体外诊断试剂培训最新课件

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标准液个数的原因
• 校准液个数浓度校准曲线线性好并通过坐标零点 的，可采用一个校准液；线性好但不通过坐标零 点，应使用两个校准液；对于校准曲线呈非线性 者，必须使用两个以上校准液。每一个校准液都 要有一个合适的浓度。
• 吸光度
6000
3000
浓度
5 8 10
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生化类产品基本原理
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Βιβλιοθήκη Baidu
生化类产品说明书
生化分析仪说明书除法规相关规定外，还至少包括： • 适用机型 • 反应温度（37度） • 主波长、次波长 • 孵育时间（终点法或两点法） • 延迟时间（连续监测法）、连续监测时间在延迟时间之后即开始，一
般为60～120s不少于4个吸光度检测点（3个吸光度变化值）； • 加样量 • 校准液个数（非线性必须两个以上）等。
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免疫类产品质量技术风险点分析
• 辣根过氧化物酶 • 过氧化物酶（HRP）广泛分布于植物中，辣根中含量最高，
从辣根中提取的称辣根过氧化物酶（HRP），酶蛋白和辅基 的最大吸收光谱分别为275nm和403nm。 • 酶的纯度以RZ表示：RZ=OD403/OD275 • 纯酶的RZ多在3.0以上，最高为3.4。RZ在0.6以下的酶制品为粗 酶，非酶蛋白约占 75%，不能用于标记。RZ在2.5以上者方可 用于标记。（检查进货检验记录或生产过程记录）
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体外诊断产品的类别
• 微生物：通过培养鉴别细菌等微生物的方法。 • 血液学：通过电阻抗、激光和高能电磁波等技术检测血液中血细胞的数量和分
类的方法。
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生化类产品基本方法
• 生化分析仪反应的一般称为生化试剂
• 两点法、终点法、速率法、比浊法 • 两点法： • 测定酶反应开始后某一时间内(t1到t2)产物或底物浓度的总变化量以求取酶反应
• 两点法： 苦味酸法测定肌酐采用此法
• 速率法对于酶活性测定，如丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱 氢酶、碱性磷酸酶、γ谷氨氨酰基转移酶、淀粉酶和肌酸激酶等。一些代谢物 酶法测定的项目如己糖激酶法测定葡萄糖、脲酶偶联法测定尿素等，也可用连 续监测法。（7个酶加葡萄糖、尿素）
• 免疫比浊法载脂蛋白、免疫球蛋白、补体、抗“O”、类风湿因子，以及血清中 的其他蛋白质如前白蛋白、结合珠蛋白、转铁蛋白等均可用此法。(蛋白）
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生化类产品基本方法
• 终点法常用的有总胆红素（氧化法或重氮法）、结合胆红素（氧化法或重氮 法）、血清总蛋白（双缩脲法）、血清白蛋白（溴甲酚氯法）、总胆汁酸（酶 法）、葡萄糖（葡萄糖氧化酶法）、尿酸（尿酸酶法）、总胆固醇（胆固醇氧 化酶法）、甘油三酯（磷酸甘油氧化酶酶法）、高密度脂蛋白胆固醇（直接测 定法）、钙（偶氮砷Ⅲ法）、磷（紫外法）、镁（二甲苯胺蓝法）。
氧化反应:
还原反应：
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生化类产品质量风险点分析
原材料(辅酶I )（进货检验记录或生产记录中，应包括辅酶空白 吸光度的检验记录，且不同的类别符合下述特点）
还原性辅酶I主要用于下降反应，当还原性辅酶I质量出现问题 时，试剂的空白吸光度降低，导致试剂测量结果的不确定度变 大，测量的灵敏度也随之降低，测量线性范围变小。
体外诊断产品的生产监管
北京市医疗器械检验所
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主要内容
• 体外诊断产品的种类 • 体外诊断产品生产的基本原理
• 生化类产品 • 免疫类产品 • 分子类和血液类
• 溯源性问题
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体外诊断作用“医生的眼睛”
• 预测和诊断功能，如：
• 血细胞
• 抗体（肝炎、艾滋、IGE） • 基因（唐氏、小儿耳聋、遗传缺陷
氧化性辅酶I主要用于上升反应，当氧化性辅酶I质量出现问题
时，试剂的空白吸光度升高，导致试剂测量结果的不确定度变
大，测量的灵敏度也随之降低，测量线性范围变小。
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生化类产品质量技术风险点分析
生产记录中应包括试剂用水的电导率、PH值及微生物检验记录
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生化类产品质量风险点分析
• II类：除III、I类，如：蛋白质、糖类、酯类、酶类、维生素、无机离 子、激素等；
• I类：微生物培养基（不用于微生物鉴别和药敏试验）、样本处理用产 品，如溶血剂、稀释液、染色液等。
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体外诊断产品的类别
• 体外诊断专业分类:生化、免疫、分子生物学、微生物、体液等,临床使用超过千种。
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免疫产品质量风险点分析
• 酶与抗体的活性 常用琼脂扩散或免疫电泳法，使抗原与抗体形成 沉淀线，经PBS漂洗1天，再以蒸馏水浸泡1小时，将琼脂凝胶片浸于 酶底物溶液中着色，如果出现应有的颜色反应，再用生理盐水浸泡， 颜色仍然不褪，表示结合物既有酶的活性，也有抗体活性。良好的 结合物在显色后，琼扩滴度应在1:16以上。另一个测定方法是用系列 稀释的酶标抗体直接以ELISA方法进行方阵滴定，此法不仅可以测定 标记效果，还可以确定酶标抗体的使用浓度。
初速度的方法。 • 终点法： • 通过测定酶反应开始到反应达到平衡时产物或底物浓度总变化量，以求出酶活
力的方法，亦称平衡法。 • 速率法： • 是指连续测定(每15秒~1分钟监测一次)酶反应过程中某一反应产物或 • 底物的浓度随时间的变化来求出酶反应的初速度的方法，即连续监测法。 • 透射比浊法透射比浊法可用于测定产生浊度反应的项目。
• 生化：生物化学反应或免疫反应(生化仪的项目），酶类、糖类、脂类、蛋白、无机元素、 肝功能、肾功等指标。
• 免疫：抗原与抗体相结合的特异性反应，传染性疾病、内分泌、肿瘤、药物检测、血型 鉴定等。
• 分子诊断：分子生物学方法检测患者体内遗传物质的结构或表达水平的变化，主要用于 肝炎、性病、优生优育、遗传病基因、肿瘤等检测。
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免疫类产品基本原理
Elisa反应的基本原理（酶标仪、发光仪等）
将含有已知抗体的抗血清吸附在微量滴定板上的小孔里，洗涤 一次；②加待测抗原，如两者是特异的，则发生结合，然后把 多余抗体洗除；③加入与待测抗原呈特异反映的酶联抗体（二 抗），使形成“夹心”；④加入该酶的底物，若看到有色的酶 解产物产生，说明在孔壁上存在相应的抗原。
基因BRCA1）。
• 疗效和健康监测，如： • 代谢物（血糖） • 标志物（AFP、PSA、HPV） • 蛋白、微量元素（白蛋白、Ca);
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体外诊断产品的类别
• 体外诊断根据风险分3类：
• III类：致病性病原体抗原、抗体以及核酸、人类基因检测、肿瘤标志 物、血型、组织配型、变态反应（过敏原）等；