微生物学实验教案 (2)

微生物实验教案

实验一显微镜油镜的使用和细菌形态的观察

一、实验目的

以染色玻片为例，熟练掌握显微镜油镜的使用方法。

二、实验原理

圈、:镜座、

a：镜口角（即入射角）。3油镜使用的原理油镜，即油浸接物镜。当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光

线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。

三、实验材料

1显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、载玻片、盖玻片、接种环、镊子、酒精灯、火柴、玻璃铅笔、蒸馏水等。

2枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的玻片染色标本。

四、实验方法与步骤

（1）用前检查：零件是否齐全，镜头是否清洁。

（2）调节光亮度。

油镜使用的原理绘制细菌形态

六、思考题

1油镜与普通物镜在使用方法上有何不同？应特别注意些什么？

2使用油镜时，为什么必须用镜头油？

七、实验注意事项

1不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。

2镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度。

3观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以

带正电荷的碱性染料。染料适用于热固定的涂片，染料与菌体细胞质黏附使菌体着色。经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明对比。

三、实验材料

1显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、载玻片、盖玻片、接种环、镊子、酒精灯、火柴、玻璃铅笔、蒸馏水等。

2、培养12-18h的枯草芽孢杆菌和大肠杆菌以及金黄色葡萄

球菌。

3、简单染色液（美蓝染色液、黑色素液或炭素墨水）

四、实验方法与步骤

1、活菌制片观察

取一张干净的载玻片，在其中央滴上一滴干净的蒸馏水，取培养

六、思考题

1镜检标本时，为什么先用低倍镜观察，而不是直接用高倍

镜或油镜观察？

2根据实验体会，你认为制备染色标本时，应注意哪些事项？

七、教学反馈

实验三细菌的革兰氏染色

一、实验目的

1掌握革兰氏染色。

2了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。

二、实验原理

1革兰氏染色的原理

1

2

4

红）

5

6

A

B

C中性（复合）染料：如伊红、美兰等，Wright染料和Gimsa染

料等（常用于细胞核染色）。

D单纯染色：这类染料物，不溶于水，但溶于脂肪溶剂中，如苏丹类（Sudanb）的染料2革兰氏染色

（1）涂片。

（2）初染：在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液，染1分钟，倾去染液，流水冲洗至无紫色。

（3）媒染：先用新配的卢哥氏碘液冲去残水，而后用其覆盖

涂面1分钟，后水洗。

（4）脱色：除去残水后，滴加95%酒精进行脱色约30秒，

后立即用流水冲洗。

（5）复染：滴加番红染色液，染1分钟，水洗后用吸水纸吸

干。

（6）镜检：观察染色结果。

五、实验报告

3H2O、

pH 试纸、棉花、牛皮纸、记号笔、线绳、纱布。

3灭菌锅

三、实验方法

(一)牛肉膏蛋白胨培养基的配制

牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。其配方如下：

牛肉膏3g，蛋白胨10g．NaCl5g，琼脂15-20g，水1000mL，

pH7.4-7.6。

1称药品：按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中。牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶解后倒入大烧杯；也可放在称量纸上称量，随后放人热水中，牛肉膏便与称量纸分离，立即取出纸片。蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。

2加热溶解：在烧杯中加入少于所需要的水量，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒搅拌，待药品完全溶解后再补

的调节

4层纱

)有些微生物需要更好的通气，则可用8层纱布制成通气塞。有时也可用试管帽或塑料塞代替棉塞。

7包扎：加塞后，将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸或双层报纸，以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞。若培养基分装于试管中，则应先把试管扎成捆后，再于棉塞外包一层牛皮纸。然后用记号笔注明培养基名称、组别、日期。

8灭菌：将上述培养基于121.3℃湿热灭菌20min。如因特

殊情况不能及时灭菌，则应放人冰箱内暂存。

9摆斜面：灭菌后，如制斜面，则需趁热将试管口端搁在一根长木条上，并调整斜度，使斜度的长度不超过试管总长度的1/2。

10无菌检查：将灭菌的培养基放入37℃温箱中培养24-48h，无菌生长即可使用。或储存于冰箱清洁的橱内，备用。

四、实验结果和报告

记录本实验配制培养第的名称、数量，并图解说明其配制

?

4学习平板接种等无菌操作技术。

二、实验材料

1金黄色葡萄球菌和普通变形菌斜面菌种。

2已灭菌的牛肉膏、高氏1号、土豆蔗糖固体培养基各1瓶。

3无菌培养皿12套、无菌EP管10支、土壤样品、天平、称量纸、药匙、试管架、记号笔、涂布器、1000ul移液器、

200ul移液器、20ul移液器、1000ul枪头、200ul枪头、20ul枪头。

4无菌水(49.5mL、带玻璃珠)1瓶、80％乳酸、10％酚液、95％乙醇。

三、实验方法

(一)土壤稀释分离

1取土壤：取表层以下5-10ml处的土样．放入灭菌的袋中备用，或放在4℃冰箱中暂存。

10-2

，放入

10-3

10-9同法吸取10-8稀释液各lml放入编号10-8的3个平板中，再吸取10-7稀释液各lml放入编号10-7的3个平板中（由低浓度向高浓度时，吸管可不必更换）。然后在9个平板中分别倒入已融化并冷却至45—50℃的细菌培养基(图

22-2)，轻轻转动平板，使菌液与培养基混合均匀，冷疑后倒置，适温培养。至长出菌落后即可计数。

2涂抹平板计数法涂抹平板计数法与混合法基本相同，