植物抗旱生理指标测定原理及方法

植物抗旱生理指标测定原理及方法

生命科学学院

杨歌

一、

问题及质疑：

1.酸性体系下，脯氨酸与茚三酮加热反应后的最终产物为红色，再实验过程中，仅有少数时候能发现红色产物。原因有待确定。

2.经查看文献资料，反应步骤已经是优化的，没有问题。甲苯萃取脯氨酸与茚三酮的反应产物，消除了多余未反应的茚三酮，磺基水杨酸，提取液中其他杂质（如色素）以及PH变化的干扰。

3.根据茚三酮与脯氨酸的缩合反应分析：

（1）反应体系的PH控制很重要，保持酸性环境，否则，反应产物的最大吸光值并不在520nm。

（2）极限干旱材料或者重脱水材料的脯氨酸含量大，材料干重比新鲜材料多数倍，加相同量的茚三酮，反应程度应该有所不同。而脯氨酸含量少的样本，容易受到各种因素的干扰。

四、丙二醛含量的测定

1.原理

植物在逆境下遭受伤害（或衰老）与活性氧积累诱发的膜脂过氧化作用密切相关，膜脂过氧化的产物有二烯轭合物、脂类过氧化物、丙二醛、乙烷等。其中丙二醛（MDA）是膜脂过氧化最重要的产物之一，因此可通过测定MDA了解膜脂过氧化的程度，以间接测定膜系统受损程度以及植物的抗逆性。

丙二醛在高温及酸性环境下可与2-硫代巴比妥酸（TBA）反应产生红棕色的产物3,5,5´-三甲基恶唑2,4-二酮（三甲川），该物质在532 nm处有一吸收高峰，并且在660nm处有较小光吸收。由于醛、可溶性糖对此反应有干扰，在450 nm处有一吸收峰，用双组分分光光度法加以排除。

2.步骤

试剂：（1）10%三氯乙酸（TCA）：TCA--------------25g

加ddH2O至---------250ml （2）0.6%硫代巴比妥（TBA）：TBA------------0.6g

加5%TCA至---------100ml

实验步骤：

（1）称取材料0.1g，加10% TCA 2ml研磨至匀浆，再加8ml进一步研磨；

（2）4000rpm离心10min，取上清至新管；

（3）2ml提取液+2ml 0.6% TBA，混合均匀，2ml ddH2O+2ml

0.6% TBA为空白对照；

（4）混合沸水浴15min，冰上冷却；

（5）4000rpm离心10min；

（6）取上清再532nm，600nm，450nm波长下的光密度值。

3.计算方法

式中，Vt：提取液总体积（mL）----------------10ml；

Vs：测定用提取液体积（ml）-------------2ml；

FW：样品鲜重（g）---------------------0.1g。

D663=82.04Ca +9.27Cb

D645=16.75Ca +45.6Cb (浓度单位：g/mL）

CA= 12.72D663– 2.59D645

CB= 22.88D645– 4.68 D663

CT = 20.29D645 +8.02D663 (浓度单位：mg/L）

Chl(mg/g叶)= C(mg/L)*提取液总量（L）*稀释倍数/FW（g）

注意事项：

（1）避光。

（2）时间控制，研磨以及放置时间不宜过长。

（3）叶绿素一定要提干净，以免造成误差。