结核感染T细胞TBIGRA检测及意义
结核病人血清TB-IgG水平检测与PPD阳性者分析
结核病人血清TB-IgG水平检测与PPD阳性者分析结核病，是一种由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，全球范围内都存在着一定的感染率。
根据世界卫生组织的数据显示，每年有数百万人感染结核分枝杆菌，其中约有数十万人死亡。
结核病对人类健康和社会经济都造成了严重的影响，因此对结核病的早期诊断和有效管理具有重要意义。
在结核病的诊断中，血清TB-IgG水平检测是一种常用的方法之一。
血清TB-IgG表示结核分枝杆菌特异性抗体IgG，在结核病的过程中，人体免疫系统会产生这种特异性抗体。
通过检测血清中TB-IgG的水平可以辅助结核病的诊断和治疗。
另一种常用的检测方法是PPD皮试，即结核菌素皮内试验。
PPD阳性者表示对结核菌素具有过敏反应，也可提示存在结核病感染。
1. 结核病人血清TB-IgG水平检测血清TB-IgG水平检测是通过检测患者血清中的结核分枝杆菌特异性抗体IgG水平来判断是否感染结核分枝杆菌。
这种方法可以快速、准确地得出初步诊断，有助于及早采取治疗措施。
根据一些研究表明，血清TB-IgG水平检测在结核病的早期诊断和敏感性上有一定的优势，能够提供辅助诊断的信息。
也存在一些局限性，比如在结核病的活动性和非活动性阶段的判断上并不十分准确，也容易受到某些其他因素的干扰而产生假阳性或假阴性结果。
2. PPD阳性者分析PPD（结核菌素）皮试是一种通过皮下注射结核菌素来检测患者对结核菌素的过敏反应的方法。
如果在注射后48-72小时出现硬结和红斑，即为PPD阳性反应。
PPD阳性者表示对结核菌素具有过敏反应，这通常意味着存在结核病的感染或曾经接触过结核病菌。
PPD皮试是一种简单、快速且经济的检测方法，被广泛应用于结核病的筛查和早期诊断中。
3. 血清TB-IgG水平检测与PPD阳性者关系分析研究表明，结核病人血清TB-IgG水平检测与PPD阳性者之间存在一定的相关性。
在一些研究中发现，结核病人的血清TB-IgG水平与PPD皮试的结果呈正相关关系，即TB-IgG水平高的患者更容易出现PPD阳性反应。
结核感染T细胞TBIGRA检测及意义 ppt课件
Dheda K, et al.The immunology of tuberculoisis:From bench to beside.Respirogy,2010,15:433-450
2020/11/29
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结核检测的方法比较
• 不能区分卡介 苗接种者
• 不能区分NTM • 48-72小时复诊
接触史 临床症状 病原/病理
2020/11/29
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TB-IGRA 产品特性
➢高灵敏度，检出率85%以上
➢高特异性
RD1区编码的ESAT-6和CFP-10两个特异性抗原
该抗原具 有较强的Thl细胞免疫原性，且在所有制备卡介 苗的菌株及环 境中绝大多数非结核分枝杆菌中均不存在该抗原，不受卡介苗和非分
支杆菌影响
IFNg
TNFa
CK
电镜下的结核杆菌
3
2020/11/29
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2010年新发880万例结核患者，59%在亚洲，26%在非洲
World Health Organization.Global tuberculosis control:epidemiology,strategy, financing:WHO report 2011(WHO/HTM/TB/2011.16).Geneva:WHO,2011
尚未发病的一种特殊状态
结核分枝杆菌（MTB）
注：感染后发病与否和机体易感性有关！
暴露 感染
1%
疾病进展
9%
L潜ate伏ncy
LTBI
90%
自愈
复燃
活动性结核病
2-5% 5-10% HIV>10%
一直存在活菌 需预防性服药
未根治
细菌全部被清除
【诊断】结核感染T细胞检测技术（TB-IGRA）
【诊断】结核感染T细胞检测技术（TB-IGRA）结核病简介结核病：我国重⼤传染病之⼀；是由结核分⽀杆菌引起的慢性⾁芽肿性炎症。
可累及除指甲和⽑发外的全⾝各个脏器，治愈后仍有复发风险；以肺结核最常见，⽽肺外结核占10%-20%。
· 结核分枝杆菌（MTB）是结核病的致病菌，通过呼吸道传播，可以侵⼊⼈体全⾝各种器官，主要感染肺部。
· 全世界约三分之⼀的⼈群感染了结核分枝杆菌，《2012年全球结核病报告》显⽰，在2011年有870万新发病例， 140万⼈死于结核病。
· 活动性结核：有临床症状或影像学改变，具传染性诊断⽅法：影像学⽅法、细菌学⽅法、病理学⽅法、免疫学⽅法· 潜伏性结核感染（LTBI）：感染后尚未发病的⼀种特殊状态，⽆活动性结核的临床表现和影像学改变，具免疫学检测阳性（PPD/ IGRA阳性），有活菌，5-10%可发展，有85%～90%新诊断的活动性肺结核由LTBI演变⽽来。
诊断⽅法：⽪肤结合菌素试验（TST）、γ⼲扰素释放试验（IGRAS）TB-IGRA检测原理γ-⼲扰素的产⽣⼈体感染结核分枝杆菌后，将产⽣特异性T淋巴细胞，并存在于外周⾎中，这些T淋巴细胞再次接触结核抗原后被激活，进⽽分泌出IFN-γ。
γ-⼲扰素的检测将特异性抗原加⼊到患者全⾎样本中培养，以IFN-γ的含量变化来判断患者机体内结核特异性T细胞的存在与否及强弱。
TB-IGRA试剂盒中包含结核分枝杆菌特异抗原（卡介苗和⼤多数⾮结核杆菌中普遍缺失RD1区编码的ESAT-6和CFP-10蛋⽩）。
临床运⽤1、肺结核的辅助诊断（尤其涂/菌阴性）：TB-IGRA从细胞⽔平上检测结核感染，检出率⾼（85%以上），早期感染即可检出，实现早诊断早治疗。
2、肺外结核的辅助诊断：TB-IGRA取静脉⾎进⾏检测，克服肺外结核患者痰样找不到结核菌，病灶部位取样难的问题。
3、感染性疾病与结核病的鉴别诊断：不明原因发热；咳嗽、咳痰>2周；咯⾎、胸痛等症状疑似结核，胸⽚/CT不能明确诊断者；⾝体其他器官疾病，抗炎治疗效果不佳患者的结核排查，阴性结果在很⼤程度上可以排除结核。
TB-IGRA结核感染T细胞检测ppt课件
昆明三院
TB-IGRA 90.0% 90.7% 80.0%
QFT-GIT 86.8% 87.3% 80.0%
总标本数 342
322
20
老年医院
TB-IGRA 76.6% 76.5% 78.6%
QFT-GIT 67.3% 66.2% 85.7%
总标本数 248
234
14
厦门CDC
TB-IGRA 70.9% 70.6% 100.0%
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特异性T细胞体外释放酶联免疫法检 测
TB-IGRA
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7
TB-IGRA原理、方法
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特异性T细胞体外检测在发达国家已广泛应用
• IGRA技术目前已获得美国FDA批准，在欧洲获得了CE标志认证，在日 本已经被MHLW批准
• “特异性T细胞体外检测”方法在国际上被越来越多地应用于TB感染 的辅助诊断，已成为欧美国家结核常规检测方法之一。
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消化科/心内科/肾内科/骨科
肺外结核免疫学辅助诊断
40％的结核感染者存在肺外病灶，1/4的结核患者为肺 外结核。而对肺外结核取样难度大，用IGRA检测为阳性时，高 度怀疑结核。单肺外结核不具有传染性，可分布在综合医院的 呼吸科外的其他科室。
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儿科
可判断传染 可进行定性
优点 性高低
及半 定量分 析
分子诊断
核酸检测
特异性高， 涂阳标本检 出率高
检出率20-
30%，不能
区分非结核
缺点
分枝杆菌； 取样难
检出率59% ，耗时长（ 2-6周）；缺 陷的活菌无 法培养；肺 外结核病人 取样困难
结核感染T细胞(T-SPOT.TB)
结核感染T细胞（T-SPOT.TB）一、名称结核感染T细胞（T-SPOT.TB）二、项目简介、临床意义及收费标准T-SPOT.TB是一种记数单个结核特异的效应T细胞的酶联免疫斑点（ELISPOT）检测方法，其灵敏高于ELISA方法。
该检测通过检测受结核分枝杆菌抗原刺激而活化的效应T细胞来诊断结核感染。
该检测适用于所有具有结核潜伏感染风险或怀疑是结核病的人群，无论年龄、性别、种族、治疗还是免疫状况，其诊断结核感染的敏感性为90%-95%，特异性为93%-100%。
对临床诊断或排除结核病具有重要的参考价值。
收费标准：740元/人份，收费依据：混合淋巴细胞培养（W0309050020）（250元）×2次；干扰素测定（W0309060008）（120元）×2种抗原。
三、标本采取1.静脉血：肝素锂（绿头管）抗凝管采集静脉血4ml，立即颠倒数次，充分混匀，以免血液凝固。
采血后向试管中注入血液时请缓慢进行，避免用力过猛造成细胞破坏影响检测结果。
2.脑脊液：无菌小瓶留取4ml以上，每毫升加125IU肝素（0.02ml）抗凝并立即混匀。
3.浆膜腔积液（胸水、腹水、心包积液）：无菌密闭容器留取50ml以上，每100毫升加2500IU（0.4ml）抗凝并立即混匀。
4.关节液：无菌小瓶留取4ml以上，每毫升加125IU肝素（0.02ml）抗凝并立即混匀。
四、检测时间、报告时间检测时间：每周二（节假日除外）进行检测，标本必须在上午9点前送达实验室。
报告时间：周三出报告。
五、注意事项1.标本采集后4小时内必须送到实验室进行检测，标本采集后如果超过4小时未送检将严重影响检测结果。
2.检测脑脊液、浆膜腔积液、关节液，须同时送检静脉血。
3.冬季运送标本时注意保温，避免冷冻。
六、联系科室和电话检验科微生物室(TeL：84205491)。
结核感染T细胞TBIGRA检测及意义
80.3%（118/147)
γ-干扰素释放试验诊断结核分枝杆菌感染的临床意义
88.64%（39/45）
结核分枝杆菌相关γ-干扰素体外释放试验在结核病诊断中的应用价值
90.7%（243/268）
两种结核分枝杆菌相关γ-干扰素定量检测试剂盒检测结核分枝杆菌感染结果比较研究
90.9%（290/319）
体外释放酶联免疫法检测结核杆菌γ-干扰素的实验研究
•Tuberculosis结核TB •Interferon（干扰素） •Gamma（ γ） •Release（释放） •Assay（测定）
•原理: 感染者体内被结核菌（TB）抗原致敏的效应T细胞; 在体外受到相同抗原的刺激（在APC辅助下）后，会分泌大 量IFN γ细胞因子; 通过IFN- γ的检测，判断结核感染情况。
IGRAs
APC
IFNg release assay
细胞 因子
ELISA
细胞 因子
ELISPOT
活化/细 胞因子
流式细胞术
体外刺激： RD1抗原T cell
IFNg
TNFa
CK
活化标志物
细胞因子
两种TBIGRA比较
高孟秋,刘菲,纪滨英等 两种γ干扰素释放分析在结核病临床诊断中的比较研 究.中华结核和呼吸杂志;2012，3510：762-765
原因
• HIV 感染和艾滋病破坏了机体的免疫
系统;加剧了结核的发病，
1/3HIV
病人死于结核
• 多菌耐药的结核菌感染率增加
• 贫困 移民等
• 细菌学涂片率低，2/3TB病人菌阴性
结核发病机理
结核分枝杆菌MTB
活动性结核： 发病状态 潜伏性结核感染LTBI：是宿主感染结核杆菌后尚未
结核感染T细胞(TB-IGRA)检测及意义
88.6%(39/44)
国外mparison of Tuberculin Skin Testing, QuantiFERON-TB Gold and TSPOT.TB in Children
Latent TB检出高
Positive Tuberculin Skin Test or Interferon-Gamma Release Radiographic Lesions Suggesting Old Healed Tuberculosis
临床应用案例
肺外结核辅助诊断：
➢某院感染科，女，75岁 ➢临床症状：发热数日，胸痛，干咳 ➢检测结果：X射线胸腔积液影像，积液涂片（-）、积液培养
（-）、TB-IGRA T-N 350pg/ml，积液单核细胞增多，血沉 快 ➢结果分析：对于肺外结核的诊断，涂片与培养的阳性率极低， TB-IGRA（+），结合其他非特异辅助指标可明确诊断肺外结 核。
A
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NTM（非结核分枝杆菌）比例增高
2000 年全国流调分离的抗酸杆菌菌株中，NTM 菌株占11. 1% ， 其中90% 为非结核分枝杆菌肺病。
NTM 肺病的临床表现与结核病相似， 既可有全身中毒症状， 亦有局部损害表现。但症状和体征缺乏特异性，20%-50% 的病 人无明显症状，除非做菌型鉴定，凭临床表现难与肺结核病相 鉴别。
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TB-IGRA 产品特性
➢高灵敏度，检出率85%以上
➢高特异性
RD1区编码的ESAT-6和CFP-10两个特异性抗原
该抗原具 有较强的Thl细胞免疫原性，且在所有制备卡介 苗的菌株及环 境中绝大多数非结核分枝杆菌中均不存在该抗原，不受卡介苗和非分
支杆菌影响
IFNg
探讨结核感染T细胞斑点试验在结核病中的诊断价值
探讨结核感染T细胞斑点试验在结核病中的诊断价值探讨结核感染T细胞斑点试验在结核病中的诊断价值引言：结核病是一种由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，全球范围内仍然是重大公共卫生问题之一。
早期和准确的结核病诊断对于控制疾病的传播和提供有效的治疗举措至关重要。
近年来，结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT.TB）逐渐成为结核病的主要诊断工具之一，本文将探讨T-SPOT.TB在结核病中的诊断价值。
一、T-SPOT.TB的原理与技术：T-SPOT.TB是一种利用酶联免疫斑点法检测结核分枝杆菌特异性T细胞反应的技术。
该方法基于测量体外T细胞的干预和测量干预期间T细胞产生的干预细胞因子的原理，通过寻找和计数结核分枝杆菌特异性T细胞的干预斑点来判断人体是否感染了结核分枝杆菌。
二、T-SPOT.TB的优势：与传统的结核诊断方法相比，T-SPOT.TB具有以下显著的优势：1. 高度特异性：T-SPOT.TB能有效区分结核病与非结核分枝杆菌感染，降低了假阳性率，提高了诊断的准确性。
2. 高敏感性：T-SPOT.TB能更早地检测出结核感染，尤其是对于免疫缺陷患者和隐性感染者具有更高的敏感性。
3. 快速结果：T-SPOT.TB的检测结果通常在24小时内可得，对于紧急情况和迅速诊断起到了关键作用。
4. 无交叉反应：T-SPOT.TB不受BCG疫苗和其他非结核分枝杆菌感染因素的影响，避免了传统诊断方法的交叉反应。
三、T-SPOT.TB在结核病中的诊断价值：1. 早期诊断：由于T-SPOT.TB的高敏感性，它能够早期检测出结核感染，避免了疾病的进一步传播，为尽早治疗提供了依据。
2. 预测疾病进展：通过监测T细胞反应的变化，T-SPOT.TB可以评估结核感染的严重程度和预测患者的疾病进展，以便采取及时的干预措施。
3. 监测治疗效果：T-SPOT.TB可以用于评估结核患者的治疗效果，及时调整治疗方案，提高治疗的效果。
4. 作为筛查工具：T-SPOT.TB可以作为结核病的筛查工具，在高感染风险群体中进行广泛的应用，以便早期发现结核感染，减少疾病传播。
结核感染T细胞检测(TB-IGRA)在老年不典型肺结核诊断中的价值研究
结核感染 T 细胞检测(TB- IGRA)在老年不典型肺结核诊断中的价值研究发布时间：2021-12-12T07:54:46.259Z 来源：《中国医学人文》2021年8期作者：李崇兰李海雯[导读]李崇兰李海雯通讯作者（昆明市第三人民医院；云南昆明650041）摘要目的探讨研究结核感染 T 细胞检测(TB- IGRA)在老年不典型肺结核诊断中的价值。
方法采用单中心回顾性分析我院2014年7月-2021年3月诊治的老年不典型肺结核并符合纳入标准的患者共364例作为观察组，选择同期在我院疑诊为老年不典型肺结核后经各项检查排除肺结核诊断的患者共217例，对患者的临床症状、入院以后所做的TB- IGRA检测、PPD试验和结核抗体检测结果进行比较，观察两组患者以上症状和检查的差异。
结果观察组患者TB- IGRA阳性率为92.8%，PPD阳性率为69.78%，结核抗体检测阳性率为62.35%，均明显高于对照组（P<0.01）。
结论 TB-IGRA检测在诊断老年不典型肺结核疾病中的灵敏度、确诊率、特异度、阳性预测值均较高，且不受年龄、血常规检查、发热等的影响，具有重要价值。
关键词：结核感染 T 细胞检测；老年；不典型肺结核；诊断价值肺结核由结核分枝杆菌引起，是我国常见的慢性传染性疾病，以青年、老年人群常见，在青年患者中主要表现为午后潮热、盗汗、咳嗽、咯血等典型症状[1]，中国作为仅次于印度的结核病高发国家[2]，尽早诊治肺结核，尤其是不典型肺结核，切断传染源，对于控制肺结核的广泛传播具有重大作用。
本研究对我院自2014年7月-2021年3月诊治的老年不典型肺结核进行回顾性分析，以评估结核感染T细胞检测(TB- IGRA)对其的诊断价值，现报道如下。
1 资料与方法采用单中心回顾性分析我院2014年7月-2021年3月诊治的老年不典型肺结核并符合纳入标准的患者共364例作为观察组，其中男192例，女172例，年龄60-92岁，平均（67.3±5.1）岁。
结核感染T细胞(TB-IGRA)检测及意义
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与免疫学指标关联
分析TB-IGRA检测与免疫学指标（如CD4+T细胞计数、干扰素-γ释放等）的关系，发现这些 指标在结核病患者中异常表达，且与TB-IGRA检测结果相互印证。
与临床表现及预后关联
探讨TB-IGRA检测结果与结核病患者临床表现及预后的关系，发现阳性结果与患者病情严 重程度、治疗反应及预后密切相关。
完善相关法规和政策支持
01
制定行业标准
建立TB-IGRA检测技术的行业标 准和质量管理体系，确保检测结 果的准确性和可靠性。
02
加强政策扶持
03
完善医保报销政策
政府应加大对TB-IGRA检测技术 的投入和支持力度，推动相关产 业的发展和创新。
将TB-IGRA检测技术纳入医保报 销范围，减轻患者的经济负担， 提高检测的可及性。
05
临床案例分析与解
读
不同类型结核病患者案例分析
活动性结核病案例
通过对比活动性结核病患者的TB-IGRA检测结果，发现其 阳性率较高，表明该检测对于活动性结核病的诊断具有较 高敏感性。
潜伏性结核病案例
分析潜伏性结核病患者的TB-IGRA检测结果，可见部分患 者呈现阳性反应，提示存在结核分枝杆菌感染，但无明显 临床症状。
加强国际间合作与交流
分享经验与技术
加强与其他国家和地区的交流与合作，分享TB-IGRA检测技术的研 发和应用经验，共同推动技术的进步和发展。
参与国际标准制定
积极参与国际标准的制定和修订工作，推动TB-IGRA检测技术的国 际化和标准化进程。
加强科研合作
鼓励科研机构和企业加强合作，共同开展TB-IGRA检测技术的基础 研究和应用研究，推动技术的不断创新和发展。
QB—SPOT结核实验
QB—SPOT结核实验
结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT.TB）是一种运用IGRA技术，检测被结核分枝杆菌特异的早期分泌靶抗原6（ESAT-6）和培养滤液蛋白10（CFP 10）分别刺激后释放γ-干扰素的效应T淋巴细胞，以辅助诊断结核感染的实验室检测技术。
TBspot试验通常指T-SPOT试验，即结核杆菌感染T细胞斑点试验，又称为结核菌感染干扰素释放试验，是利用结核特异性抗原，通过酶联免疫斑点技术，检测受试者体内是否存在结核效应的T淋巴细胞，从而判断被检查者是否感染结核杆菌。
该检查的原理是结核杆菌感染之后，T淋巴细胞会形成免疫记忆。
通常在体外分离到T淋巴细胞之后，培养增殖T细胞的同时，用相应的特异性抗原，进行刺激，激活T细胞记忆，有记忆的细胞则会分泌大量的干扰素。
结核T-SPOT检查即为结核菌T细胞斑点检测，是临床用于诊断结核病的新型检查方法。
通过检测干扰素的量，判断该细胞是否存在结核感染形成的记忆，进而通过进一步的反应判断是否存在结核菌感染。
但它的结果不能作为单独或决定性诊断活动性结核的证据，阳性结果仅提示患者体内存在结核杆菌特异性的效应T细胞。
但是否为活动性结核，则需要结合患者的临床症状及其他检测指标，进行综合判断。
现在已经有多项研究的结果显示，T-SPOT试验只能判断是否感染过结核，但无法鉴别活动性结核与潜伏性结核，因此对于活动性结核的诊断价值有限。
结核分枝杆菌相关γ-干扰素(TB-IGRA)监测推荐书
结核分枝杆菌γ -干扰素（TB-IGRA）检测[TB 检测发展趋势]据世界卫生组织( WHO)统计，我国是全球22个结核病高负担国家之一，在结核病防治工作还面临着诸多新的问题与挑战，近年来，我国每年报告肺结核发病人数约130 万，且患者人数逐年增加，始终位居全国甲乙类传染病的前列。
国家已出台相关文件要求加强结核病防治工作，要求及早发现、治疗疾病，遏制结核病流行态势的出现。
而这无疑对结核的诊治水平提出了更高的要求。
但迄今为止，临床上用于结核分枝杆菌感染的诊断方法仍存在许多不足。
首先，结核菌素皮肤试验( TST)作为一种较常用的方法，但其特异性不够好，不利于在中国这类将卡介苗(BCG)作为常规接种疫苗的国家推广，同时，TST 对潜伏性结核分枝杆菌感染的敏感性一般，对于免疫抑制者的检测结果亦难以确定；其次，细菌学诊断无论是涂片镜检还是细菌培养，其检出率都不超过50%，灵敏度十分有限；核酸诊断虽然灵敏度大幅提高，但该方法具有成本高、操作复杂、对实验条件及技术人员要求高、肺外结核病人取样困难等特点，因而很难得到大面积推广。
近年来，一类用于诊断结核分枝杆菌感染的新方法进入了人们的视线——干扰素释放试验(Interferon Gamma Release Assay，IGRA)。
这类试验采用Elisa／Elispot(酶联免疫吸附／酶联免疫斑点)方法，定量检测检测全血／外周血单核细胞在结核菌特异性抗原刺激下释放γ -干扰素的水平，用于诊断潜伏性结核分枝杆菌感染以及结核病。
目前这类试验中，有两种较为成熟的方法，即QuantiFERON—TBGOLD 试验(QFT-G)和T-SPOT TB 试验。
其对应的方法和试剂盒先后被美国FDA 批准应用于临床，美国CDC 为其制定了使用指南。
然而，进口试剂的高成本，使得这些方法难以在国内得到广泛应用，而传统方法又存在诸多不足，因此，国内各大医疗机构及患者对一种性能稳定、质量可靠的优秀国产试剂的需求呼之欲出。
结核感染T细胞 γ 干扰素释放试验(TB-IGRA)在结核病诊断中的应用
ABSTRACT: Objective To investigate the application value of tuberculosis interferon gamma release assay (TB-IGRA) in the diagnosis of tuberculosis. Methods A total of 86 cases of tuberculosis patients and 98 cases of other lung diseases were tested with TB-IGRA test, serum tubercle bacillus antibody and sputum smear acid-fast staining test, and the test results were retrospectively analyzed. Results The TB -IGRA positive rates in the tuberculosis group, the pulmonary tuberculosis group and the extrapulmonary tuberculosis group were significantly higher than that in the other lung diseases groups, and the IFN-酌 concentrations were higher than that of the other lung disease groups (P<0.05). There were no significant differences in TB-IGRA positive rates and IFN-酌 concentrations between smear-positive and smearnegative pulmonary tuberculosis patients (P>0.05). The sensitivity of the TB-IGRA test for diagnosis of tuberculosis was higher than that of the tuberculosis antibody test and smear acid-fast staining test, the specificity was higher than that of the tuberculosis antibody test (P<0.05). Conclusion The TB -IGRA test has a high sensitivity and specificity for the diagnosis of tuberculosis, which has a higher clinical diagnostic value for tuberculosis in Baoji area. KEYWORDS: tuberculosis; tuberculosis interferon gamma release assay (TB-IGRA); tuberculosis antibody test
结核感染T细胞γ干扰素释放试验及结核杆菌抗体在肺结核患者诊断中的应用
- 67 -①荆州市第三人民医院 湖北 荆州 434000结核感染T细胞γ干扰素释放试验及结核杆菌抗体在肺结核患者诊断中的应用刘小寒①【摘要】 目的：探讨对结核感染T 细胞γ干扰素释放试验（TB-IGRA）及结核杆菌抗体（TB-Ab）在肺结核患者诊断中的应用价值。
方法：选择2022年1—12月荆州市第三人民医院收治的216例疑似肺结核患者，将病理学诊断作为“金标准”，依据是否存在结核病进行分组，分为肺结核组（n =151）和非肺结核组（n =65），采集患者清晨空腹静脉血分别检测TB-IGRA、TB-Ab 水平，观察两项指标检测肺结核阳性结果，观察不同检查方式诊断效能。
结果：肺结核组中TB-IGRA 阳性检出率、TB-Ab 阳性检出率均高于非肺结核组，差异有统计学意义（P <0.05）。
TB-IGRA、TB-Ab 诊断肺结核的阳性预测值、特异度比较，差异无统计学意义（P >0.05），TB-IGRA 诊断肺结核的敏感度、阴性预测值高于TB-Ab，差异有统计学意义（P <0.05）。
年龄>60岁肺结核患者TB-IGRA 阳性检出率、TB-Ab 阳性检出率高于≤60岁肺结核患者，差异有统计学意义（P <0.05）。
结论：临床肺结核诊断中应用TB-IGRA、TB-Ab 检查均有较高诊断效能，但相对而言TB-IGRA 检查方式更优，且该检查方式阳性率易受年龄因素影响。
【关键词】 肺结核 结核感染T 细胞γ干扰素释放试验 结核杆菌抗体 阳性检出率 诊断效能 doi：10.14033/ki.cfmr.2024.01.017 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2024）01-0067-04 Application of Tubercle Bacillus-T Cell Interferon-γ Release Assays and Tubercle Bacillus Antibody in Patients with Pulmonary Tuberculosis/LIU Xiaohan. //Chinese and Foreign Medical Research, 2024, 22(1): 67-70 [Abstract] Objective: To explore the diagnostic value of tubercle bacillus-T cell interferon-γ release assays (TB-IGRA) and tubercle bacillus antibody (TB-Ab) in patients with pulmonary tuberculosis. Method: A total of 216 patients with suspected pulmonary tuberculosis admitted to the Third People's Hospital of Jingzhou from January to December 2022 were selected, and pathological diagnosis was taken as the "gold standard". According to the presence or absence of pulmonary tuberculosis, the patients were divided into pulmonary tuberculosis group (n =151) and non-pulmonary tuberculosis group (n =65). Fasting venous blood of patients in the morning was collected to detect TB-IGRA and TB-Ab levels respectively, and the positive results of the two indicators were observed 及颜面轮廓超声指标对21-三体综合征的诊断价值[J].中华超声影像学杂志，2016，25（11）：957-961.[11]李扬，崔照领，文晓燕，等.无创产前基因筛查联合超声指标诊断染色体异常价值[J].中国计划生育学杂志，2022，30（1）：220-224.[12]杜剑亮，黎欢.唐氏综合征产前筛查及产前诊断ICD-10编码案例分析[J].中国病案，2022，23（2）：41-43.[13]陈新英，曾书红，江矞颖，等.两例21部分三体胎儿的产前诊断[J].中国计划生育和妇产科，2023，15（7）：108-110.[14]刘婷，武秀萍.唐氏综合征的口腔-颅颌面表征及治疗进展[J].国际口腔医学杂志，2023，50（5）：618-622.[15] GARC ÍA-GARC ÍA M T，DIZ-DIOS P，ABELEIRA-PAZOS M T，et al. Cranial-vertebral-maxillary morphological integration in Down syndrome[J]. Biology，2022，11（4）：496.[16]徐琦，周祎，黄冬冰，等.早孕期超声指标对复杂性单绒毛膜双胎的预测价值[J].中华围产医学杂志，2019，22（10）：744-750.[17]亓琳，吴琼，张欢欢，等.胎儿NT 厚度联合uE3检测在胎儿染色体异常及异常妊娠中的诊断价值[J].海军医学杂志，2023，44（2）：152-156.[18]张广英，曲素慧，刘蔚，等.早孕期胎儿颈项透明层厚度及颜面轮廓超声指标对21-三体综合征的预测价值[J].医学影像学杂志，2020，30（12）：2188-2192，2197.[19]叶风，白莉莉，董雪琴，等.胎儿鼻部超声在产前筛查唐氏综合征中的应用价值[J].临床超声医学杂志，2016，18（1）：17-20.[20]韩娟，牛翠茹，孙庆梅，等.甘肃省11~13+6周胎儿FMF角分布在唐氏综合征筛查中的应用研究[J].西南国防医药，2021，31（6）：505-507.[21]张欢欢，王丽春.颈项透明层厚度及颜面轮廓超声指标对早孕期正常胎儿及21-三体综合征的诊断价值[J].医学影像学杂志，2019，29（4）：677-679.（收稿日期：2023-11-03） 肺结核临床常见慢性传染性疾病之一，该病的发生是因为机体内侵入结核杆菌，并导致肺部组织受累而引起。
细胞斑点试验
基于T淋巴细胞检测 结核感染的原理
结核感染的免疫应答反应以细胞免疫为主，结 核感染后体内长期存在抗原特异性的记忆性T细 胞
当再次遇到抗原刺激时，能迅速活化增殖，释 放r干扰素
r干扰素是结核分枝杆菌感染后机体免疫应答中 最重要的细胞因子
基于T淋巴细胞检 测结核感染的原理
基于T淋巴细胞检测 结核感染的原理
结核的传统诊断手段
结核菌素皮试：
低敏感性：免疫力低下人群中其敏感性大大降低。 低特异性：与卡介苗接种和其他环境分枝杆菌有交叉，易 造成“假阳性”结果。
细菌学检查：常规培养：2月；快速培养：1周；
阳性率取决于采集标本中细菌数量，不利于早期诊断。
病理学检查：阳性率低，对取材标本有较高要求，有创
T-SPOT.TB的临床意义
T-SPOT.TB高灵敏度
提问 出报告时间：一、三、五检测三个工作日出。 标本类型：肝素抗凝全血两管 需注意:4小时内送检，8小时内完成检测 价格：660元 方法学：酶联免疫斑点法 英文：T-SPOT
T-SPOT.TB
结核感染T细胞斑点检测
T细胞斑点试验（T-SPOT），又叫作结核感染干扰 素释放试验（Interferon Gamma Release Assays， IGRAs
结核的现状
结核病是全球严重的公共卫生问题之一。据WHO 统计，全球约有20亿人感染结核分枝杆菌，每年有约 200万人死于结核。
基于T淋巴细胞检测 结核感染的原理
空白对照孔内斑点数小于10且阳性对照孔内斑 点数大于20时视为试验有效
T-SPOT.TB试验结果用每106 PBMCs中斑点形 成细胞（SFCs）的数目来描述，即SFCs/106 PBMCs
结核杆菌感染效应T细胞分泌干扰素-γ检测试验-丁香园
结核杆菌感染效应T细胞分泌干扰素-γ检测试验-丁香园（原创内容，转贴须注明出处 /bbs/topic/29211004） 检测T细胞免疫状态的干扰素-γ（IFN-γ）释放检测试验（interferon-γ releaseassays，IGRA），是近些年广受重视的一个实验方法。
因其可特异、直观地显示T细胞对于某特异性抗原的免疫状态，在基础免疫学研究领域已得到广泛应用。
因其操作较复杂，耗时长，在临床检验领域还不算普及，但在个别项目，IGRA却显示出良好的生命力。
这个别项目，就是结核杆菌感染效应T细胞分泌IFN-γ检测试验，开展此项检验的临床实验室越来越多，跟进开发此产品的厂家也越来越多。
先说说IGRA的原理：T细胞在被特异性免疫原激活后，再次遇到该免疫原时，会分泌干扰素-γ。
据此，可在体外用特定免疫原刺激T细胞，检测其IFN-γ分泌情况，从而推断其在体内时是否已被该免疫原免疫过。
肺结核（及其他结核病）的实验室诊断一直是个难题。
痰培养和痰涂片染色的阳性率低，容易漏诊；结核菌素皮肤试验则假阳性率太高，临床应用意义严重受限。
目前市面上常见的结核抗体检测试剂盒，其临床意义也广受争议。
即便是通过核酸扩增的方法检测痰液或其他标本，结果仍不能完全让人满意。
IGRA法检测结核杆菌感染，就是在这样的背景下发展起来的，堪称数十年来结核病实验室诊断技术发展的一个里程碑。
在已上市产品中，具体实验操作设计层面，有两种不同的方向。
一种是全血添加免疫原，孵育适当时间后，通过ELISA双抗夹心法检测血浆中IFN-γ的含量；另一种是从全血中分离出单个核细胞（主要是淋巴细胞），配成适当浓度的细胞悬液，与免疫原同时加入已包被IFN-γ抗体的板孔中，孵育一定时间后，加入已标记过氧化物酶或碱性磷酸酶或者其他生物素的IFN-γ抗体，通过所标记生物素的催化特性进行显色反应，使板孔底部形成有色斑点，根据斑点数量作出结果判断，一般称这种方法为酶联免疫斑点试验（(Enzyme Linked-immunospotAssay，ELISPOT）。
结核感染T细胞检测呼吸科
潜伏性结核感染的诊断
皮肤结核菌素试验（TST） ≥10mm γ干扰素释放试验（IGRAs）
.
7
TB-IGRA方法介绍
原理: 机体内被结核菌抗原致敏的效 应T细胞，在体外受到相同抗原的 刺激（在APC辅助下）后，会分泌 大量IFN- γ(细胞因子)。通过IFN- γ 的检测，判断结核感染情况。
IGRAs
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临床应用案例
肺外结核辅助诊断：
➢ 某院感染科，女，75岁 ➢ 临床症状：发热数日，胸痛，干咳 ➢ 检测结果：X射线胸腔积液影像，积液涂片（-）、积液培养（-）、
TB-IGRA T-N 350pg/ml，积液单核细胞增多，血沉快 ➢ 结果分析：对于肺外结核的诊断，涂片与培养的阳性率极低，TB-
IGRA（+），结合其他非特异辅助指标可明确诊断肺外结核。 ➢ 临床诊断：结核性胸膜炎
.
14
IGRA方法辅助诊断结核性胸膜炎：
天津市海河医院，124例受试者，包括健康对照 者30名、初诊结核性胸膜炎患者37例、恶性胸腔 积液患者32例、非结核性胸膜炎患者25例。
结论：用IGRA方法对结核性胸膜炎诊断的敏感 性、特异性和诊断准确率分别为91.9％ 、90.6 ％ 、91.3％ ，优于ADA和TB-Ab。
20
潜伏性感染监控
一起小规模结核暴发流行的调查与控制
某中学高三年级小规模结核爆发
疫情发展阶段
结核病例及分布
初始病例
1例（7班）
疫情时间 6月初
第一批疫情
5例（7班）
8-9月
第二批疫情
10例（8例7班）
9月
疫情初处理
自行住院
全年级师生胸透， 胸透阴影预防性
服药
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细菌培养
抗体检测
IGRA方法
• 取样操作简便
• 检出率高（活动 分子诊断
结核和潜伏结核） • 区分BCG、NTM • 检测肺外结核
• 特异性差 • 误诊肺炎、肺癌 • 肺外结核难
• 假阳/假阴多； （涂阴45%/35%） • WHO建议禁用
• 操作复杂 • 技术要求高 • 涂阴检出低
34%
• 肺外结核难
结核检测的方法比较
• 不能区分卡介 苗接 病原/病理
TST（结核菌素皮试）
• 不能区分NTM • 检出率低20% • 肺外结核难
涂片 镜检
结核 诊断
X射线
• 耗时长4-8周 • 检出率低50% • 涂阴检出低
22%-38% • 肺外结核难
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TB-IGRA
•Tuberculosis（结核TB） •Interferon（干扰素） •Gamma（ γ） •Release（释放） •Assay（测定）
•原理: 感染者体内被结核菌（TB）抗原致敏的效应T细胞， 在体外受到相同抗原的刺激（在APC辅助下）后，会分泌大 量IFN- γ(细胞因子)。通过IFN- γ的检测，判断结核感染情况。
IGRAs
APC
IFN-g release assay
细胞 因子
ELISA
细胞 因子
ELISPOT
活化/细 胞因子
流式细胞术
体外刺激： RD1抗原T cell
IFNg
TNFa
CK
活化标志物
细胞因子
两种TB-IGRA比较
高孟秋,刘菲,纪滨英等.两种γ-干扰素释放分析在结核病临床诊断中的比较研 究.中华结核和呼吸杂志，2012，35（10）：762-765
目录
contents
1. 结核病的诊断现状 2. TB-IGRA产品介绍 3. TB-IGRA的临床应用 4. TB-IGRA检测方法及结果解释
结核病现状
•结核病(tuberculosis)是由结核分枝杆菌(tubercle bacillus)引 起的一种慢性肉芽肿性炎。 •以肺结核最常见，死亡人数仅次于艾滋病。也可见于全 身各器官。肺外结核占整个发病率的10%-20%，死亡率占 结核病全部死亡率的14.1%-17.6%。 •全世界约三分之一的人群感染，《2014年全球结核病报告》 显示：2013年有900万新发病例， 150万人死亡。 •中国是结核病高发区，发病数居全球第二，现有600万活 动性肺结核，且患者人数逐年增加，始终位居全国甲乙类 传染病的前列。
注：感染后发病与否和机体易感性有关！
暴露 感染
1%
疾病进展
9%
L潜ate伏ncy
LTBI
90%
自愈
复燃
活动性结核病
2-5% 5-10% HIV>10%
一直存在活菌 需预防性服药
未根治
细菌全部被清除
不发展为结核病
不需要预防性服药
结核病的免疫主要是细胞免疫
Dheda K, et al.The immunology of tuberculoisis:From bench to beside.Respirogy,2010,15:433-450
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目录
contents
1. 结核病的诊断现状 2. TB-IGRA介绍 3. TB-IGRA的临床应用 4. TB-IGRA检测方法及结果解释
TB-IGRA方法介绍
原理: 机体内被结核菌抗原致敏的效 应T细胞，在体外受到相同抗原的 刺激（在APC辅助下）后，会分泌 大量IFN- γ(细胞因子)。通过IFN- γ 的检测，判断结核感染情况。
TB-IGRA 产品特性
➢高灵敏度，检出率85%以上
➢高特异性
RD1区编码的ESAT-6和CFP-10两个特异性抗原
该抗原具 有较强的Thl细胞免疫原性，且在所有制备卡介 苗的菌株及环
境中绝大多数非结核分枝杆菌中均不存在该抗原，不受卡介苗和非分支
杆菌影响
IFNg
TNFa
CK
国内外相关研究
TB-IGRA快速简便，是一种值得推广的检测方法：
80.3%（118/147)
γ-干扰素释放试验诊断结核分枝杆菌感染的临床意义
88.64%（39/45）
结核分枝杆菌相关γ-干扰素体外释放试验在结核病诊断中的应用价值
电镜下的结核杆菌
2
2010年新发880万例结核患者，59%在亚洲，26%在非洲
World Health Organization.Global tuberculosis control:epidemiology,strategy, financing:WHO report 2011(WHO/HTM/TB/2011.16).Geneva:WHO,2011
原因
• HIV 感染和艾滋病破坏了机体的免疫
系统，加剧了结核的发病， 1/3HIV病人死于结核 • 多菌耐药的结核菌感染率增加 • 贫困、移民等 • 细菌学涂片率低，2/3TB病人菌阴性
结核发病机理
活动性结核： 发病状态 潜伏性结核感染（LTBI）：是宿主感染结核杆菌后
尚未发病的一种特殊状态
结核分枝杆菌（MTB）
张华，黄圣文，罗振元.结核分枝杆菌r-干扰素体外释放定量试验诊断结核感染的临床应用.中华医学院 感染学杂志 2009年第19卷第14期
国内外相关研究
国内文章
sensitivity
结核分枝杆菌γ-干扰素体外释放定量试验诊断结核感染的临床应用
90.24%（74/82）
TB-IGRA与TST检测菌培阳性肺结核患者比较
发病人群前五位的国家
• India(2.0 million–2.5 million) (26%)
• China (0.9 million–1.2 million)
38%
• South Africa (0.40 million–0.59 million)
• Indonesia (0.37million–0.54 million)
• Pakistan (0.33 million–0.48million).
结核病现状及危害-传播范围广
逐年 增加
全球27个MDR-TB流行严重的国家之一，中国尤其严重
World Health Organization.Multidrug and extensively drug-resistant TB (M/XDR-TB): 2010 global report on surveillance and response. WHO/HTM/TB/2010.3.