳工业中已经得到广泛的应用。
利用天然的或经筛选的乳酸菌发酵，已经生产出多种不同类型的发酵乳。
因而分离和鉴定乳酸菌对人类的生产和生活都具有非常重要的意义。
无芽孢，革兰氏染色呈阳性。
微好氧，厌氧发酵，最适温度30~40摄氏度，最适PH值为5.5~6.2，在微酸环境下可以生长，中性或者偏碱性环境中则生长速率下降。
在固体培养基上培养时，通常厌氧条件或者减少氧气压力和充有体积分数为5%~10%的CO2可以增加其表面生长物，有些菌株在分离时就是厌氧的。
（一）实验仪器和试剂：实验仪器：现有的仪器：欠缺的仪器：培养基和试剂：①培养基：BCP培养基、MRS培养基和SL培养基BCP培养基：酵母膏2 5g，蛋白胨5g，葡萄糖5g，溴甲酚紫0.04g，琼脂15g，蒸馏水lO00ml，pH7 0；MRS培养基（可以培养包括双岐乳杆菌、嗜酸乳杆菌和干酪乳杆菌）：重量(g) 牛肉蛋白粉10 ，鱼肉汁10 ，酵母浸出汁粉5 ，葡萄糖20 ，醋酸钠5 ，柠檬酸二铵 2 ，吐温80 0.1 ，硫酸镁0.58 ，硫酸锰0.28 ，蒸溜水1 000ml ，备注：用高压锅在121℃灭菌15min，调节pH6.2～6.4 。
乳酸杆菌选择性琼脂SL：酪蛋白水解物10g；酵母提取物5g；柠檬酸二铵2g；乙酸钠（CH3COONa？3H2O）25g；MgSO4？7H2O 0.58g；琼脂15g；葡萄糖20g；吐温80 1.0ml；磷酸氢二钾6g；FeSO4？7H2O 0.03g；MnSO4？4H2O 0.15g。
以上用量为1000ml培养基的用量。
溶解琼脂在500ml的沸水中，溶解其他组分在500ml的水中，用冰醋酸调pH=5.4，并混合已融化的琼脂，进一步煮沸5分钟，倾倒平板或此热的培养基适量分装入灭菌的试管，这样无需进一步灭菌，避免重复融化和冷却。
乳酸菌检验的方法要点
乳酸菌检验的方法要点乳酸菌不是分类学上的名称，它是指一群能分解葡萄糖或乳糖产生乳糖产生乳酸、需氧和兼性厌氧、多数无动力、过氧化氢酶阴性、革兰氏阳性的无芽孢杆菌和球菌。
这类细菌在自然界分布广泛，可栖居在人和各种动物的口腔、肠道等器官内，在土壤、食品、饲料、水及一些临床标本中都有乳酸菌的存在。
乳酸菌在工业、农业和医药等与人类生活密切相关的领域应用价值很高，相当多的乳酸菌对人、畜的健康起着有益的作用，但个别菌种能对人畜致病，乳酸菌主要包括23个属的细菌。
乳酸菌的检测流程：1、乳酸菌悬液的制备：将待检测的样品，准确称取0.5克，量取99.5mL无菌生理盐水稀释，（此次稀释了200倍，即0.5克样品，稀释到了100克水溶液），再加入灭菌玻璃珠20～30粒于250mL三角瓶中，置于振荡器或摇床上剧烈摇晃30分钟以上，目的是将粘连在一起的乳酸菌细胞打散从而分散开来。
2、稀释到适当倍数：根据所待检测的样品可能的乳酸菌含量，进行适当的稀释操作，例如如果估计样品的含乳酸菌活菌数为200亿/克左右，则建议稀释2亿倍，这样将来在90mm平板上培养时会长出大约100个乳酸菌落，比较便于计数，总之控制平板培养皿上的乳酸菌落数量在30～300个的范围内，比较便于计数。
3、倒制平板即“接种”：倒制平板在超净工作台上进行，养殖户可使用一盏简单的酒精灯和一个干净的操作台就可操作。
即事先配制好并灭菌处理的检测用琼脂培养基，在水浴锅内保持50℃的温度，使琼脂培养基呈溶解状态，置于操作台旁边备用。
（养殖户可先不从压力锅中取出，在压力锅维持一定的温度，从而也不会凝固。
）取事先干热灭菌处理后的90mm培养皿（也叫平板）若干、1mL移液管若干，置于操作台上备用。
（养殖户的培养皿平板可在压力锅中进行蒸汽灭菌处理。
）在无菌条件下（打开超净工作台无菌风，或养殖户点上酒精灯），将稀释了2亿倍的乳酸菌液，用移液管移取1mL，于培养皿中，再在此培养皿中倒入前述保持溶解状态的检测培养基液15mL左右（倒培养基时，估计能覆盖满平皿的液体量即可），然后，盖好培养皿盖，轻轻转动平皿，原地转几圈，使培养基液与乳酸菌液混合均匀，等数分钟后，待培养基凝固后，可移入培养箱中进行培养；4、在培养箱中进行培养：将前面倒制好的平板倒转（即盖子在下面），放于培养箱中于33℃温度下培养2～3天，待培养皿平板中长出比较明显的带有透明圈的菌落时，即可进行计数得出检测结果。
乳酸菌生化鉴定 乳糖
乳酸菌生化鉴定乳糖
乳酸菌是一类广泛存在于自然界中的微生物，其在食品、医药、农业等领域中具有重要的应用价值。
其中，乳酸菌在食品行业中的应用尤为广泛，例如酸奶、酸乳、酸菜等产品中都含有乳酸菌。
在乳酸菌的生化鉴定中，乳糖是一个重要的指标。
乳糖是乳酸菌的一种碳源，其代谢过程可以产生乳酸等有机酸，同时也可以产生气体。
因此，乳糖的利用能力是乳酸菌生化鉴定的重要指标之一。
乳酸菌生化鉴定是通过检测乳酸菌在不同条件下的生理和代谢
特征，来确定其分类和鉴定。
在乳糖的生化鉴定中，通常采用的方法是培养乳酸菌在含有乳糖的培养基中，并观察其生长情况和代谢产物。
在培养基中，乳糖的浓度越高，乳酸菌的生长速度越慢，产生的酸度和气体也会相应减少。
同时，不同种类的乳酸菌对乳糖的利用能力也有所不同，有些乳酸菌可以完全利用乳糖，有些则只能部分利用或者完全不能利用。
因此，在乳酸菌的生化鉴定中，通过观察乳酸菌在不同浓度的乳糖培养基中的生长情况和代谢产物，可以初步确定乳酸菌的分类和鉴定。
同时，对于某些不同种类的乳酸菌，还需要结合其他指标进行综合鉴定，才能确定其确切的分类和鉴定。
- 1 -。
乳酸菌检验操作规程
乳酸菌检验操作规程1、感官性状：取本品适量，置于非太阳光直射条件下的明亮处，目视检测，应为白色至淡黄色粉状固体，无发霉、结块。
2、水分：精密称取本品5.0g，置于经105℃烘干至恒重的扁形称量瓶中，在105℃条件下干燥至恒重，计算减失重量的百分率，应≤8.0%。
3、粒度：称取供试品100g，置于40目标准筛中，手动振筛10分钟，称取筛上物质量，应能100%通过40目筛。
4、目标菌数：4.1、试剂和培养基4.1.1、稀释液：0.85%生理盐水经121℃高压灭菌30分钟；取0.85%灭菌生理盐水9ml，置于具塞离心管中，密封，经121℃高压灭菌30分钟。
4.1.2、MRS培养基：称取蛋白胨10.0g、牛肉膏5.0g、酵母粉4.0g、葡萄糖20.0g、吐温80-1.0ml、七水磷酸氢二钾2.0g、三水醋酸钠5.0g、柠檬酸三铵2.0g、七水硫酸镁0.2g、四水硫酸锰0.05g、琼脂粉15.0g，将除琼脂粉的上述各组分置于1000ml纯化水中，加热搅拌使溶解，调pH值为7.0±0.1，加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液2.0ml，摇匀，分装于预置琼脂粉的锥形瓶中，密封，经115℃高压灭菌30分钟，在无菌条件下注入灭菌后的平皿中，每个平皿约注入15ml培养基。
4.2、检测方法：在无菌条件下操作，固体中间产品取样10.0g，置于含90ml灭菌稀释液的锥形瓶中，其中置玻璃珠数颗，超声处理2分钟，振摇使样品完全分散于溶液中，即为1:10的稀释液；移液器或灭菌吸管吸取1:10稀释液1ml，置于含灭菌稀释剂9ml的离心管（或试管）中，密封，摇匀；按上述稀释次序递次稀释至适宜的稀释倍数；取2-3个适宜稀释倍数离心管，用移液器或灭菌吸管吸取0.1ml，接种至经37℃预培养24小时的MRS培养基平皿上，每个浓度接种两个以上平皿，使用灭菌后的L形涂布棒小心涂布接种液于培养基表面，涂布好的平皿盖好后室温静置15分钟，密封并倒置平皿于37±1℃培养箱中培养48小时观察。
酸奶发酵过程中乳酸菌菌株的筛选与鉴定
酸奶发酵过程中乳酸菌菌株的筛选与鉴定酸奶是一种由牛奶或者其他乳制品通过乳酸菌的发酵而制成的食品。
乳酸菌是酸奶发酵的关键因素，具有良好的保健效果和口感。
在酸奶制作过程中，乳酸菌菌株的筛选与鉴定是非常重要的步骤。
本文将介绍酸奶发酵过程中乳酸菌菌株的筛选与鉴定的方法和意义。
首先，乳酸菌菌株的筛选是为了选择出适合酸奶发酵的优质菌株。
在酸奶制作中，菌株的特性包括产酸能力、耐受性、生长速度和抗菌特性等多方面。
通过筛选过程，可以找到产酸量高、生长快速、对不良菌有抑制作用的优质菌株。
这些菌株可以在酸奶制作中快速发酵，产生出优质的酸奶。
乳酸菌菌株的筛选方法有很多种，常见的包括传统筛选法、分子筛选法和生理筛选法等。
传统筛选法是指利用一系列的生理、生化和形态特性对菌株进行初步筛选。
通过这种方法，可以初步判断菌株是否具有发酵酸奶的潜力。
分子筛选法则是通过利用分子生物学技术对乳酸菌菌株进行检测，例如PCR扩增、16S rRNA测序等。
这些方法可以对菌株的遗传信息进行分析，从而确定其种属和亲缘关系。
生理筛选法则是根据菌株在不同环境条件下的生长情况，筛选出适应性强、产酸能力高的菌株。
乳酸菌菌株的鉴定是为了确保酸奶发酵过程中使用的菌株的纯度和品质。
鉴定的目的是确定菌株的种属和亚种，以及其在酸奶制作中的适用性。
鉴定的方法多样化，常用的有生化鉴定法、微生物学鉴定法和分子生物学鉴定法等。
生化鉴定法是利用菌株在特定培养基和条件下的代谢特征进行分析，通过菌株对不同物质的反应情况来确定其种属。
微生物学鉴定法则是通过观察菌株的细胞形态、培养特性等进行判断。
分子生物学鉴定法则是通过测序菌株的特定基因序列，例如16S rRNA，来确定菌株的种属和亲缘关系。
乳酸菌菌株的筛选与鉴定在酸奶发酵过程中具有重要的意义。
通过合适的筛选和鉴定方法，可以保证酸奶发酵的质量和稳定性。
优质的菌株不仅可以提高酸奶的口感和品质，还具有益生菌的功能，对消化系统和免疫系统有益。
乳酸菌镜检方法及显微镜使用方法
乳酸菌镜检方法及显微镜使用方法-CAL-FENGHAL-(YICAI)-Company One 1乳酸菌精简方法及显微镜使用方法第一部分：乳酸菌镜检可以采用革兰氏染色方法。
第二部分：使用显微镜的油镜进行镜检, 下而是具体的染色方法和镜检方法，请参考。
第一部分=乳酸菌革兰氏染色方法1目的在乳酸菌发放之前，利用标准的革兰氏染色法对即将发放的乳酸菌悬液或乳酸菌样品进行检测，观察乳酸菌乳酸菌在显微镜下的形态。
2原理通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌山于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在墜内，使其仍呈紫色：而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。
3实验用品准备:灭菌玻片、lO-lOOul移液器、lO-lOOul灭菌移液吸头、lOOul- lOOOul移液器、lOOul-lOOOul移液吸头、接种环、酒精灯、打火机、革兰氏染色液、吸水纸、显微镜、香柏油、擦镜纸、计时器4操作:1涂片：取灭过菌的载玻片于实验台上，用移液枪吸取lOul待检样品滴在载玻片的中央，用烧红冷却后的接种环将液滴涂布成一均匀的薄层，涂布面不宜过大。
2干燥：将标本面向上，手持载玻片一端的两侧，小心地在酒精灯上高处微微加热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰或加热时间过长，以防标本烤枯而变形。
约需时20-30S,随即水洗。
在涂片薄膜上滴加沙黄染液「2滴，使染色液覆盖涂片，染色约 Imirio10水洗：斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。
11干燥、观察：用吸水纸吸掉水滴，待标本片干后置显微镜下，用低倍镜观 察，发现U的物后滴一滴浸油在玻片上，用油镜观察细菌的形态 及颜色，紫色的是革兰氏阳性菌，红色的是革兰氏阴性菌。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
操作步骤
相关标准
注意事项
实验原理
试验流程
操作步骤相关标准注 Nhomakorabea事项实验原理
试验流程
10-4 10-5 10-6
稀释
选择稀释度
倒平板 涂布 培养基
乳酸菌(稀释度X2) 双歧杆菌(稀释度X2) 嗜热链球菌(稀释度X2)
操作步骤
相关标准
注意事项
乳酸 菌总数
阳性对照组和空白试验
观察计数 双歧 杆菌数 嗜热链 球菌数
1.形态特征
乳酸链球菌族，菌体球状，通常成对或成链。 乳酸杆菌族，菌体杆状，单个或成链，有时成丝状、产生假分枝。
2.生活习性
繁殖：在固体培养基上菌落较小，生长缓慢。在液体发酵培养基内可以很快 地生长，离心洗涤可以获得纯度较高的菌体且兼具需氧和厌氧的性能。 运动：大多数不运动，少数以周毛运动。 活性：普通的乳酸菌，活力极弱，它们只能在相对受限制的环境中存活，一 旦脱离这些环境，其自身也会灭亡。只有经过特殊工艺处理的乳酸菌才能到达肠 道。进入肠内的乳酸菌，必须具备数量多、活力强，才能发挥其生物功效。
关于乳酸菌的检测
实验器材 1.冰箱 电子天平 恒温培养箱 恒温干燥箱 恒温水溶锅 锥 形瓶 灭菌吸管 灭菌剪刀 2改良TJA培养箱或改良MC培养箱；生理盐水
实验原理
试验流程
乳酸菌是一类可发酵糖 主要产生大量乳酸的细菌的通称 。本试验中乳酸主要为乳杆菌属 (Lactobacillus)、双歧杆菌 (Bifidobacterium)和链球菌属 (Streptococcus)。
乳杆菌 数
实验原理
试验流程
GB 16321-2003
指标 项目
操作步骤
相关标准
注意事项
未杀菌乳酸 杀菌乳酸菌 菌饮料 饮料
有活菌检出
乳酸菌、 (cfu/ml)≥
1X106
-
实验原理
试验流程
注意倒培养基时要适量，避免因 培养基不够影响实验。 稀释转移好后要震荡均匀。 从样品稀释到平板涂布要求在 15min内完成。 注意1mL移液管的使用,不要交叉 污染。
操作步骤
相关标准
注意事项
THE END 谢谢
单击此处添加标题
3.生理功能
1、防治有色人种普遍患有的乳糖不耐症（喝鲜奶时出现的腹胀、腹泻等症状）。 2、促进蛋白质、单糖及钙、镁等营养物质的吸收，产生维生素B族等大量有益物质。 3、使肠道菌群的构成发生有益变化，改善人体胃肠道功能，恢复人体肠道内菌群平衡，形
成抗菌生物屏障，维护人体健康。
4、抑制腐败菌的繁殖，消解腐败菌产生的毒素，清除肠道垃圾。 5、抑制胆固醇吸收，降血脂、降血压作用。 6、免疫调节作用，增强人体免疫力和抵抗力。 7、抗肿瘤、预防癌症作用。 8、提高SOD酶活力，消除人体自由基，具抗衰老、延年益寿作用。 9、有效预防女性泌尿生殖系统细菌感染。 10、控制人体内毒素水平，保护肝脏并增强肝脏的解毒、排毒功能。
乳酸饮料中乳酸 菌的检测
乳酸菌的介绍
培养菌落 乳酸菌菌种
乳酸菌介绍
乳酸菌（Lactobacillus）是发酵糖类且主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色 阳性细菌的总称。凡是能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产生乳酸的细菌统称为乳酸菌。 是一种存在于人类体内的益生菌。乳酸菌可用于制造酸奶、乳酪、德国酸菜、啤酒、葡 萄酒、泡菜、腌渍食品和其他发酵食品。