植物激素及其检测技术
植物激素的测定方法
植物激素的测定方法植物激素是一类由植物自身合成并参与生长发育调控的活性物质，对植物的生长发育起着重要作用。
因此，准确测定植物激素的含量对于研究植物生长发育调控机制具有重要意义。
本文将介绍几种常用的植物激素测定方法。
一、高效液相色谱法（HPLC）高效液相色谱法是目前应用最广泛的植物激素测定方法之一。
该方法基于植物激素在高效液相色谱柱上的保留时间和峰面积，通过与已知浓度的标准品比较，可以计算出待测样品中植物激素的含量。
高效液相色谱法具有分离效果好、分析速度快、准确度高的优点，但需要专用的仪器设备，操作较为复杂。
二、气相色谱法（GC）气相色谱法是另一种常用的植物激素测定方法。
该方法通过将待测样品中的植物激素转化为易挥发的衍生物，然后在气相色谱柱上进行分离和定量分析。
气相色谱法具有测定灵敏度高、分离效果好的特点，但需要对样品进行预处理，并且对仪器的稳定性要求较高。
三、酶联免疫吸附法（ELISA）酶联免疫吸附法是一种常用的免疫学测定方法，也可以用于测定植物激素的含量。
该方法通过将植物激素与特异性抗体结合，然后再用酶标记的二抗进行检测，最后通过比色反应或发光反应来测定植物激素的含量。
酶联免疫吸附法具有操作简便、成本较低的优点，但需要特异性较好的抗体。
四、放射免疫测定法（RIA）放射免疫测定法是一种使用放射性同位素标记的植物激素进行测定的方法。
该方法通过将放射性同位素标记的植物激素与待测样品中的植物激素结合，然后通过放射性计数来测定植物激素的含量。
放射免疫测定法具有灵敏度高、测定范围广的特点，但需要使用放射性同位素，存在辐射危险。
五、质谱法（MS）质谱法是一种高灵敏度的分析方法，可以用于测定微量的植物激素。
该方法通过将待测样品中的植物激素通过质谱仪进行分子质量分析，从而测定植物激素的含量。
质谱法具有高灵敏度、高分辨率的特点，但需要专用的仪器设备和较高的技术水平。
植物激素测定方法有高效液相色谱法、气相色谱法、酶联免疫吸附法、放射免疫测定法和质谱法等。
植物激素检测方法
植物激素检测方法一、什么是植物激素？植物激素是植物体内合成的一系列痕量有机化合物，它在植物的某一部位产生，运输到另一个或一些部位，在极低的浓度下便可引发生理反应，几乎参与了调控植物从种子休眠、萌发、营养、生长和分化到生殖、成熟和衰老的每个生命过程，既可调控植物自身的生长发育，又通过与植物所生存的外部环境互相作用调节其对环境的适应。
通过调控如细胞分裂素、油菜素内酯和生长素等植物激素的代谢可显著地改良作物的株型结构和产量构成，从而大幅度提高作物产量和品质。
植物激素主要包括生长素(auxin)、赤霉素(gibberellin，GA)、细胞分裂素(cytokinin，CTK)、脱落酸(abscisic acid，ABA)、油菜素甾醇类(brassinosteroids，BRs)、茉莉酸(jasmonic acid，JA)及其甲酯(MeJA)、水杨酸类(salicylic acids，SA)、乙烯(ethylene)和多肽激素(peptide hormones)等。
二、检测方法科标生物检测中心可以提供各种植物样品检测服务，中心是通过权威认证的第三方机构，检测后出具权威检测报告。
三、主要分析技术1、生物鉴定法是一类经典的植物激素检测方法，它利用激素作用于植物的组织或器官时产生的特异性反应对植物激素进行测定。
2、免疫检测技术是测定植物激素的常用方法。
该方法是基于抗原和抗体的特异性结合，因此有较好的专一性。
采用放射性元素标记的方法，即放射免疫分析(radioimmunoassay，RIA)，其检测灵敏度高，重复性好，但对实验条件的要求较高。
3、气相色谱火焰离子化检测法(GC-FID)和气相色谱质谱法(GC-MS)能够对所分析样品进行准确、高灵敏度测量，但由于气相色谱对样品的特殊要求，使得待测组分需具有一定挥发性，因此在植物激素样品的前处理过程中需对样品进行衍生化。
4、高效液相色谱紫外检测法(HPLC-UV)、高效液相色谱荧光检测法(HPLC-FL)和高效液相色谱质谱检测法(HPLC-MS)也大量用于植物激素的纯化及定量分析，其中MS因为具有良好的选择性和灵敏度，并且能够给出化合物的结构信息，在实际检测中得到了更普遍的运用。
植物激素生物测定
2、苋红素合成法
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2、苋红素合成法
注意： 1、尾穗苋黄化苗对光十分敏感，整个试 验需在暗室内进行。 2、尾穗苋种子有较长的休眠期，新收获 的种子不能发芽。可放在冰箱中经2-3个 的低温处理后发芽使用。
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3、组织培养鉴定法
经典方法之一。 大豆愈伤组织、烟草茎的髓部、胡萝卜根 韧皮部等都对细胞分裂素有较高敏感性。 此法专一性强，缺点是需时较长。
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四、脱落酸的生物测定
1、小麦胚芽伸长法 与生长素的测定方法完全相同，只是脱落 酸的作用是抑制小麦胚芽鞘的伸长。与对 照相比，脱落酸处理组的小麦胚芽鞘伸长 少，脱落酸浓度愈高，胚芽鞘的伸长愈少。
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2、棉花外植体脱落法
脱落酸能诱导离区细胞中纤维素酶和果胶 酶的生物合成，从而促进植物离层的形成， 导致器官脱落。叶柄对外源脱落酸很敏感， 在一定的浓度范围内，脱落率与浓度成正 比，脱落时间与脱落酸浓度成反比。
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1、萝卜子叶增重法
细胞分裂素有促进萝卜子叶增大的效应， 其主要原因是促进了细胞的分裂和扩大。 在一定浓度范围内（激动素为2-25mg/L）， 子叶增重与浓度呈线性关系。
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1、萝卜子叶增重法
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2、苋红素合成法
原理：尾穗苋（Amaranthus caudatus） 在光照下由幼苗合成一种红色色素-苋红 素（Amaranthin或Betacyanin）。在暗中 发芽的尾穗苋子叶不能合成苋红素，子叶 呈白色。但如供给细胞分裂素和酪氨酸， 暗中萌发的尾穗苋子叶就能合成苋红素。 在激动素浓度为0.01-3mg/L范围内，色素 的量与激动素浓度增加成比例。
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第五章：植物激素的生物测定
植物激素的测定分析采用薄层层析(thin layer chromatography,TLC)、气相色谱 (gas chromatography,GC)、高效液相层 析(high performance liquid chromatography,HPLC)和质谱分析(mass spectrography,MS)等，其原理大都是基 于不同物质在不同介质中有不同的分配系 数。
植物激素整理
植物激素整理植物激素的检测方法1. 生物测试生物测试法是最早采用的植物激素测定方法它是利用植物激素的生理活性通过某些植物的组织和器官对植物激素产生的特异性反应进行测定的。
优点：简便易行也能反映植物激素的生理活性缺点：专一性较差且植物体内含有生长素类似物~ 拮抗物等影响测定的结果需在前处理中尽可能纯化所要测定的组分过程复杂此外重复性差工作量大2. 免疫检测免疫学技术应用于植物激素的测定有力地促进了激素定量研究的发展它的基本原理是利用抗原和抗体的特异性竞争结合。
优点：了检测灵敏度可检测出10-12 g 的微量物质相应其前处理也得到了简化又改善了测定的专一性。
缺点：抗体的制备较复杂。
3.物理化学方法物理化学方法分光谱法和色谱法两种1）分光谱法：主要有紫外吸收光谱~ 红外吸收光谱和荧光法优点：灵敏度高缺点：专一性差2）色谱法：利用物质在不同介质中的分配原理进行测定的，包括纸上层析，薄层层析(TLC) ，气相色谱(GC) ，高效液相色谱(HPLC) 以及气质联用(GC-MS) 等，将分离和测定结合起来是色谱法的基本特点。
（1）纸上层析和TLC：优点：设备简单易操作缺点：分离效率和灵敏度有限制（2）G C 和HPLC：是在纸上层析和TLC 的基础上装备了商品化的色谱柱和检测器，保证了检测方法的专一、灵敏和准确（3）GC 和HPLC 方法:分析植物激素, 灵敏度和选择性高, 重复性好, 但对前处理要求较高; 又因保留时间的分辨有一定限制, 若达不到所需纯度要求可能会出现多种化合物的保留时间相同或接近而影响测定结果。
（4）在植物激素的理化检测中, 仪器联用是当代的发展趋势：最常用的结合系统是气相色谱-质谱联用(GCMSD，技术, 它是目前最为可靠的激素检测方法, 还可验证其它测定方法的可靠性, 而且还可鉴定未知物质的结构，但需经冗长的样品纯化程序, 设备昂贵, 使用和维护成本高。
此外有气液相色谱( GLCD 配以火焰热离子检测器(FTDD 快速灵敏地对植物细胞分裂素定量测定[25], 也有薄层色谱与气相色谱结合分析ABA。
植物激素的提取和纯化
植物激素测定的方法
1、生物测定法
生物测定法是通过测定激素作用于植株或离体器官后所产生的生 理生化效应的强度，从而推算植物激素含量的方法。
特点：简单易操作，但是其灵敏度及专一性均不够高 。
2、物理和化学方法
薄层层析、气相色谱(GC)、高效液相层析(HPLC)和质谱分析(MS)、 色质联谱(GC-MS)可以更为精确地检测多种激素 。
实验步骤
• 1、植物激素的提取：
分次加入3ml 80%甲醇 称样（0.5g） 10000g 倒入离心管 10min 离心
研磨 倒出上清液
• 2、激素的纯化：过C18柱法
5ml针筒接在C18柱上 5ml 100%甲醇 5ml 70%甲醇
5ml乙醚
加样ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
• 3、取出300μl氮气吹干备用。
实验5 植物激素的提取和纯化
一般激素在植物中的含量极低，性质又不稳定，加 之细胞中其他化合物的干扰，故测定的方法必须 十分灵敏和专一。通常首先用合适的有机溶剂来 提取，既要避免许多干扰物质，又要防止破坏激 素本身。其次采用各种过柱、萃取或层析步骤， 使激素得到部分提纯。然后再用生物的、物理的 或化学的方法测定其含量。
特点：灵敏度和选择性高，重复性好，但对前处理要求较高 。
3、免疫分析法
放射免疫检测法(RIA)和酶联免疫吸附检测法(ELISA)是当前常用的两 种激素定量技术。
特点：高专一性，高灵敏性，操作简便，样品往往只需初步纯 化。
实验材料、试剂和仪器
• 1、实验材料：新鲜采集的叶片或其他部分； • 2、试剂：80%甲醇； • 3、仪器：研钵、移液抢、塑料离心管、高速低温 离心机、Sep-Pak C18柱、吹氮气装置。
植物激素的测定方法-精品文档
二、免疫球蛋白的分子结构
免疫球蛋白的基本结构
• 四肽链结构 ，链间二硫键连接 • 两条重链（H）和两条轻链（L） • 氨基端和羧基端。
可变区与恒定区
• 根据氨基酸排列顺序的不同分为： 可变区（V）和恒定区（C） • 可变区（V区）：氨基酸组成、排列顺序变化较 大 • 恒定区（C区）：氨基酸数量、种类、排列顺序 及 含糖量都比较稳定
注意事项 ：
（ 1 ）微量加液器应注意保养并定期校正，否则结果误差 较大，同时加样时不可出现气泡，以免反应物间不能充分 混匀反应。 （ 2 ）洗涤时力求次数足够，且避免形成气泡，否则洗涤 不完全。 （3）温育时要力求受热均匀，同时避免液体蒸发。 （ 4 ）比色时反应管内不能留有气泡，管底不能存有水滴， 否则出现较大误差。
测定标准物各浓度和各样品490nm
处的OD值。
数据分析
在波长 450nm 处分别读取各标准孔和样本孔 OD 值， 以 OD值为横坐标，“标样激素含量的对数”为纵坐
用酶标仪进行比色，以0 ng/ml标准孔为空白孔，
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ标，在半对数坐标纸上画出标准曲线，以测定孔的
利用反对数求得ABA的绝对含量。
OD值在标准曲线上查出待测样品的 ABA含量的对数。
植物激素的酶连免疫分析法
几种酶标分析仪
DNM-9602G酶标分析仪
DNM-9602A酶标分析仪
DNM-9602 标配酶标分析仪
操作步骤
包被---温育---洗涤---竞争--温育---洗涤---加二抗---温育--
-洗涤---显色---比色---计算
包 被
• 每小孔中加入100μl包被缓冲液，然后
植物激素的测定方法？
生物活性法 气相色谱（气-质联机） 液相色谱（液-质联机） 酶连免疫法（ ELISA 法）
植物激素的检测方法
比色谱法是最早应用于生长 素分析的光谱法，但由于该法选 择性差，现很少被应用。荧光分 析法是进行痕量、超痕量甚至分 子水平上分析的重要手段，它具 有选择性好、取样少、灵敏度高 以及简便快速等优点，近年来在 植物激素分析中得到广泛应用。
电化学分析法
电化学分析法相对于气相色谱(GC)、液相色 谱(HPLC)、毛细管电泳(CE)、免疫法等分析方法具 有简单、方便和仪器价廉等特点. 在早期的研究中, 植物激素的电化学分析方法主要是针对脱落酸、赤 霉素、玉米素和激动素等植物激素标准品的电化学 行为进行探讨. 通过研究发现, 植物激素存在的本底 溶液的性质和pH 对测定结果会产生很大影响。
色谱法和光谱法
色谱法
光谱法
色谱学是利用物质在不同介质中的 分配原理进行测定的, 包括纸上层析、薄 层层析( TLC)、气相色谱( GC)、高效相 色谱( HPLC) 以及气质联用( GC-M S) 等, 将分离和测定结合起来是色谱法的基本 特点。根据色谱学理论, 某种化合物在一 定色谱条件下的出峰时间(保留时间) 是 固定的, 这是色谱学定性的依据； 而色 谱峰面积(或峰高) 与物质的含量(或总量) 成正比, 这是色谱学定量的基础。
植物激素 的 检测方法
目录
CONTENTS
01
02
03
04
植物 激素 定义
植物 激素 分类
植物 激素 检测 方法
参考 文献
1
植物激素的定义
植物激素的定义
天然植物激素或内源性植物激素, 是植 物自身代谢产生的一类具有高度生物活 性的有机小分子化合物. 它们一般先在 植物的某一部位合成, 然后再转运到其 他部位去发挥作用。植物激素虽是小分 子, 却调控着几乎整个植物生命周期, 如 种子萌发、茎叶伸长、果实成熟以及脱 落等生理过程。植物激素还能感应植物 所处生存环境的外界刺激, 如水分、光 照、温度和损伤等, 并作出相应的反应。
酶联免疫法(ELISA)测定植物激素含量
酶联免疫法（ELISA）测定植物激素含量姓名：李希东专业：植物学学号：200808201 日期：09.5.10 成绩：一、实验目的：掌握间接法测定植物激素的原理和方法；了解逆境对玉米根系ABA和IAA含量的影响。
二、实验原理：酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immuno sorbert assay，简称ELISA)是在免疫酶技术(immuno enzymite technique)的基础上发展起来免疫测定技术。
其建立在两个重要的生物化学反应基础之上的，即①抗原抗体反应的高度专一性和敏感性；②酶的高效催化特性。
ELISA把这二者有机地结合在一起，即被分析物先与其相应的抗体或抗原反应，然后再检测抗体或抗原上酶标记物的活性，从而达到定性或定量测定的目的。
间接法是将过量的与蛋白质连接的待测植物激素(实验前将该激素与牛血清白蛋白等蛋白质连接成[激素一蛋白质复合物])吸附在固相支持物上，然后加入待测植物激素和相应抗体，使抗体与待测植物激素及激素蛋白质复合物结合，再加入酶标抗体(标记酶与非特异第二抗体的复合物)，就形成〔蛋白质·激素·第一抗体·第二抗体·酶复合物〕，加入底物后就生成有色产物，测定其吸光率，可计算待测抗原的量。
如果抗体、激素一蛋白质复合物和酶标抗体的量一定，并且[激素·蛋白质复合物]和待测激素的总量超过抗体的量，那么生成的[蛋白质·激素·第一抗体·第二抗体·酶复合物]的量就受待测激素含量的限制，因此待测抗原的量将与吸光率成反比。
图A表示间接酶联免疫方法的基本原理：A.间接酶联免疫原理示意图示反应板（固相载体）示激素特异抗体（一抗）示激素（抗原）示非特异二抗示蛋白质·激素复合物示标记酶本实验所采取的方法，则是利用游离抗原和吸附抗原与游离抗体的竞争性结合反应，它的原理可用下式表示:Ab十H十HP=AbH十AbHP其中Ab表示抗体，H表示游离激素，HP表示吸附在板上的激素一蛋白质复合物。
植物激素类检测
植物激素类检测植物激素是由植物自身代谢产生的一类有机物质，会从产生部位移动到作用部位，在极低浓度下就有明显生理效应的微量物质，也称为植物天然激素或植物内源激素。
它是植物细胞接受特定环境信号诱导产生的、低浓度时可调节植物生理反应的活性物质。
在细胞分裂与伸长、组织与器官分化、开花与结实、成熟与衰老、休眠与萌发以及离体组织培养等方面，分别或相互协调地调控植物的生长发育与分化。
常见的植物激素有五类，生长素类、赤霉素类(GAs)、细胞分裂素类(CTKs)、乙烯(ETH)和脱落酸(ABA)。
前三类都是促进生长发育的物质，脱落酸是一种抑制生长发育的物质，而乙烯则主要是一种促进器官成熟的物质。
植物激素的离子色谱图植物激素的二级全扫描质谱图迪信泰检测平台采用液质联用(HPLC-MS或LC-MS/MS)的方法，常用Thermo Scientific的U3000快速液相色谱对样品进行分离，随后采用Thermo Scientific™ Q Exactive™对样品进行鉴定，可以高效、精准的检测植物激素的含量变化。
目前可检测的植物激素包括吲哚乙酸(IAA)、玉米素（ZR）、赤霉素（GA3)、脱落酸（ABA)等。
对于常见激素或以上激素的同类物质，可结合标样进行检测，对于稀有的激素分子，如提供标准样品，迪信泰检测平台可提供定制检测。
此外，我们还提供HPLC测定植物激素的服务，以及植物激素系列检测试剂盒产品，以满足您的不同需求。
植物激素类检测项目玉米素（ZA）检测赤霉素（GA）检测吲哚乙酸（IAA）检测脱落酸（ABA）检测水杨酸（SA）检测茉莉酸（JA）检测生长素（Auxin）/植物生长激素检测细胞分裂素（CTK）检测玉米素核苷（ZR）/反式玉米素核苷（TZR）检测吲哚丁酸（IBA）/吲哚-3-丁酸检测6-苄氨基腺嘌呤/6-苄氨基嘌呤（6-BA）检测激动素（KT）检测萘乙酸（NAA）检测异戊烯基腺嘌呤（IP/2ip）检测异戊烯基腺嘌呤核苷（IPA/2ipr）检测结合吲哚乙酸检测结合脱落酸检测水杨酸甲酯（MESA）检测茉莉酸甲酯（MeJA）检测油菜素内酯/芸苔素/油菜素甾醇（BR/BL）检测独角金内酯（SLs）检测褪黑素(MT)/褪黑激素/褪黑色素检测样品制备激素提取方法（此部分涉及到公司的核心工艺，以下提供常规的提取工艺）1）称量约0.5 g的新鲜植物样品；2）液氮研磨至粉碎；3）加入5 mL异丙醇/盐酸缓冲液，4℃震荡30 min；4）加入10 mL二氯甲烷，4℃震荡30 min；5）4℃，13000 rpm离心5 min，取下层有机相；6）避光，氮气吹干有机相，用250 μL-500 μL甲醇(0.1%甲酸)溶解；7）0.45 μm的微孔滤膜过滤，用HPLC-MS/MS检测。
植物生物化学检测技术
植物生物化学检测技术随着科学技术的不断发展，植物生物化学检测技术在现代农业、生态环境保护等领域扮演着重要的角色。
通过检测植物体内的生物化学成分，我们可以获得关于植物生长状态、病虫害防治等方面的有价值的信息。
本文将介绍植物生物化学检测技术的原理、方法和应用。
一、植物生物化学检测技术的原理植物生物化学检测技术主要基于植物体内生物分子的特性和相应的分析方法。
植物身上包含众多的生物化学物质，如蛋白质、核酸、酶、激素等，它们在植物的生长、发育和抵抗病害过程中发挥着重要的作用。
通过对这些生物化学物质的检测和分析，我们可以了解到植物的健康状况、适应性以及如何更好地调控。
二、植物生物化学检测技术的方法1. 蛋白质分析技术蛋白质是植物生物体中最丰富的生物分子之一，具有多种生物学功能。
蛋白质分析技术通过电泳、免疫学、质谱等方法，对蛋白质的结构、功能和数量进行检测和分析，以研究植物在不同环境下的生理变化、代谢通路以及蛋白质与环境胁迫的相互作用等。
2. 核酸检测技术核酸是植物基因组的主要组成部分，具有遗传信息的传递和表达功能。
核酸检测技术包括PCR、实时荧光定量PCR、基因测序等，通过对植物体内的基因进行检测和分析，可以了解到植物的基因型、基因表达水平以及与环境因素之间的关系。
3. 植物激素分析技术植物激素是植物内源性的低分子有机物，对植物的生长、发育和代谢过程起着关键作用。
植物激素分析技术利用高效液相色谱、气相色谱-质谱等方法，对植物激素的种类、含量和变化趋势进行检测，以研究植物内源激素的合成、传输和响应机制。
三、植物生物化学检测技术的应用1. 农业领域植物生物化学检测技术在农业生产中有着广泛的应用。
通过对作物体内的养分含量、抗性指标以及农药残留等进行检测，可以帮助农民科学施肥、选择适宜的抗性品种以及合理使用农药，提高农业生产的效益和质量。
2. 生态环境保护植物生物化学检测技术在环境保护中也发挥着重要的作用。
通过对植物体内有毒物质的检测和分析，可以及时发现和评估环境中的污染状况，并指导环境的修复和改善。
植物激素检测方法
植物激素检测⽅法植物激素是植物体内合成的⽤于调控植物⽣成发育的⼩分⼦化合物。
⽬前，被公认的植物激素有6⼤类：细胞分裂素类（CK）、⾚霉素类（GAs）、⽣长素类（Auxins）、脱落酸类（ABA）、⼄烯和油菜素甾醇类（BRs）。
以下介绍⼏种常⽤的植物激素检测⽅法。
1. ⽣物检测法利⽤植物激素作⽤于植物组织或离体器官后产⽣的特异性反应，从⽽间接对植物激素的含量进⾏检测。
然⽽，不同结构的⾚霉素、⽣长素或激动素对不同⽣物检测法的响应有差异，因此有时可能⽆法测出。
由于⽣物检测法可以检测植物激素的活性，常⽤于植物激素的定性分析，也常与其他检测⽅法结合使⽤。
2. ⽓相⾊谱法通过与标准样品共⾊层分离来鉴定样品中植物激素的含量，但由于⽆法排除杂质与标准品的共⾊层分离，所以不能准确检测植物激素含量。
待测样品必须形成易挥发的甲基化和三甲基硅烷化衍⽣物才可以运⽤⽓相⾊谱法检测，所以在⼄烯的测定种，⽓相⾊谱法⽐较常⽤。
3. 酶联免疫法（ELISA法）将抗原或抗体与酶结合形成酶标抗原或抗体，加⼊酶反应的底物后，底物被酶催化⽣成有⾊产物，通过颜⾊反应的深浅来进⾏定性或定量分析。
酶联免疫吸附法的主要缺点在于抗体的制备复杂，且检测中难以排除交叉反应，⽆法保证植物激素检测的准确性。
4. ⾼效液相⾊谱法⾼效液相⾊谱法与不同检测器结合，能直接分析多种植物激素，是⽬前应⽤较⼴泛的植物激素检测⽅法之⼀。
除⼄烯外的其它植物激素均可以采⽤⾼效液相⾊谱法进⾏检测。
5. 质谱法液质联⽤（LC-MS）和⽓质联⽤（GC-MS）克服了⾼效液相⾊谱和⽓相⾊谱的在植物激素定性和定量⽅⾯的局限性，成为普遍接受和认可的植物激素检测⽅法。
GC-MS具有选择性好、专⼀性强、灵敏度⾼等特点，不⾜之处在于对样品的纯化要求很⾼，且样品需要衍⽣化处理。
不同于GC-MS，LC-MS不需要衍⽣化处理，简化了操作步骤，缩短了检测时间。
因此LC-MS更适⽤于植物激素的检测（除⼄烯外）。
植物激素研究的一般方法
植物激素研究的一般方法
1. 激素的提取和分离，研究人员通常会从植物组织中提取激素，并通过化学方法或生物学方法进行分离纯化，以便进行后续的分析
和实验。
2. 生物测定法，生物测定法是研究植物激素活性的重要方法，
包括生物学活性测定、生长调节测定等，常用的方法包括生长曲线
实验、生物测定实验等。
3. 分子生物学方法，利用分子生物学技术对植物激素进行研究，包括克隆激素合成基因、激素受体基因、信号转导途径相关基因等，通过转基因技术和基因敲除技术研究植物激素的功能。
4. 生化分析方法，利用生化分析方法对植物激素进行研究，包
括高效液相色谱法、质谱法、酶联免疫吸附实验等，用于检测和定
量植物激素的含量。
5. 组织培养技术，利用植物组织培养技术研究植物激素的生物
学功能，包括激素的促进生长、诱导愈伤组织等，通过组织培养的
方式研究植物激素的作用机制。
总的来说，植物激素研究的一般方法涉及到多个学科领域的知识和多种实验技术的应用，通过综合运用这些方法，可以全面深入地研究植物激素在植物生长发育中的作用机制和调控网络。
植物激素生理作用与检测技术的研究现状及进展
基 因编码 一个 细胞 色素 Ｐ ５ 单加 氧 酶 ， 酶参 与 了赤霉 素 ４０ 此 介 导 的Ｓ Ｒ１ Ｌ 降解 和赤 霉素合 成 的反 馈调 控 ， 从而 调控水 稻
节 间的生长 发育 。
研究 表 明Ａ Ａ 以降低Ｌ Ｒ （ Ｂ可 Ｅ 叶片伸展 率 ） ， 诱导抗 旱
安 徽 农 学 通 报 ，Ａ ｈ ｉ ｇｉＳｉＢ ｌ２ １ ，６０ ） ｎ ｕ ｒ． ｃ． ｕ１ ０ ０１ （８ Ａ ．
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植 物 激素 生 理作 用 与检测 技 术 的研 究现 状及 进 展
房 凯
（ 北京林 业大学 ， 北京 １ ０ ８ ０ ０ ３）
摘 要 ： 物激 素作 为植物体 内的痕 量分子 ， 于调 节植物 的各种 生长发 育过 程和 环境 的应答 具有十 分重要 的 意 植 对 义， 因此对 于植物 激素 的检 测技术 就要 不断创 新和提 高。 综述 了植物 激素 的生 理作 用和各 种检 测技术 的研 究现状
ｅ ｖ ｒ ｎ ｎ ｅ ｐ ｎ ｅ Ｓ ｈ ｙ ａ ｅｎ ｃ ｓ ａ ｙ ｔ ｏ ｔｎ ｏ ｓ ｙ ｉ ｎ ｖ ｔ ｎ ｍｐ ｏ ｅ ｔ ｅ ｄ ｔ ｃ ｉ ｎ ｔ ｃ ｎ ｌ ｇ ． ｅ ｒ ｃ ｎ ｎ ｉｏ ｍｅ ｔｒ ｓ ｏ ｓ ， Ｏ ｔ ｅ ｒ ｅ ｅ ｓ ｒ ｃ ｎ ｉ ｕ ｕ ｌ ｎ ｏ ａ ｅ ａ ｄ ｉ ｒ ｖ ｈ ｅ ｅ ｔ ｅ ｈ ｏ ｏ ｙ Ｔｈ ｅ ｅ ｔ ｏ ｏ ａ ｖ ｎ ｅ ｎ ｐ ｙ ｉ ｌｇ ｃ ｌ ｃ ｉ ｎ ｏ ｌ ｎ ｏ ｍｏ ｅ ｎ ａ ｉ ｔ ｆ ｅ ｅ ｔｏ ｅ ｈ ｏ ｏ ｙ ｒ ｅ ｉ ｗｅ ｎ ｔ ｉ ｐ ｐ ｒ ｄ ａ ｃ ｓｉ ｈ ｓｏ ｏ ｉ ａ ｔ ｆｐ ａ ｔ ｒ ｎ ｓａ ｄ ａｖ ｒｅ ｙ ｏ ｔ ｃ ｉ ｎ ｔ ｃ ｎ ｌ ｇ ｓｗｅ ｅ ｒ ｖ ｅ ｄ ｉ ｈ ｓ ａ ｅ ． ａ ｏ ｈ ｄ Ｋｅ ｒ ｓ ｙ ｗｏ ｄ ：Ｄｅ ｅ ｔｏ ｅ ｈ ｏ ｏ ｙ Ｐｈ ｓｏ ｏ ｉａ ｃ ｉ ｎ Ｐ ａ ｔｈ ｒ ｎ ｓ ｔ ｃ ｉ ｎ ｔ ｃ ｎ ｌ ｇ ； ｙ ｉ ｌ ｇ ｃ ｌ ｔｏ ； ｌ ｎ ｏ ｍｏ ｅ ａ
植物激素的测定方法
植物激素的测定方法植物激素是一类在植物生长和发育过程中起调节作用的化合物。
它们能够通过调节细胞分裂、扩展和分化以及调控植物对环境的适应能力，从而影响植物的形态和功能。
为了研究和了解植物激素的作用机制，科学家们发展了多种测定植物激素的方法。
这些方法可以帮助我们准确地测定植物激素的浓度，并进一步揭示植物激素在植物生长和发育中的作用。
一种常用的测定植物激素的方法是高效液相色谱法（HPLC）。
HPLC 是一种基于植物激素在液相中的分离和检测原理的分析方法。
首先，样品中的植物激素会被提取出来，然后通过在柱子中的固定相上进行分离，最后利用紫外光谱仪或质谱仪等设备进行检测和定量。
这种方法具有高分离效果、高灵敏度和高准确性的优点，常用于测定植物激素如生长素、赤霉素、脱落酸等的浓度。
除了HPLC，放射免疫测定法（RIA）也是一种常用的测定植物激素的方法。
RIA利用植物激素与标记同位素结合的原理，通过测量放射性同位素的放射线强度来定量植物激素的浓度。
这种方法具有高灵敏度和高特异性的优点，可以测定植物激素如赤霉素、激动素、玉米素等的浓度。
酶联免疫吸附测定法（ELISA）也是一种常用的测定植物激素的方法。
ELISA利用植物激素与特异性抗体的结合反应，通过测量抗体与酶标记物质之间的酶活性来定量植物激素的浓度。
这种方法具有简单、快速和高灵敏度的优点，常用于测定植物激素如赤霉素、生长素、激动素等的浓度。
除了上述几种常用的测定方法，还有一些新兴的测定植物激素的方法也在不断发展中。
例如，质谱法（MS）是一种基于植物激素分子的质量和质荷比的分析方法，可以精确测定植物激素的结构和浓度。
另外，生物传感器和光谱法等新技术也被应用于植物激素的测定领域，为研究人员提供了更多的选择。
测定植物激素的方法多种多样，各有优劣。
科学家们根据研究目的和需求选择合适的方法来测定植物激素的浓度。
这些测定方法的发展和应用，不仅有助于我们深入了解植物激素的作用机制，还为植物生长和发育的调控提供了重要的理论和实践基础。
植物激素的检测方法
植物激素的检测方法摘要：植物激素是植物体内的微量信号分子，它们几乎调节着植物生长发育的所有过程，植物，植物激素的检测常用方法有关键词：植物激素的检测；生物试法；色谱检测法；免疫检测法1 植物激素的介绍植物激素是指植物细胞接受特定环境信号诱导产生的、低浓度时可调节植物生理反应的活性物质。
植物激素有六大类：即生长素（auxin）、赤霉素（GA）、细胞分裂素（CTK）、脱落酸（abscisic acid，ABA）、乙烯（ethyne，ETH）和油菜素甾醇（brassinosteroid，BR）。
它们都是些简单的小分子有机化合物，但它们的生理效应却非常复杂、多样。
2 植物激素检测方法研究2.1 生物试法生物试法是最早检测植物激素的方法，它是依据植物激素的生理活性，通过某些植物的组织或器官产生的特异性反应来进行检测。
1928年F W Went首先建立了检测植物生长素的燕麦芽鞘弯曲测试法,但方法复杂,若没有熟练的技巧,就很难取得准确的结果。
因此在1933年, Thimann K V 和J Bonner把这个方法改变了一下建立了燕麦叶鞘切断伸长法,简化了操作方法。
此后,随着ABA、CTK、GA等激素的逐一发现,相应的各类激素的测定方法也被广泛建立。
例如,小麦胚芽鞘切断抑制法检测ABA;烟草髓愈伤组织鉴定法和胡萝卜根愈伤组织鉴定法鉴定CTK;矮生豌豆法、大麦胚芽鉴定法和点滴法鉴定GAs等等[1]。
生物试法具有简便易行的特点，能够反应植物激素的生理活性，还可以鉴定新的植物激素和生理活性物质，因此至今仍然得到广泛的应用。
但其不足之处在于，植物体内往往存在许多激素分子的类似物、代谢物、拮抗物或其他干扰物质，从而影响生物试法的检测结果[2]。
此外还要尽量控制环境因子和使用的植物材料的均一性，以便检测结果的准确、可靠。
20世纪90年代Wout Boerjan[3]等建立的重组DNA技术定量检测生长素和细胞分裂素的方法可谓是这一领域的一个重要进展。
植物激素及理化指标检测书
► 积的变化不会影响影响定量结果。 内ꢉ法抵消了前处理的操作误差，乃至流动相、 检测器的影响。
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类别 游离态生长素 结合态生长素
生长素前体
脱落酸 游离态茉莉酸 结合态茉莉酸 茉莉酸前体 游离态水杨酸 结合态水杨酸
天然细胞分裂素
人工合成细胞分裂素 赤霉素系列 油菜素内酯
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比色法
乙醇提取-比色法测定
植物激素可用生物试法进行鉴定,5种激素每种试举一例
植物激素可用生物试法进行鉴定,5种激素每种试举一例植物激素是一类能够调节植物生长和发育的化合物，通过控制细胞分裂、伸长、分化和老化等生理过程来影响植物的生长和发育。
在植物生理学研究中，通过生物试法可以对植物激素进行鉴定和测定，这对于深入了解植物生长发育的调控机制具有重要意义。
以下将分别举例介绍5种常见的植物激素以及相关的生物试法。
第一种激素是赤霉素。
赤霉素是一种类似动物激素的化合物，能够促进细胞的分裂和伸长，同时调节植物的开花和果实发育等过程。
赤霉素的鉴定通常使用胚芽生长试验。
将种子和含有不同浓度赤霉素溶液的培养基共同培养，观察种子发芽和胚芽生长情况，可以根据不同的生长表现来确定赤霉素的存在与否。
第二种激素是生长素。
生长素是一种主要通过影响细胞伸长和分裂来调节植物生长的激素。
生长素的鉴定常使用半花生根试验。
将种植在含有不同浓度生长素溶液的培养基上的花生根的半部分培养，在一定时间后观察根的生长情况，可以根据根长度的变化来判断生长素的含量和作用程度。
第三种激素是脱落酸。
脱落酸是一种能够促使植物叶片脱落和果实成熟的激素。
脱落酸的鉴定通常使用叶片脱落试验。
将含有不同浓度脱落酸溶液的培养基与叶片接触，观察叶片的脱落情况，可以根据叶片脱落的时间和数量来判断脱落酸的作用效果。
第四种激素是细胞分裂素。
细胞分裂素是一类能够促进植物细胞分裂的激素，对于植物生长非常重要。
细胞分裂素的鉴定常使用离体培养试验。
将植物的组织切割并进行无菌培养，在培养基中添加不同浓度的细胞分裂素，观察组织的增殖情况，可以根据细胞数量和组织的生长情况来确定细胞分裂素的作用水平。
第五种激素是脱落素。
脱落素是一类能够使植物组织和器官脱落的激素，对于促进植物的生长发育起到重要作用。
脱落素的鉴定常使用果实脱落试验。
将不同浓度脱落素溶液喷洒在果实上，观察果实的脱落情况，可以确定脱落素在果实脱落过程中的作用程度和浓度。
通过以上的例子，我们可以看到植物激素的鉴定可以通过不同的生物试法进行。
植物生长素的测定方法
植物生长素的测定方法一、植物生长素测定的重要性。
1.1 植物生长素就像植物生长的“魔法药水”，它对植物的生长发育起着超级关键的作用。
少了它，植物可能就会像没吃饱饭的孩子，长得病恹恹的。
所以准确测定植物生长素的含量是非常重要的事儿。
1.2 这就好比医生要知道病人身体里各种元素的含量来判断健康状况一样，我们要知道植物生长素的量，才能更好地照顾植物，让它们茁壮成长，结出丰硕的果实或者开出美丽的花朵。
二、生物鉴定法。
2.1 燕麦胚芽鞘弯曲试验。
这是一种很经典的方法呢。
把含有生长素的提取物放在燕麦胚芽鞘的一侧，就像在给胚芽鞘出一道“生长的选择题”。
如果胚芽鞘向着放提取物的一侧弯曲了，那就说明这里面有生长素在发挥作用。
这就像在黑暗中给植物指了一个生长的方向，它就会朝着生长素多的地方努力生长，就像人会朝着有希望的方向前进一样。
2.2 豌豆茎切段试验。
我们把豌豆茎切段，然后放在含有生长素的溶液里。
就像把小树苗种在肥沃的土壤里一样。
如果溶液里生长素合适，豌豆茎切段就会像被注入了活力，愉快地生长起来。
通过测量切段的生长长度等数据，就能大致判断出生长素的含量啦。
这有点像看孩子吃了多少营养食物就知道他会长多高一样。
三、化学测定法。
3.1 比色法。
这个方法就像是给生长素穿上一件有颜色的衣服，然后通过颜色的深浅来判断它的含量。
我们利用生长素和某些试剂发生化学反应后会产生颜色变化的原理。
这就好比是在一群人中，通过衣服颜色来区分不同的人一样。
不过这个方法有时候会受到其他物质的干扰，就像在一群穿着相似颜色衣服的人中，可能会认错人一样。
3.2 色谱法。
这可是个比较“高大上”的方法。
它就像一个非常精细的筛子，能够把生长素从众多的化合物中分离出来，然后准确地测定它的含量。
这个方法准确性比较高，就像神枪手打靶一样，很少会失手。
但是它的设备比较昂贵，操作也相对复杂，就像开豪车一样，虽然很厉害，但是不是谁都能轻松驾驭的。
四、物理测定法。
4.1 免疫测定法。
植物激素的酶联免疫吸附测定法(ELISA)
植物激素的酶联免疫吸附测定法（ELISA）免疫测定是利用抗原、抗体特异性反应而建立的，根据可视化方法的不同可分为：酶联免疫、放射免疫、荧光免疫、化学发光免疫测定、生物发光免疫测定、浊度免疫测定法等。
由于酶联免疫吸附分析法（Enzyme-linked Immunosorbent Assays, 简称ELISA）具有灵敏性、特异性高，且方便、快速、安全、成本低廉的特点，而日益被广泛应用于植物激素测定。
目前，几大类植物激素IAA,ABA, GA3、GA4、iPA、ZR、DHZR等都建立了相应的ELISA方法并有试剂盒出售。
植物激素的酶联免疫检测方法有两种形式（见下图），一种是在固相载体上直接包被抗体（直接法，先包被二抗，再加一抗），另一种是包被抗原（间接法）。
直接法利用游离抗原和酶标抗原与吸附的抗体进行竞争。
间接法利用游离抗原和吸附抗原与游离抗体进行竞争。
间接法的原理可用下式表示：Ab+H+HP=AbH+AbHP其中Ab表示抗体，H表示游离激素，HP表示吸附在板上的激素－蛋白质复合物。
根据质量作用定律，当该反应体系中Ab及HP的量确定时，游离H越多，结合物AbH形成的就越多，而AbHP形成的就越少，即结合在板上的抗体就越少，通过酶标二抗检测结合物AbHP的多少，就可以确定游离H量的多少。
材料、试剂及设备1 材料各种新鲜植物材料2 仪器设备研钵，冷冻离心机，台式快速离心浓缩干燥器或氮气吹干装置，酶联免疫分光光度计，吸水纸，恒温箱，冰箱，酶标板（40孔或96孔），可调微量液体加样器（10μl，40μl,200μl,1000μl），带盖瓷盘（内铺湿纱布）。
3 试剂(1) 包被缓冲液：称取１.５g Na2CO3, 2.93g Na HCO3, 0.2g NaN3（可不加）, 用量筒加1 000 ml蒸馏水，pH为9.6(2) 磷酸盐缓冲液（PBS）：称取8.0g NaCl, 0.2g KH2PO4, 2.96g Na2HPO4·12H2O，用量筒加1 000 ml蒸馏水，pH为7.5。
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植物激素及其检测技术
什么是植物激素？
植物激素是植物合成的一类痕量有机化合物，他们在极低的浓度下就能引发生理反应，在植物的生长发育和环境应答中具有非常重要的作用。
他们几乎参与了植物的每个生命过程，包括种子休眠、萌芽、营养、生长、分化、生殖、成熟和衰老。
1928年，温特证实了首个植物内源激素——生物素的存在，随后其他植物激素陆续被科学家发现。
以前，人们将植物内源激素分为五大类：生长素（auxins）、赤霉素（gibberellins）、细胞分裂素（cytokinins）、乙烯（ethylene）、脱落酸（abscisic acid）。
前三类激素能促进植物的生长发育，乙烯主要促进植物器官成熟，而脱落酸抑制生长发育。
水杨酸（salicylic acid）油菜素内酯（brassinosteroids）、茉莉酸（jasmonic acid，JA）、多胺（polyamines）、酚类（phenolic compounds）、独角金内酯（Strigolactones）等植物激素陆续被发现。
图1. 植物激素。
表1. 主要的植物激素及其代表化合物的分子结构、名称及含量范围（李艳华2011）。
为什么要检测植物激素？
一方面，植物激素对于植物生长、发育和对环境响应起着非常重要的调控作用。
另一方面，植物作为重要的农业产品、园艺产品等，植物激素（如细胞分裂素、生长素、油菜素内酯）能显著调节植物的株型结构和产量构成，从而大幅提升作物的产量和品质，茉莉酸、水杨酸、
油菜素内酯等多种激素在植物对抗病虫害中发挥重要作用。
因此植物激素的定性、定量在研究植物激素作用机理、植物生命过程、提高农产品/园艺植株质量、和人类定向植物改造方面起到重要作用。
但是植物激素检测具有以下几个难点：
1、作为植物的次生代谢产物，含量极低。
1g鲜样中的通常为ng级植物激素，甚至pg级；
2、不同样本含量差异大；样本越新鲜越好。
3、基质效应干扰严重。
基质是样品中分析物以外的组分，常对分析物的分析鉴定产生干扰，影响结果的准确性，这种干扰被称为基质效应。
如何检测植物激素？
目前，主要有以下几个检测植物激素的方法：
生物鉴定法：这是最早用于植物激素检测的方法，根据待测定的激素特性进行植物激素检测。
比如1928年，温特利用生长素能使燕麦胚芽鞘弯曲的特性来鉴定生长素浓度。
该方法对样本的纯度要求高，分辨率不高，重复性差，所以应用少。
免疫检测法：，该技术基于抗原与抗体的特异性结合，是比较常用的方法，具有较高的专一性。
免疫检测方法又可以分为放射免疫分析（RIA）和酶联免疫吸附分析（ELISA）。
RIA的检测灵敏度高，重复性好，但是对实验条件要求高。
ELISA相比而言，更简单易行，因此使用更为广泛。
生物传感器：基于生物传感器的方法允许连续、直观的激素水平监测，主要分为电化学生物传感器、免疫传感器和遗传编码传感器。
电化学生物传感器利用酶促氧化还原反应，并由转
换器转化为可以被测定的电信号，从而测定植物激素，对某些植物激素特异的中间化合物也可用作生物传感器或电极。
免疫传感器利用经过特殊设计的适配体（单链RNA或DNA）折叠产生配体分子的结合位点，与目标植物激素特异性结合。
遗传编码的生物传感器利用的是基于靶向植物激素启动子区域设计的植物激素遗传报告者。
图2、电化学生物传感器示例（Novak, Napier et al. 2017）。
色谱和色谱-质谱联用法：近年来，色谱和质谱技术飞速发展，在植物激素检测的应用上越来越受青睐。
色谱技术利用各组分在色谱固定相上保留性质的差异实现激素分离，基于色谱图，可以得出样本含量和纯度信息。
质谱技术可以将不同质量的离子按照质荷比（m/z）进行定性、定量及结构分析，质谱法是唯一可以确定分子质量的方法，灵敏度高，样品需求小，由于其高灵敏性和功能强大，在实际应用中最为广泛。
✓气相色谱-质谱联用（GC-MS）技术可同时分析多种植物激素，准确性高，灵敏度高，适合分析具有一定挥发性、弱极性的物质，因此在GC-MS分析前要衍生成相应的挥发性衍生物，但高温容易降解热不稳定化合物。
气相色谱与串联质谱（MS-MS）联用能更一步提高对于负责内源激素检测的灵敏性。
内标法（理想的内标物为同位素）可以减少样本提取、纯化时的损失、仪器误差，使得定量更为准确。
✓液相色谱与质谱联用（LC-MS）和高效液相色谱质谱法（HPLC-MS）也大量用于植物激素的纯化、鉴定和定量分析，主要用于不挥发性化合物、极性化合物和热不稳定性化合物的分析鉴定。
LC-MS与GC-MS相比，减少了繁琐的衍生步骤，也减少了时间花费，避免了衍生过程带来的实验误差。
超高液相色谱法（UPLC）相较于HPLC和LC，增加了分析的通量，灵敏度，和色谱峰容量，表现更为出色。
因此，也常和MS连用，用于植物激素分离鉴定。
（MS-MS）串联质谱可以进一步进行激素的结构分析，结合多反应选择监控（MRM）可以提高选择性和定量检测限度。
内标法可以使结果更为灵敏和可靠。
图3、LC/MS。
其他方法：其他还有毛细血管技术（CE）、光谱法、电化学法等，但是由于自身技术的限制，都没有质谱法应用广泛。
比如，毛细管技术虽然样本消耗少、分离效果好，但是灵敏度和重现性方面表现略差。
参考文献：
1. 李艳华. 基于质谱技术的植物激素高效分析方法研究[D]. 中国农业科学院, 2011.
2. 陈菲, 陈丽璇, 刘鸿洲, et al. 质谱技术在植物内源激素检测中的应用(综述)[J]. 亚热带植物科学, 2010, 39(4).
3. Novak, O., R. Napier and K. Ljung (2017). "Zooming In on Plant Hormone Analysis: Tissue- and Cell-Specific Approaches." Annu Rev Plant Biol 68: 323-348.。