5-蚕豆根尖细胞微核检测技术

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蚕豆根尖微核测试技术

7 镜检及微核识别找到分生组织区细胞分散均匀、膨大、分裂相对多的部位，再转到高倍镜（物镜40X）下进行观察微核的识别标准（1）凡是主核大小的1/3以下，并与主核分离的小核。（2）小核着色与主核相当或稍浅。（3）小核形态可以是圆形、椭圆形、不规则形。每一处理观察5个根尖，每个根尖观察1000个细胞，并计数其中有微核的细胞数（微核千分率）
蚕豆根尖微核测试技术
实验原理
蚕豆根尖细胞在分裂时染色体的复制过程中常发生断裂，断裂下来的片段在正常情况下能自行复位愈合，如果此时受到外界诱变因子的作用，会阻碍染色体的愈合，于是会出现微核，由于产生的微核数量与外界诱变因子的强弱成正比，所以可用微核出现的百分率来评价环境诱变因子对生物遗传物质影响的程度。
4 “污染指数”判别：此方法可避免因实验条件等因素带来的微核千分率本底的波动，故较宜适用。污染指数=样品实测微核千分率平均值/对照组微核千分率平均值 0-1.5 基本没有污染 1.5-2.0 轻污染 2-3.5中污染 3.5以上重污染
பைடு நூலகம்
结果分析与报告
1 各测试样品微核千分率的计算 2 如果被检测样品不多，可直接用各样品微核千分率平均值与对照组比较（t检验），从差异的显著性判断水质污染与否。 3 如果监测的样品较多，可先用方差分析（F检验）看各采样点所测的微核千分率平均值和对照的差异显著性。如差异显著，还可进行各采样点微核差异显著性的多重比较，看被检样品微核千分率平均值差异显著性的分组情况，以归纳划分这些不同采样点不同级别的污染程度。
3 根尖细胞恢复培养处理后的种子用自来水（或蒸馏水）浸洗三次，每次2～3分钟。洗净后再置入辅有湿脱脂棉中，25℃下再恢复培养 22～24h。 4 固定将恢复后的种子，从根尖顶端切下1cm长的幼根，用卡诺氏固定液固定24小时。固定后的根如不及时制片，可换入 70%的乙醇溶液中置4℃冰箱中保存备用。 5 解离：用蒸馏水浸洗固定好的幼根两次，每次5分钟，吸净蒸馏水，加入5mol/L盐酸将幼根浸没，室温下酸解10分钟，幼根软化即可。 6染色吸去盐酸，用蒸馏水浸洗幼根三次，每次1～2分钟。截下 1～2mm左右长的根尖，滴加席夫氏试剂（在生物实验可以和经过酸化的DNA 发生反应，DNA 被染成紫红色，而不和核仁，细胞质发生反应，因此可以来鉴定DNA的存在。），染色5～8分钟，加盖玻片，压片观察

蚕豆根尖微核监测法

3．对各个部件要轻拿轻放，不要碰撞，尤其是硬盘。 4．防止液体进入计算机内部：在安装计算机元器件时，也要严禁液体进入计算机内部的板卡上。因为这些液体都可能造成短路而使器件损坏，所以要注意不要将饮料摆放在机器附近，对于爱出汗的朋友，也要避免头上的汗水滴落，还要注意不要让手心的汗沾湿板卡。
12.2.5 组装前的注意事项
取出豆种，用调温水浸洗 3 次，每次 5 min，
按照规定的条件恢复培养24 h。
处理6h
处理过程中，根尖如出现相关的急性毒性症
状，则按要求增加试样急性毒性预试验；否则，直接进行后续试验。
实验步骤
4.根尖固定
用卡诺氏液固定
切取顶端 l.0 cm 左右根尖置于具盖指管内（同一试样处理的根尖放入一个指管），加卡诺氏液固定 2 h。固定时间最长不超过 24 h。
8．插拔时不要抓住线缆拔插头，以免损伤线缆。
12.2.6 台式计算机组装基本步骤
1．主机的安装（1）准备好机箱并安装电源，主要包括打开空机箱和安装电源；（2）驱动器的安装，包括硬盘、光驱的安装；（3）CPU和散热器的安装，在主板处理器插座上安装CPU及散热风扇；（4）内存条的安装，将内存条插入主板内存插槽内；（5）主板的安装，将主板固定在机箱内；（6）显卡的安装，根据显卡接口类型将显卡安装在主板上合适的扩展槽内；（7）声卡等的安装，根据声卡的总线类型选择合适的扩展槽将它们安装在主板上；（8）机箱与主板间连线的连接，是指各种指示灯、电源开关线、 PC喇叭等面板插针的连接，以及硬盘、光驱。
用乙醇保存
如不能及时染色制片，则弃去卡诺氏液，用实验用水洗净，加入乙醇溶液浸没，于冰箱内冷藏，72h内染色镜检。
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浸洗根尖

蚕豆根尖细胞微核实验报告

利用蚕豆根细胞微核技术检测洗发水的毒性09生物技术宁伟王晓刚太红桥刘经源摘要微核（micronucleus,MCN）是真核生物细胞经各种理化因子作用后引起染色体畸变，在间期细胞中的一种表现形式。

在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3～1/20，染色与主核一样或稍浅。

一般认为微核是由无着丝粒的染色体断片或落后染色体，在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块。

当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核之外的小核，即微核。

[1]蚕豆根尖细胞微核试验(Micronucleustest,MC-NT)技术是一种以染色体断裂及纺锤丝损伤为测试终点的植物微核检测方法。

它是一种应用于监测环境致突变物对人体和其他生物体的遗传物质产生危害的技术,并从细胞遗传学水平上探讨植物遗传物质的改变状况与环境污染，也可以检测淡水环境的质量。

[2]关键词蚕豆根尖微核洗发水千分率蚕豆是一种很好的细胞遗传学研究材料。

它的染色体为六对相当大的染色体，而且根尖含有较多的分裂相细胞，非常适合显微观察。

目前，蚕豆根尖微核技术在环境致突变性检测/监测方面已经形成了一套完整的体系。

它的可靠性和灵敏性较高，且本底较低，这对于一种致突变性检测方法是十分重要的。

此外，它的检测物谱较广。

目前多数学者认为，在镜检细胞微核时，应按下列标准计数微核：（1）凡主核大小1/3以下，与主核分离的小核；（2）小核的着色与主核相当或稍浅；（3）小核形态可为圆形，不规则等。

[3]1. 实验目的掌握蚕豆根尖细胞微核检测技术的一般方法。

并利用蚕豆根尖细胞微核检测技术对洗发水的毒性状况给出客观的评价，同时表明蚕豆根尖细胞MCN对胁迫很敏感，蚕豆根尖微核技术可用于洗漱用品的安全监测。

2. 材料与方法2.1实验材料蚕豆种子、洗发水、显微镜、镊子、培养皿、剪刀、载玻片、盖玻片、烧杯、Carnoys固定液、盐酸酒精解离液、改良苯酚品红染液、NaN3等。

生物监测课件项目五环境三致物生物检测任务二蚕豆根尖微核监测法(全)

注：试样微核率、空白试样微核率和参比试样微核率分别以 MCN试样、MCN 空白和 MCN 参比表示。
结果计算与表示
2.结果判定
MCN试样≤实验室历史累积MCN空白上限（参考值6.6‰），则该试样不存在致突变性
MCN试样＞实验室历史累积MCN空白上限（参考值 6.6‰），且本次MCN试样较MCN空白显著增加，则该试样存在致突变性
取出豆种，用调温水浸洗 3 次，每次 5 min，
按照规定的条件恢复培养24 h。
处理6h
处理过程中，根尖如出现相关的急性毒性症
状，则按要求增加试样急性毒性预试验；否则，直接进行后续试验。
实验步骤
4.根尖固定
用卡诺氏液固定
切取顶端 l.0 cm 左右根尖置于具盖指管内（同一试样处理的根尖放入一个指管），加卡诺氏液固定 2 h。固定时间最长不超过 24 h。
0～1.5 基本没有污染
1.5～2 轻污染
2～3.5 中污染
>3.5
重污染
01
04
结果
报告
03
结果计算与表示
3.结果报告
受试物
01 名称、来源、采样时间、地点等。
浓度
02 受试物的处理浓度或稀释浓度（以体积%计）。
02
MCN‰
03 各处理组的MCN‰、统计分析方法及结果。
04
结论
对于受试物为化学品或污染物等物质，报告其蚕豆根尖微核率显著性情况，评价其安全性；对于受试物为环境水样或污水，报告其污染程度。
让我们复习一下细胞有丝分裂的过程吧
植物细胞的有丝分裂
有丝分列各期图像
蚕豆根尖微核监测法的原理
蚕豆根尖细胞在进行有丝分裂过程中，染色体经常发生断裂，但一般情况下，断裂可以自行愈合

实验06 蚕豆根尖微核检测技术

实验六蚕豆根尖微核检测技术一、实验目的⒈了解微核测试原理和毒理遗传学意义。

⒉学习蚕豆根尖的微核测试技术。

二、实验原理微核（micronucleus,MCN）是真核生物细胞经各种理化因子作用后引起染色体畸变，在间期细胞中的一种表现形式。

在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3～1/10，染色与主核一样或稍浅。

一般认为微核是由无着丝粒的染色体断片或落后染色体，在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块。

当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核之外的小核，即微核。

三、实验器材和药品松滋青皮蚕豆、显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、烧杯、Carnoys固定液、1mol／L盐酸、改良苯酚品红染液、NaN3。

四、方法与步骤⑴浸种催芽：择饱满、均匀的种子，洗净后用蒸馏水常规浸种、催芽24～30h，此期至少换水2次；待种子充分吸胀后，移入铺有干净、双层湿纱布的托盘内培养。

⑵用被检测液处理根尖：当初生根长到1～2cm时，选初生根生长良好的蚕豆6～8粒，分别放入蒸馏水（CK）、0.４mmol／L、0.８mmol／L、1.2mmol／L的NaN3中染毒8～12h。

⑶根尖细胞恢复培养：处理后的种子用蒸馏水（自来水）浸洗3次，每次2～3 min；将处理液洗净后，置于湿棉花上恢复22～24h；同时均设蒸馏水处理为空白对照组。

以上温度均为25℃。

⑷根尖细胞固定：将恢复后的种子，从根尖顶端切下1～1.5cm长的幼根，用Carnoys 固定液固定20～24h。

固定后的根如不及时制片，可换入70%的酒精溶液中置4℃冰箱中保存备用。

⑸酸解：用1mol／L盐酸在60±5℃下酸解8min，幼根软化即可。

⑹染色：吸去盐酸，用蒸馏水浸没幼根3次，每次1～2分钟。

最后浸于水中。

制片前取出置载玻片上，截下1～2mm左右长的根尖，滴1-2滴改良苯酚品红染液染色10～15min 后，加上盖玻片，覆以吸水纸常规压片。

利用蚕豆根尖细胞微核技术检测咖啡和茶叶对细胞生长的影响

利用蚕豆根尖细胞微核技术检测咖啡和茶叶对细胞生长的影响一、实验目的1、学习蚕豆根尖的微核测试技术。

2、探究咖啡对蚕豆根尖生长的影响。

3、探究茶叶对蚕豆微核的影响。

二、实验原理微核（micronuclei）试验是检测染色体或有丝分裂器损伤的一种遗传毒性试验方法。

无着丝粒的染色体片段或因纺锤体受损而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期仍留在子细胞的胞质内成为微核。

用微核试验来评价药物、放射线、有毒物质等对人体细胞或体外培养细胞遗传学损伤仍是一个直观有效可行的方法,在遗传毒理、医学、食品、药物、环境等诸多方面得到了广泛的应用。

微核计数经济,迅速,简便,不需要特殊技能,可以统计更多的细胞并实现计算机自动计数。

若采用核型稳定的细胞,确立统一的操作协议,进行实验室间的合作建立数据库,应用探针技术的微核试验很可能被纳入遗传毒理学试验。

蚕豆(Vicia faba)是一种理想的细胞遗传学研究材料。

蚕豆的染色体大，数量少(2n=12),根尖中含有较多的分裂相细胞，非常适合显微观察，而且蚕豆根尖细胞周期中的大部分时间对诱变剂敏感，便于遗传毒性检测实验。

咖啡问世以来受到世界各地人们的追捧,不论是老人还是年轻人。

众所周知咖啡有提神的功效，有助于防止放射线伤害，而且咖啡会起到预防肝癌的作用但是咖啡还有一些副作用，如：经常喝咖啡会使人上瘾，饮用过多的咖啡人麻痹瘫痪等。

茶叶在中国有着悠久的历史，如今也受到世界各地人们的青睐。

喝茶对人体有很大的益处，如：茶叶中的茶多酚可与重金属结合产生沉淀，使身体中的一些有害物质迅速排出体外，达到解毒的效果。

三、实验仪器、试剂、材料3.1主要实验仪器盖玻片、恒温水浴锅、恒温培养室（25℃）、冰箱、培养皿、棉花、纱布、计数器、光学显微镜、烧杯等。

3.2主要实验试剂卡纳氏固定液：三份纯酒精与一份冰醋酸混合制成、70%乙醇、0.1mol/L盐酸、改良苯酚品红染液。

3.3实验材料褐皮蚕豆种子、速冲咖啡、茶叶。

实验四蚕豆根尖微核监测技术

实验四蚕豆根尖微核监测技术（VMT）一、实验目的学习如何利用高等植物间期体细胞遗传检测系统以监测环境中的致突变物。

二、原理在细胞分裂早期，若受到有害理化因子的攻击，使染色体发生断裂，产生染色体片段。

在这些片段中，有些可能重新愈合恢复正常，随细胞分裂进入子细胞，有些则由于缺乏着丝点，不能移向细胞的极部而变成圆球体，像卫星一样分布在主核的周围，这便是微核，由于染色体片段的大小和数量不一，所以微核的大小和数量也不相同。

而蚕豆根尖细胞的染色体大，DNA含量多，因而对诱发物的反应敏感，通过显微镜下的观察和计数，便可监测环境污染。

三、器材与试剂（一）显微镜、温箱、恒温水浴箱、冰箱、手揿计数器、解剖盘、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、试剂瓶、烧杯等显微镜压片实验用具。

（二）试剂1.5N HCl、45%醋酸、卡诺氏液（无水乙醇3份加冰醋酸1份配成，固定根尖时随用随备）、Schiff试剂、SO洗涤液。

2四、操作步骤1、蚕豆浸种催芽（1）浸种：将当年或前一年的松滋青皮豆种子按需要量放入盛有有自来水的烧杯中，臵25℃温箱内，浸泡20~30小时，此期间至少换水2次，换用的水最好事先臵于25℃温箱中预温。

（2）催芽：待种子吸胀后，用纱布松松包裹臵解剖盘内，保持温度，在25℃的温箱中催芽12~24小时。

待种子初生根露出2~3mm时，再选取发芽良好的种子，放入铺有薄层温脱脂棉的解剖盘内，仍臵入25℃的温箱中继续催芽，注意保护湿度。

再经24~36h，种子大部分初生根长至2~3cm，根毛发育良好，这时就可用来作为监测水源样品或药物溶液突变效应之间。

2、被监测液处理根尖（1）每一处理选取6~8粒初生根尖生长良好，根长一致的种子，放入盛有被测液的培养皿中，被测液浸泡住根尖即可，用自来水处理作对照，方法相同。

（2）处理时间4~6h。

3、根尖细胞恢复培养：（1）将处理的种子，用自来水浸洗8次，每次2~3min。

（2）洗净后的种子再放入新铺好湿脱脂棉的解剖盘内，按前述培养条件使根尖细胞恢复22~24h。

实验六蚕豆根尖微核检测技术学时综合性设计性

实验六、蚕豆根尖微核检测技术（３学时）（综合性、设计性实验）
一、实验目的 1．了解染色体畸变的各种类型、微核测试的原理和毒理遗传学在实际生活与工作中的应用范围及意义 2．学习蚕豆根尖的微核测试技术
二、实验原理
微核简称(MCN)，是真核生物细胞中的一种异常结构，往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生。在细胞间期微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外、大小应在主核1／3以下。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样。一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的断片产生的，但有些实验也证明整条的染色体或多条染色体也能形成微核。这些断片或染色体在细胞分裂末期被两个子细胞核所排斥便形成了第三个核块。已经证实微核率的大小是和用药的剂量或辐射累积效应呈正相关，这一点和染色体畸变的情况一样。所以可用简易的间期微核计数来代替繁杂的中期畸变染色体计数。
五、实验方法
1．实验材料的培育蚕豆根尖细胞的染色体大，DNA含量高，因而对
诱变因子反应敏感。松滋青皮豆是从不同蚕豆品种中筛选出来的一种较为敏感的品种。本品种引入后在栽培繁殖时要注意不要同其它蚕豆品种种在一起，不喷洒农药、以保持该品种较低的本底微核值。也可用其它蚕豆品种，但是必须设置对照组。种子成熟后，晒干贮藏于干燥器内或4℃冰箱内备用。
6．酸解：
从70％乙醇中取出固定好的根尖→流水冲洗３min→吸水纸吸干→放入盛有适量1 mol/L HCl，60±0.5℃水浴保温的青霉素瓶中→解离 10min。
7．染色改良石炭酸品红染色：
解离后材料水洗3min并吸干，挑取1个根尖的乳白色分生组织于载玻片上夹碎捣烂，滴加1～2滴染液，染色10～15min，压片。
3．处理
每一处理选取6-8粒初生根生长良好、根长一致的种子，放入盛有待测物溶液的培养皿中，浸没根尖。阳性因子可采用CrO3（1.0和2.5 mol/L）、NaN3 （0.5、1.0和1.5mol/L）或EMS（150和200 mol/L），另取一处污水作待检测物质，用自来水作对照，共9 个处理，处理根尖6～24h(处理时间可视实验需要和被测液浓度而定)。

蚕豆根尖微核检测技术

蚕豆根尖微核检测技术实验名称: 方便面面饼液对蚕豆根尖微核率的影响专业年级: 2010级级生物科学成员: 尹忠围安树珺谢林芝刘伟指导教师:实验时间: 2013年4 月一、摘要用蚕豆根尖细胞微核技术检测不同种类方便面面饼液微核的诱变效果。

设置了阴性对照:自来水处理组，实验组:康师傅、统一、老坛，麻老表四组饼液分别处理蚕豆根尖，阳性对照:用0.02g/L的醋酸铅溶液处理。

发现方便面面饼液在诱导微核产生方面影响明显，醋酸铅溶液具有诱导微核产生的作用。

关键字:蚕豆根尖，方便面面饼，微核千分率，污染指数二、实验背景和目的随着现代社会的发展，越来越多的化学物质运用到人们的日常生活之中，如种类繁多的食品添加剂。

而其中有些物质具有较强的危害，如致畸，致癌，致突变等。

为了检测已存在或潜在的危害，各种检测技术应运而生。

微核试验是检测染色体或有丝分裂器损伤的一种遗传毒性试验方法。

无着丝粒的染色体片段或因纺锤体受损而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期仍留在子细胞的胞质内成为微核。

微核计数经济,迅速,简便,不需要特殊技能,可以统计更多的细胞并实现计算机自动计数。

我们采用蚕豆作为实验材料，采用植物微核技术来检测方便面面饼中添加剂对人体是否产生危害。

方便面是日常生活中经常接触到的食品，其市场占据快餐食品的大壁江山，在超市中油炸方便面与非油炸方便面占到快餐食品的60%到70%。

另一方面，在各媒体的报道中，经常出现有关方便面的食用危害，而且很有争议，所以这也是我们进行本实验的一个原因。

三、实验原理微核是间期细胞中在细胞核之外存在的一个或多个圆形或杏仁状结构，大小在主核的1/3以下，是有丝分裂后期丧失着丝粒的落后的染色体片段形成。

20世纪70年代初，Matter和Schmid等首先用动物骨髓细胞微核率来测定怀疑具有诱变活力的化合物，并称之为微核。

实验5蚕豆根尖细胞微核检测技术30页PPT

随着分子生物学技术的迅速发展和不断渗透到微核研究中, 使微核试验的检测应用范围不断扩大,现已发展成为能同时检测染色体断裂、染色体丢失、分裂延迟、不分离、DNA 损伤修复障碍、Hprt 基因突变、细胞凋亡、细胞分裂不平衡等多种遗传损害终点。
自20 世纪70 年代Heddle 和Schmid 利用啮齿类骨髓细胞建立了微核试验检测方法以来,各国都在不断研究探索微核试验技术。主要从三个方面来进行:一是探索微核试验的实验技术,即研究材料、实验方法、给药方式、染毒途径、制片方法、染色方法等;二是利用微核试验来检测各种致突变物质;三是通过微核试验来预测疾病。
胞数）
MN‰ 在10‰以下的为基本污染 10‰ - 18 ‰ 区间为轻度污染 18 ‰ - 30 ‰区间为中度污染 30 ‰以上为严重污染注：每个处理观察3个根尖，每个根尖记数1000个细胞，统计其中含微核的细胞数然后平均，即为该处理的微核千分率。
2）污染指数（pollution index)
二分体时期微核
➢倒位的细胞学特征：粗线期倒位圈；后期桥和断片；微核
➢倒位的遗传效应：改变重组率；基因重排
微核(micronucleus ,MN) 是指位于生物细胞的细胞质中独立于主核,直径小于主核1/ 20～1/ 3 ,完全与主核分开的圆形或椭圆形的微小核。它可以是整条染色体,也可以是染色体断片, 染色性与主核一致,其中部分微核具有DNA 复制能力。微核是由于外界损害因素使染色体发生断裂,细胞进入下一次分裂时, 染色体不能随有丝分裂进入子细胞,而导致染色体丢失或断裂, 从而形成一个或数个小核.
学习蚕豆根尖细胞微核制片与检测技术，了解该技术在诱变作用检测上的应用。
三材料蚕豆根尖（新鲜的固定材料）

蚕豆的根尖实验报告(3篇)

第1篇一、实验目的1. 观察蚕豆根尖的结构；2. 学习并掌握蚕豆根尖的制片技术；3. 探讨不同处理对蚕豆根尖细胞的影响。

二、实验原理蚕豆根尖是植物学研究的重要材料，其结构简单，易于观察。

根尖包括根冠、分生区、伸长区和成熟区。

本实验通过观察蚕豆根尖的结构，了解不同处理对根尖细胞的影响，从而为后续研究提供依据。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜蚕豆、酒精、盐酸、醋酸洋红染液、载玻片、盖玻片、镊子、剪刀、解剖镜、显微镜等。

2. 实验试剂：95%酒精、15%盐酸、醋酸洋红染液。

四、实验步骤1. 取新鲜蚕豆，用剪刀剪去根尖，放入装有95%酒精的试管中浸泡30分钟，以固定细胞。

2. 将浸泡好的蚕豆根尖放入装有15%盐酸的试管中，在室温下处理30分钟，以解离细胞。

3. 将解离好的蚕豆根尖取出，用蒸馏水清洗3次，去除多余盐酸。

4. 将清洗干净的蚕豆根尖放入装有醋酸洋红染液的试管中，染色5-10分钟。

5. 将染色的蚕豆根尖取出，用蒸馏水清洗3次，去除多余染液。

6. 将清洗干净的蚕豆根尖放在载玻片上，用镊子轻轻压扁，盖上盖玻片。

7. 在显微镜下观察蚕豆根尖的结构，记录不同处理对根尖细胞的影响。

五、实验结果与分析1. 根尖结构观察（1）根冠：位于根尖的最前端，细胞排列紧密，具有保护作用。

（2）分生区：位于根冠之后，细胞较小，排列紧密，细胞核较大，具有强烈的分裂能力。

（3）伸长区：位于分生区之后，细胞停止分裂，开始迅速伸长，是根伸长最快的地方。

（4）成熟区：位于伸长区之后，细胞停止伸长，分化形成导管和根毛，是根吸收水分和无机盐的主要部位。

2. 不同处理对根尖细胞的影响（1）空白对照组：蚕豆根尖细胞结构正常，无异常现象。

（2）酒精处理组：蚕豆根尖细胞结构出现变形，部分细胞核变大，染色体凝聚。

（3）盐酸处理组：蚕豆根尖细胞结构出现严重变形，部分细胞核破碎，染色体断裂。

（4）醋酸洋红染液处理组：蚕豆根尖细胞结构正常，染色体染色均匀。

蚕豆根尖细胞微核技术在环境污染监测中应用

（3）作为一种可靠性较高的监测技术，还没有专门针对地下水污染的应用的报道。
蚕豆根尖细胞微核技术在环境污染监测中应用
3rew
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再见，see you again
2020/12/5
蚕豆根尖细胞微核技术在环境污染监测中应用
种植物。如，大蒜，韭菜，玉米，大豆，洋葱等
等。
n 监测对象也扩展到水体，土壤，大气等。
蚕豆根尖细胞微核技术在环境污染监测中应用
3.蚕豆细胞微核技术原理
n
根据之前的概念可知，植物细胞在分裂时之
所以产生微核，是因为受到了有害因子的攻击，
而有害因子来源有两种：（1）细胞代谢（2）外
部环境
n
而经过大量的实验表明，由细胞自身原因所
蚕豆根尖细胞微核技术在环境污染监测中应用
蚕豆根尖细胞微核
蚕豆根尖细胞微核技术在环境污染监测中应用
n
到现在，植物微核技术已经发展成为一种比
较成熟的环境污染监测技术，多个国家已将其列
入监测环境污染的常规项目，其中我国也于1986
年将其编入《环境监测技术规范》。
n
实验材料也由当初的紫露草和蚕豆扩展到多
植物细胞微核技术
• 植物细胞微核技术是根据遗传学上染色体畸变
而建立的一种环境污染的生物监测方法。
•细胞微核(micronucleus , MN )
• 细胞在进行有丝分裂或减数分裂的早前期，
染色体受到有害因子的攻击而发生断裂，产生染色体片段，游离于细胞之中，形成小核，即微核。
蚕豆根尖细胞微核技术在环境污染监测中应用
2011.08.16 5000、77、150000
蚕豆根尖细胞微核技术在环境污染监测中应用

蚕豆根尖微核试验的问题分析及改进策略

蚕豆根尖微核试验的问题分析及改进策略
有关蚕豆根尖微核试验的问题分析及改进策略
摘要：蚕豆根尖微核技术是1种新兴的`快速生物测试方法.该方法已被列入国家"生物监测技术规范(水环境部分)",而且在监测重金属、有机污染物等环境致突变性物质方面也得到了充分应用.综述了蚕豆根尖细胞微核技术从产生到最终确立的进程,并重点就实际操作过程中存在的一些问题进行了讨论,提出了相应的改进策略,以期为蚕豆根尖微核试验技术的完善和广泛使用提供依据. 作者：肖健王璐XIAO Jian WANG LU 作者单位：南京农业大学资源与环境学院,江苏,南京,210095 期刊：河北农业科学 Journal： JOURNAL OF HEBEI AGRICULTURAL SCIENCES 年，卷(期)：2010, 14(7) 分类号：X502 关键词：蚕豆根尖微核试验生物测试方法问题改进。

7,8,9综合实验蚕豆根尖微核检测技术

蚕豆根尖微核检测技术
实验目的
1.了解微核检测的原理和毒理遗传学 2.学习蚕豆根尖微核检测技术
实验原理
微核（micronucleus，MCN）：
是真核生物细胞内遗传物质的一种异常结构
微核率（ MCN ‰）与作用因子的剂量或累积
效应呈正相关
污染指数
实验材料
蚕豆根尖
实验步骤
1、浸种催芽：将实验用蚕豆按需要量放入盛有自来水的杯中，浸泡24h，此间至少换水两次。种子吸胀后，25℃催芽，置于铺有湿润滤纸的培养皿中，经36—48h，大部分初生根长至1— 2cm。 2、用被检测溶液处理蚕豆根尖：每一处理选取3-5粒初生根生长良好的已萌发种子，放入盛有被测的培养皿中，被测液浸没根尖即可。阳性检测因子可采用CrO3、NaN3、重铬酸钾、EDTA为加强阳性效果可适当加大溶度，如1.0—2.5mol/L CrO3和0.5— 1.5mol/L NaN3、溶液。另外可取一污水作被检液之一，用自来水（或蒸馏水）处理作对照。处理根尖12—24h，此时间也可视试验要求和被检液溶度而定。
实验结果
若进行污水检测，根据污染指数鉴定出你所测水样的污染程度，也可以计算被检化学药剂的污染指数。污染指数（PI)=样品实测MCN ‰平均值/对照组（标准水） MCN ‰平均值污染指数在0.50—1.50区间基本没有污染； 1.51—2.00区间为轻度污染； 2.01—3.50区间为中度污染； 3.51以上为重度污染。
实验步骤
5、酸解：用蒸馏水浸洗固定好的幼根两次，每次5min，吸净蒸馏水，加mol/L盐酸将幼根浸没，室温下解离10min至根尖软化。
6、染色：吸去盐酸，用蒸馏水浸没幼根3次，每次1—2min。最后浸于水中，制片前取出置于载玻片上，截下1—2mm长的根尖，滴一滴石炭酸品红，染色10min，加一盖玻片，压片观察。

实验十八：开放性实验——蚕豆(Vicia faba)根尖细胞微核监测技术

• 【方法步骤】 • 1．蚕豆浸种催芽 • 1) 浸种将当年或前一年的蚕豆种子按需要量放人盛有自来水 •
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（或蒸馏水）的烧杯中，置25 ℃的温箱内浸泡24 h－36 h，此期间至少换水2次，换用的水最好事先置于 25 ℃温箱中预温。（如室温超过25 ℃，即可在室温下进行浸种催芽。） 2) 催芽待种子吸胀后，用纱布松松包裹置解剖盘（或铝盒）内，保持湿度，在25 ℃的温箱中催芽12 h－24 h，待种子初生根露出2 mm－3 mm时，选取发芽良好的种子，放人铺有薄层湿脱脂棉的解剖盘（或铝盒）内，仍置人25 ℃的温箱中继续催芽，注意保持湿度。再经36 h－48 h，种子大部分初生根长至1. 5 cm－ 2 cm，根毛发育良好，这时就可用来作为监侧水源样品或检测药物溶液诱变效应之用。 2．被监测液处理根尖 1) 每一处理选取6粒－8粒初生根尖生长良好、根长较一致的种子，放人盛有被测液的培养皿中，让被测液浸泡住根尖即可。用自来水（或蒸馏水）处理作对照，方法相同。 2) 处理时间4 h－6 h，视实验要求和被测液的浓度等情况而定。
• 【实验用品】 • 1．实验材料——松滋青皮豆（普通蚕豆代替）
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蚕豆根尖细胞的染色体大，DNA含量多，因而对诱变物反应敏感。松滋青皮豆是华中师范大学生命科学学院遗传学教研室从蚕豆不同品种中筛选出来的微核试验敏感品种。本品种栽培繁殖时要注意不和其它蚕豆品种种在一起，不喷农药，以保持该品种较低的本底微核值。如果只需对水环境的监测起警报系统作用，也可用其它当地蚕豆品种，但要注意设好对照组。种子成熟晒干后，为保证其发芽率，要贮于干燥器内，或用牛皮纸袋装好放人4℃冰箱内保存备用。 2．器材显微镜、温箱、恒温水浴锅、冰箱、手掀计数器、解剖盘（或铝制饭盒）、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、试剂瓶、烧杯等显微压片实验用具。 3．药品 1）5 mol/L HC1。 2）卡诺氏液：无水乙醇（或95％乙醉)3份加冰醋酸1份配成。固定根尖时随用随配。 3）席夫氏（Schiff）试剂：称0. 5 g 碱性品红（Fuchsin Basic)加蒸馏水100 ml 置三角烧瓶中煮沸5 min，并不断搅拌使之溶解。冷却到58℃时过滤于深棕色试剂瓶中，待滤液冷至25 ℃时再加人10 ml 1 mol/l HCl 和1 g 偏重亚硫酸钠或偏重亚硫酸钾（Na2S2O5或K2S2O5）充分振荡使其溶解。塞紧瓶口，用黑纸包好，置于暗处至少 24 h，检查染色液如果是透明无色即可使用。此染色液在4℃冰箱中可保存6个月左右，如出现沉淀就不能再用。 4）SO2洗涤液贮存液：10% Na2S2O5（或K2S2O5)溶液，1 mol/L HCI 使用液：取上述10% Na2S2O5（或K2S2O5)溶液 5 m，加1mol/l HCl 5 ml，再加蒸馏水100 ml 配成，现用现配。