第十二章厌氧菌和分枝杆菌
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病原生物学- 厌氧菌
腐物中; 3.培养:专性厌氧菌; 4.致病性:多为外源性感染; 5.防治:用类毒素预防、抗毒素治疗。
一 破伤风梭菌 (一)生物学特性
1．G+细长杆菌，芽胞位于菌体顶端且大于菌体, 呈鼓槌状。芽胞抵抗力强，土壤中存活数十 年。耐100℃ 60分钟。对青霉素敏感。
2．培养
普通平板上迁徙生长,血平板上形成溶血环。在庖肉 培养基上生长，出现混浊变黑，右侧试管未接种。
(三）微生物学检查
用动物实验查出毒素： 1组：食物或呕吐物上清0.5ml给小鼠腹腔注射。 2组：煮沸上清液0.5ml。 3组: 上清液0.5ml加多价抗毒素血清。
（四）防治
加强食品卫生；治疗用多价抗毒素血清，早期 足量，并对症治疗。
陕西肉毒毒素中毒事件值得警觉
母亲自制的豆腐乳，改变了王录社一家的命运 2003年07陕西省岐山县安乐乡唐家岭村王录社
四、艰难梭菌 C.difficile
为肠道内正常菌群，专性厌氧， 菌群失调时引起伪膜性肠炎。
第二节 无芽胞厌氧菌
1.致病条件：无芽胞厌氧菌是人体的正常菌群， 为机会性致病菌，引起内源性感染。 ① 由于机械或物理损伤导致它们侵入非正常 寄居部位。 ② 局部形成厌氧环境。 ③ 菌群失调和机体抵抗力下降。
1、直接涂片、染色镜检：G＋有荚膜大杆菌伴有 其它杂菌，WBC减少、形态不规则。 2．分离培养及鉴定：
厌氧培养：“汹涌发酵”或接种小白鼠死后剖 检，尸体膨胀恶臭，“泡沫肝”。
（四）防治 1．彻底清创、抗菌治疗，注射多价抗血清。 2．高压氧舱治疗，必要时手术截肢。
三、肉毒梭菌C.botulinum
（一）生物学性状 1．培养：严格厌氧、血平板形成β溶血环。 2．抵抗力：芽胞耐100 ℃数小时， 121℃ 30分。肉毒毒素100℃1分钟即被破坏。 但酸性条件下稳定，胃液中1天不破坏。 3. 分型：按抗原性分为7型，仅A、B、E型 对人致病。
一 破伤风梭菌 (一)生物学特性
1．G+细长杆菌，芽胞位于菌体顶端且大于菌体, 呈鼓槌状。芽胞抵抗力强，土壤中存活数十 年。耐100℃ 60分钟。对青霉素敏感。
2．培养
普通平板上迁徙生长,血平板上形成溶血环。在庖肉 培养基上生长，出现混浊变黑，右侧试管未接种。
(三）微生物学检查
用动物实验查出毒素： 1组：食物或呕吐物上清0.5ml给小鼠腹腔注射。 2组：煮沸上清液0.5ml。 3组: 上清液0.5ml加多价抗毒素血清。
（四）防治
加强食品卫生；治疗用多价抗毒素血清，早期 足量，并对症治疗。
陕西肉毒毒素中毒事件值得警觉
母亲自制的豆腐乳，改变了王录社一家的命运 2003年07陕西省岐山县安乐乡唐家岭村王录社
四、艰难梭菌 C.difficile
为肠道内正常菌群，专性厌氧， 菌群失调时引起伪膜性肠炎。
第二节 无芽胞厌氧菌
1.致病条件：无芽胞厌氧菌是人体的正常菌群， 为机会性致病菌，引起内源性感染。 ① 由于机械或物理损伤导致它们侵入非正常 寄居部位。 ② 局部形成厌氧环境。 ③ 菌群失调和机体抵抗力下降。
1、直接涂片、染色镜检：G＋有荚膜大杆菌伴有 其它杂菌，WBC减少、形态不规则。 2．分离培养及鉴定：
厌氧培养：“汹涌发酵”或接种小白鼠死后剖 检，尸体膨胀恶臭，“泡沫肝”。
（四）防治 1．彻底清创、抗菌治疗，注射多价抗血清。 2．高压氧舱治疗，必要时手术截肢。
三、肉毒梭菌C.botulinum
（一）生物学性状 1．培养：严格厌氧、血平板形成β溶血环。 2．抵抗力：芽胞耐100 ℃数小时， 121℃ 30分。肉毒毒素100℃1分钟即被破坏。 但酸性条件下稳定，胃液中1天不破坏。 3. 分型：按抗原性分为7型，仅A、B、E型 对人致病。
【学习课件】第12章厌氧性细菌
2021/7/9
一、破伤风梭菌 （C.tetani）
（一）生物学性状（掌握） （二）致病性与免疫性（掌握、难点） （三）微生物学检查法（了解） （四）防治原则（掌握）
2021/7/9
（一）生物学性状
❖形态与染色
▪ 鼓槌状杆菌，散在排列， G＋ ▪ 周鞭毛、无荚膜、芽胞大于菌体位于一端
2021/7/9
Anaerobic bacteria
2021/7/9
厌氧性细菌
厌氧芽胞梭菌
无芽胞厌氧菌
破伤风梭菌
破伤风
（掌握）
产气荚膜梭菌
气性坏疽
（熟悉）
肉毒梭菌
肉毒中毒
（熟悉）
条 件 致 病 菌
（了解）
2021/7/9
厌氧芽胞梭菌的共同特性
1.革兰阳性大杆菌，大多数严格厌氧。
2021/7/9
厌氧培养法
❖庖肉培养基法 ❖焦性没食子酸吸氧法 ❖厌氧罐法 ❖厌氧气袋法 ❖厌氧培养箱法
生物学作用 A
卵磷 脂 酶， 增 加血 管 通透 性 ，
溶血和坏死作用
+
坏死作用
-
增加胃肠壁通透性
-
坏死作用，增加血管通透性
-
溶血素
-
溶血素，细胞毒素
±
胶原酶、明胶酶、坏死作用
+
蛋白酶
-
μ (mu)
透明质酸酶
±
ν (nu)
DNA 酶
±
神经氨酸酶
改变神经节苷脂受体
+
其它
肠毒素
肠毒素、细胞毒素
+
+ 大多菌株产生；± 某些菌株产生；-不产生；nt 未研究
只能被同型抗毒素中和。 ❖ 肉毒毒素不耐热，煮沸1分钟即可被破坏。
一、破伤风梭菌 （C.tetani）
（一）生物学性状（掌握） （二）致病性与免疫性（掌握、难点） （三）微生物学检查法（了解） （四）防治原则（掌握）
2021/7/9
（一）生物学性状
❖形态与染色
▪ 鼓槌状杆菌，散在排列， G＋ ▪ 周鞭毛、无荚膜、芽胞大于菌体位于一端
2021/7/9
Anaerobic bacteria
2021/7/9
厌氧性细菌
厌氧芽胞梭菌
无芽胞厌氧菌
破伤风梭菌
破伤风
（掌握）
产气荚膜梭菌
气性坏疽
（熟悉）
肉毒梭菌
肉毒中毒
（熟悉）
条 件 致 病 菌
（了解）
2021/7/9
厌氧芽胞梭菌的共同特性
1.革兰阳性大杆菌，大多数严格厌氧。
2021/7/9
厌氧培养法
❖庖肉培养基法 ❖焦性没食子酸吸氧法 ❖厌氧罐法 ❖厌氧气袋法 ❖厌氧培养箱法
生物学作用 A
卵磷 脂 酶， 增 加血 管 通透 性 ，
溶血和坏死作用
+
坏死作用
-
增加胃肠壁通透性
-
坏死作用，增加血管通透性
-
溶血素
-
溶血素，细胞毒素
±
胶原酶、明胶酶、坏死作用
+
蛋白酶
-
μ (mu)
透明质酸酶
±
ν (nu)
DNA 酶
±
神经氨酸酶
改变神经节苷脂受体
+
其它
肠毒素
肠毒素、细胞毒素
+
+ 大多菌株产生；± 某些菌株产生；-不产生；nt 未研究
只能被同型抗毒素中和。 ❖ 肉毒毒素不耐热，煮沸1分钟即可被破坏。
12 厌氧菌
Ø必须在无氧环境下才能生长繁殖的细菌 厌氧芽胞梭菌Ø根据能否形成芽胞无芽胞厌氧菌ØG +大杆菌，可形成芽胞；Ø广泛分布于土壤、人和动物肠道；Ø抵抗力强；Ø可产生强烈外毒素，引起破伤风、气性坏疽、肉毒中毒等，多数为外源性感染；Ø专性厌氧培养。
Ø是破伤风的病原菌。
Ø外伤感染后死亡率达20%，新生儿死亡率可高达90%。
Ø世界上每年约有100万病例发生，死亡率在30-50%之间，其中一半的死亡病例是新生儿。
G+杆菌，周身鞭毛，无荚膜，形成芽胞后菌体成鼓槌状严格厌氧大多生化反应阴性 芽胞抵抗力强致病物质： 溶血毒素（tetanolysin ） 痉挛毒素（tetanospasmin ） 裂解成A 链（轻链）和B 链（重链）B 链与运动神经元胞浆膜上受体结合，A 链进入胞浆 A 链进入CNS ，阻止上下神经元间正常抑制性神经冲动传递，造成骨骼肌强直性痉挛对脊髓前角细胞和脑干神经细胞有高度的亲和力侵入伤口，伤口厌氧微环境细菌仅在局部繁殖，释放毒素 破伤风（牙关紧闭，苦笑面容，角弓反张等）致病过程1、组织开放性损伤，创口较深。
2、受到外界破伤风梭菌侵入。
3、创口内有失活组织或局部组织缺血缺氧。
破伤风免疫属外毒素免疫，主要是抗毒素发挥中和作用。
破伤风痉挛毒素毒性很强，极少量毒素即可致病，而如此少量的毒素尚不足以引起免疫，且毒素与组织结合后，也不能有效刺激免疫系统产生抗毒素，故一般病后不会获得牢固免疫力。
获得有效抗毒素的途径是进行人工免疫。
Ø伤口直接涂片镜检，病菌分离培养阳性率低Ø主要根据典型症状和病史作出诊断清创扩创，防止厌氧微环境形成。
人工主动免疫：破伤风类毒素或白百破三联疫苗。
感染早期立即注射破伤风抗毒素(TAT)，即人工被动免疫；还可注射免疫球蛋白。
* 注射TAT之前一定要皮试治疗原则:1、抗毒素：应早期、大量中和游离外毒素。
10-厌氧菌、分枝杆菌、棒状杆菌
• 据WHO预计，目前全球约20亿人已感 WHO预计 目前全球约20亿人已感 预计， 染了MTB。 染了MTB。 • 全球现有TB病人2000万。 全球现有TB病人 病人2000万 • TB的死亡将达历史最高水平，全球每 TB的死亡将达历史最高水平 的死亡将达历史最高水平， 天有8000 人死于 ， 每年约300 万人 人死于TB 天有 8000人死于 TB， 每年约 300万人 死于TB 特别是在发展中国家， 死于TB 。特别是在发展中国家，TB 的形势尤其严峻，全球98％ TB死亡 的形势尤其严峻，全球98％的TB死亡 95％的新发TB都是在发展中国家 都是在发展中国家。 和95％的新发TB都是在发展中国家。
• 所致疾病
– 食物中毒 • 进食污染食物（多为罐头、肉制品、豆制品）发生食物中毒-进食污染食物（多为罐头、肉制品、豆制品）发生食物中毒--食入毒素 • 临床表现：少见胃肠道症状，主要为神经末梢麻痹（松驰型） 临床表现：少见胃肠道症状，主要为神经末梢麻痹 松驰型） 神经末梢麻痹（
– 婴儿肉毒病
• 细菌进入肠道，繁殖，产生毒素而致病 细菌进入肠道，繁殖， • 以6个月以内的小婴儿居多
免疫性
• 破伤风免疫属抗毒素免疫，主要是抗毒 破伤风免疫属抗毒素免疫， 素发挥中和作用（ 素发挥中和作用（毒素与中枢神经组织 结合非常牢固， 结合非常牢固，一旦结合即非抗毒素所 能中和） 能中和） • 病后不会获得牢固免疫力 • 获得有效抗毒素的途径是人工免疫 类 获得有效抗毒素的途径是人工免疫—类 毒素
• 德国科学家Robert Koch在1882年发现了 德国科学家Robert Koch在1882年发现了 一种特殊的微生物—— 结核杆菌 结核杆菌， 一种特殊的微生物 ——结核杆菌 ， 结核 病的致病细菌。 病的致病细菌 。 他还证明了这种微生物 是可以在培养基里培养出来的。 是可以在培养基里培养出来的 。 这一发 现使得结核的实验研究成为现实。 现使得结核的实验研究成为现实。
厌氧菌讲义PPT课件
（一）标本采集与运送
1.厌氧菌标本的采集 ➢采集原则：体表及其与外界相通的腔
道，即有正常菌群寄生的部位的标本 ，不宜作厌氧菌检查。 ➢采集方法：针筒穿刺抽取，严格无菌 操作，尽量避免接触空气。
原则上只有在正常情况下无菌的部 位采取的标本(如血、胸腔抽出液、心包 液、腹腔液、关节液、胆汁、外科手术 取出的脓、深部脓肿抽出物、膀胱穿刺 抽出的尿)适于做厌氧培养。被正常菌群 污染的标本(如大便、自行排出的尿、直 接咳出的痰、胃和十二指肠引流液、前 列腺分泌物、支气管镜冲洗液等)不宜做 厌氧培养
2.厌氧菌药敏试验指征：
➢ 严重感染，如心内膜炎、脑脓肿、骨髓 炎治疗时期长，观察药物敏感性变化。
➢ 慢性感染 ➢ 经验用药无效 ➢ 对新药评价 ➢ 耐药监测
3.药敏试验方法 ➢ ATB ANA厌氧菌药敏实验：挑取菌落于
API 20 A培养基，制成3McF的菌悬液， 吸取200uL 至ATB S 培养基接种试条，厌 氧环境下培养24-48 小时，仪器或手工判
2.厌氧菌生长速度慢，实验室报告结果时间较长， 对临床及时指导不够，这是临床医生不愿送标 本的主要原因。
3.临床微生物实验室对开展厌氧菌检验态度不够 积极，主要由于：培养庆氧菌所需要的条件比 较高，操作程序繁琐,花费的成本高，效益低。
二、厌氧菌的基本概念
（一）细菌分类(根椐对氧分子的需求）
专性需氧菌：结核分枝杆菌，星状诺卡 菌
（五）厌氧菌的鉴定
1.API鉴定系统：挑取菌落于API 20 A培养基，制 成3McF的菌悬液，移至API 20 A的试条中，放 厌氧环境中培养24小时，加相应的试剂，判读 结果。
2.ATB快速鉴定系统：挑取菌落于悬浮培养基，制 成4McF的菌悬液，移至Rapid ID 20A的鉴定试 条，于普通培养箱37度培养4小时，加相应的 试剂，仪器判读结果。
第章厌氧菌ppt课件
第十五章
厌氧菌
郑州大学第一临床学院
冯羡菊
2019
-
1
第一节
概
述
厌氧性细菌(anaerobic bacteria)指一 群在有氧条件下不能生长，必须在无氧条件 下才能生长繁殖的细菌。
2019
-
2
厌氧菌的分类
分为两类： 一类为有芽胞厌氧菌，只有一个属，即梭菌属， 共有130个种，以芽胞形式存于体外。 另一类为无芽胞厌氧菌， 包括40多个属， 300 多个菌种和亚种；多为体内正常菌 群， 存在于皮肤、口腔、上呼吸道、肠道和泌尿生 殖道。易引起这些部位的内源性感染。
坏死梭杆菌形态
2019
-
27
致病性
坏死梭杆菌是毒力很强的梭杆菌，常引起急性 扁桃体炎，有时并发单核细胞增多症，是儿童 和青年人扁桃体周围脓肿中最常分离到的厌氧 菌。局部症状还包括颈间隙感染和颈静脉脓毒 性血栓静脉炎，尚可引起胸膜渗出性脓胸、增 生性转移脓肿和菌血症。
2019
-
28
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ五节
革兰阳性无芽胞厌氧杆菌
2019革兰染色形态及其他特征脆弱类杆菌两端钝圆着色深中间色浅不均匀有空泡长短不一标本有琥珀味产黑色素普雷沃菌球杆菌可见多形性长短不一紫外线照射发红色荧光标本有恶臭具核酸杆菌菌体细长两头尖紫色颗粒沿菌体长轴成双排列标本有丁酸味坏死梭杆菌菌体细长高度多形性长短不一菌体中部膨胀呈圆球形韦荣球菌极小的革兰阴性球菌消化链球菌球形或卵圆形呈链状的小球菌易染成阴性乳酸杆菌细长无芽胞有时多形性标本有乳酸气味痤疮丙酸杆菌排列呈xyv或栅状标本有丙酸气味放线菌分枝呈棒状xyv或栅状排列脓汁中的黄色颗粒呈琥珀酸气味破伤风梭菌细长鼓槌状极端芽胞圆形产气荚膜梭菌粗大杆菌呈单或双排列有芽胞有荚膜艰难梭菌粗长杆菌芽胞卵圆形或长方形位于次极端2019初代培养
厌氧菌
郑州大学第一临床学院
冯羡菊
2019
-
1
第一节
概
述
厌氧性细菌(anaerobic bacteria)指一 群在有氧条件下不能生长，必须在无氧条件 下才能生长繁殖的细菌。
2019
-
2
厌氧菌的分类
分为两类： 一类为有芽胞厌氧菌，只有一个属，即梭菌属， 共有130个种，以芽胞形式存于体外。 另一类为无芽胞厌氧菌， 包括40多个属， 300 多个菌种和亚种；多为体内正常菌 群， 存在于皮肤、口腔、上呼吸道、肠道和泌尿生 殖道。易引起这些部位的内源性感染。
坏死梭杆菌形态
2019
-
27
致病性
坏死梭杆菌是毒力很强的梭杆菌，常引起急性 扁桃体炎，有时并发单核细胞增多症，是儿童 和青年人扁桃体周围脓肿中最常分离到的厌氧 菌。局部症状还包括颈间隙感染和颈静脉脓毒 性血栓静脉炎，尚可引起胸膜渗出性脓胸、增 生性转移脓肿和菌血症。
2019
-
28
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ五节
革兰阳性无芽胞厌氧杆菌
2019革兰染色形态及其他特征脆弱类杆菌两端钝圆着色深中间色浅不均匀有空泡长短不一标本有琥珀味产黑色素普雷沃菌球杆菌可见多形性长短不一紫外线照射发红色荧光标本有恶臭具核酸杆菌菌体细长两头尖紫色颗粒沿菌体长轴成双排列标本有丁酸味坏死梭杆菌菌体细长高度多形性长短不一菌体中部膨胀呈圆球形韦荣球菌极小的革兰阴性球菌消化链球菌球形或卵圆形呈链状的小球菌易染成阴性乳酸杆菌细长无芽胞有时多形性标本有乳酸气味痤疮丙酸杆菌排列呈xyv或栅状标本有丙酸气味放线菌分枝呈棒状xyv或栅状排列脓汁中的黄色颗粒呈琥珀酸气味破伤风梭菌细长鼓槌状极端芽胞圆形产气荚膜梭菌粗大杆菌呈单或双排列有芽胞有荚膜艰难梭菌粗长杆菌芽胞卵圆形或长方形位于次极端2019初代培养
兽医微生物学-革兰氏阳性无芽胞杆菌(李氏杆菌+丹毒杆菌+分枝杆菌)
结核分支杆菌
2. 分离培养：将病料中加入6％ 硫酸或 4％ NaOH溶液处理15min后，经中和、离心， 取少许沉淀物接种在培养基斜面上，每份 病料接4～6管，管口封严，置37℃培养8 周，每周观察一次，培养阳性时，需进行 培养特性和生化特性鉴定。
第一群
产单核细胞李氏杆菌 L.monocytogenes
伊氏李氏杆菌
L.ivanovii
无害李氏杆菌
L.innocua
韦氏李氏杆菌
L.welshimer
塞氏李氏杆菌 L.seeligeri
第二群---格氏李氏杆菌
L.grayi
产单核细胞李氏杆菌，引 致人和动物的李氏杆菌病。
第一群
产单核细胞李氏杆菌 L.monocytogenes
（七）微生物学诊断
1、显微镜检查：取患病动物结节及病变 与非病变交界处组织直接涂片，抗酸 染色后镜检，如发现红色成丛杆菌时， 可做出初步诊断。 结核杆菌，菌体细长，直或微弯。 牛型菌比人型菌粗而短， 禽型菌呈多形性。菌体呈单个散在 排列，少数成对、成丛。
结核杆菌（抗酸染色）
禽分支杆菌
禽分支杆菌
30℃～37℃。 • 4、血平板上生长茂盛，透明，灰白色露滴
状小菌落，α溶血； • 5、明胶穿刺：沿穿刺线横向四周生长，呈
试管刷状，但不液化明胶。
三、生化特性
• 1、糖类发酵：葡、果、乳，＋ • 2、接触酶：－ • 3、IMViC：－－－－ • 4、H2S：＋ • 5、不分解尿素
四、血清型
• 根据肽聚糖抗原可分为：25个血清 型和1a、1b、2a、2b四个亚型。
37℃～37.5℃，在30℃～34℃可生长； 禽分支杆菌可在42℃生长。
2、生长慢，初代分离1-2周才开始生长， 3-4周才能旺盛生长。生长速度：禽型菌 ＞人型菌＞牛型菌。
初中八年级(初二)生物 第12章厌氧性细菌
毒素（tetanus antitoxin，TAT）以获 得被动免疫作紧急预防 对已发病者，特异性治疗包括早期足量 使用抗毒素及抗生素两方面
二、 产气荚膜梭菌
(C染色
革兰阳性粗大杆菌 芽胞位于次极端，无鞭毛 在体内有明显的荚膜
菌、肉毒梭菌等
病例讨论
李春波，男，55岁，农民。 主诉：因张口困难，全身抽筋而急诊入院。
病史：一周前在地里劳动时，不慎被一绣铁钉刺 破左足底。伤口立即由“赤脚医生”处理包扎， 但至今未愈。入院前24h开始张口困难，逐渐加 重，不能进食。颈项发硬，不能弯腰。５h前开始 全身抽筋，发作历时几秒钟，间歇20～30min。
2.培养特性
厌氧。繁殖周期为 8分钟
血琼脂平板上，双 层溶血环
牛奶培养基中，可 出现“汹涌发酵。
(二)致病性
1.致病物质
α毒素—卵磷脂酶
分解细胞膜上卵磷脂，引起溶血、组织坏死、 水肿、出血
在气性坏疽的形成中起主要作用
胶原酶、透明质酸酶、DNA酶等毒素的 分解破坏作用，造成气肿及组织坏死
（一）生物学性状
1. 菌体细长，有周鞭毛，芽胞呈鼓槌状,G+ 2.芽胞抵抗力很强，在100 °C 1h才被破坏，
在土壤中可存活数十年 3. 严格厌氧，不分解糖类、蛋白质。
（二）致病性与免疫性
1. 致病条件
伤口需形成厌氧微环境 伤口窄而深（如刺伤）; 有泥土或异物污染; 大面积创伤、烧伤，坏死组织多，局部 组织缺血; 同时有需氧菌或兼性厌氧菌混合感染的 伤口;
势高的呼吸酶； 根据能否形成芽胞，可分为
厌氧芽胞梭菌属：引起外源创伤感染 无芽胞厌氧菌：引起内源性感染
第一节 厌氧芽胞梭菌属(Clostridium)
二、 产气荚膜梭菌
(C染色
革兰阳性粗大杆菌 芽胞位于次极端，无鞭毛 在体内有明显的荚膜
菌、肉毒梭菌等
病例讨论
李春波，男，55岁，农民。 主诉：因张口困难，全身抽筋而急诊入院。
病史：一周前在地里劳动时，不慎被一绣铁钉刺 破左足底。伤口立即由“赤脚医生”处理包扎， 但至今未愈。入院前24h开始张口困难，逐渐加 重，不能进食。颈项发硬，不能弯腰。５h前开始 全身抽筋，发作历时几秒钟，间歇20～30min。
2.培养特性
厌氧。繁殖周期为 8分钟
血琼脂平板上，双 层溶血环
牛奶培养基中，可 出现“汹涌发酵。
(二)致病性
1.致病物质
α毒素—卵磷脂酶
分解细胞膜上卵磷脂，引起溶血、组织坏死、 水肿、出血
在气性坏疽的形成中起主要作用
胶原酶、透明质酸酶、DNA酶等毒素的 分解破坏作用，造成气肿及组织坏死
（一）生物学性状
1. 菌体细长，有周鞭毛，芽胞呈鼓槌状,G+ 2.芽胞抵抗力很强，在100 °C 1h才被破坏，
在土壤中可存活数十年 3. 严格厌氧，不分解糖类、蛋白质。
（二）致病性与免疫性
1. 致病条件
伤口需形成厌氧微环境 伤口窄而深（如刺伤）; 有泥土或异物污染; 大面积创伤、烧伤，坏死组织多，局部 组织缺血; 同时有需氧菌或兼性厌氧菌混合感染的 伤口;
势高的呼吸酶； 根据能否形成芽胞，可分为
厌氧芽胞梭菌属：引起外源创伤感染 无芽胞厌氧菌：引起内源性感染
第一节 厌氧芽胞梭菌属(Clostridium)
医学微生物学：实验课5 厌氧性细菌和分枝杆菌
（一）实验材料 １、卡介苗或结核病人痰液 2、抗酸染色液等 （二）实验方法 １、用接种环取卡介苗2～3环。涂片、干燥和固定。 ２、用抗酸染色法染色。 ３、镜检。 （三）实验原理
结核分枝杆菌细胞壁含有大量脂质，一般不易着色， 若经高温或延长染色时间而着色后能抵抗盐酸酒精的脱色。
【染液】
抗酸性染液（一）（石炭酸复红液 Carbon fuchsin ） 抗酸性染液（二）（3%盐酸酒精 3%Acid-alcohol ） 抗酸性染液（三）（碱性美兰液 Alkaline methylene blue ）
一、厌氧芽胞梭菌的形态染色特征
1、破伤风梭菌(C. tetani) ：革兰阳性，菌 体细长杆状，芽胞圆形，位于菌体顶端， 大于菌体，使细菌呈鼓槌状。
2、产气荚膜梭菌（ C. perfrigens ）：革兰阳性， 粗大杆状，芽胞椭圆形，位于菌体次极端，但体 内标本不易看到芽胞，只见到四周有明显的荚膜。
（四）操作步骤：
初染：将已固定的标本片用染色夹夹好，玻片上加一小块吸 水纸片（防止染液流洒），然后滴加石炭酸复红染液，在酒 精灯上微微加热，直到染液冒出蒸气为止（不可煮沸和煮 干),及时补充染液,维持3~5min，水洗。
脱色：用3%盐酸酒精脱色30sec，脱色时应轻轻晃动玻片。 水洗。
复染：滴加碱性美兰液复染1min，水洗。 用吸水纸吸干，镜检。
实验五
厌氧性细菌和分枝杆菌
ANAEROBES AND MYCOBACTERIUM
目的要求
1. 熟悉破伤风梭菌(C. tetani)、产气荚膜梭菌(C. perfrigens )与肉毒梭菌(C. botulinum)形态及染色性
2. 熟悉厌氧培养方法（Anaerobic cultivation methods） 3. 掌握抗酸染色法(Acid-fast stain)
结核分枝杆菌细胞壁含有大量脂质，一般不易着色， 若经高温或延长染色时间而着色后能抵抗盐酸酒精的脱色。
【染液】
抗酸性染液（一）（石炭酸复红液 Carbon fuchsin ） 抗酸性染液（二）（3%盐酸酒精 3%Acid-alcohol ） 抗酸性染液（三）（碱性美兰液 Alkaline methylene blue ）
一、厌氧芽胞梭菌的形态染色特征
1、破伤风梭菌(C. tetani) ：革兰阳性，菌 体细长杆状，芽胞圆形，位于菌体顶端， 大于菌体，使细菌呈鼓槌状。
2、产气荚膜梭菌（ C. perfrigens ）：革兰阳性， 粗大杆状，芽胞椭圆形，位于菌体次极端，但体 内标本不易看到芽胞，只见到四周有明显的荚膜。
（四）操作步骤：
初染：将已固定的标本片用染色夹夹好，玻片上加一小块吸 水纸片（防止染液流洒），然后滴加石炭酸复红染液，在酒 精灯上微微加热，直到染液冒出蒸气为止（不可煮沸和煮 干),及时补充染液,维持3~5min，水洗。
脱色：用3%盐酸酒精脱色30sec，脱色时应轻轻晃动玻片。 水洗。
复染：滴加碱性美兰液复染1min，水洗。 用吸水纸吸干，镜检。
实验五
厌氧性细菌和分枝杆菌
ANAEROBES AND MYCOBACTERIUM
目的要求
1. 熟悉破伤风梭菌(C. tetani)、产气荚膜梭菌(C. perfrigens )与肉毒梭菌(C. botulinum)形态及染色性
2. 熟悉厌氧培养方法（Anaerobic cultivation methods） 3. 掌握抗酸染色法(Acid-fast stain)
临床常见细菌—分枝杆菌(病原生物学课件)
生长缓慢
人型结核分枝杆菌、牛型分枝杆菌
非典型分枝杆菌
Ⅰ组
生长缓慢、光产色
堪萨斯分枝杆菌、海分枝杆菌
Ⅱ组
生长缓慢、暗产色
瘰疠分枝杆菌
Ⅲ组
生长缓慢、不产色
鸟-胞内分枝杆菌
Ⅳ组
生长快速、
偶发分枝杆菌
麻风分枝杆菌
人工培养基上不生长
第一节 结核分枝杆菌
一、生物学性状1.形态与染色细长略弯，分枝状排列或聚集成团。抗酸染色阳性，菌体染成红色，非抗酸菌染成蓝色。G+，不易着色
＋
100个视野内发现1~9条抗酸菌
2＋
10个视野内发现1~9条抗酸菌
3＋
每个视野内发现1~9条抗酸菌
4＋
每个视野内发现9条以上抗酸菌
(三)临床意义1.致病物质：主要与菌体成份有关。（1）脂质索状因子:引起慢性肉芽肿分枝菌酸：与抗酸性有关蜡质D:具有佐剂作用硫酸脑苷脂:阻碍吞噬磷脂:促类上皮细胞形成，与结核结节形成有关（2）蛋白质：诱发超敏反应（3）糖类：抵抗吞噬作用
分枝杆菌及检验
分枝杆菌（Mycobacterium） 一类细长弯曲的杆菌，因有分枝生长的趋势而得名主要特点细长弯曲，细胞壁含有大量脂质，分枝状生长。常用抗酸染色鉴定（抗酸阳性呈红色）。引起疾病多呈慢性，且伴肉芽肿。
分枝杆菌的分类
分类
生长特性
主要对人致病的分枝杆菌
结核分枝杆菌
犰狳
2.临床意义:1.传播途径：主要是密切接触2.所致疾病：麻风（侵害皮肤、粘膜和神经系统）3.临床分型：瘤型（占20%～30%，传染性强）结核样型（占60%～70%，传染性弱）界线类（可转化为以上两型）
3.防治原则：早发现（检验时，标本通常采用刮片），早隔离、早治疗治疗药物主要有砜类（氨苯砜、苯丙砜、醋氨苯砜）、利福平、氯苯吩嗪及丙硫异烟胺。
人型结核分枝杆菌、牛型分枝杆菌
非典型分枝杆菌
Ⅰ组
生长缓慢、光产色
堪萨斯分枝杆菌、海分枝杆菌
Ⅱ组
生长缓慢、暗产色
瘰疠分枝杆菌
Ⅲ组
生长缓慢、不产色
鸟-胞内分枝杆菌
Ⅳ组
生长快速、
偶发分枝杆菌
麻风分枝杆菌
人工培养基上不生长
第一节 结核分枝杆菌
一、生物学性状1.形态与染色细长略弯，分枝状排列或聚集成团。抗酸染色阳性，菌体染成红色，非抗酸菌染成蓝色。G+，不易着色
＋
100个视野内发现1~9条抗酸菌
2＋
10个视野内发现1~9条抗酸菌
3＋
每个视野内发现1~9条抗酸菌
4＋
每个视野内发现9条以上抗酸菌
(三)临床意义1.致病物质：主要与菌体成份有关。（1）脂质索状因子:引起慢性肉芽肿分枝菌酸：与抗酸性有关蜡质D:具有佐剂作用硫酸脑苷脂:阻碍吞噬磷脂:促类上皮细胞形成，与结核结节形成有关（2）蛋白质：诱发超敏反应（3）糖类：抵抗吞噬作用
分枝杆菌及检验
分枝杆菌（Mycobacterium） 一类细长弯曲的杆菌，因有分枝生长的趋势而得名主要特点细长弯曲，细胞壁含有大量脂质，分枝状生长。常用抗酸染色鉴定（抗酸阳性呈红色）。引起疾病多呈慢性，且伴肉芽肿。
分枝杆菌的分类
分类
生长特性
主要对人致病的分枝杆菌
结核分枝杆菌
犰狳
2.临床意义:1.传播途径：主要是密切接触2.所致疾病：麻风（侵害皮肤、粘膜和神经系统）3.临床分型：瘤型（占20%～30%，传染性强）结核样型（占60%～70%，传染性弱）界线类（可转化为以上两型）
3.防治原则：早发现（检验时，标本通常采用刮片），早隔离、早治疗治疗药物主要有砜类（氨苯砜、苯丙砜、醋氨苯砜）、利福平、氯苯吩嗪及丙硫异烟胺。
实验五 尿标本、厌氧菌、分枝杆菌
8
㈣ 检验程序
尿标本（中段尿）
涂 片 定量培养
分离培养
淋病奈瑟菌培养
直接 离心
革抗 兰酸 染染 色色
菌落计数
BAP/ MAK/ EMB
37℃ 18～24h
可疑菌落
巧克力培养基
37℃ 24～36h 5% CO2
涂片GS 鉴定试验 药物敏感试验
9
定量取样方法：
菌落计数
1. 标准定量接种环：用1μl或10μl 的标准定量接种环， 以垂直方向持拿，使环圈刚好浸入尿液表面（不可使尿 液碰到取菌环上方的环柄），取尿液进行接种。
膀胱穿刺尿 任意数目
所有细菌都有意义，需做鉴定和药敏，
注：中段尿和导尿标本有4种以上微生物生长均报告“标本污染”。
11
㈤ 结果评价与报告
2. 检测结果的报告方法
阴性结果报告：培养48 h 无菌落生长或菌落数未达到即为阴性。
报告方式:“培养48 h无菌生长”或直接报告菌落数(CFU/m1) 。
可疑结果报告：
2. 微量移液器法：无定量接种环的实验室，可使用无菌的5 μl 微量 移液器吸取尿液加入平板，再用接种环划线接种，将平板菌落数乘 以200，即为每ml 尿液中所含有的细菌数（CFU/ ml）。
3. 普通接种环法：
定量接种基数法：
直接划线法、倾注平板法。
10
㈤ 结果评价与报告
1. 不同方法采集的尿标本培养结果评价
（4）留置导尿管: 先消毒导尿管外部，按无菌操作
方法用注射器穿刺导尿管吸取尿液。防止混入消 毒剂，注意不能从尿液收集袋中采集尿液。
（5）小儿尿液收集包：用于无自控能力的小儿。很
难避免会阴部菌群污染产生假阳性，所以只有在 检验结果为阴性时才有意义。如果结果为阳性， 应结合临床进行分析。
实验6 厌氧菌、棒状杆菌、分枝杆菌等
血琼脂平板：双层溶血环 内环完全溶血-θ毒素 外环不完全溶血- α毒素
蛋黄琼脂平板：Nagler反应 牛奶培养基：“汹涌发酵”
Nagler反应
产气荚膜梭菌产生 卵磷脂酶分解卵黄
中卵磷脂所致
汹涌发酵
将产气杆菌 接种于紫牛 奶培养基中
在牛奶中分解乳糖， 使其中酪蛋白凝固
细菌产生大量H2和CO2
白喉棒状杆菌生物学特性
蛋黄, 马铃薯, 甘油， 孔雀绿
麻风分枝杆菌
•形态、染色与结核分枝杆菌相似 •麻风分枝杆菌是一种典型胞内菌 (麻风细胞) •体外人工培养至今仍未成功
Albert 染色法
•制片同革兰染色 •甲液染5分钟→水洗→再以乙液（碘液）染1分钟 →水洗→印干→油镜检
抗酸染色法
抗酸染色法(acid-fast stain) ：以5％石炭酸复红
Albert染色(异染颗粒)
Elek平板试验结果
白喉杆菌菌苔 沉淀线(阳性) 含白喉抗毒素滤纸片
Elek Test
结核杆菌
形态与染色
细长略带弯曲 细胞壁脂质含量高，肽聚糖外大量分
枝菌酸 齐－尼抗酸染色阳性
培养特点
专性需氧 • 液体培养基 ： 表面生长 ( 菌膜) • 固体培养基： 粗糙型菌落 (菜花状) 生长缓慢,营养要求高,常用罗氏培养基
实验六
厌氧性细菌、棒状杆菌、分枝杆菌等
Content
示教 破伤风梭菌及产气荚膜梭菌的形态、染色性及培养特性 Nagler反应、汹涌发酵 结核分枝杆菌：抗酸染色法，液体、固体培养 麻风分枝杆菌：抗酸染色 白喉棒状杆菌： Albert染色法、吕氏血清斜面、 亚碲酸盐 平板
操作 产气荚膜梭菌致病性实验 病人痰液（结核分枝杆菌）抗酸染色法 口腔螺旋体的检查 肠道致病菌粪便标本的分离与鉴定（续）——血清学反应
蛋黄琼脂平板：Nagler反应 牛奶培养基：“汹涌发酵”
Nagler反应
产气荚膜梭菌产生 卵磷脂酶分解卵黄
中卵磷脂所致
汹涌发酵
将产气杆菌 接种于紫牛 奶培养基中
在牛奶中分解乳糖， 使其中酪蛋白凝固
细菌产生大量H2和CO2
白喉棒状杆菌生物学特性
蛋黄, 马铃薯, 甘油， 孔雀绿
麻风分枝杆菌
•形态、染色与结核分枝杆菌相似 •麻风分枝杆菌是一种典型胞内菌 (麻风细胞) •体外人工培养至今仍未成功
Albert 染色法
•制片同革兰染色 •甲液染5分钟→水洗→再以乙液（碘液）染1分钟 →水洗→印干→油镜检
抗酸染色法
抗酸染色法(acid-fast stain) ：以5％石炭酸复红
Albert染色(异染颗粒)
Elek平板试验结果
白喉杆菌菌苔 沉淀线(阳性) 含白喉抗毒素滤纸片
Elek Test
结核杆菌
形态与染色
细长略带弯曲 细胞壁脂质含量高，肽聚糖外大量分
枝菌酸 齐－尼抗酸染色阳性
培养特点
专性需氧 • 液体培养基 ： 表面生长 ( 菌膜) • 固体培养基： 粗糙型菌落 (菜花状) 生长缓慢,营养要求高,常用罗氏培养基
实验六
厌氧性细菌、棒状杆菌、分枝杆菌等
Content
示教 破伤风梭菌及产气荚膜梭菌的形态、染色性及培养特性 Nagler反应、汹涌发酵 结核分枝杆菌：抗酸染色法，液体、固体培养 麻风分枝杆菌：抗酸染色 白喉棒状杆菌： Albert染色法、吕氏血清斜面、 亚碲酸盐 平板
操作 产气荚膜梭菌致病性实验 病人痰液（结核分枝杆菌）抗酸染色法 口腔螺旋体的检查 肠道致病菌粪便标本的分离与鉴定（续）——血清学反应
第十二章厌氧性细菌
（二）致病性致病物质、所致疾病
（三）微生物学检查法
（四）防治原则
三、肉毒梭菌
（一）生物学性状形态与染色、培养特性和分型
（二）致病性致病物质、所致疾病
（三）微生物学检查法
（四）防治原则
四、艰难梭菌
（一）生物学性状形态与染色
（二）致病性致病物质、所致疾病
第二节无芽胞厌氧菌
（一）生物学性状主要种类、性状和在感染中的作用
3.了解破伤风梭菌和肉毒梭菌的微生物学检查
教学步骤
教学内容：
第十二章厌氧性细菌
第一节厌氧芽胞梭菌
一、破伤风梭菌
（一）生物学性状形态与染色、培养特性和生化反应和抵抗力
（二）致病性与免疫性致病物质、所致疾病和免疫性
（三）微生物学检查法
（四）防治原则
二、产气荚膜梭菌
（一）生物学性状形态与染色、培养特性和分型
（二）致病性致病条件、致病物质、感染特征及所致疾病
（三）微生物学检查
（四）防治原则
时间分配：
2学时
本单元重点、难点
1．破伤风梭菌的主要生物学性状、致病性和防治原则
2．产气荚膜梭菌、肉毒梭菌主要生物学厌氧菌的致病条件、感染特征
4．临床最常见的无芽孢厌氧菌的种类及所致疾病
5．两类厌氧菌感染的不同点
教学方法
理论讲授
教具准备
ppt幻灯片一套
课外作业
见《医学免疫学与病原生物学习题集》
《医学微生物学》教案首页
对象
授课时间
地点
章节课题
第十二章厌氧性细菌
教学目的
与要求
1.掌握破伤风梭菌、产气荚膜梭菌、肉毒梭菌致病性和防治原则；无芽孢厌氧菌的致病条件、感染特征、临床最常见的无芽孢厌氧菌的种类及所致疾病。
（三）微生物学检查法
（四）防治原则
三、肉毒梭菌
（一）生物学性状形态与染色、培养特性和分型
（二）致病性致病物质、所致疾病
（三）微生物学检查法
（四）防治原则
四、艰难梭菌
（一）生物学性状形态与染色
（二）致病性致病物质、所致疾病
第二节无芽胞厌氧菌
（一）生物学性状主要种类、性状和在感染中的作用
3.了解破伤风梭菌和肉毒梭菌的微生物学检查
教学步骤
教学内容：
第十二章厌氧性细菌
第一节厌氧芽胞梭菌
一、破伤风梭菌
（一）生物学性状形态与染色、培养特性和生化反应和抵抗力
（二）致病性与免疫性致病物质、所致疾病和免疫性
（三）微生物学检查法
（四）防治原则
二、产气荚膜梭菌
（一）生物学性状形态与染色、培养特性和分型
（二）致病性致病条件、致病物质、感染特征及所致疾病
（三）微生物学检查
（四）防治原则
时间分配：
2学时
本单元重点、难点
1．破伤风梭菌的主要生物学性状、致病性和防治原则
2．产气荚膜梭菌、肉毒梭菌主要生物学厌氧菌的致病条件、感染特征
4．临床最常见的无芽孢厌氧菌的种类及所致疾病
5．两类厌氧菌感染的不同点
教学方法
理论讲授
教具准备
ppt幻灯片一套
课外作业
见《医学免疫学与病原生物学习题集》
《医学微生物学》教案首页
对象
授课时间
地点
章节课题
第十二章厌氧性细菌
教学目的
与要求
1.掌握破伤风梭菌、产气荚膜梭菌、肉毒梭菌致病性和防治原则；无芽孢厌氧菌的致病条件、感染特征、临床最常见的无芽孢厌氧菌的种类及所致疾病。
《厌氧菌和分枝杆菌》课件
厌氧菌和分枝杆菌
目
CONTENCT
录
• 厌氧菌概述 • 分枝杆菌概述 • 厌氧菌与人类疾病 • 分枝杆菌与人类疾病 • 厌氧菌与分枝杆菌的比较
01
厌氧菌概述
厌氧菌的定义
厌氧菌：是指在无氧环境中生长繁殖的细菌，通常 存在于人体内部、外部的缺氧环境中。
厌氧菌在自然界中广泛存在，包括土壤、水、动物 和人体内部等。
厌氧菌如破伤风杆菌、气性坏 疽梭菌等可引起脑膜炎，导致 头痛、呕吐、意识障碍等症状 。
腹腔感染
腹腔内厌氧菌感染可能导致腹 痛、腹胀、恶心等症状，严重 时可引起感染性休克。
女性生殖系统感染
如盆腔炎、宫颈炎等，可引起 下腹痛、阴道分泌物增多等症 状。
厌氧菌感染的症状和诊断
症状
厌氧菌感染的症状因感染部位和 病菌种类而异，常见症状包括发 热、疼痛、肿胀、恶心、呕吐等 。
分枝杆菌感染的症状和诊断
症状
分枝杆菌感染的症状因病原体和感染部位而异，常见症状包括发热、咳嗽、盗汗 、体重减轻等。
诊断
分枝杆菌感染的诊断通常依赖于细菌培养、组织病理学检查、分子生物学检测等 方法。这些方法有助于确定病原体类型和感染程度。
分枝杆菌感染的治疗方法
药物治疗
支持治疗
分枝杆菌感染通常需要长期、联合使 用多种抗菌药物进行治疗。常用的药 物包括利福平、异烟肼、乙胺丁醇等 。
治疗手段
厌氧菌感染治疗主要包括清创、使 用抗生素等；分枝杆菌感染治疗则 需长期使用抗结核药物，必要时采 取手术治疗。
耐药性
部分厌氧菌和分枝杆菌对抗生素的 耐药性日益严重，给防治工作带来 挑战。
THANK YOU
感谢聆听
分枝杆菌感染患者需要注意休息，遵 医嘱治疗，同时保持良好的生活方式 和饮食习惯，以便尽快康复。
目
CONTENCT
录
• 厌氧菌概述 • 分枝杆菌概述 • 厌氧菌与人类疾病 • 分枝杆菌与人类疾病 • 厌氧菌与分枝杆菌的比较
01
厌氧菌概述
厌氧菌的定义
厌氧菌：是指在无氧环境中生长繁殖的细菌，通常 存在于人体内部、外部的缺氧环境中。
厌氧菌在自然界中广泛存在，包括土壤、水、动物 和人体内部等。
厌氧菌如破伤风杆菌、气性坏 疽梭菌等可引起脑膜炎，导致 头痛、呕吐、意识障碍等症状 。
腹腔感染
腹腔内厌氧菌感染可能导致腹 痛、腹胀、恶心等症状，严重 时可引起感染性休克。
女性生殖系统感染
如盆腔炎、宫颈炎等，可引起 下腹痛、阴道分泌物增多等症 状。
厌氧菌感染的症状和诊断
症状
厌氧菌感染的症状因感染部位和 病菌种类而异，常见症状包括发 热、疼痛、肿胀、恶心、呕吐等 。
分枝杆菌感染的症状和诊断
症状
分枝杆菌感染的症状因病原体和感染部位而异，常见症状包括发热、咳嗽、盗汗 、体重减轻等。
诊断
分枝杆菌感染的诊断通常依赖于细菌培养、组织病理学检查、分子生物学检测等 方法。这些方法有助于确定病原体类型和感染程度。
分枝杆菌感染的治疗方法
药物治疗
支持治疗
分枝杆菌感染通常需要长期、联合使 用多种抗菌药物进行治疗。常用的药 物包括利福平、异烟肼、乙胺丁醇等 。
治疗手段
厌氧菌感染治疗主要包括清创、使 用抗生素等；分枝杆菌感染治疗则 需长期使用抗结核药物，必要时采 取手术治疗。
耐药性
部分厌氧菌和分枝杆菌对抗生素的 耐药性日益严重，给防治工作带来 挑战。
THANK YOU
感谢聆听
分枝杆菌感染患者需要注意休息，遵 医嘱治疗，同时保持良好的生活方式 和饮食习惯，以便尽快康复。
5 厌氧芽胞梭菌 分枝杆菌——【医学微生物学精品讲义】
一）实验目的 初步掌握抗酸染色法
二）实验材料 １、肺结核患者痰标本。 2、抗酸染色液等。 三）实验方法 １、用接种环挑取痰液涂片，干燥、固定。 ２、用抗酸染色法染色。 ３、镜检
实验五 厌氧菌和分枝杆菌
• 一、破伤风梭菌、产气荚膜梭菌与肉毒梭菌形态及染色性 • 二、产气荚膜梭菌的厌氧培养实验 • 三、结核病人痰液涂片-抗酸染色
• 1．破伤风梭菌：革兰阳性杆菌，菌体细长、笔 直，芽胞大于菌体，呈正圆形，位于菌体顶端， 使细菌呈鼓槌状，为本菌典型特征。
• 2．产气荚膜梭菌：革兰阳性粗大杆菌，芽胞椭 圆形，位于次极端，不比菌体粗。小白鼠腹腔 液涂片，革兰染色或荚膜染色，可见菌体呈单 个或成双排列，四周有明显的荚膜。
四）实验结果 汹涌发、结核杆菌培养特征 三、抗酸染色——肺结核患者痰标本的直接涂片检查
结核杆菌(抗酸染色)
• 固体培养基上菌落呈干燥、坚硬、 颗粒状、乳白色或米黄色，不透 明，表面皱纹状，形似花菜。
• 在液体培养基内呈表面生长，形 成菌膜。
抗酸染色
• 3．肉毒梭菌：革兰阳性短粗杆菌，芽胞椭圆形， 大于菌体，位于次极端，使菌体呈汤匙形或网 球拍状
破伤风梭菌
产气荚膜梭菌
产气荚膜梭菌动物试验
一）试验目的 了解产气荚膜梭菌的体外培养特性。 二）实验材料 1、泥土。 2、培养基。
3、凡士林。
三）实验方法 1、用无菌镊子取少量泥土与培养基中； 2、将凡士林加热熔解后，玻璃管吸取凡士林液体覆盖在培养基表面。 3、放于37℃温箱中培养12~18小时。
二）实验材料 １、肺结核患者痰标本。 2、抗酸染色液等。 三）实验方法 １、用接种环挑取痰液涂片，干燥、固定。 ２、用抗酸染色法染色。 ３、镜检
实验五 厌氧菌和分枝杆菌
• 一、破伤风梭菌、产气荚膜梭菌与肉毒梭菌形态及染色性 • 二、产气荚膜梭菌的厌氧培养实验 • 三、结核病人痰液涂片-抗酸染色
• 1．破伤风梭菌：革兰阳性杆菌，菌体细长、笔 直，芽胞大于菌体，呈正圆形，位于菌体顶端， 使细菌呈鼓槌状，为本菌典型特征。
• 2．产气荚膜梭菌：革兰阳性粗大杆菌，芽胞椭 圆形，位于次极端，不比菌体粗。小白鼠腹腔 液涂片，革兰染色或荚膜染色，可见菌体呈单 个或成双排列，四周有明显的荚膜。
四）实验结果 汹涌发、结核杆菌培养特征 三、抗酸染色——肺结核患者痰标本的直接涂片检查
结核杆菌(抗酸染色)
• 固体培养基上菌落呈干燥、坚硬、 颗粒状、乳白色或米黄色，不透 明，表面皱纹状，形似花菜。
• 在液体培养基内呈表面生长，形 成菌膜。
抗酸染色
• 3．肉毒梭菌：革兰阳性短粗杆菌，芽胞椭圆形， 大于菌体，位于次极端，使菌体呈汤匙形或网 球拍状
破伤风梭菌
产气荚膜梭菌
产气荚膜梭菌动物试验
一）试验目的 了解产气荚膜梭菌的体外培养特性。 二）实验材料 1、泥土。 2、培养基。
3、凡士林。
三）实验方法 1、用无菌镊子取少量泥土与培养基中； 2、将凡士林加热熔解后，玻璃管吸取凡士林液体覆盖在培养基表面。 3、放于37℃温箱中培养12~18小时。
微生物与免疫学课件：弧菌 厌氧性细菌 分枝杆菌 2014
肉毒梭菌 C. botulinum
生物学性状：
– 1. 形态染色： ➢ G+粗杆菌， ➢ 有芽胞， ➢ 呈汤匙状或 网球 拍状
2. 培养：严格厌氧，血平板上有溶血。
致病性：
–1. 致病物质： 肉毒毒素是目前已知最剧烈的毒素。
–2.所致疾病：食物中毒 胃肠症状少见，以运动神经末梢麻痹为主要表 现
L型变异：
结核杆菌经青霉素、环丝氨酸、溶菌酶、 异烟肼作用变成L型结核菌。
耐药性变异： MDRTB
致病性
致病因素
荚膜 脂质：索状因子
磷脂 蜡质D 硫酸脑苷脂 蛋白质
致病性
荚膜 与细胞表面受体结合（粘附与入侵作用）
致
含多种酶（分解利用营养物质）
病
保护（阻止有害物质的进入菌体）
物 脂质
质
磷脂（形成结核结节） 索状因子（破坏细胞，引起肉芽肿）
– 2.所致疾病： ⑴气性坏疽 ⑵食物中毒
所致疾病
气性坏疽
– 致病条件与破伤风梭菌相同 – 潜伏期短，发展迅速，病情险恶，死亡率高，
以组织坏死，气肿和全身中毒为特征
组织坏死、分解糖产气，（捻发音）
压迫软组织、血管， 加重组织坏死：疼痛、水肿、 恶臭
毒素入血，全身中毒症状
防治原则： –1. 预防： ❖ 及时扩创 → 破坏厌氧环境 ❖ 严密隔离病人；所用器械、敷料彻底底灭 菌
抗酸染色为阳性红色又名抗酸杆菌酸杆菌细胞壁含有大量的脂质细胞壁含有大量的脂质无鞭毛无芽胞不产外毒素或内毒素无鞭毛无芽胞不产外毒素或内毒素引起的疾病呈慢性并伴有肉芽肿引起的疾病呈慢性并伴有肉芽肿结核分枝杆菌结核分枝杆菌mtuberculosismtuberculosis简称简称结核杆菌结核杆菌tuberclebacillituberclebacilli是结核病的病原体核病的病原体人体的所有组织和器官均可感染结核菌人体的所有组织和器官均可感染结核菌而发病其中以肺结核最常见而发病其中以肺结核最常见由于由于hivaidshivaids流行人口流动耐药结核菌流行人口流动耐药结核菌的增加结核菌发病率开始上升
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特点 细胞壁含有大量的脂类 菌体不易着色，不易脱色，故采用抗 酸染色，故又称抗酸杆菌 无特殊结构，致病与菌体成分有关， 形成慢性肉芽肿性病变 营养要求高，生长缓慢
结核分枝杆菌
Mycobacterium tuberculosis Tubercle bacilli
流行病学
结核病的病原菌
蛋白质
引起迟发性过敏反应
（二）所致疾病
结核病
传染源：开放性肺结核病人痰
传播途径：呼吸道、消化道、皮肤 黏膜
1 肺部感染 （1）原发感染
原发感染
结核分枝杆菌 肺泡 吞噬细胞
吞噬细胞内繁殖
原发性感染
（渗出性炎症） 结核结节 淋巴结病 逐渐纤维化和钙化
全身性粟粒性结核
（2）继发感染
三、免疫性
有毒TB菌
结果
结核菌素试验应用
选择卡介苗接种对象、测定卡介苗接种
后的免疫效果
了解人群自然感染率
作为婴幼儿结核病的辅助诊断
测定肿瘤患者的细胞免疫功能
四、特异性防治
卡介苗预防
接种对象：新生儿和结核菌素试验阴性的儿童 免疫时间：3～5年 联合应用 长期用药
药物治疗
第三节
麻风分枝杆菌
1886年德国细菌学家 Koch 证明
全球性卫生问题
是艾滋病高发区人群的首要死因
世界防治结核病日
3月24日
一、生物学性状
1 形态与染色
细长略弯，有时呈 分枝状；无芽胞、 鞭毛
抗酸染色阳性
2 培养特性
特点 专性需氧 生长缓慢 营养要求高 生长现象 液体：
表面生长（菌膜）
一、生物学特性
一、 生物学性状 形态染色 革兰阳性 芽胞：一端膨大，呈鼓槌状 专性厌氧 抵抗力 强，芽胞在干燥土壤中可存活数十 年，耐热100℃1h，对青霉素敏感
破伤风梭菌
二、致病性与免疫性 传染途径及伤口条件 破伤风为创口感染 发生感染的条件 ——伤口的厌氧微环境 伤口窄而深 混有泥土及异物 大面积创伤、烧伤，局部缺血，坏 死组织多 伴有需氧菌或兼性厌氧菌
根据芽胞有无
无芽胞厌氧菌
厌氧菌的分布 厌氧为人体正常菌群构成的优势菌 体内正常菌群厌氧菌与需氧菌的比例 牙表面、胃、小肠中为1：1 眼结膜、鼻涕、唾液、外尿道、皮 肤表面为10：1 牙周、牙垢、结肠中为1000 ：1
LGG益生菌主要功能
致病物质 ——破伤风痉挛毒素（外毒素）
破伤风痉挛毒素的作用机制
致病机制
痉挛毒素 末梢神经 淋巴液 血液 脊髓前角 脑干
破伤风
封闭抑制性突 触的介质释放
牙关紧闭 角弓反张
强直性痉挛
伸肌、屈肌同 时强烈收缩
所致疾病——破伤风
典型症状
苦笑面容 角弓反张 其它
三、微生物学检查与防治
固体：
表面粗糙 呈颗粒、结节或菜花状菌落 乳白或米黄，不透明
3 抵抗力
抗干燥 抗酸碱 抗染料 对酒精、湿热及紫外线敏感 对抗结核药物敏感
二、致病性
（一）荚膜
与细胞表面受体结合（粘附与入侵作用） 含多种酶（分解利用营养物质）
致 病
物 质
保护（阻止有害物质的进入菌体）
脂质 索状因子（破坏细胞，引起肉芽肿） 磷脂（形成结核结节） 硫酸脑苷脂（抑制吞噬体与溶酶体结合） 蜡质D（引起迟发性过敏反应）
皮下
郭霍现象
正常豚鼠 10-14天
以前感染过或免疫豚鼠
24-48小时 局部红肿、溃疡 局部红肿、浅溃疡 坏死，经久不愈 不扩散， 脱落后自行愈合
全身扩散
感染免疫/有菌免疫（infection immunity ） 细胞免疫为主,迟发型超敏反应同时存在 免疫和超敏反应的物质基础
结核分枝杆菌核糖核酸（rRNA）
结核菌素试剂
旧结核菌素（old tuberculin，OT)
纯蛋白衍化物(purified protein derivative，PPD)
结核菌素试验
结核菌素试验
方法
取两种PPD 5单位注入两前 臂皮内 48～72小时后观察红肿直径 阴性：＜5mm 阳性：＞5mm 强阳性：≥15mm
微生物学检查：临床诊断 防治原则 正确处理伤口——及时清创，防止形成 厌氧微环境 人工自动免疫——类毒素（百白破三联 疫苗）平时预防 人工被动免疫——抗毒素 紧急预防 特异性治疗 治疗 抗毒素+抗生素+镇静解痉药物
分枝杆菌属（Mycobacterium）
结核分枝杆菌 麻风分枝杆菌 非结核分枝杆菌
结核菌素蛋白、蜡质D 可产生抗体，但其保护作用不明确
三、微生物学检查
标本取材
涂片染色镜检：抗酸染色
培养法：罗氏固体培养基 动物试验 细菌学基因诊断：PCR
四、微生物学检查法 痰液等 标本处理：浓缩集菌
直接镜检：抗酸染色
分离培养：培养基、时间
动物试验：豚鼠等
快速诊断：PCR等
结核菌素试验
人 直接接触或由飞沫传播 一般是6个月至5年
瘤型麻风 结核样型 界线类 未定类
1、 平衡和改善胃肠道功能
2、 增强人体自身免疫能力
3、 促进双歧杆菌和嗜酸乳杆菌生长和作用
4、 预防和帮助治疗腹泻
5、 预防呼吸道感染 6、 排出毒素 7、 预防龋齿 8、 预防过敏
厌氧培养箱
种类
破伤风梭菌 产气荚膜梭菌 肉毒梭菌 艰难梭菌
破伤风梭菌
Clostridium tetani
(Mycobacterium.leprae)
俗称麻风杆菌，引起麻风，是一种慢性 传染病 流行广泛，主要分布在亚、非和拉丁美 洲
形态与染色
细长略弯曲 无芽胞，无荚膜，无 鞭毛 抗酸染色阳性 典型的胞内寄生菌
致病性
易感人群 传播途径 潜伏期 发病慢、病程长 麻风分为3种类型