氨茶碱的血药浓度测定实验报告

氨茶碱的血药浓度测定及药动学参数计算

一、【目的】掌握血清中氨茶碱血药浓度的紫外测定法，掌握血清中茶碱提取法，验证氨茶碱的动力学模型，掌握二房室动力学模型的参数计算方法。用有机溶剂将血清中的氨茶碱提出，用紫外测定法根据标准曲线测出氨茶碱浓度，用残差法运用计算机进行数据处理、曲线描绘及参数计算，从而验证氨茶碱动力学模型，使大家对药动学研究有一初步的了解。

二、【原理】氨茶碱为临床常用平喘药，由茶碱与乙二胺缩合而成，在体液中可分离出茶碱。在酸性条件下，可用有机溶剂从血清中提出茶碱，并同时沉淀血清蛋白，再用碱液把茶碱从有机溶剂中提出（见图1）。测量λ274和λ298处的吸光度（A274为茶碱和本底，即溶剂、血清的吸光度，A298为本底的吸光度）。茶碱的吸收度为△A = A 274 A 298，使用UV1601双波长分光光度计测定（见图2）。

图1．茶碱的抽提过程

图2

氨茶碱经静脉进入血液，随血液循环进行组织分布，达到平衡后转入消除相。时量曲线呈二房室动力学模型，公式为C = Ae -α

t +Be -β

t ，曲线由分布相C a = Ae -α

t 和消除相C b =Be -β

t

两部分组成，其对数表达式分别为log C a = (-αlog e) t + log A 和log C b = (-βlog e) t + log B （见图3），在对数坐标上由于分布相较早趋近于零，故可先在时量曲线终末段直线回归法求出消除相对数表达式log C b = (-βlog e) t + log B ，然后用差数法求出C a = C - C b ，再次运用直线回归法求出分布相对数表达式log C a = (-αlog e) t + log A ，最终得到所有的参数A 、α、B 和β，从而得到时量曲线C = Ae -α

t +Be -β

t 。

取 血 试 管

酸 性 分 离 管

碱 性 分 离 管

血液 NaOH

抽提液

血清

含茶碱的上层液

图3．二房室模型的时量曲线

三、器材：玻璃试管、离心管、注射器、吸管、离心机、微量进样器、UV1601双波长分光光度计。药品与试剂：氨茶碱标准液，0.1 N HCl ，0.1 N NaOH ，异丙醇：氯仿抽提液(5：95)。动物：家兔，体重2.5～3 kg 。

四、【方法步骤】

1． 动物实验：给药、不同时段取血，测定一系列血药光密度（ΔA t ）

取健康家兔一只，用二甲苯涂擦兔耳以扩张血管，静脉注射肝素750IU/kg 抗凝，取空白血约0.5ml 。经4min 后一耳缘静脉注射氨茶碱(2分钟内注射完)，另一耳缘静脉在不同时段取血，取血时间（x ）如表2。2500转/分离心5分钟分离血清，各管均取血清0. 25 ml 于试管中，加0.1 N 盐酸溶液0.1 ml 、抽提液2.5 ml ，振摇混合，2500转/分离心10分钟，吸取氯仿液(下层)2 ml 置另一试管中，加入0.1 N NaOH 溶液2ml ，振摇混匀，2500转/分离心10分钟，吸取碱液(上层)，以空白血为参比，测定一系列ΔA t ，结果填入表2的第一和第二列。

操作流程如图4：

图4．ΔA t 操作流程

消除相log C ex = (-βlog e) t + log B

分布相log C r = (-αlog e) t + log A

2.标准管加样

取试管5支，依次加入0.1mg/ml的茶碱标准液20、40、60、80和100 μl，然后各管加入0.1 N NaOH溶液使总容积为4 ml，则浓度依次为0.5、l.0、l.5、2.0、2.5 μg/ml，测定各管△A，填入表1。

五、【数据处理】

（1）利用Excel求药物光密度（Y）与浓度（X）之间的回归关系Y = A’+ B’X

表１．标准管加样

标准管号 1 2 3 4 5

茶碱标准液(ml)0.02 0.04 0.06 0.08 0.10

0.1N NaOH 溶液

3.98 3.96 3.94 3.92 3.9

（ml）

茶碱浓度X（μg/ml）0.5 1.0 1.5 2.0 2.5

光密度Y （△A）0.039 0.077 0.116 0.160 0.198 回归方程Y=0.0802X-0.0023

Excel模板已经做好，仅需要在标准直线工作表中的第二列填入相应的△A值，Excel 便自动绘出茶碱光密度——浓度回归直线（见图5），并标明其表达式Y = A’ + B’X，给出相应的统计参数截距A’=-0.002、斜率B’=0.080和相关系数R’=1.000 。

图5

（2）计算不同时段血药浓度，求时量曲线C = Ae-αt +Be-βt及药动参数

不同时间点x(min)及其相应血药光密度（ΔA t）已经填入了表2的第一和第二列，在Excel模板“血药浓度计算”工作表中已预先拷入了表2，则相应血药浓度Ct (μg/ml)和血

药浓度对数值y自动在第三和第四列求出血药浓度和二房室模型的药动参数，有以下几步：

表2．不同时段血药光密度（ΔA t）记录

x (min) ΔA t C t ( g/ml) y (log C)

Ct =( ΔA t - A' ) / B'*4/0.2y = LOG10(C

)

t

13 0.109 1.443

22 0.094 24.01 1.380

40 0.078 20.02 1.302

85 0.061 15.79 1.198

244 0.050 13.04 1.115

372 0.041 10.80 1.033

1）利用回归直线表达式计算每个ΔA t相应的血药浓度，绘制药时曲线，将浓度转换为对数坐标，找出远端呈直线分布的N个点，电脑拟合给出消除相曲线Cex=Be-βt [对数表达式为log Cb = (-βlog e) t + log B]，给出相应的统计参数截距log B、斜率-βlog e和相关系数r ,给出药动参数B = 17.7594和β=0.0013。由Cex=Be-βt算出Cex 的其余各点，并以红色空心圆点标示于图中（如图6），其数值即为表3中的红色数字。

图6．