细胞培养技术精品PPT课件
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细胞培养技术培训ppt课件版
严格执行突发事件上报制度、校外活 动报批 制度等 相关规 章制度 。做到 及时发 现、制 止、汇 报并处 理各类 违纪行 为或突 发事件 。
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见的是贴附于平面支持物细胞。在一般光镜下 生存中的细胞是均质而透明的，结构不明显。
细胞在生长期常有1-2个核仁，在细胞机能 状态不良时，细胞轮廓会增强，反差增大。
若胞质中时而出现颗粒、脱滴和腔泡等， 表明细胞代谢不良。
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倒 置 显 微 镜
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液 氮 罐
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细胞原代培养PPT课件
3.过滤
• 用400目不锈钢筛网过滤 • 收集滤液于离心管 4.离心 • 平衡、离心5min，1000～1500 rpm • 去上清，加PBS，混匀，离心（同上） • 重复上一步 5.接种 • 去上清，加3～5ml培养基，混匀，接种于培养瓶 • 加培养基3～5mm深，盖紧盖，观察细胞密度 6.培养
针头）
有机试剂过滤除菌，常用0.22µm • 超净工作台
紫外灯照射30min以上 • 培养室
紫外灯照射2～3h/天
操作步骤
1.取材 • 75％酒精浸泡乳鼠2min，取肝脏于平皿中 • PBS溶液洗涤3次 • 去除液体后，剪碎成1～2mm3小块 2.消化 • 加5～8倍组织量的胰蛋白酶溶液 • 转移到离心管内，加盖 • 37℃水浴15min，每5min摇晃1次 • 终止消化：加1ml含血清的培养基DMEM
• 超净工作台 紫外消毒，鼓风，保持干净、整洁
• 高压锅 用电，带压力表，自动恒压，掌握时间
橡胶、塑料、药品——15’，金属——20’ • 培养瓶
玻璃瓶和塑料瓶，洗涤要干净，临时消毒
• 培养基 a.天然培养基：血清、胚胎浸出液、水解乳蛋白等 b.合成培养基：DMEM、RPMI1640、199培养基等 c.无血清培养基：Ham F12和DMEM混合的基础培 养基、自行设计与配制的培养基（加其他成分）
a.组织块法：直接将组织块接种于培养瓶， 24小时就有细胞向四周游出。 简便、易行，适合于来源有限、数量较少 的组织做原代细胞培养
b.消化法
• 用酶消化、分解妨碍细胞生长的间质（基 质、纤维等），形成单个细胞或细胞团
• 对上皮、肝、肾、胚胎等间质少、较软组 织选择胰蛋白酶
• 对骨、前列腺、癌组织等纤维多、较硬的 组织可用胶原酶
细胞组织培养技术PPT幻灯片
过程
动物细胞培养应用
❖ 大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干 扰素、单克隆抗体）
❖ 作为基因工程中的受体细胞 ❖ 培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，
判断某种物质的毒性 ❖ 为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依
据
植物胞具有全能性 这个理论，近几十年来发展起来的一项无性 繁殖的新技术。植物的组织培养广义又叫离 体培养，指从植物体分离出符合需要的组织。 器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作， 在人工控制条件下进行培养以获得再生的完 整植株或生产具有经济价值的其他产品的技 术。
应用
❖ 在农业领域中的应用 自六十年代后期起，植物组织培养技术得到 了迅猛的发展，在农业上的应用主要包括以 下几个方面： 植物种质资源的保存、植物种质资源的创新、 植物优良品种的快繁、 应用植物培养细胞生 产次生代谢物
细胞培养的主要优点
➢ 可提供大量生物性状相同的细胞作为研究对象， 比较经济，方便
➢ 可消除其他外界因素的影响，对疫苗生产来说其 抗原性更接近于自然流行株
➢ 可减少宿主蛋白成分，减少变态反应
细胞培养的基本条件
❖ 接种细胞量 ❖ 培养液 ❖ 氢离子浓度及气体条件 ❖ 温度 ❖ 无菌条件和培养器皿的清洁
另外，在培养液中加入氢离子缓冲剂，如 HEPES可使培养液有较强的缓冲能力。
温度
细胞培养的最适温度与细胞来源的动物 体温一致，温度增加2—3℃对细胞产生不 良影响，低温对细胞影响较小
无菌条件
细胞培养技术的关键之一是防止 污染，在细胞培养中，可能发生 污染的来源有： ➢组织培养液 ➢器皿 ➢组织本身 ➢工作者本身 ➢空气
度
酸碱度
细胞生长最宜的PH范围是7.0—7.4。细胞可忍 受较大的范围PH变化（PH6.6—7.8）培养环境偏酸 较偏碱更宜于细胞贴壁。培养液中的缓冲体系主要 是碳酸氢盐、磷酸氢盐和血清。其中碳酸氢盐/CO2 为主要的缓冲体系，如使用CO2孵箱，能提供稳定 的5%CO2，可自动调节细胞代谢引起的PH改变。
《动物细胞培养技术》课件
动物细胞培养技术可以用于组织工程和再 生医学领域，为损伤或病变的组织和器官 提供替代疗法。
02
动物细胞培养的基本原理
细胞周期与细胞分裂
细胞周期
描述细胞生长和分裂的阶段，包 括间期和分裂期。
细胞分裂
细胞繁殖的方式，包括有丝分裂和 减数分裂。
细胞分裂调控
介绍细胞分裂的调控机制，如周期 蛋白、激酶等。
调整细胞浓度
将分离出的单个细胞调整到合适的浓度。
接种
将调整好的细胞悬液接种到培养容器中，轻轻晃 动容器使细胞均匀分布。
培养
将接种好的容器放置在恒温、恒湿、恒光的培养 箱中培养，定期观察记录细胞的生长情况。
细胞观察与检测
01
02
03
04
形态观察
定期观察细胞的形态变化，如 细胞大小、形态、染色深浅等
。
• 干细胞治疗是一种新兴的治疗方法，利用干细胞的再生和分化能力来修复或替换受损的组织和器官。动物细胞培养技术在 干细胞治疗领域的应用，为干细胞分离、培养和扩增提供了重要的技术支持，有助于推动干细胞治疗的发展。
动物细胞培养技术的发展前景 干细胞治疗领域的应用
药物筛选与毒性测试
药物研发过程中，需要进行大量的药物筛选和毒性测试。动物细胞培养技术可以 模拟人体细胞对药物的反应，为药物筛选和毒性测试提供更为准确和可靠的数据 支持，有助于加速新药的研发进程。
动物细胞培养技术广泛应用于生物医 学、药物研发、食品安全等领域。
培养基是动物细胞培养的关键因素， 它为细胞提供营养、生长因子和适宜 的生存环境。
动物细胞培养技术的外培养动物细胞。
20世纪初，随着组织培养技术 的不断发展，动物细胞培养技术
逐渐成熟。
21世纪初，随着基因编辑技术 的发展，动物细胞培养技术在疾 病治疗、药物研发等领域的应用
《细胞培养技术》课件
《细胞培养技术》PPT课 件
细胞培养技术是一项重要的生物学技术，通过将细胞生长在适宜的培养基中， 实现细胞的体外培养和繁殖，为研究细胞和开发生物制品提供了重要手段。
什么是细胞培养技术
1 定义
2 历史
细胞培养技术指的是将细胞从生物体中取出， 在适宜的培养基中进行体外培养的技术。
细胞培养技术起源于20世纪初，随着科学技 术的进步，逐渐成为生物学和医学领域的重 要工具。
常用的细胞培养方法
传统细胞培养方法
通过将细胞放置在培养皿中，利用培养基中的营 养物质供养细胞并促进其生长和繁殖。
三维细胞培养技术
通过构建具有三维结构的培养环境，模拟生物体 内的细胞生长环境，促进细胞在体外的功能表达。
动物细胞培养技术
主要应用于医学研究和生物制药领域，常用于人 类或动物细胞的培养和研究。
环保领域
细胞培养技术有助于环境修复和污染物降解，如 污水处理等。
细胞培养技术的挑战和发展趋势
1 挑战
细胞培养技术面临着细胞变异、细胞老化、 污染等问题，需要不断解决和改进。
2 发展趋势
随着科技的不断发展，细胞培养技术将越来 越趋向自动化、高通量和个性化。
结语
1 总结
细胞培养技术是一项重要的生物学技术，推 动了许多领域的发展和进步。
2 展望
未来，细胞培养技术将继续发展，为人类的 健康和社会发展做出更大贡献。
细胞培养基础知识
1 细胞的分类
2 培养基的种类
3 细胞培养条件
细胞可以根据形态、功能、 组织来源等进行分类，不 同类型的细胞需要不同的 培养条件。
培养基可以根据成分和用 途进行分类，常见的有无 血清培养基、无动物成分 培养基等。
细胞的培养需要一定的温 度、湿度、二氧化碳浓度 等环境条件，以及适当的 营养物质供给。
细胞培养技术是一项重要的生物学技术，通过将细胞生长在适宜的培养基中， 实现细胞的体外培养和繁殖，为研究细胞和开发生物制品提供了重要手段。
什么是细胞培养技术
1 定义
2 历史
细胞培养技术指的是将细胞从生物体中取出， 在适宜的培养基中进行体外培养的技术。
细胞培养技术起源于20世纪初，随着科学技 术的进步，逐渐成为生物学和医学领域的重 要工具。
常用的细胞培养方法
传统细胞培养方法
通过将细胞放置在培养皿中，利用培养基中的营 养物质供养细胞并促进其生长和繁殖。
三维细胞培养技术
通过构建具有三维结构的培养环境，模拟生物体 内的细胞生长环境，促进细胞在体外的功能表达。
动物细胞培养技术
主要应用于医学研究和生物制药领域，常用于人 类或动物细胞的培养和研究。
环保领域
细胞培养技术有助于环境修复和污染物降解，如 污水处理等。
细胞培养技术的挑战和发展趋势
1 挑战
细胞培养技术面临着细胞变异、细胞老化、 污染等问题，需要不断解决和改进。
2 发展趋势
随着科技的不断发展，细胞培养技术将越来 越趋向自动化、高通量和个性化。
结语
1 总结
细胞培养技术是一项重要的生物学技术，推 动了许多领域的发展和进步。
2 展望
未来，细胞培养技术将继续发展，为人类的 健康和社会发展做出更大贡献。
细胞培养基础知识
1 细胞的分类
2 培养基的种类
3 细胞培养条件
细胞可以根据形态、功能、 组织来源等进行分类，不 同类型的细胞需要不同的 培养条件。
培养基可以根据成分和用 途进行分类，常见的有无 血清培养基、无动物成分 培养基等。
细胞的培养需要一定的温 度、湿度、二氧化碳浓度 等环境条件，以及适当的 营养物质供给。
细胞培养技术的应用及前景ppt讲述
细胞培养技术的个性化医疗应用
定制化细胞疗法
利用患者自体的细胞进行培养和改造， 用于治疗特定的疾病，如CAR-T细胞 疗法治疗白血病。
基因编辑与细胞治疗
应用前景
个性化医疗是未来医疗领域的发展方 向，细胞培养技术的个性化医疗应用 将为患者提供更精准、有效的治疗方 案。
结合基因编辑技术，对患者的细胞进 行改造，纠正基因缺陷或增强细胞功 能，如CRISPR-Cas9技术。
细胞培养技术的分类
根据培养环境的不同，细胞培养技术可以分为贴壁培养和悬浮培养。贴壁培养是指细胞贴附在固体表面生长，而悬浮培养则 是细胞在液体中自由悬浮生长。
根据培养目的的不同，细胞培养技术可以分为原代培养、传代培养和诱导分化培养。原代培养是指直接从生物体获取的细胞 进行培养，传代培养是指将已经培养的细胞进行再次培养，而诱导分化培养则是通过特定条件诱导细胞分化为特定类型的细 胞。
THANK YOU
感谢聆听
利用三维支架或生物材料作为 细胞生长的支持物，模拟细胞 在体内的生长环境，使细胞在 形态、功能和代谢等方面更接 近体内状态。
类器官模型
通过3D细胞培养技术构建具有 特定组织或器官功能的微型生 物体，用于研究人体发育、药 物筛选和疾病模型等。
应用前景
类器官模型在药物筛选、毒理 学研究、个性化医疗等领域具 有广阔的应用前景，有助于减 少动物实验，提高实验结果与 人体实际情况的符合度。
02
03
04
生物医学研究
细胞培养技术为生物医学研究 提供了重要的实验模型，有助 于研究细胞生长、发育、疾病 机制和治疗方案等。
药物研发
细胞培养技术用于药物筛选和 药物作用机制的研究，加速新 药的研发进程。
组织工程
细胞培养技术17577PPT课件
群体中多数细胞处于间期，少数处于分裂期。分 裂期较短。
精品ppt
6
整个细胞周期可划分为G1 → S → G2 → M → G1，如下图所示：
精品ppt
7
细胞生长曲线
体外培养的细胞生长达到一定密度后，都需传 代。传代的频率或间隔与培养液的性质、接种细 胞数量和细胞增殖速度等有关。接种细胞数量大、 细胞基数大、相同增殖速度条件下，细胞数量增 加与饱和速度相对要快。连续细胞系和肿瘤细胞 系比初代培养细胞增殖快，培养液中血清含量多 时细胞增殖比少时快。细胞增殖一代，一般要经 过以下三个阶段：
凋亡发生的过程表现（细胞缩小→致密染色质 边集→核碎片→凋亡小体） 1、丧失了特殊的表面结构（微绒毛等）和接触 区，形成光滑的轮廓，从周围活细胞中分离出来 2、细胞缩小：①胞浆细胞器集中
②胞膜出芽或起泡 ③细胞皱缩；
精品ppt
14
3、保持胞浆细胞器完整性
扫描电镜下，细胞表面呈奇特火山口样外观，① 线粒体不肿胀，内膜不破裂；②短暂滑面内质网 （SEN）扩张，扩张间隙与细胞表面融合；③有 时有聚积排例的半结晶状核糖体；④可有与细胞 表面平行的微丝束。
取材 无菌环境中，从机体取出某种组织（视实验目的
而定），经过一定的处理（如消毒、消化分散等） 后接入培养器血中，这一过程称为取材。取材后 应尽快培养，因故不能马上培养时，置4℃的培养 液中保存，但时间不能超过24h。取组织时应严 格保持无菌，同时也要避免接触其他有害物质。 取病理组织、皮肤及消化道上皮细胞时容易带菌， 为减少污染，可用500～1000单位/ml青、链霉素 的PBS液漂洗5～10min。 （无论是传代培养还是原代，对细胞进行操作切 记：细心，专心，动作要轻）
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整个细胞周期可划分为G1 → S → G2 → M → G1，如下图所示：
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细胞生长曲线
体外培养的细胞生长达到一定密度后，都需传 代。传代的频率或间隔与培养液的性质、接种细 胞数量和细胞增殖速度等有关。接种细胞数量大、 细胞基数大、相同增殖速度条件下，细胞数量增 加与饱和速度相对要快。连续细胞系和肿瘤细胞 系比初代培养细胞增殖快，培养液中血清含量多 时细胞增殖比少时快。细胞增殖一代，一般要经 过以下三个阶段：
凋亡发生的过程表现（细胞缩小→致密染色质 边集→核碎片→凋亡小体） 1、丧失了特殊的表面结构（微绒毛等）和接触 区，形成光滑的轮廓，从周围活细胞中分离出来 2、细胞缩小：①胞浆细胞器集中
②胞膜出芽或起泡 ③细胞皱缩；
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3、保持胞浆细胞器完整性
扫描电镜下，细胞表面呈奇特火山口样外观，① 线粒体不肿胀，内膜不破裂；②短暂滑面内质网 （SEN）扩张，扩张间隙与细胞表面融合；③有 时有聚积排例的半结晶状核糖体；④可有与细胞 表面平行的微丝束。
取材 无菌环境中，从机体取出某种组织（视实验目的
而定），经过一定的处理（如消毒、消化分散等） 后接入培养器血中，这一过程称为取材。取材后 应尽快培养，因故不能马上培养时，置4℃的培养 液中保存，但时间不能超过24h。取组织时应严 格保持无菌，同时也要避免接触其他有害物质。 取病理组织、皮肤及消化道上皮细胞时容易带菌， 为减少污染，可用500～1000单位/ml青、链霉素 的PBS液漂洗5～10min。 （无论是传代培养还是原代，对细胞进行操作切 记：细心，专心，动作要轻）
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《动物体细胞培养》课件
基因编辑与转基因技术
动物体细胞培养可用于基因编辑和转 基因技术的操作，实现基因的敲除、 敲入和转录调控等。
干细胞研究
动物体细胞培养可用于干细胞的研究 ，包括胚胎干细胞和成体干细胞的分 离、扩增和诱导分化等。
动物体细胞培养的历史与发展
历史回顾
动物体细胞培养技术自20世纪50年代发展至今，经历了从简 单培养到复杂培养的过程，技术手段不断改进和完善。
特点
可以获得具有高度相似性和稳定性的 细胞系，用于药物筛选和疾病模型建 立等。
04
动物体细胞培养的挑战与解
决方案
细胞污染问题
总结词
细胞污染是动物体细胞培养中常见的问 题，它会影响实验结果和细胞的健康状 况。
VS
详细描述
细胞污染通常由微生物、支原体、其他细 胞等引起。为了解决这一问题，需要在实 验过程中严格控制环境卫生，定期进行消 毒和检查，以及使用高质量的试剂和耗材 。
动物体细胞培养在生物工程领域的应用前景
总结词
动物体细胞培养在生物工程领域的应用前景 广阔，有助于推动畜牧业、生物制药和生物 材料等领域的发展。
详细描述
通过动物体细胞培养技术，可以生产出具有 特定功能的生物材料和药物，如生长因子、 抗体等。同时，在畜牧业中，动物体细胞培 养技术的应用将有助于提高动物产量和品质 ，降低生产成本。此外，动物体细胞培养还 可以用于基因编辑和基因治疗等领域的研究
发展趋势
随着生物技术的不断发展，动物体细胞培养将朝着更加高效 、安全和可控的方向发展，同时与其他技术的结合将为科学 研究提供更多可能性。
02
动物体细胞培养的基本原理
细胞周期与细胞分裂
细胞周期
描述细胞从一次分裂完成开始， 到下一次分裂完成所经历的全过 程。
细胞培养基本技术PPT课件
细胞培养基本技术ppt课件
目录
• 细胞培养技术简介 • 细胞培养的基本条件 • 细胞培养的常用技术 • 细胞培养的实验操作 • 细胞培养的注意事项与安全防护
01 细胞培养技术简介
细胞培养技术的定义
细胞培养技术是指将活体组织或细胞 从生物体中分离出来，在模拟体内环 境的条件下，进行培养、繁殖和维持 生命活动的一种技术。
有特定功能的细胞。
细胞克隆技术的优点是能够筛 选出具有特定功能的细胞，缺 点是需要花费大量时间和精力
进行筛选。
细胞融合技术
细胞融合技术是通过将两个或多个细 胞融合成一个新的细胞，用于生产单 克隆抗体、制备杂交瘤细胞等。
细胞融合技术的优点是能够制备出具 有两个或多个细胞特性的杂交瘤细胞， 缺点是需要筛选出具有所需特性的杂 交瘤细胞。
染条件。
04 细胞培养的实验操作
细胞接种与扩大培养
细胞接种
将少量细胞悬液加入培养容器中，轻 轻旋转使细胞均匀分布。
扩大培养
将已生长的细胞从原培养容器中取出 ，按比例加入新鲜培养基，继续培养 。
细胞的观察与检测
细胞形态观察
定期观察细胞形态变化，如生长状态、分裂速度等。
细胞数量与密度检测
使用细胞计数板或流式细胞仪测定细胞数量和密度。
传代细胞培养需要定期进行细胞 分裂和繁殖，以维持细胞的生长
和生产能力。
传代细胞培养的优点是能够大量 生产具有相同特性的细胞，缺点 是细胞的生长和生产能力会随着
传代次数的增加而降低。
细胞克隆技术
细胞克隆技术是通过将单个细 胞培养成一个个独立的群体， 用于筛选具有特定功能的细胞。
细胞克隆技术需要使用适当 的筛选方法来识别和分离具
细胞识别与鉴定
目录
• 细胞培养技术简介 • 细胞培养的基本条件 • 细胞培养的常用技术 • 细胞培养的实验操作 • 细胞培养的注意事项与安全防护
01 细胞培养技术简介
细胞培养技术的定义
细胞培养技术是指将活体组织或细胞 从生物体中分离出来，在模拟体内环 境的条件下，进行培养、繁殖和维持 生命活动的一种技术。
有特定功能的细胞。
细胞克隆技术的优点是能够筛 选出具有特定功能的细胞，缺 点是需要花费大量时间和精力
进行筛选。
细胞融合技术
细胞融合技术是通过将两个或多个细 胞融合成一个新的细胞，用于生产单 克隆抗体、制备杂交瘤细胞等。
细胞融合技术的优点是能够制备出具 有两个或多个细胞特性的杂交瘤细胞， 缺点是需要筛选出具有所需特性的杂 交瘤细胞。
染条件。
04 细胞培养的实验操作
细胞接种与扩大培养
细胞接种
将少量细胞悬液加入培养容器中，轻 轻旋转使细胞均匀分布。
扩大培养
将已生长的细胞从原培养容器中取出 ，按比例加入新鲜培养基，继续培养 。
细胞的观察与检测
细胞形态观察
定期观察细胞形态变化，如生长状态、分裂速度等。
细胞数量与密度检测
使用细胞计数板或流式细胞仪测定细胞数量和密度。
传代细胞培养需要定期进行细胞 分裂和繁殖，以维持细胞的生长
和生产能力。
传代细胞培养的优点是能够大量 生产具有相同特性的细胞，缺点 是细胞的生长和生产能力会随着
传代次数的增加而降低。
细胞克隆技术
细胞克隆技术是通过将单个细 胞培养成一个个独立的群体， 用于筛选具有特定功能的细胞。
细胞克隆技术需要使用适当 的筛选方法来识别和分离具
细胞识别与鉴定
植物组织和细胞培养技术ppt课件
植物组织培养
根据细胞全能性原理，在无菌条件下，分离植物
的器官、组织、细胞或原生质体（称为外植体），
并在培养基上培养，在适宜的条件下使其长成部
分或完整植株的技术。
愈
根 继续
分离
脱分化
伤再分化 组
芽
培养
外植体
织
植物激素： 细胞分裂素、生长素
植物 体
胚状 体
在日常生活中，随处都可以看到浪费 粮食的 现象。 也许你 并未意 识到自 己在浪 费，也 许你认 为浪费 这一点 点算不 了什么
胚 状 体
幼 苗
离体培养
细胞全能性指已 经分化的细胞， 仍然具有发育成 完整新的生物个 体的潜能。
说明高度分化的 植物细胞具有全 能性。
在日常生活中，随处都可以看到浪费 粮食的 现象。 也许你 并未意 识到自 己在浪 费，也 许你认 为浪费 这一点 点算不 了什么
细胞的全能性
为什么细胞具有全能性？
在日常生活中，随处都可以看到浪费 粮食的 现象。 也许Байду номын сангаас 并未意 识到自 己在浪 费，也 许你认 为浪费 这一点 点算不 了什么
细胞的全能性
1．实现细胞的全能性必需的条件是什 么？为什么？
离体。因为在特定的时间和空间条件
下，细胞中的基因会选择性地表达出各 种蛋白质，形成不同的组织和器官。
在日常生活中，随处都可以看到浪费 粮食的 现象。 也许你 并未意 识到自 己在浪 费，也 许你认 为浪费 这一点 点算不 了什么
在日常生活中，随处都可以看到浪费 粮食的 现象。 也许你 并未意 识到自 己在浪 费，也 许你认 为浪费 这一点 点算不 了什么
植物组织培养
根据细胞全能性原理，在无菌条件下，分
《细胞培养技术》课件
《细胞培养技术》ppt课 件
contents
目录
• 细胞培养技术简介 • 细胞培养的基本原理 • 细胞培养的实验操作 • 细胞培养技术的应用实例 • 细胞培养技术的发展前景与挑战
01
细胞培养技术简介
细胞培养技术的定义
细胞培养技术是指在体外模拟体 内环境，用于培养细胞的技术。
该技术通过提供适宜的营养、气 体和生长因子等条件，使细胞在
目前细胞培养技术面临的挑战
细胞来源
目前细胞培养的细胞来源有限，主要来源于肿瘤细胞和胚 胎干细胞，需要寻找更为安全、可靠的细胞来源。
培养环境
细胞在体外培养过程中需要模拟体内的生理环境，如温度 、湿度、pH值等，如何维持这些环境参数的稳定是当前 面临的重要挑战。
免疫排斥
在组织工程和器官移植等领域，免疫排斥反应是影响治疗 效果的重要因素之一，如何降低免疫排斥反应也是当前研 究的重点。
将细胞从旧的培养液中分 离出来，并接种到新的培 养液中。
细胞冻存
将细胞保存于低温或冷冻 状态，以便长期保存或未 来使用。
细胞培养中的注意事项
严格无菌操作
避免微生物污染，保证细胞的 健康生长。
适宜的细胞密度
确保细胞获得足够的营养和空 间，促进其生长和分裂。
定期更换培养液
清除代谢废物，提供新鲜的营 养物质。
01
02
03
04
生物医学研究
用于研究细胞的生长、发育、 分化、凋亡等过程，以及探索 疾病的发生机制和治疗方法。
药物研发
用于筛选和验证药物的有效性 和安全性，以及研究药物的细
胞作用机制。
再生医学
用于组织工程和干细胞治疗等 领域，为损伤修复和疾病治疗
提供新的手段。
contents
目录
• 细胞培养技术简介 • 细胞培养的基本原理 • 细胞培养的实验操作 • 细胞培养技术的应用实例 • 细胞培养技术的发展前景与挑战
01
细胞培养技术简介
细胞培养技术的定义
细胞培养技术是指在体外模拟体 内环境，用于培养细胞的技术。
该技术通过提供适宜的营养、气 体和生长因子等条件，使细胞在
目前细胞培养技术面临的挑战
细胞来源
目前细胞培养的细胞来源有限，主要来源于肿瘤细胞和胚 胎干细胞，需要寻找更为安全、可靠的细胞来源。
培养环境
细胞在体外培养过程中需要模拟体内的生理环境，如温度 、湿度、pH值等，如何维持这些环境参数的稳定是当前 面临的重要挑战。
免疫排斥
在组织工程和器官移植等领域，免疫排斥反应是影响治疗 效果的重要因素之一，如何降低免疫排斥反应也是当前研 究的重点。
将细胞从旧的培养液中分 离出来，并接种到新的培 养液中。
细胞冻存
将细胞保存于低温或冷冻 状态，以便长期保存或未 来使用。
细胞培养中的注意事项
严格无菌操作
避免微生物污染，保证细胞的 健康生长。
适宜的细胞密度
确保细胞获得足够的营养和空 间，促进其生长和分裂。
定期更换培养液
清除代谢废物，提供新鲜的营 养物质。
01
02
03
04
生物医学研究
用于研究细胞的生长、发育、 分化、凋亡等过程，以及探索 疾病的发生机制和治疗方法。
药物研发
用于筛选和验证药物的有效性 和安全性，以及研究药物的细
胞作用机制。
再生医学
用于组织工程和干细胞治疗等 领域，为损伤修复和疾病治疗
提供新的手段。
细胞培养技术 ppt课件
PPT课件
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二、培养细胞相关条件
（三）细胞培养用试剂
（7）其他
谷氨酰胺： 终浓度2 mmol/L HEPES： 丙酮酸钠： 10-25 mmol/L 终浓度1 mmol/L
2-巯基乙醇：终浓度50 uM
PPT课件
29
三、培养细胞技术 （一）基本操作
1. 无菌操作
防止微生物污染； 培养用一切物品、液体都无菌。 （37度预热，或室温平衡） 2. 操作区消毒 75%酒精擦拭（生物安全柜，进入操作区物品） 紫外消毒20-30 min 3.洗手和着装 4. 实验操作
• 细胞工程药物研究与开发：生物活性多肽研究与开 发,人参皂甙,紫杉醇等生物活性成分研究与开发。 • 单克隆抗体制备：包括诊断用单克隆抗体,治疗用单
PPT课件 4
细胞培养目的和作用
基础研究
(1) 药物作用机理； (2) 基因功能； (3) 疾病发生机理。
2、生物制药
• 疫苗生产：如病毒性疫苗(肝炎病毒疫苗,艾滋病疫苗 等),肿瘤疫苗(多肽疫苗)等。
二、培养细胞相关条件
• 血清分类
• 1、特级胎牛血清（最高级别的） （1）Hyclone 北美特级胎牛血清（SH30070.03） （2）Gibco北美特级胎牛血清（16000-044）
• 2、优等级胎牛血清 （1）Hyclone加拿大优等胎牛血清（SH30396） （2）Hyclone澳大利亚优等胎牛血清（SH30084） （3）Gibco澳大利亚胎牛血清（10099-141）
PPT课件 3
细胞培养目的和作用
1、科学研究
药物研究与开发
• 新药筛选：如化学合成药物药效研究,中药有效成分 筛选与鉴定等。 • 疫苗研究与开发：如病毒性疫苗的研究与开发(肝炎 病毒疫苗,艾滋病疫苗等),肿瘤疫苗(多肽疫苗)等。
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The polymerization and
depolymerization of F-actin
are essential for cell motility.
To assess whether the
observed arrangements of
the actin cytoskeleton could
哈尔滨医科大学附属第二医院科研实验中心
（2）上皮型细胞
扁平不规则多角形， 中有圆形核，细胞紧 密相连成单层膜。其 生长特点为细胞紧密 相连，呈“铺路石” 状
消化管外皮细胞、肝 、胰、肺泡上皮、血 管内皮等
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（3）其他贴附型细胞
①游走型细胞
在支持物上散在生 长，一般不连接成 片。细胞质经常伸 出伪足或突起，呈 活跃的游走或变形 运动，速度快而且 不规则
affect the migration of
shETS2- or lenti-
196b-treated AGS cells, we
examined cellular actin
structure with phalloidine
staining. The F-actin源自positive membrane
2.培养瓶、培养板、吸管、加样器等。
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五、细胞生长条件
（一）营养物质 细胞生长所需的营养物质包括氨基酸、维生素、碳水
化合物、无机离子以及各种促生长因子等。血清中含有多 种细胞生长所需的营养物质。
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四、细胞培养所需仪器设备及用品
（一）无菌操作环境 1.无菌操作区：只限于细胞培养，独立的区域或与外界隔离，
备有紫外杀菌条件（主要用于培养室空气、操作台、塑料 培养皿和培养板等表面消毒 ）； 2.个人：无菌服、无菌室专用鞋，并且带上口罩和帽子；
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（二）设备
1.超净工作台：为细胞操作提供无菌环境 2.显微镜：倒置显微镜、荧光显微镜等； 3.CO2培养箱； 4.干烤箱 5.高压锅 6.纯水器、离心机、液氮罐、天平等；
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（三）用品
1.滤器：细胞培养用的培养基、消化液中含有多种生物活性 物质，这些物质在高温和射线的照射下易失去功能，必须 用滤器除菌；
容易大量繁殖
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（二）生长特性
1、接触抑制：细胞进行体外培养时，分散贴壁生长的细胞一旦相互汇 合接触，即停止移动和生长的现象。细胞增殖到一定程度,也就是互 相挨在一起的时候,糖蛋白识别了这种信息,就会使细胞停止继续繁殖, 这种现象就叫做接触抑制。（肿瘤细胞不受影响）
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细胞培养技术
➢细胞培养基础知识 ※ ➢相关实验仪器使用 △ ➢细胞学相关实验
➢细胞培养教学视频
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细胞培养基础知识
哈尔滨医科大学附属第二医院科研实验中心
一、概念：细胞培养是指从器官、组织中分离出 细胞并在体外模拟体内生理环境在无菌、适当的 温度和一定的营养条件下使之生长生存，维持结 构和功能的培养方法。（培养物是单个细胞或细 胞群）
protrusions
were
significantly increased in
addition to the F-actin
organization enhancement
in the shETS2- or lenti-
196b-treated AGS cells
Liao Y L, Hu L Y, Tsai K W, et al. Transcriptional regulation of miR-196b by ETS2 in gastric cancer cells[J]. Carcinogenesis, 2012: bgs031. IF=5.266
是指细胞附着于支持物表面生长。贴壁生长的细 胞从形态学上大体分为上皮细胞型和成纤维细胞型两 种
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（1）成纤维型细胞
细胞体呈梭形或不规则三角形或者是扇形，中央 有卵圆形核，胞质突起，其生长特点为不紧密相 连，多呈放射状，漩涡状或栏栅状。
成纤维细胞 、心肌、平滑肌、成骨细胞、骨髓 基质干细胞等
神经胶质细胞
哈尔滨医科大学附属第二医院科研实验中心
②多形型细胞
难以确定其规律和 稳定的形态
神经组织细胞
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2.悬浮生长 不需要支持物，而悬浮于培养基中生长，多呈
圆形。一般多来自于血液、脾或骨髓细胞。
悬浮型
见于各种造血系统 肿瘤细胞和血液细 胞
胞体圆形，不贴于 支持物上，呈悬浮 生长
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局限性：
组织和细胞离体以后，独立生存在人工培养环境中，与 体内环境相比，仍有很大差异。故实验结果不能推至体内 ，轻易做出与体内等同的结论。
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三、细胞培养特性 （一）生长方式
根据是否附于支持物上生长的特性，分为贴附生 长和悬浮生长。 1.贴附生长
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二、细胞培养的优点及局限性
优点： 能长时间直接观察活细胞的形态结构和生命活动，应用 领域广。 便于观察、记录、摄影，直接观察细胞变化。 可供研究的细胞种类广泛，从低等生物到高等动物，以 及人类；从胚胎到成体；从正常组织到肿瘤细胞皆可。 便于使用不同方法研究细胞。 培养细胞携带有与体内细胞同等的基因组，是分子生物 学和基因工程学的研究对象和组成部分。 可同时提供大量生物性状相似的实验对象，耗资少。 易于施加物理、化学和生物因素进行实验。 生物制品、基因工程制品、单克隆抗体生产必要手段。
2、密度抑制：细胞接触汇合成片后，虽发生接触抑制，只要营养充分， 细胞仍然能够进行增殖分裂，因此细胞数量仍在增多。但当细胞密度 进一步增大，培养液中营养成分减少，代谢产物增多时，细胞因营养 的枯竭和代谢物的影响，则发生密度抑制（Density Inhibition）， 导致细胞分裂停止。（肿瘤细胞受影响）
depolymerization of F-actin
are essential for cell motility.
To assess whether the
observed arrangements of
the actin cytoskeleton could
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（2）上皮型细胞
扁平不规则多角形， 中有圆形核，细胞紧 密相连成单层膜。其 生长特点为细胞紧密 相连，呈“铺路石” 状
消化管外皮细胞、肝 、胰、肺泡上皮、血 管内皮等
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（3）其他贴附型细胞
①游走型细胞
在支持物上散在生 长，一般不连接成 片。细胞质经常伸 出伪足或突起，呈 活跃的游走或变形 运动，速度快而且 不规则
affect the migration of
shETS2- or lenti-
196b-treated AGS cells, we
examined cellular actin
structure with phalloidine
staining. The F-actin源自positive membrane
2.培养瓶、培养板、吸管、加样器等。
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五、细胞生长条件
（一）营养物质 细胞生长所需的营养物质包括氨基酸、维生素、碳水
化合物、无机离子以及各种促生长因子等。血清中含有多 种细胞生长所需的营养物质。
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四、细胞培养所需仪器设备及用品
（一）无菌操作环境 1.无菌操作区：只限于细胞培养，独立的区域或与外界隔离，
备有紫外杀菌条件（主要用于培养室空气、操作台、塑料 培养皿和培养板等表面消毒 ）； 2.个人：无菌服、无菌室专用鞋，并且带上口罩和帽子；
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（二）设备
1.超净工作台：为细胞操作提供无菌环境 2.显微镜：倒置显微镜、荧光显微镜等； 3.CO2培养箱； 4.干烤箱 5.高压锅 6.纯水器、离心机、液氮罐、天平等；
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（三）用品
1.滤器：细胞培养用的培养基、消化液中含有多种生物活性 物质，这些物质在高温和射线的照射下易失去功能，必须 用滤器除菌；
容易大量繁殖
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（二）生长特性
1、接触抑制：细胞进行体外培养时，分散贴壁生长的细胞一旦相互汇 合接触，即停止移动和生长的现象。细胞增殖到一定程度,也就是互 相挨在一起的时候,糖蛋白识别了这种信息,就会使细胞停止继续繁殖, 这种现象就叫做接触抑制。（肿瘤细胞不受影响）
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细胞培养技术
➢细胞培养基础知识 ※ ➢相关实验仪器使用 △ ➢细胞学相关实验
➢细胞培养教学视频
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细胞培养基础知识
哈尔滨医科大学附属第二医院科研实验中心
一、概念：细胞培养是指从器官、组织中分离出 细胞并在体外模拟体内生理环境在无菌、适当的 温度和一定的营养条件下使之生长生存，维持结 构和功能的培养方法。（培养物是单个细胞或细 胞群）
protrusions
were
significantly increased in
addition to the F-actin
organization enhancement
in the shETS2- or lenti-
196b-treated AGS cells
Liao Y L, Hu L Y, Tsai K W, et al. Transcriptional regulation of miR-196b by ETS2 in gastric cancer cells[J]. Carcinogenesis, 2012: bgs031. IF=5.266
是指细胞附着于支持物表面生长。贴壁生长的细 胞从形态学上大体分为上皮细胞型和成纤维细胞型两 种
哈尔滨医科大学附属第二医院科研实验中心
（1）成纤维型细胞
细胞体呈梭形或不规则三角形或者是扇形，中央 有卵圆形核，胞质突起，其生长特点为不紧密相 连，多呈放射状，漩涡状或栏栅状。
成纤维细胞 、心肌、平滑肌、成骨细胞、骨髓 基质干细胞等
神经胶质细胞
哈尔滨医科大学附属第二医院科研实验中心
②多形型细胞
难以确定其规律和 稳定的形态
神经组织细胞
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2.悬浮生长 不需要支持物，而悬浮于培养基中生长，多呈
圆形。一般多来自于血液、脾或骨髓细胞。
悬浮型
见于各种造血系统 肿瘤细胞和血液细 胞
胞体圆形，不贴于 支持物上，呈悬浮 生长
哈尔滨医科大学附属第二医院科研实验中心
局限性：
组织和细胞离体以后，独立生存在人工培养环境中，与 体内环境相比，仍有很大差异。故实验结果不能推至体内 ，轻易做出与体内等同的结论。
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三、细胞培养特性 （一）生长方式
根据是否附于支持物上生长的特性，分为贴附生 长和悬浮生长。 1.贴附生长
哈尔滨医科大学附属第二医院科研实验中心
二、细胞培养的优点及局限性
优点： 能长时间直接观察活细胞的形态结构和生命活动，应用 领域广。 便于观察、记录、摄影，直接观察细胞变化。 可供研究的细胞种类广泛，从低等生物到高等动物，以 及人类；从胚胎到成体；从正常组织到肿瘤细胞皆可。 便于使用不同方法研究细胞。 培养细胞携带有与体内细胞同等的基因组，是分子生物 学和基因工程学的研究对象和组成部分。 可同时提供大量生物性状相似的实验对象，耗资少。 易于施加物理、化学和生物因素进行实验。 生物制品、基因工程制品、单克隆抗体生产必要手段。
2、密度抑制：细胞接触汇合成片后，虽发生接触抑制，只要营养充分， 细胞仍然能够进行增殖分裂，因此细胞数量仍在增多。但当细胞密度 进一步增大，培养液中营养成分减少，代谢产物增多时，细胞因营养 的枯竭和代谢物的影响，则发生密度抑制（Density Inhibition）， 导致细胞分裂停止。（肿瘤细胞受影响）