TaKaRa 质粒DNA小量纯化试剂盒说明书
高纯度质粒小提试剂盒使用说明书
高纯度质粒小提试剂盒 Pure Mini Plasmid Kit(目录号：HS0103)产品包装试剂盒成分 50 preps Buffer P1 15 ml Buffer P2 15 ml Buffer P3 20 ml Buffer PD 30 ml RNase A(10 mg/ml)150 ul Buffer PW 60 ml Buffer EB 10 ml Spin Columns PA 50个 Collection Tubes (2 ml)50个（注意：使用前将全部RNase A 溶液加到Buffer P1中混合均匀，2 ~ 8℃保存）保存条件本试剂盒在室温(15 ~ 25℃)干燥条件下，可保存12个月；更长时间的保存可置于2 ~ 8℃。
若溶液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀。
单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月。
加入RNase A 后的Buffer P1应置于2 ~ 8℃保存，可稳定保存6个月。
产品简介本试剂盒用于高纯度质粒DNA 的小量制备与纯化。
菌体经碱裂解、高盐、低pH 处理，质粒可从菌体中释放出来，并特异、高效地被离心柱硅胶膜（Spin Columns PA ）吸附。
通过去蛋白液（Buffer PD ）和漂洗液（Buffer PW ）的清洗可去除蛋白及其他杂质，在低盐、高pH 条件下洗脱，最后得到高纯度的质粒DNA 。
北京厚生博泰科技有限公司Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.使用本试剂盒可从1 ~ 5 ml过夜培养的菌液中纯化得到高达20 ug的高纯度质粒DNA，可在30 min之内完成提取任务。
所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR、测序、低敏感细胞株的转染等各种常规分子生物学操作。
产品特点1. 快速：步骤少，操作简便，节约时间。
2. 简便：离心吸附柱不需要预平衡，漂洗液Buffer PW 和去蛋白液Buffer PD不需要另加乙醇，即开即用。
磁珠法质粒DNA小量抽提试剂盒说明书
磁珠法质粒DNA小量抽提试剂盒MagBeads Plasmid DNA Mini Extraction Kit【目录号】PDE-5005、PDE-5010、PDE-5030、PDE-5100【运输条件】2~25℃；【保存条件】组分①、③、④于2~8℃保存；组分⑦于-20℃保存；其它组分室温保存；【试剂盒组成】1. 使用前将RNase A溶液（组分⑦）全部加入菌体悬浮液（组分①）中，4℃保存备用；2. 使用前检查菌体裂解液（组分②）是否出现浑浊，如有请置于37℃水浴中温浴至澄清；3. 实验前质粒复性液（组分③）需提前置于4℃冷却充分；4. 菌体裂解液（组分②）和质粒复性液（组分③）使用后应请立即盖紧盖子；5. 磁珠悬浮液（组分④）严禁冻融和离心，以免磁珠受到损害，使用前务必充分混匀；6. 所有离心步骤均为室温下进行，其中加入质粒复性液（组分③）后低温离心效果更佳；7. RNase A溶液（组分⑦）长期不使用于-20℃保存，融化后4℃保存，并尽快使用；8. 质粒DNA抽提得量与细菌的培养浓度、宿主菌、质粒拷贝数等因素有关；9. 本操作指南经公司反复验证，使用前请仔细阅读并按指南建议操作。
磁珠法·自动化：为生命科学提供自动化磁纳米捕获方案【产品简介】本试剂盒可应用于对小量菌液进行质粒DNA抽提。
试剂盒采用高性能纳米磁珠和特殊缓冲液系统。
磁珠表面修饰有特殊化学基团，在一定条件下对质粒DNA具有极强的亲和力，当条件改变时可以可逆的释放质粒DNA，从而达到分离纯化质粒DNA的效果。
整个操作过程简便、快速。
本产品可最大限度的去除蛋白质等杂质，保证提取所得质粒DNA的纯度，所得质粒DNA产物可直接应用于酶切、测序、文库筛选、连接和转化等各种下游分子生物学实验。
本试剂盒可在EP管中进行手动法操作、在96孔圆孔板中实现手动法高通量操作（单人同时操作1~6块96孔板，可同步实现96~576份样本抽提工作）、或者与各种自动化核酸提取仪配合使用实现自动化高通量操作。
质粒小量提取试剂盒说明书
质粒小量提取试剂盒说明书货号：D1100规格：50T/100T保存：常温保存，复检期一年。
（注：RNase A以附件形式发货，收到未使用前请-20℃保存）试剂盒内容：试剂盒组成D1100-50T D1100-100TRNase A300ul500ul溶液Ⅰ15ml30ml溶液Ⅱ15ml30ml溶液Ⅲ20ml40ml漂洗液15ml15ml×2洗脱液15ml30ml吸附柱50个100个收集管50个100个说明书1份1份产品说明：本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，根据离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA的原理特异性提取质粒DNA。
离心吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一地吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。
使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。
使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。
溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA （将试剂盒中提供的RNaseA全部加入），混匀，置于2-8℃保存。
如非指明，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
操作步骤:1、取1-5ml细菌培养物，12000rpm离心1min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。
2、向留有菌体沉淀的离心管中加入250ul溶液Ⅰ(请先检查是否已加入RNaseA），使用移液器或旋涡振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。
注意：如果菌块未彻底混匀，会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入250ul溶液Ⅱ，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。
注意：混匀一定要温和，以免污染细菌基因组DNA，此时菌液应变得清亮粘稠，作用时间不要超过5min，以免质粒受到破坏。
4、向离心管中加入350ul溶液Ⅲ，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀。
12000rpm离心10min，用移液器小心地将上清转移到另一个干净的离心管中，尽量不要吸出沉淀。
TaKaRa MutanBEST Kit （20 次量） 说明书
TaKaRa Code：D401TaKaRa MutanBEST Kit（20次量）宝生物工程(大连)有限公司目录内容页码●制品说明 1●制品内容 1●保存 1●试剂盒原理 1●操作方法 2I . PCR反应 2II. Blunting Kination反应 2 III. Ligation反应3 IV. 结果 3 ●注意事项 3●制品说明本制品是利用PCR技术进行定点突变操作的试剂盒。
其原理是利用导入变异点的引物进行PCR反应后，对PCR产物进行末端平滑化及5′磷酸（P）化处理，再用高效连接试剂Ligation Solution I进行自身连接（环化反应），然后转化、提取突变体DNA。
本试剂盒的原理十分简单，但Taq酶在PCR过程中的错配率限制了这一技术的应用。
现在，TaKaRa的Pyrobest DNA Polymerase使这一技术得到了最大程度的发挥。
Pyrobest DNA Polymerase不仅具有超高的保真性（Fidelity），并且和TaKaRa Taq具有同样的扩增效率。
与其他突变试剂盒相比，本试剂盒的最大特点是操作方便、简单，只需一天时间便可完成整个操作，并且不受载体、宿主菌的限制。
●制品内容（20次量）Pyrobest DNA Polymerase（5 U/μl） 15 μl10×Pyrobest Buffer II 200 μldNTP Mixture（2.5 mM each） 180 μl10×Blunting Kination Buffer 50 μlBlunting Kination Enzyme Mix 25 μlLigation Solution I 150 μl●保 存： -20℃●试剂盒原理试剂盒原理见图1，全套操作约需5小时，简单说明如下。
1. 设计一对5′端邻接，3′端方向相反的引物用以导入变异点。
2. 进行PCR扩增（使用高保真DNA聚合酶Pyrobest DNA Polymerase）。
高纯度质粒小量提取试剂盒 说明书
大班数学活动教案：拼图教案1. 教学背景学生年龄：4-5岁学生已具备的知识和技能：会数数、认识一到十的数字、知道形状与颜色的区别2. 教学目标2.1 知识目标1.学生能把简单的拼图拼好，并准确地说出拼图所属的几何形状。
2.学生能通过拼图，巩固对一到十个数字的认识。
2.2 技能目标1.提升学生的动手能力，能够按照图示，拼好拼图。
2.培养学生的观察能力，能够观察拼图的几何形状和数字，准确地做出判断。
2.3 情感目标1.养成学生对数学活动的兴趣，让学生体验到学习数学的快乐。
2.培养学生的合作意识，学生能够在小组内合作完成拼图。
3. 教学过程3.1 导入环节教师问学生：“你们在家里会玩拼图吗？”学生回答时，教师让学生展示一下自己的拼图，然后教师说：“好的，今天我们就来学习大一点的拼图，准备好了吗？”3.2 活动环节一：拼图过程1.分组：教师将学生分成小组，每组三到四名学生。
2.活动准备：教师为每个小组提供一份数字拼图图纸，和相应的拼图，每张图纸上有一到十个数字和图形，学生需要根据图纸上的数字和图形拼出对应的图片。
3.活动过程：教师告诉学生，现在开始拼图，让学生自由组合句子，优美表达以及敢于发言。
学生在拼图过程中，要注意拼图的位置和相互之间的关系，有效进行小组合作，完成自己的任务。
3.3 活动环节二：讲解数字与形状教师在学生完成拼图后，根据每个组完成拼图的情况，问学生完成拼图的过程，并带学生回顾每个数字都对应的几何形状，如数字一对应的图形是直线，数字五对应的图形是五边形等。
3.4 活动环节三：游戏比赛教师让每个小组选一名代表出来，分别进行拼图比赛，以时间最短和完成度最高的小组为胜者，并为获胜小组颁发奖励。
4. 教学反思这次的数学活动，让学生在拼图的过程中，不仅锻炼了学生的动手能力和观察力，还让学生对数字和几何形状有了更深刻的认识。
同时，我们也培养了学生的合作意识，让他们感受到集体的力量。
在今后的数学活动中，我们将进一步发扬数学活动的魅力，让学生在活动中感受到更多的乐趣。
质粒DNA小量提取试剂盒说明书
质粒DNA 小量提取试剂盒一、产品简介采用SDS碱裂解法，结合硅胶膜选择性吸附DNA的方法，适合1-4ml细菌培养物中提取多至20 μg质粒DNA。
纯化的质粒DNA适合用于酶切、PCR、测序、转化和转染等分子生物学实验。
二、试剂盒组成和储存组成内容DK301-01 (50次) DK301-02 (200次)RNase A1＊30 μl 120 μlBuffer BL 15 ml 60 mlBuffer P1 15 ml 60 mlBuffer P2 15 ml 60 mlBuffer P3 20 ml 90 mlBuffer WA§19 ml 75 mlBuffer WB§16 ml 65 mlDNA吸附柱-B 50套200套1.5 ml离心管50个200个TE※15 ml 30 ml说明书1份1份＊RNase A1: 50 mg/ml, -20℃长期保存；第一次使用前将RNase A1全部加入Buffer P1中，于4℃保存。
§Buffer WA和Buffer WB，使用前按试剂瓶所示体积加入无水乙醇或者95%乙醇，混合均匀。
※TE：10 mM Tris-HCl, 0.1 mM EDTA, pH 8.0(25°C)。
除RNase A1和Buffer P1(已加入RNase A1)外，其他组成成分于室温储存。
三、注意事项1.Buffer P3和Buffer WA含刺激性化合物，避免沾染皮肤、眼睛和衣服、谨防吸入口鼻。
若沾染皮肤、眼睛，立即使用大量水或生理盐水冲洗沾染处，必要时寻求医疗咨询。
2. 使用后应及时盖紧试剂瓶盖子，以免影响下次使用效果。
3. 操作步骤A2和B2，充分悬浮细菌，无可见的块状菌团，不然会影响裂解效果。
4. 操作步骤A3和B3，缓慢翻转离心管，以免机械力打断基因组DNA而导致最后纯化的质粒DNA中有基因组DNA污染，同时避免打断质粒DNA，保持其完整性。
takara 胶回收试剂盒说明书
操作流程1. 使用TAE缓冲液或TBE缓冲液制作琼脂糖凝胶，然后对目的DNA进行琼脂糖凝胶电泳。
2. 在紫外灯下切出含有目的DNA的琼脂糖凝胶，用纸巾吸尽凝胶表面的液体。
此时应注意尽量切除不含目的DNA部分的凝胶，尽量减小凝胶体积，提高DNA回收率。
胶块超过300 mg时，请使用多个Column进行回收，否则严重影响收率。
注）切胶时请注意不要将DNA 长时间暴露于紫外灯下，以防止DNA损伤。
3. 切碎胶块。
胶块切碎后可以加快操作步骤6的胶块溶解时间，提高DNA回收率。
4. 称量胶块重量，计算胶块体积。
计算胶块体积时，以1 mg=1 μl 进行计算。
5. 向胶块中加入胶块溶解液Buffer GM，Buffer GM的加量如下表：凝胶浓度Buffer GM使用量1.0％3个凝胶体积量1.0％～1.5％4个凝胶体积量1.5％～2.0％5个凝胶体积量6. 均匀混合后室温15-25℃溶解胶块（胶浓度较大或比较难溶时可以在37℃加热）。
此时应间断振荡混合，使胶块充分溶解（约5～10分钟）。
7. 当凝胶完全溶解后，观察溶胶液的颜色，如果溶胶液颜色由黄色变为橙色或粉色，向上述胶块溶解液中加入3 M醋酸钠溶液（pH5.2）10 μl，均匀混合至溶液恢复黄色。
当分离小于400 bp的DNA片段时，应在此溶液中再加入终浓度为20%的异丙醇。
8. 将试剂盒中的Spin Column安置于Collection Tube上。
9. 将上述操作步骤7的溶液转移至Spin Column中，12,000 rpm离心1分钟，弃滤液。
注）如将滤液再加入Spin Column中离心一次，可以提高DNA的回收率。
10. 将700 μl 的Buffer WB加入Spin Column中，室温12,000 rpm离心30秒钟，弃滤液。
注）请确认Buffer WB中已经加入了指定体积的100%乙醇。
11. 重复操作步骤10。
12. 将Spin Column安置于Collection Tube上，室温12,000 rpm离心1分钟。
TAKARA植物DNA提取试剂盒说明书
加入 Extraction Solution 2 振荡仪振荡 5 秒，轻微离心
加入 Extraction Solution 3 振荡仪振荡 5 秒，轻微离心
50℃温浴 15 分钟
上层水相移至新的 Microtube 中 加入异丙醇混匀后，12,000 rpm 4℃离心 10 分钟
-1-
8. 轻微离心 2 秒钟以内，于 50℃温浴 15 分钟。 注：长时间离心 Extraction Solution 3 将会分层， 务必控制在 2 秒钟以内。
9. 12,000 rpm 4℃离心 15 分钟。 10. 取上层水相移至新的 1.5 ml Microtube 中，上层水
相约 400 μl。注意尽量不要混入水相以外的物质。 11. 添加等量的异丙醇，轻柔混匀。
除去上清，加入 1 ml 70％乙醇清洗沉淀 12,000 rpm 4℃离心 3 分钟
●实验例
除去上清，沉淀干燥后用 TE Buffer 溶解
实验例 1：从植物组织中提取基因组 DNA
将拟南芥的幼芽、西红柿的幼芽和菠菜叶用剪刀剪至 3 mm 以下角形状，分别称取 20 mg 和 50 mg 放入
1.5 ml Microtube 中，于-20℃冻结后按“操作方法”进行基因组 DNA 的提取，基因组 DNA 使用 20 μl TE
淀。 注：沉淀过度干燥将导致难以溶解，请注意。
注 1. 回收的基因组 DNA 溶液可直接作为 PCR 反应的 模板或直接进行限制酶切断等反应。 使用 20 μl TE Buffer 溶解基因组 DNA 时，PCR 反应液（25 μl 反应体系）或限制酶酶切反应液（20 μl 反应体系）中添加的 DNA 溶液在 0.5～2 μl 之 间为好。
Takara基因组抽提试剂盒说明书
3. 准备 65℃水浴。 4. Solution A、Solution B 若出现沉淀，请于 65℃加热溶解，待恢复至室温后使用。 5. Rinse B 在首次使用前，请添加 56 ml 的 100%乙醇。 6. 洗脱结合于 DNA 制备膜上的基因组 DNA 时，把 Elution Buffer 或灭菌蒸馏水加热至 65℃使用将
●制品内容（50 次量）
本试剂盒分试剂 Set 与 Column Set 两部分。 ■ 试剂 Set
RNase A1（50 mg/ml）*1
20 μl
Lysozyme
60 mg
Glycerol
1.2 ml
EDTA Buffer
2 ml
SP Buffer
10 ml
Solution A*2
12 ml
Solution B*2
注）注意不要残留细小菌块，可以使用振荡器（Vortex） 等剧烈振荡使菌体充分悬浮。
4. 加入 20 μl 的 Lysozyme 溶液，均匀混合后室温静置 5 分钟。
5. 加入 30 μl 的 EDTA Buffer，均匀混合后室温静置 5 分钟。
6. 加入 200 μl 的 Solution A，剧烈振荡后 65℃保温 10
后应充分混合。 ② Lysozyme 失活。Lysozyme 配制成溶液后应保证在-20℃保存。 ③ 洗脱时将灭菌蒸馏水或 Elution Buffer 加热至 65℃后使用将有利于提高洗脱效率。 ④ 严格按照操作方法进行操作。
takara反转录试剂盒说明书
Code No. RR047A 研究用PrimeScript™RT reagent Kitwith gDNA Eraser(Perfect Real Time)说明书目录内容页码●制品说明1●制品内容 1 ●试剂盒外必备材料 1 ●保存 1 ●特长 2 ●使用注意 2 ●操作方法 2 ● Real Time PCR 4 ●实验例 6 ●附录7 ●关联产品8●制品说明为了准确地进行基因表达量分析，必须满足只有cDNA作为模板检出的先决条件，但Total RNA中常常混有基因组DNA，并可以直接作为PCR反应的模板进行扩增，因此会造成解析结果不准确。
为了避免这种情况发生，通常将检测用引物设计在内含子前后的外显子上，使基因组DNA得不到扩增。
但是，此方法不适合具有单个外显子的基因或两个外显子之间所跨的内含子过小的基因，同时当基因组上有伪基因存在时、或设计引物对基因组有非特异性扩增时、以及基因信息没被完全解析的生物种等也同样不适合于本方法。
在这种情况下，我们常常需要对Total RNA样品进行DNase I处理，以除去残存的基因组DNA。
而DNase I处理通常要进行复杂的纯化操作，同时会造成RNA的降解和损失。
PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser是可以除去基因组DNA进行Real Time RT-PCR反应的专用反转录试剂。
Kit中使用了具有较强DNA分解活性的gDNA Eraser，通过42℃，2 min即可除去基因组DNA。
同时由于反转录试剂中含有抑制DNA分解酶活性的组分，经过gDNA Eraser处理后的样品可以直接进行15 min的反转录反应合成cDNA，因此，20 min内即可迅速完成从基因组DNA去除到cDNA合成的全过程。
使用本制品合成的cDNA适用于SYBR® Green分析法和TaqMan®探针分析法，可以根据实验目的，选择与SYBR Premix Ex Taq™ II（Tli RNaseH Plus）（Code No. RR820Q/A/B）、Probe qPCR Mix（Code No. RR391S/A/B）组合使用。
新景质粒DNA小量试剂盒说明书
4. 将LB培养基中的NaCl含量提高到10g/L，每毫升LB细菌培养物的质粒回收效率能提 高2 μg左右。
2. 菌体溶解
快速收集的菌体（12000 rpm 离心30秒）通常会堆积得比较紧密而不易悬浮，可以 改用3000 rpm 离心5分钟收集菌体，以便于后续悬浮步骤的操作。
Buffer W2 会洗去残留在膜上的 Buffer W1，确保纯净的质粒 DNA 吸附在纯化柱上。 质粒 DNA 结合、洗涤的过程中只需要使溶液滤过纯化柱即可，因此对离心速度和 离心时间并无严格的要求。如果使用国产离心机，可以将离心速度改为 8000 rpm 以降 低噪音；如果使用进口离心机，则可以选用离心机中的“short run”或“quick”模式运行 以节约操作时间。
质量保证
杭州新景生物试剂开发有限公司保证提供的产品是通过质量检验的合格产品。如果 用户在使用中发现产品不能满足实验要求，请立即停止使用产品，并联络我公司技术支 持获取帮助；或者直接联络我公司当地代理商，提出产品更换要求（注意：如果经过鉴 定是因为客户的错误操作所导致的实验失败，我公司只能提供相应的补救措施，保留不 予更换的权利）。
化质粒 DNA，Buffer W1 洗涤步骤不能省略，残留在纯化柱上的微量蛋白（主要是内源 性的非特异性核酸内切酶Ⅰ）会严重影响后续的酶切反应。下表是常见宿主菌的 endA 基因型。
如果从 DH5α、DH10B 等限制性内切酶缺陷型（endA-）宿主菌中纯化质粒 DNA， Buffer W1 洗涤步骤可以省略。但如果从 5ml LB 细菌培养物中分离纯化质粒，残留在纯 化柱上的蛋白会增多，也不应省略 Buffer W1 的洗涤步骤。
Copy number 500–700 300–500 300–400 >1000 15–20 10–12 ~5
高纯度质粒小提中量试剂盒操作方法及步骤说明书
高纯度质粒小提中量试剂盒操作方法及步骤说明书高纯度质粒小提中量试剂盒目录号：PL1801适用范围：适用于5-15ml 中等规模质粒制备（mind preparations）试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次平衡液室温5mlRNase A（10mg/ml）－20℃250μl溶液P1 4℃25 ml溶液P2 室温25 ml溶液P3 室温35 ml去蛋白液PE 室温16ml第一次使用前按说明加指定量乙醇漂洗液WB 室温15 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温10ml吸附柱AC 室温50个收集管（2ml）室温50个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:1.第一次使用时，将试剂盒所带的全部RNase A加入溶液P1后（终浓度100ug/ml）置于2-8℃保存。
如果溶液P1中RNase A失活，提取的质粒可能会有微量RNA残留，在溶液P1中补加RNase A即可。
2.环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍：本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞，离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
产品特点：1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。
克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.独有的去蛋白液配方，可以高效去除残留的核酸酶，即使是核酸酶含量丰富的菌株如JM系列、HB101也可以轻松去除。
有效防止了质粒被核酸酶降解。
3.快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。
获得的质粒产量高、纯度好，可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。
质粒小提试剂盒使用说明书
质粒小提试剂盒I 简明步骤（PD1211）（详细内容请参考英文说明书）I.实验前准备 II. 注意事项RNase A: 使用前将提供的所有RNase A 瞬时离心后加入Buffer A1, 使用后将Buffer A1/RNase A 置于4o C 保存。
质粒拷贝数:纯化中低拷贝的质粒时，使用2倍的菌液体积，2倍的Buffer A1,B1,N1, 相同体积的Wash Buffer 和Elution Buffer.转化菌:若为-70o C 甘油冻存的菌，请先涂布平板培养后，再重新挑选新的单个菌落进行培养。
切勿直接取冻存的菌种进行培养。
DNA Wash Buffer*: 使用前请将8 mL (PD1211-00)或48 mL (PD1211-01)或216 mL (PD1211-02) or 90 mL (PD1211-03) 96-100% 乙醇加入DNA Wash Buffer 。
Buffer B1: 在低于室温时会沉淀，请于50o C 左右水浴加热至沉淀完全溶解，溶液澄清，使用后保证Buffer B1瓶盖旋紧。
在室温下（22-25o C ）进行所有离心操作。
III. 操作步骤1. 接种新鲜的单个菌落到1-5 mL 的LB 培养基（含适量抗生素），37o C 震荡培养14-16小时。
室温下10,000 x g 离心1分钟，收集菌体，并尽可能的吸去上清。
注：残留的液体培养基容易导致菌液裂解不充分，第5步离心后沉淀较松，不能有效吸取上清。
注：本说明书中的操作程序适用于标准LB （Luria Bertani ）培养基培养12-16 小时后，OD 600（细菌密度）在2.0-3.0之间的菌液。
若采用的是富集培养基，例如TB 或2×YT，请注意保证OD 600不超过3.0。
2. 加入250 µL Buffer A1（确保已加入RNase A ），用移液枪或涡流震荡充分悬浮细菌细胞。
Takara 感受态制备试剂盒说明书
TaKaRa Code：D406Competent Cell Preparation Kit次（200量）宝生物工程(大连)有限公司目录内 容 页 码●制品说明 1●制品内容 1●制品保存 1●使用注意 1●感受态细胞的制备方法 1●感受态细胞的DNA转化 2●实验例 2●相关试剂及培养基的制备方法 3■Ampicillin 3■IPTG 3■X-Gal 3■LB培养基 3■LB/Amp培养基 3■SOB培养基 3■SOC培养基 4■φb×broth 4■LB/Amp/X-Gal/IPTG平板培养基 4●制品说明大肠杆菌经过处理后可以摄取外源DNA（Plasmid DNA、Phage DNA等），处于这种状态的细胞称为感受态细胞（Competent Cell）。
在基因工程实验中，经常要使用各种感受态细胞进行DNA的转化操作。
实验使用的感受态细胞的来源大体可以分为两种：一种是购买商品化的感受态细胞，但商品化感受态细胞成本高、运输及保存有一定困难（超低温）；另一种是自己制备感受态细胞，实验人员自己制作感受态细胞时，往往受到各种试剂及实验条件等限制，制备的感受态细胞效率低，达不到实验要求。
TaKaRa Competent Cell Preparation Kit是一种方便、高效、快速制备感受态细胞的试剂盒。
使用本试剂盒制备的感受态细胞可以满足大多数实验的需要，并且适用于几乎所有常用的大肠杆菌，例如：E.coli DH5α、JM109、CJ236、HB101、MV1184、BMH71-18mut S等，转化效率均可以达到1×106 cfu/μg pUC19以上（转化效率根据大肠杆菌细胞系及转化用DNA不同稍有差异）。
使用本试剂盒制备的感受态细胞可以在-80℃保存一年。
●制品内容（200次量）Solution A 20 mlSolution B 20 ml●制品保存：4℃保存。
●使用注意1.制作感受态细胞时应使用专用的玻璃器皿或塑料容器。
Takara基因组抽提试剂盒说明书
1% Agarose 凝胶电泳图 M1 ： λ-Hind III digest DNA Marker
1 ： 纯化的基因组 DNA 2 ： PCR 扩增片段（约 1,500 bp） M2 ： DL2,000 DNA Marker
图 2.基因组 DNA 及其 PCR 扩增结果电泳图 -3-
注）请确认 Rinse B 中已经加入了指定体积的 100%乙醇。 15. 重复操作步骤 14，然后从负压装置上取下 Spin Column，将其安置于试剂盒中的 Collection Tube
上。 16. 12, 000 rpm 离心 1 分钟。 17. 将 Spin Column 安置于新的 1.5 ml 的离心管上，在 Spin Column 膜的中央处加入 60 μl 的灭菌
Q1. 基因组 DNA 的收率较低或无基因组 DNA，为什么？ A1. 一般正常情况下，1～4 ml 的过夜培养大肠杆菌中，可以提取约 3 μg 的基因组 DNA。基因组 DNA
收量较低时，可以从以下几个方面考虑： ① DNA 未充分释放。保证在 SP Buffer 中充分悬浮菌体，注意不要残留菌块；加入 Solution A
否则将阻碍 DNA 结合到 DNA 制备膜上。 5. 部分试剂中含刺激性化合物，在步骤 7 以后的操作中请戴上乳胶手套和眼镜，并应尽量在通风橱中
进行。若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水冲洗，必要时应寻求医疗咨询。 6. 基因组 DNA 需长期保存时，建议在 Elution Buffer 中保存。
●Q&A
11. 弃 Filter Cup，在滤液中加入 450 μl 的 DB Buffer， 混合均匀。
12. 将试剂盒中的 Spin Column 安置于 Collection Tube 上。
质粒小量提取试剂盒磁珠法说明书
质粒小量提取试剂盒（磁珠法）说明书货号：DM1100规格：50T/100T保存：磁珠可以在室温下（15-25℃）运输，但请在4℃冰箱中保存。
RNase A 需-20℃保存，以保证其活性。
其余试剂可以室温保存，更长时间的保存可置于2-8℃。
试剂盒内容：产品说明：本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，再通过具有独特分离作用的磁珠和缓冲液系统在高盐状态下特异性地结合溶液中的质粒DNA。
使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接、转化、文库筛选、体外翻译、转染一些常规的传代细胞等。
使用前请先在漂洗液中配置70%乙醇。
若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min溶解沉淀，摇匀后使用。
操作步骤：1. 裂解取1～5 mL菌液至EP管中，12000 rpm离心2分钟，尽量吸净上清。
在菌体沉淀中加入250 μl裂解液R1和2.5μl RNase A，吸打或振荡至彻底悬浮菌体；加入250 μl裂解液R2，立即温和颠倒离心管5-10次混匀，室温静置2-4 min；加入350 μl裂解液R3，立即温和颠倒离心管5-10次充分混匀（此时底部可能会出现大量白色絮状沉淀属于正常现象）。
置于离心机12000rpm，4℃离心5-10 min。
2. 结合尽量取净上清于新的1.5 mL EP管中，加入等量异丙醇以及振荡混匀的50 μL磁珠，颠倒混匀1 min，静置3 min。
将EP管置于磁铁上进行磁分离，吸弃废液（吸净管盖及管底残液）。
3. 洗涤加入600 μL 漂洗液（使用前请预先配置70%乙醇），轻柔混匀1-2 min，然后磁分离，吸净管盖及管底的残液；重复本步骤一次。
4. 洗脱室温晾干5～10 min至乙醇挥发完全，加入50～100 μL洗脱液，缓慢抽吸混匀，56℃水浴10 min。
每隔2～3 min轻摇EP管几下混匀。
然后磁分离，小心吸取上清液至新的EP管中，进行下步实验。
质粒小量提取纯化试剂盒 说明书
质粒小量提取纯化试剂盒使用说明书产品简介GBpure Plasmid试剂盒是质粒DNA提取领域中的突破性进展，它有效结合了细胞裂解，杂质去除，及质粒纯化等功能。
无需过柱，不用酚氯仿抽提，直接获得高质量的质粒DNA。
我们独特的试剂系统能确保所提质粒DNA高产量，高质量。
本试剂纯度高，采用人性化设计，可按用户需求灵活制定容量大小。
产品特色●简单:添加GBpure Plasmid使细胞裂解，释放DNA，及杂质去除有效结合起来。
●方便:无需过柱，无需过滤，无需高效液相色谱法，无需超速离心机，无需特殊设备。
●无毒性:无酚、氯仿，无饱和正丁醇，无溴化乙锭，无氯化铯，无盐酸胍。
●快速:一分钟完成菌体沉淀，五分钟完成颗粒细菌碎片，10分钟完成沉淀质粒DNA，从培养细菌到提取质粒DNA只需30分钟。
●高纯度:A260/A280 = 1.7-1.8. 所得质粒DNA无任何抑制剂，可应用于所有分子生物学的操作。
●延展性: 一盒GBpure Plasmid试剂盒可以进行：miniprep, midiprep,或maxiprep;无需购买额外的试剂盒。
●高产量: 您可以从1 (mini), 10 (midi), 100 (maxi) ml的过夜培养基中获得大约5μg, 50 μg, 500 μg的DNA质粒。
●实惠：一盒GBpure Plasmid 售价 RMB 500/ 50 minipreps，即 RMB10/miniprep ，质优价廉。
产品内容与储存条件室温保存。
有效期12个月。
操作方法1.取1 ml过夜培养菌液，装入1.5 ml离心管中，室温12,000 × g离心1 min沉淀菌体，完全弃除上清。
2.加入300 μl Buffer P1，充分混匀震荡菌体沉淀10-15 sec，使其完全分散开，至无絮块存在。
3.加入300 μl Buffer P2，轻轻颠倒离心管3-5次，室温放置1 min，使细菌完全裂解，此时溶液应呈透明。
质粒小量提取试剂盒说明书
质粒小量提取试剂盒说明书货号：D1100规格：50T/100T保存：常温保存，复检期一年。
（注：RNase A 以附件形式发货，收到未使用前请-20℃保存）试剂盒内容：试剂盒组成D1100-50T D1100-100T RNase A 200μL 400μL 溶液Ⅰ15mL 30mL 溶液Ⅱ15mL 30mL 溶液Ⅲ20mL 40mL 漂洗液Ⅰ24ml 48ml 漂洗液Ⅱ15mL 15mL×2洗脱液15mL 30mL 吸附柱50个100个收集管50个100个说明书1份1份产品说明：本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，根据离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA 的原理特异性提取质粒DNA 。
离心吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一地吸附DNA ，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。
使用本试剂盒提取的质粒DNA 可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR 、测序、连接和转化等试验。
使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。
溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA （将试剂盒中提供的RNaseA 全部加入），混匀，置于2-8℃保存。
如非指明，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
操作步骤（仅供参考）:1、取1-5mL 细菌培养物，12000rpm 离心1min ，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。
2、向留有菌体沉淀的离心管中加入250μL 溶液Ⅰ(请先检查是否已加入RNaseA ），使用移液器或旋涡振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。
注意：如果菌块未彻底混匀，会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入250μL 溶液Ⅱ，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。
注意：混匀一定要温和，以免污染细菌基因组DNA ，此时菌液应变得清亮粘稠，作用时间不要超过5min ，以免质粒受到破坏。
4、向离心管中加入350μL 溶液Ⅲ，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
● 使用例
使用本试剂盒纯化1.5 ml 的 TB 培养基的菌液（菌体 JM109），得到约16 μg 的质粒 DNA（OD260/OD280 ≥1.8），此质粒为 pUC119，用 Hind Ⅲ酶切1 小时（电泳结果见图2）。
会影响吸光度值的测定，此时建议使用琼脂糖凝胶电泳法进行定量。 ② 质粒 DNA 纯度不好。请严格遵守实验操作要求，使用新鲜菌体培养液提取质粒。 ③ 进行 DNA 洗脱时用灭菌蒸馏水洗脱。 ④ DNA 插入片段本身立体结构复杂。有些 DNA 立体结构复杂（如 GC rich、重复序列等）时难以测
序，应改进测序方法。 Q6. 质粒 DNA 的最小洗脱体积是多少？ A6. 我们建议的洗脱体积为 30-100 μl，此种洗脱体积下收率最佳（但要注意洗脱液需直接加至膜中心），
● 制品说明
本试剂盒是用于质粒（Plasmid）DNA 小量纯化的试剂盒。试剂盒采用了传统的 SDS 碱裂解法，结合硅 胶膜技术，具有高效、快速、方便之特点，全套操作只需 1 小时便可完成。使用本试剂盒可从 1～4 ml LB 培养基过夜培养的菌液中纯化得到 1～20 μg 的高纯度质粒 DNA（OD260/OD280 = 1.8～2.0），制备过 程无需苯酚抽提、乙醇沉淀等步骤，所得质粒 DNA 溶解于 Tris Buffer 或水中，纯度较高，可直接用于 转化、DNA 序列分析、体外转录、限制酶切以及其他各种酶促反应。
2. 加入 Solution Ⅱ和 Solution Ⅲ后，不要剧烈混合（Vortex 等），剧烈混合会导致基因组 DNA 的污染。 3. 加入 Solution Ⅲ后，应充分混合使蛋白质、基因组 DNA 等形成白色沉淀，离心后沉降于离心管底部。
若离心后沉淀仍悬浮于溶液中时，请将离心管上下翻转混合数次后高速离心 3～5 分钟。 4. 纯化的质粒 DNA 用于 DNA 序列分析时，最好使用灭菌蒸馏水洗脱质粒 DNA。 5. 质粒 DNA 需长期保存时，建议在 Elution Buffer 中保存。
*1 含有强碱溶液，应避免与皮肤、衣物等接触。若不小心接触到眼睛或皮肤时，请立即到医院进行 处理。
*2 含有强变性剂，应避免与皮肤、衣物等接触。若不小心接触到眼睛或皮肤时，请立即到医院进 行处理。
*3 首次使用前，向 Buffer WB 中添加 56 ml 的 100%乙醇。
■ Column Set
-3-
Q2. 本试剂盒对低拷贝质粒的纯化提取情况如何？ A2. 对于低拷贝质粒，使用 4 ml 的菌体培养液进行质粒 DNA 的提取比较合适。如使用 pBI121 质粒时，
从 4 ml 的菌体培养液中，可以纯化提取 2～3 μg 的高纯度质粒 DNA。若质粒量仍不够可以多次提取 后混合使用。 Q3. 质粒 DNA 的收量较低，为什么？ A3. 一般情况下，从 2 ml 的 LB 培养基进行过夜培养的 pUC118/JM109 培养液中，可以纯化约 10 μg 高 纯度质粒 DNA。质粒 DNA 收量较低时，可以从以下几个方面考虑： ① 大肠杆菌太陈旧（低温下长期保存的菌等）。请涂布平板培养后，重新挑选新菌落进行液体培养。 ② 质粒拷贝数低。使用低拷贝数载体时，每次产出的质粒 DNA 量会降低。 ③ 确认操作过程的严密性。应严格按操作方法进行操作。 ④ 洗脱时将灭菌蒸馏水或 Elution Buffer 加热至 60℃后使用有利于提高洗脱效率。 Q4. 加入 Solution Ⅱ后的溶菌液不澄清，为什么？ A4. ① 菌体量过多，不能充分溶菌。使用本试剂盒时，每次可处理的菌体培养液为 1～4 ml，菌体量过多
溶液（流速控制在 1 滴/秒）。 9. 将负压调至最大，向 Spin Column 中加入 500 μl 的 Buffer WA，吸尽 Spin Column 中溶液。 10. 向 Spin Column 中加入 700 μl 的 Buffer WB，吸尽 Spin Column 中溶液。
注）请确认 Buffer WB 中已经加入了指定体积的 100%乙醇。 11. 重复操作步骤 10，然后从负压装置上取下 Spin Column，将其安置于 Collection Tube 上。 12. 12,000 rpm 离心 1 分钟，除尽残留洗液。 13. 将 Spin Column 安置于新的 1.5 ml 的离心管上，在 Spin Column 膜的中央处加入 50 μl 的灭菌蒸馏
研究用
Code No. 9760
TaKaRa MiniBEST Plasmid Purification Kit Ver.4.0
说明书
v201412Da
目录
内容
● 制品说明 ● 制品内容 ● 保存与运输 ● 使用前的准备事项 ● 操作方法 ● 使用例 ● 注意事项 ● Q&A
页码
1 1 1 1 2 3 3 3
● Q&A
Q1. 纯化质粒 DNA 时，一般使用多少菌体培养液比较合适？ A1. 根据我们的经验，如为高拷贝质粒（如：pUC118 等），使用 2 ml 培养液与 4 ml 培养液纯化的质粒 DNA
的收量差别不是很大，可以纯化 10～15 μg 高纯度质粒 DNA。我们一般使用 2 ml 的菌体培养液进行 质粒 DNA 提取。
DNA 溶液
图 1. 操作流程简图
-2-
如果实验室备有适合于 Spin Column 接口的负压装置，可从上述操作步骤 6 以后进行以下操作。 7. 将试剂盒中的 Spin Column 插到负压装置的插口上。 8. 将上述操作步骤 6 的上清液转移到 Spin Column 中，开启调节负压装置，缓慢吸走 Spin Column 中的
时，需要按照比例增加 Solution I/II/III 的加量。 ② 菌体沉淀悬浮不充分。在加入 Solution Ⅰ后，应使用振荡器（Vortex）等进行剧烈振荡使菌体沉
淀充分悬浮后再做溶菌处理。 Q5. 质粒 DNA 测序结果不佳，为什么？ A5. ① 模板 DNA 加量不准。请对质粒 DNA 正确定量。使用吸光度值定量时，有时 DNA 溶液中的不纯物
Spin Columns Collection tubes
50 支 50 支
【试剂盒之外所需准备试剂】 ◆ 无水乙醇 ◆ 灭菌水或 Tris-HCl（pH8.0）
● 保存与运输
1. 本试剂盒可以在室温下（15-25℃）保存，但温度较低时，有的 Buffer 会出现沉淀，使用前需 37℃加 热直至沉淀消失。
2. Solution I 中加入 RNase A 后可于 4℃保存约 3 个月。 3. RNase A 可于室温下（15-25℃）保存 6 个月，长期保存需存放于-20℃。 4. 本试剂盒于室温下（15-25℃）运输。
● 使用前的准备事项
1. 初次使用本试剂盒时，请将 RNase A 混浊液全部加入到 Solution Ⅰ中，均匀混合后 4℃保存。 2. 首次使用前，向 Buffer WB 中添加 56 ml 的 100%乙醇。 3. 检查 Solution II 和 Solution III 中是否有沉淀，如果有沉淀请将试剂置于 37℃温浴直至沉淀全部消失，
1. 大肠杆菌的培养。 从平板培养基上挑选单菌落接种至 1～4 ml 的含有抗生素的 液体培养基中，37℃过夜培养（培养 12-16 小时，培养超过 16 小时细胞将难以裂解，质粒收量也会随之降低）。 注）培养液不宜过量，培养液过量时，会因菌量太大而溶菌 不充分，纯化时会影响质粒的纯度。
2. 取 1～4 ml 的过夜培养菌液，12,000 rpm 离心 2 分钟，弃 上清。
3. 用 250 μl 的 Solution Ⅰ（含 RNase A）充分悬浮细菌沉淀。 注）注意不要残留细小菌块，可以使用振荡器（Vortex）等 剧烈振荡使菌体充分悬浮。
4. 加入 250 μl 的 Solution Ⅱ轻轻上下翻转混合 5～6 次，使 菌体充分裂解，形成透明溶液。 注）轻轻颠倒混合，不可剧烈振荡，此步骤不宜超过 5 分钟。
菌体培养液 菌体
Solution Ⅰ Solution Ⅱ Solution Ⅲ
裂解、中和
上清转移至 Spin Column 中
Buffer WA Buffer WB 清洗 Spin Column
将 Spin Column 安 装于新 1.5 ml tube 上 加 Elution Buffer 加 Elution Buffer 加 Elution Buffer
5. 加入 350 μl 的 4℃预冷的 Solution Ⅲ，轻轻上下翻转混合 5～6 次，直至形成紧实凝集块，然后室温静置 2 分钟。
6. 室温 12,000 rpm 离心 10 分钟，取上清。 注）此时 4℃离心不利于沉淀沉降。
7. 将试剂盒中的 Spin Column 安置于 Collection Tube 上。 8. 将操作步骤 6 的上清液转移至 Spin Column 中，12,000 rpm
不可剧烈振荡 Solution II，以免产生大量气泡。
-1-
4. Solution II 使用后，应立即盖紧盖子，避免试剂长时间与空气接触。 5. Solution III 使用前请于 4℃预冷。 6. 试剂中含有强碱及变性剂，操作时应佩戴手套等防护用具。
● 操作方法
确认 Solution Ⅰ中是否加入了 RNase A；Buffer WB 中是否 加入了无水乙醇。 实验操作前请将 Solution Ⅲ置于 4℃（或冰上）预冷后使用。 操作流程见图 1，全套操作约需 1 小时，详细说明如下。
● 制品内容（50 次量）
本试剂盒分试剂 Set 与 Column Set 两部分。 ■ 试剂 Set