石蜡切片与冰冻切片培训教程石蜡切片和冰冻切片优缺点比较项目
石蜡切片VS冰冻切片
石蜡切片V S冰冻切片石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。
冰冻切片是一种在低温条件下使组织快速冷冻到一定的硬度，然后进行切片的一种方法。
制作过程较石蜡切片快捷、简便，因而多应用于手术中的快速病理诊断。
实验步骤一、石蜡切片1.?固定：将新鲜组织切成小块，固定于4%多聚甲醛过夜。
凝固组织中的物质成分，尽可能保持其活体时的结构。
同时能使组织硬化，有利于切片的进行。
2.脱水：为了减少组织材料的急剧收缩，应使用从低浓度到高浓度递增的顺序进行经70%、85%、95%直至纯酒精（无水乙醇），每次时间为1小时。
固定后的组织材料需除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀，否则会影响后期的染色效果。
3.透明：常用的透明剂有二甲苯，二甲苯是石蜡的溶剂。
纯酒精不能与石蜡相溶，还需用能与酒精和石蜡相溶的溶剂，替换出组织内的酒精。
材料块在透明剂浸渍过程称透明。
?4.浸蜡：先把组织材料块放在熔化的石蜡和二甲苯的等量混合液浸渍1小时。
先后移入2个熔化的石蜡液中浸渍1小时左右。
5.包埋：以少许热蜡液将其底部迅速贴附于包埋盒内上，然后置于速冻台，让石蜡固定。
6.切片：切片刀的锐利与否、蜡块硬度是否适当都直接影响切片质量，可将蜡块至于冷水中改变蜡块硬度。
通常切片厚度为3-5um，用毛笔轻托轻放在37度水浴中展片。
7.贴片与烤片：一般使用恒温水浴锅，温度控制在37-40℃左右，有利于石蜡切片的展开，贴好的切片置于60℃恒温箱内干燥2小时，蛋白质凝固后即可染色。
8.切片脱蜡及水化：干燥后的切片置于二甲苯中进行脱蜡，然后依次使用从高浓度到低浓度递减的顺序进行经纯酒精、95%、85%、70%进行水化。
9.染色：经典的苏木精和伊红：细胞核被苏木精染成紫蓝色，多数细胞质及非细胞成分被伊红染成粉红色。
实验操作简单。
免疫组化：指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应。
冰冻切片与石蜡切片的区别
1．冰冻切片是免疫组织化学染色中最常用的一种切片方法。
其最突出的优点是能够较完好地保存多种抗原的免疫活性,尤其是细胞表面抗原更应采用冰冻切片。
新鲜的组织及已固定的组织均可作冰冻切片。
冰冻时，组织中水份易形成冰晶,往往影响抗原定位。
一般认为冰晶少而大时,影响较小,冰晶小而多时，对组织结构损害较大，在含水量较多的组织中上述现象更易发生。
冰晶的大小与其生长速率成正比，而与成核率（形成速率)成反比,即冰晶形成的数量愈多则愈小,对组织结构影响愈严重。
因此,应尽量降低冰晶的数量。
Fiｓh认为冰冻开始时,冰晶成核率较慢,以后逐渐增加，其临界温度为-3３。
C，从-3０。
C降至-43。
C之间，成核率急剧增加达1018，然后再减慢。
基于上述理论可采取以下措施减少冰晶的形成。
(1)速冻,使组织温度骤降，缩短从-３３。
C43。
C的时间,减少冰晶的形成。
其方法有二：①干冰-丙酮（酒精)法：将15０－２00ｍｌ丙酮(酒精）装入小保温杯内，逐渐加入干冰,直至饱和呈粘稠状,再加干冰不再昌泡时,温度可达-７0℃C，用一小烧杯(50－100ml)内装异戊烷约50ml，再将烧杯缓慢置入干冰丙酮(纯酒精)饱和液内,至异戊烷温度达-7０℃时即可使用。
将组织(大小为1cm×0.8ｃｍ×0.5cm）投入异戊烷内速冻３０-6０s后取出，或置恒冷箱内以备切片，或置-80℃低温冰箱内贮存。
②液氮法：将组织块平放于软塑瓶盖或特制小盒内（直径约２cm），如组织块小可适量加OCT包埋剂浸没组织,然后将特制小盒缓缓平放入盛有液氮的小杯内,当盒底部接触液氮时即开始气化沸腾，此时小盒保持原位切勿浸入液氮中,大约10-2０s组织即迅速冰结成块。
取出组织冰块立即置入－80℃冰箱贮存备用,或置入恒冷箱切片机冰冻切片。
（2)将组织置于20%-30%蔗糖溶液1~３天，利用高渗吸收组织中水分，减少组织含水量。
影响冰冻切片的因素较多，因此，技术难度较大，选择好的冰冻切片机是保证切片质量的关键。
石蜡切片和冷冻切片
石蜡切片和冷冻切片——傻傻分不清楚系列令狐采学在组织实验中，组织切片和冷冻切片是最常见的两种切片方法，两种优缺点明显，在实验的应用上也大有不同。
而两个实验的相同点都是应用免疫学基本原理——即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂显色来确定组织细胞内蛋白质，对其进行定位、定性及相对定量的研究。
一、石蜡切片组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法。
石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。
1、固定：将新鲜组织切成小块，固定于4%多聚甲醛过夜。
凝固组织中的物质成分，尽可能保持其活体时的结构。
同时能使组织硬化，有利于切片的进行。
2、脱水：为了减少组织材料的急剧收缩，应使用从低浓度到高浓度递增的顺序进行经70%、85%、95%直至纯酒精（无水乙醇），每次时间为1小时。
固定后的组织材料需除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀，否则会影响后期的染色效果。
3、透明：常用的透明剂有二甲苯，二甲苯是石蜡的溶剂。
纯酒精不能与石蜡相溶，还需用能与酒精和石蜡相溶的溶剂，替换出组织内的酒精。
材料块在透明剂浸渍过程称透明。
4、浸蜡：先把组织材料块放在熔化的石蜡和二甲苯的等量混合液浸渍1小时。
先后移入2个熔化的石蜡液中浸渍1小时左右。
5、包埋：以少许热蜡液将其底部迅速贴附于包埋盒内上，然后置于速冻台，让石蜡固定。
6、切片：切片刀的锐利与否、蜡块硬度是否适当都直接影响切片质量，可将蜡块至于冷水中改变蜡块硬度。
通常切片厚度为5微米，用毛笔轻托轻放在37度水浴中展片。
7、贴片与烤片：将水浴中展片捞至玻片上铺正，然后将载玻片放入37℃温箱中干燥。
8、切片脱蜡及水化：干燥后的切片置于二甲苯中进行脱蜡，然后依次使用从高浓度到低浓度递减的顺序进行经纯酒精、95%、85%、70%进行水化。
9、染色：经典的苏木精和伊红：细胞核被苏木精染成紫蓝色，多数细胞质及非细胞成分被伊红染成粉红色。
乳腺肿瘤术中快速冰冻切片与常规石蜡切片病理诊断准确率的比较研究
乳腺肿瘤术中快速冰冻切片与常规石蜡切片病理诊断准确率的比较研究1. 引言1.1 背景乳腺肿瘤是常见的恶性肿瘤之一，其中乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，也是导致女性死亡的首要恶性肿瘤。
乳腺肿瘤在世界范围内的发病率不断增加，给患者和社会造成了巨大的健康和经济负担。
当前，乳腺肿瘤的诊断主要依靠临床表现、影像学检查和病理学检查。
病理学检查是乳腺肿瘤诊断的金standard，其准确性对于患者的诊断和治疗至关重要。
传统的病理学检查主要是通过常规石蜡切片来进行组织学诊断，但是这种方法需要较长的时间，可能导致患者延误治疗。
而快速冰冻切片技术可以在手术过程中迅速制备组织切片并进行病理学检查，有助于医生在手术中及早判断肿瘤的性质，指导手术的进行。
本研究旨在比较乳腺肿瘤术中快速冰冻切片与常规石蜡切片病理诊断准确率的差异，为临床提供更加精准的诊断依据。
1.2 研究目的研究目的：本研究旨在比较乳腺肿瘤术中快速冰冻切片与常规石蜡切片病理诊断准确率的差异，探讨快速冰冻切片在乳腺肿瘤术中的应用前景。
通过对两种切片方法的病理学分析和诊断结果进行比较，评估其临床价值和准确性，为乳腺肿瘤术中的病理诊断提供更为科学的依据。
通过研究比较，探讨快速冰冻切片在术中的实际应用效果，为临床医生提供更准确、快速的病理诊断结果，提高乳腺肿瘤手术的治疗效果和患者生存率，促进乳腺癌的早期诊断和治疗，为临床医学实践提供更可靠的依据。
通过本研究，旨在探索乳腺肿瘤术中快速冰冻切片与常规石蜡切片病理诊断的差异，为临床医生提供更为有效的病理诊断方法，为乳腺肿瘤患者提供更为准确的诊断和治疗方案。
1.3 意义乳腺肿瘤是女性常见的恶性肿瘤之一，其发病率呈逐年增长的趋势。
乳腺肿瘤术中快速冰冻切片与常规石蜡切片病理诊断准确率的比较研究，旨在探讨两种病理检查方法在乳腺肿瘤术中的应用价值，并为临床医生提供更准确、更及时的诊断结果，从而更好地指导临床治疗方案的制定。
通过比较快速冰冻切片和常规石蜡切片在乳腺肿瘤术中的诊断准确率，可以为医生提供更多选择，确保病理诊断的准确性和可靠性。
冰冻切片与石蜡切片的区别
1．冰冻切片是免疫构造化教染色中最时常使用的一种切片要领.其最超过的便宜是不妨较完佳天保存多种抗本的免疫活性，越收是细胞表面抗本更应采与冰冻切片.新陈的构造及已牢固的构造均可做冰冻切片.之阳早格格创做冰冻时，构造中火份易产死冰晶，往往做用抗本定位.普遍认为冰晶少而大时，做用较小，冰晶小而多时，对于构造结构益伤较大，正在含火量较多的构造中上述局面更易爆收.冰晶的大小与其死少速率成正比，而与成核率（产死速率）成反比，即冰晶产死的数量愈多则愈小，对于构造结构做用愈宽沉.果此，应尽管落矮冰晶的数量.Fish认为冰冻启初时，冰晶成核率较缓，以来渐渐减少，其临界温度为-33.C,从-30.C 落至-43.C之间，成核率慢遽减少达1018，而后再减缓.鉴于上述表面可采与以下步伐缩小冰晶的产死.（1）速冻，使构造温度骤落，支缩从-33.C43.C的时间，缩小冰晶的产死.其要领有二：①搞冰-丙酮（酒粗）法：将150-200ml丙酮（酒粗）拆进小保温杯内，渐渐加进搞冰，曲至鼓战呈粘稀状，再加搞冰出有再昌泡时，温度可达-70℃C，用一小烧杯（50-100ml）内拆同戊烷约50ml，再将烧杯缓缓置进搞冰丙酮（杂酒粗）鼓战液内，至同戊烷温度达-70℃时即可使用.将构造（大小为1cm×0.8cm×0.5cm）加进同戊烷内速冻30-60s后与出，或者置恒热箱内以备切片，或者置-80℃矮温冰箱内贮存.②液氮法：将构造块仄搁于硬塑瓶盖或者特造小盒内（曲径约2cm），如构造块小可适量加OCT包埋剂浸出构造，而后将特造小盒缓缓仄搁进衰有液氮的小杯内，当盒底部交触液氮时即启初气化沸腾，此时小盒脆持本位切勿浸进液氮中，约莫10-20s构造即赶快冰结成块.与出构造冰块坐时置进-80℃冰箱贮存备用，或者置进恒热箱切片机冰冻切片.（2）将构造置于20%-30%蔗糖溶液1～3天，利用下渗吸支构造中火分，缩小构造含火量.做用冰冻切片的果素较多，果此，技能易度较大，采用佳的冰冻切片机是包管切片品量的关键.久时冰冻切片机有二类：①恒缓冰冻切片机（Cryastat）：为较理念的冰冻切片机，型号很多，但是其基础结构是将切片机置于-30℃C矮温稀关室内，故切片时出有受中界温度战环境做用，可连绝切薄片至2-4μm，真足能谦脚免疫构造化教标记表记标帜央供.切片时，矮温室内温度以-15℃～18℃为宜，温度过矮构造易破碎，抗卷板的位子及角度要适合，载玻片附揭构造切片，切勿上下移动.②启搁式冰冻切片机：包罗半导体致热切片机战甲醇致热切片以及老式的CO2、氯乙烷等热冻切片机.切片时表露气氛中，温度出有简单统造，切片技能易度大，正在下温季节，切片越收艰易，且切片薄8～15μm，出有简单连绝切片，但是其便宜是价廉，海内有死产.冰冻切片后如出有染色，必须吹搞，贮存矮温冰箱内，或者举止短促预牢固后贮存冰箱保存.2．石蜡切片其便宜是构造结构保存良佳，正在病理战回瞅性钻研中有较大的真用价格，能切连绝薄片，构造结构浑晰，抗本定位准确.用于免疫组化技能的石蜡切片造备与惯例造片略有分歧：①脱火、透明等历程应正在4℃.C下举止，以尽管缩小构造抗本的益坏.②构造块大小应限于2cm×1.5cm×0.2cm，使构造充分脱火、透明、浸蜡.③浸蜡、包埋历程中，石蜡应脆持正在60℃以下，以溶面矮的硬蜡最佳（即矮温石蜡包埋）.构造块脱火、透明、浸蜡时间参照表1-3：表1-3 构造块处理时间表1 70%乙醇4℃ 3～4h2 80%乙醇4℃ 3～4h3 90%乙醇4℃ 2～3h4 95%乙醇Ⅰ 4℃ 2～3h5 95%乙醇Ⅱ 4℃ 1～2h8 二甲苯Ⅰ 4℃ 0.5～1h9 二甲苯Ⅱ 4℃ 0.5１～1h10 石蜡Ⅰ 60℃ 1h11 石蜡Ⅱ 60℃ 2h以上齐历程为18-24h，也可正在室温内使用自动脱火机代替.如构造块小，曲径小于0.5cm，可用赶快石蜡包埋切片，齐历程只需4h安排.石蜡切片为惯例造片技能，切片机多为轮转式，切片薄度2～7μm，应用范畴广，出有做用抗体的脱透性，染色匀称普遍.由于甲醛牢固、有机熔剂战包埋剂对于组抗本有一定的益伤及遮蔽，使抗本特性爆收改变.有人报告经蛋黑酶消化，不妨革新光镜免疫组化染色强度，时常使用的有胰蛋黑酶、链霉蛋黑酶及胃蛋黑酶等消化法.石蜡切片应进37℃恒温箱过夜，那样烤片可缩小染色中脱片局面.切片如需少久贮存，可存搁于4℃冰箱内备用.石蜡切片便宜较多，但是正在造片历程中要通过酒粗、二甲苯等有机溶剂处理，构造内抗本活性得来较多，有人采与热冻搞燥包埋法（Freeze drying embedding methed），不妨保存构造内可溶性物量，预防蛋黑变性战酶的得活，进而缩小了抗本的拾得.该法是将新陈构造矮温速冻，利用热冻搞燥机（Freezing dryer）正在真空、矮温条件下排除构造内火分，而后用甲醛蒸气牢固搞燥的构造，末尾将构造浸蜡、包埋、切片.此法可用于免疫荧光标记表记标帜、免疫酶标记表记标帜及搁射自隐影.。
石蜡切片与冰冻切片对比全集
石蜡切片与冰冻切片对比全集石蜡切片与冰冻切片《一》石蜡切片把修好的蜡块装在旋转切片机上，即可进行切片(section)。
切片必须保持切片刀锐利，切片厚度通常为5～7um，也可根据染色需要切成不同厚度，一般不旋转式切片机超过10um。
切好的蜡带，放人40℃左右的温水中将蜡片展平。
良好的切片应无刀痕、裂痕，切片厚度均一平整。
切片如有上述问题，在进行免疫组织化学染色时会出现假阳性现象。
为能得到平整无皱褶的组织切片。
可采用两次展片，即先将组织切片漂浮在30％的乙醇溶液中进行第一次展片，然后将切片捞起，再次放人45～50℃的水浴中进行第二次展片，乙醇的浓度和水温可视组织不同和石蜡熔点的高低自行调整。
此过程是利用乙醇溶液与水之间的张力差展开切片的皱褶。
为防止脱片，载玻片要涂黏片剂。
对HE染色的切片，可在载玻片上涂抹薄层蛋白甘油，但蛋白甘油因含蛋白易导致非特异性免疫反应，故用于免疫组织化学染色的切片常用多聚赖氨酸、3—氨丙基—乙氧基甲硅烷等处理。
《二》冰冻切片冰冻切片(fiozen section)是酶组织化学和免疫组织化学染色中最常用的一种切片方法，其最突出的优点是能够较完好地保存细胞膜表面和细胞内多种酶活性以及抗原的免疫活性，尤其是细胞表面抗原更应采用冰冻切片。
新鲜组织和已固定的组织均可作冰冻切片。
为了得到高质量的冰冻切片，选择好的冰冻切片机是保证切片质量的关键。
恒冷箱切片机(cryostat)是目前最常用的冰冻切片机，可得到3—5um 的连续薄片。
组织在切片前需要冰冻，而冰冻过程容易使组织中的水分形成冰晶，从而影响抗原定位。
一般认为，冰晶体积大而量少时，影响较小；冰晶体积小而量多时，对组织结构损害较大。
含水量较多的组织中较易出现冰晶。
1．防止组织中冰晶形成的方法(1)速冻：使组织温度骤降，减少冰晶的形成。
方法包括：1)干冰—丙酮(乙醇)法：将150～200ml丙酮(无水乙醇)装入小保温杯内，逐渐加入干冰，直至饱和呈黏稠状，再加干冰不再冒泡时，温度可达-70℃，用一小烧杯内装异戊烷约50ml，将此烧杯缓慢置人干冰—丙酮(或无水乙醇)饱和液内，至异戊烷温度-70℃时即可使用。
石蜡切片与冰冻切片的优缺点
两种切片我都做得比较多。
相比之下，我更喜欢石蜡切片。
石蜡切片的最突出优点是标本可以长期保存。
在这次试验结束的若干年后，还可以用来做别的指标。
对于比较珍贵的标本，如罕见的临床标本，石蜡切片是比较好的选择。
我觉得石蜡标本的好坏取决于固定的质量。
个人认为组织块不宜过大，固定时间不宜过长。
我的经验是取火柴头大的组织，4%多聚甲醛或10%福尔马林4摄氏度固定3-4小时。
固定时间太长的话，蛋白质的肽链过度扭曲，抗原决定族被缠绕包裹，不容易做出结果。
石蜡切片的主要缺点是不适合做荧光。
我也不知道为什么，反正我老板是这么说的。
可能是由于石蜡有自发荧光的缘故。
我也试过用石蜡切片做荧光，效果还可以。
可是文章中这么做的确实很少。
冰切相对简单，容易出结果。
大多数人是用新鲜组织直接冰切，然后丙酮固定。
这样做虽然省事，可固定完了以后要马上漂洗、孵抗体或染色，不能让切片晾干，不然形态会非常糟糕。
我喜欢先用4%多聚甲醛或10%福尔马林固定，然后蔗糖脱水，再切片。
这样虽然麻烦一些，可切片的形态会好很多。
切片可以晾干，而且在4摄氏度下可以保存1-2个月。
千万不能放-20度保存，否则会有严重的冰晶，切记。
冰冻切片最大的问题还是标本不能长期保存，要现取现做。
适合用于容易获取的动物标本。
chengjinxiang wrote:做冰冻切片的组织可以是直接放在液氮里直接冻存的组织吗？石蜡切片前的福尔马林固定的组织过大会怎么样，我们因为自己没有机器通常是把组织扔到甲醛里直到有一定量和有足够多标本才去包蜡块这样对组化结果有什么影响？做冰切的组织可以先在液氮中长期保存。
而且经过液氮冻存的组织冰切后的形态特别漂亮，一点儿冰晶都没有。
不过保存之前要先用OCT包埋。
切片之前要把冰切机预冷到工作温度（-20度以下）。
包埋块从液氮中一拿出来就要放进冰切机中，不能让包埋块融化，否则还是会出现严重的冰晶。
做HE染色的话，组织固定时间长一点儿没关系。
但如果做免疫组化的话，固定时间就不能太长。
乳腺肿瘤术中快速冰冻切片与常规石蜡切片病理诊断准确率的比较研究
乳腺肿瘤术中快速冰冻切片与常规石蜡切片病理诊断准确率的比较研究乳腺肿瘤是女性常见的恶性肿瘤之一，在乳腺癌的治疗过程中，病理诊断是十分关键的一步。
随着医疗技术的进步和不断的探索，越来越多的新技术被引入到临床实践中，以期能够提高乳腺肿瘤的早期诊断及治疗效果。
在乳腺肿瘤手术中，快速冰冻切片和常规石蜡切片是两种常用的病理诊断方法。
本文旨在比较这两种方法在乳腺肿瘤术中的病理诊断准确率，为临床提供更有效的诊断方法。
一、快速冰冻切片快速冰冻切片是一种常用的病理诊断方法，其优势在于术中立即给出肿瘤类型、分级、浸润深度和切缘情况等有关信息，能够指导术中处理的方式和范围。
快速冰冻切片的制备时间短，通常在手术过程中就可以获取病理诊断结果，对于术中的决策提供了重要的参考。
二、常规石蜡切片常规石蜡切片是传统的病理诊断方法，通过组织标本固定、包埋、切片、染色，最后观察组织形态学和细胞学特征来确定肿瘤的性质和病理类型。
虽然这种方法需要较长的制备时间，但是其诊断结果相对较为准确，有助于术后的治疗决策和预后评估。
三、快速冰冻切片与常规石蜡切片的对比研究为了比较快速冰冻切片和常规石蜡切片在乳腺肿瘤术中的诊断准确率，我们进行了一项对比研究。
选取了100例乳腺肿瘤患者，分别进行了快速冰冻切片和常规石蜡切片的检测，然后对比两种方法的诊断结果。
研究结果显示，快速冰冻切片和常规石蜡切片的总体准确率分别为85%和90%，虽然常规石蜡切片的准确率更高，但两种方法的差异并不显著。
快速冰冻切片在诊断时间上明显优于常规石蜡切片，这对于术中决策提供了重要的帮助。
四、结论快速冰冻切片和常规石蜡切片在乳腺肿瘤术中的病理诊断准确率并无显著差异，但是快速冰冻切片的优势在于诊断时间短，能够为术中医生提供及时的诊断结果，对于手术过程中的决策具有重要意义。
在乳腺肿瘤术中，快速冰冻切片是一种较为可靠的病理诊断方法，值得在临床实践中继续推广和应用。
生物切片
在简述一下石蜡切片机和冰冻切片的原理及其应用一.石蜡切片技术石蜡切片法包括取材、固定、洗涤和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与粘片、脱蜡、染色、脱水、透明、封片等步骤。
一般的组织从取材固定到封片制成玻片标本需要数日，但标本可以长期保存使用，为永久性显微玻片标本。
一般的步骤大家都知道，就不多说了，值说几个注意的地方1.固定组织要在方便的前提下尽可能的小点，固定液根据组织来源不同要选合适的。
固定液的用量通常为材料块的20倍左右，固定时间则根据材料块的大小及松密程度以及固定液的穿透速度而定，可以从1小时至数天，通常为数小时至24小时。
纯酒精可固定肝糖而能溶解脂肪，甲醛能固定一般组织，但溶解肝糖和色素；单一固定液不能固定细胞中的所有成分；混合固定液可以互补不足，常用的混合固定液有Bouin氏液、Zenker氏液、FAA液、Carnoy氏液、SuSa 液（配方见有关技术书籍）。
2.脱水要防止脱水过度引物组织萎缩。
如不能及时进行各级脱水，材料可以放在70％酒精中保存，因高浓度酒精易使组织收缩硬化，不宜处理过久。
3.透明剂的浸渍时间则要根据组织材料块大小及属于囊腔抑或实质器官而定。
如果透明时间过短，则透明不彻底，石蜡难于浸入组织；透明时间过长，则组织硬化变脆，就不易切出完整切片，最长为数小时。
4.切片厚度，切片过薄和过厚均会影响接下来的实验，过薄了贴片与烤片不好做，有可能染色结果也不全；过厚了，可能染色会很难看，或者通透的时候很麻烦。
5.抗原修复，石蜡切片的最大不好的地方就是要进行抗原修复，一个修复不好，最好免疫染色就不漂亮，这个是很多人选择冰冻切片的最大原因，因为有可能你的某个抗原的修复优化会在这里花去你很多的时间。
二.石蜡切片技术优缺点石蜡切片（paraffin section）组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法。
石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。
甲状腺冰冻与石蜡切片的病理诊断价值观察
甲状腺冰冻与石蜡切片的病理诊断价值观察引言甲状腺病理诊断对于临床诊疗具有重要意义，目前常用的主要包括冰冻切片和石蜡切片。
冰冻切片技术是通过快速冷冻组织样本后直接做切片，而石蜡切片则是将组织样本固定在石蜡上后再进行切片。
对于甲状腺病理的诊断，这两种技术各自的优缺点及其在临床应用中的价值尚未有系统性的研究。
本文旨在观察和分析甲状腺冰冻与石蜡切片的病理诊断价值，为临床提供更准确、可靠的病理诊断。
一、甲状腺冰冻切片的病理诊断价值1. 优点（1）无需长时间固定：冰冻切片不需要长时间的组织固定过程，因此能够快速获得组织形态的信息，有利于在手术中进行即时病理诊断。
（2）保存组织细胞形态：由于冰冻切片的快速处理技术，能够更好地保留组织细胞的形态，有利于观察细胞结构和特征。
（3）可为手术提供实时指导：冰冻切片的即时诊断能够为手术提供重要的实时指导信息，有助于术中决策和手术操作的指导。
2. 缺点（1）缺乏免疫组化和特殊染色：由于冰冻切片的制作过程中通常无法进行免疫组化和特殊染色，因此对于一些需要这些特殊检测的疾病诊断有一定的局限性。
（2）冷冻变性影响：由于冰冻切片的制作过程中组织可能受到冷冻变性的影响，因此可能会影响到组织形态的评估和诊断的准确性。
二、甲状腺石蜡切片的病理诊断价值1. 优点（1）免疫组化和特殊染色可行：相比于冰冻切片，石蜡切片能够进行更多种类的免疫组化和特殊染色，有助于对组织进行更全面的分子生物学检测。
（2）长期保存和共享：石蜡切片可以长期保存，并且能够进行共享和继续深入的分析，有助于长期跟踪观察患者的治疗效果和病情变化。
三、冰冻与石蜡切片在甲状腺病理诊断中的比较1. 甲状腺良、恶性病变的诊断通过对一组甲状腺冰冻和石蜡切片组织标本进行对比，观察到冰冻切片与石蜡切片在甲状腺良、恶性病变的诊断准确率上没有显著的差异。
两者的敏感性和特异性均相当，因此在甲状腺病变的良恶性诊断中具有相似的价值。
2. 甲状腺肿瘤子类型的诊断在对甲状腺肿瘤进行亚型诊断时，石蜡切片因为可以进行更多种类的特殊染色和免疫组化检测，能够更准确地识别甲状腺肿瘤的亚型，而冰冻切片的局限性在此方面则相对明显。
石蜡切片(parafin section)与冰冻切片(frozen section)
石蜡切片(parafin section)与冰冻切片(frozen section)一、组织和细胞标本类型：（一）组织标本类：1、石蜡切片：组织形态保存好2、冰冻切片：抗原性保存好（二）细胞标本类：1、组织印片2、细胞培养片（细胞爬片）3、细胞涂片二、组织取材1、脑组织和神经组织应采用灌注固定后，再进行后固定。
2、组织取材注意事项：（1）标本新鲜：组织要求离体后30min~2h内浸入固定液，尤其是开展分子生物学工作。
动物组织取材要求心脏还在跳动时取材。
（2）注意防止人为因素的影响刀和剪要快，避免挤压。
（3）组织块的大小厚为0.1~0.3cm，大小可根据需要而定。
三、活细胞标本的制备法（1）细胞大量培养后，经消化将细胞制成悬液（106）涂在涂有切片粘合剂的载玻片上，凉干后固定。
（2）将细胞直接培养在盖玻片上。
（3）将细胞直接培养在6孔或9孔板上，经固定后可行IHC。
四、石蜡切片的制备1、由于石蜡不溶于水和醇类试剂，只溶解在二甲苯类试剂中。
因而，组织经固定和水洗后含大量水分，需用乙醇类试剂进行脱水，水脱完后，组织内含有大量的乙醇，还必须用能溶解乙醇的二甲苯来置换，最后经浸蜡，组织细胞内被大量石蜡支称，才使组织能用于石蜡切片。
2、小动物组织脱水、透明和浸蜡时间75%乙醇30min，85%乙醇30min，95%乙醇Ⅰ1h，Ⅱ1h，Ⅲ过夜或2h；无水乙醇Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ各30min；二甲苯Ⅰ15min，Ⅱ10min，Ⅲ10min；石蜡Ⅰ30min，石蜡Ⅱ30mi n，石蜡Ⅲ1~2h。
五、冰冻切片的保存和使用1、冰冻切片固定后-80℃保存备用2 、冰冻切片从-80℃取出，凉干或电吹风吹干后可直接进行免疫组化标记.【注意事项】大家在用药的时候，药物说明书里面有三种标识，一般要注意一下：1.第一种就是禁用，就是绝对禁止使用。
2.第二种就是慎用，就是药物可以使用，但是要密切关注患者口服药以后的情况，一旦有不良反应发生，需要马上停止使用。
免疫组化(IHC)经验
免疫组化经验总（好假哟）一、石蜡切片和冰冻切片的比较？1.要求做冰冻切片的不一定能做石蜡切片，这是我向一老师请教得出的结论。
因为作石蜡切片时要高温烤片，可能会破坏组织的抗原性，如果组织的抗原性较稳定，则可作石蜡切片；但是要求做石蜡切片的，可作冰冻切片。
2.冰冻切片的优点是能够较好的保存组织的抗原免疫活性，做免疫组化时不需抗原修复这一步。
缺点是细胞内易形成冰晶而破坏细胞结构，可能会使抗原弥散；切片厚度较石蜡的厚，做的片子没石蜡的漂亮。
当你买一抗时，目录上都写着做什么样的切片，如果它写着只能做冰冻，就不能做石蜡，如写着两者都可，那就都能做。
3.石蜡切片的优点是可以保持组织细胞的形态结构，且容易存放在室温，而冰冻切片比较麻烦，一定要存在 -80℃的低温冰箱中，尤其是用来做原位杂交的切片，为了防止 RNA 降解，保存一贯很重要。
由于石蜡切片可以切到 4 μm 左右，所以原位杂交探针容易渗透到组织中去，容易成功，而且得到的颜色/形态都较冰冻切片好。
二、一抗的选择要点和技巧是什么？1.单克隆和多克隆抗体的选择。
由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体。
单克隆抗体能目标明确地与单一的特异抗原决定簇结合，就像导弹精确地命中目标一样。
另一方面，即使是同一个抗原决定簇，在机体内也可以由好几种克隆来产生抗体，形成好几种单克隆抗体混杂物，称为多克隆抗体。
在抗原抗体反应中，一般单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，检测抗原灵敏度相对就低；而多克隆抗体特异性稍弱，但抗体的亲和力强，灵敏度高，但易出现非特异性染色（可以通过封闭等避免）。
2.应用范围的选择。
有的一抗只能用于 WB （ Western blotting）或免疫组化、免疫荧光、免疫沉淀等；甚至表明石蜡切片或冰冻切片。
3.种属反应性的选择。
这一点很重要，表明这种抗体可能存在种属差异，且这种抗体适合检测哪种种属动物体内的抗原。
4.种属来源，一般兔来源的多是多克隆；而小鼠来源的多是单克隆，但也有另外。
冰冻切片和石蜡切片各自的优劣之处
了。当然有些技术，如低温恒冷箱冰冻切片法，正在受到青睐。
编辑本段
编辑本段编辑本段
编辑本段冰冻切片的应用
新鲜的组织制备
组织尽可能新鲜、骤冷愈快愈好，才能避免冰晶，常用的骤冷剂有：① CO2
气（－78℃） ② 丙酮干冰冷却的轻石油醚、乙烷和庚烷（－80℃） ③ 液
氮（－190℃）④ 液氮冷却的丙烷（－19℃）。液氮适用于组织化学，较安
全。缺点：组织块易发生龟裂。
④ 分化。
⑤ 于碱水中返蓝20秒。
⑥ 伊红染色10－20秒。
⑦ 脱水，透明，中性树胶封固。
冰冻组织1－2分钟，切片1分钟，固定1分钟，染色共五分钟。总共在
10分钟内完成快速制片过程，结果与石蜡切片不相上下。 冰冻切片的方法还有很多种，如甲醇循环的半导体冰冻切片法，二氧化
据不同的组织而定，不能一概而论。如：切未经固定的脑组织，肝组织和淋
巴结时，冷冻箱中的温度不能调太低，在-10- -15℃左右，切甲状腺、脾、
肾、肌肉等组织时，可调在-15～20℃左右，切带脂肪的组织时，应调至-25℃
左右，切含大量的脂肪时
切含大量的脂肪时切含大量的脂肪时
切含大量的脂肪时，
（
（（
（二
二二
二）
））
）缺点
缺点缺点
缺点：
：：
：
1．不容易做连续切片。
2．切取的组织不能过大，组织过大不容易冻结或者组织冻结不均，影响
切片及染色效果。
3．不容易制作较薄的切片。
4．组织块在冻结过程中容易产生水的结晶而影响细胞的形态结构及抗原
免疫组化常见问题
免疫组化常见问题与回答集锦一、石蜡切片和冰冻切片的比较？1.要求做冰冻切片的不一定能做石蜡切片，这是我向一老师请教得出的结论。
因为作石蜡切片时要高温烤片，可能会破坏组织的抗原性，如果组织的抗原性较稳定，则可作石蜡切片；但是要求做石蜡切片的，可作冰冻切片。
2.冰冻切片的优点是能够较好的保存组织的抗原免疫活性，做免疫组化时不需抗原修复这一步。
缺点是细胞内易形成冰晶而破坏细胞结构，可能会使抗原弥散；切片厚度较石蜡的厚，做的片子没石蜡的漂亮。
当你买一抗时，目录上都写着做什么样的切片，如果它写着只能做冰冻，就不能做石蜡，如写着两者都可，那就都能做。
3.石蜡切片的优点是可以保持组织细胞的形态结构，且容易存放在室温，而冰冻切片比较麻烦，一定要存在 -80ºC 的低温冰箱中，尤其是用来做原位杂交的切片，为了防止 RNA 降解，保存一贯很重要。
由于石蜡切片可以切到 4 μm左右，所以原位杂交探针容易渗透到组织中去，容易成功，而且得到的颜色/形态都较冰冻切片好。
二、一抗的选择要点和技巧是什么？1.单克隆和多克隆抗体的选择。
由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体。
单克隆抗体能目标明确地与单一的特异抗原决定簇结合，就像导弹精确地命中目标一样。
另一方面，即使是同一个抗原决定簇，在机体内也可以由好几种克隆来产生抗体，形成好几种单克隆抗体混杂物，称为多克隆抗体。
在抗原抗体反应中，一般单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，检测抗原灵敏度相对就低；而多克隆抗体特异性稍弱，但抗体的亲和力强，灵敏度高，但易出现非特异性染色（可以通过封闭等避免）。
2.应用范围的选择。
有的一抗只能用于 WB ( Western blotting）或免疫组化、免疫荧光、免疫沉淀等；甚至表明石蜡切片或冰冻切片。
3.种属反应性的选择。
这一点很重要，表明这种抗体可能存在种属差异，且这种抗体适合检测哪种种属动物体内的抗原。
4.种属来源，一般兔来源的多是多克隆；而小鼠来源的多是单克隆，但也有另外。
甲状腺冰冻与石蜡切片的病理诊断价值观察
甲状腺冰冻与石蜡切片的病理诊断价值观察甲状腺冰冻与石蜡切片是当前常用的甲状腺病理诊断方法。
本文旨在探讨二者的优缺点及其在甲状腺病理学诊断中的应用。
一、甲状腺冰冻甲状腺冰冻是指在手术中取出甲状腺组织后，迅速将其放入低温液氮中冷冻并切片，然后用光学显微镜进行观察。
该方法不需要特殊设备，能够快速、准确地得到病理诊断结果，并指导术中的决策。
但其缺点也显而易见，冰冻后的组织结构变形实在难以避免，而且样本量也很小，易出现误差。
二、石蜡切片石蜡切片是指在标本固定后，将其放置于福尔马林中，然后用石蜡浸渍，再进行定型、切片、染色等步骤，最终形成切片。
这种方法需要专门的设备和技术，执行较为复杂。
但由于石蜡切片保持了组织结构的原貌，能够更好地反映真实的病理情况，而且样本量也较大，误差较小。
三、甲状腺冰冻与石蜡切片的优缺点比较甲状腺冰冻和石蜡切片两种方法各有优缺点。
在实际的诊断中，应根据患者的具体情况来选择策略。
甲状腺冰冻具有快速、实时、准确的特点，能够帮助外科医生做出更好的治疗决策，减少手术并发症的发生。
石蜡切片技术则更能反映真实组织结构，需要较长时间的制备和分析，但诊断效果更好。
甲状腺冰冻和石蜡切片是甲状腺病理学诊断中两种主要的方法。
二者的应用范围几乎相同，都可以用于良性和恶性疾病的鉴别诊断、淋巴结转移的检测、肿瘤的类型、大小、浸润范围的评估等方面。
此外，甲状腺冰冻可以在术中快速得出结果，以指导手术的决策，而石蜡切片则可用于病理诊断和医学研究。
综上所述，甲状腺冰冻和石蜡切片都是常用的甲状腺病理学诊断方法，各有其独特的优缺点。
在诊断过程中，应根据患者的具体情况来选择采用哪种方法，以期待得出更准确的诊断结果。
脑病变组织快速石蜡切片和冷冻切片的比较
１２２ ．
速石 蜡切片 使用 Ｐ Ｔ ４０型病理样 品快 速超 声 Ｉ－ ４ ０
处 理仪 【 上海震 康 医疗器 材有 限公 司 ） 水浴锅 温 度 为 ６ ， ５～
７ ℃， Ｏ 组织 （ 个别组 织太小 ， 擦镜 纸包裹 ） １％福尔 马林 用 经 ０ 液 加ｒ 固定 ２ ｍｉ， ｒ Ｉ １ ～３ ｎ 去陈表面液 体 ； 用纯丙酮 ３ ｒ 脱水 ２ ０ｒ Ｉ １ — ３ ，ｍｎ次 （ 次 ３ｉ ／ 根据组织大小 、 类定 ） 组织脱 水后变 白且疏 种 ： 松， 浸蜡后将 已凝 固好 的蜡 块表面烫熔 ， 包埋组织 ， 待表面稍 凝将蜡块 平压于玻 璃表 面． 组织 包埋 面平整 ， 使 快速 挣冻 后 切片 （ ５ ）裱 片后用干燥 的滤 纸将 表面水 分吸干 ， ３～ ； 酒精 灯烘 烤 ｌ ～１ｓ快速 Ｈ Ｏ ５， Ｅ染色 ＝由 ３位病 理医师双盲 观察。
【 图分类号 ｌ Ｒ ４ 中 ４６８
【 文献标识码 】 Ｂ
【 文章编 号】０ ７ ｏ ６ ２ｔ １ｌ Ｏ ５ １０ 一ｓ９ （ｏ２ｏ — Ｏ４—０ ｒ １
３ 讨 论
快速病理切 片分为 持 陈切 片 和快速石 蜡切 片两 种。脑 组织快速进检标本 由于组织较小且 质地疏松 、 以制 成优质 难 的快 速病 理切片 。本文 就使 用超声 渡处理 仪对脑 组织 进行 快速石蜡切片并 和冷冻切片进行 比较 。
・
学 习班 通 知 ・
全军皮肤 病中心 、 空军 总医院与北京协 和医院皮肤科将 于 ２ Ｏ 年 ４月上 中旬在北 京联 台举 办为期 ２ 的皮肤病理 学 习 ０２ － 周
班（ 第二期 ）参加者授予医学继续教育学分 加 分。奉 次学习班 由北京协 和医 院王家 璧教授 和空军 总医院赵广 主任医师 主要 ．
石蜡切片和冷冻切片
石蜡切片战热冻切片——愚愚分出有收会系列之阳早格格创做正在构造真验中，构造切片战热冻切片是最罕睹的二种切片要收，二种劣缺面明隐，正在真验的应用上也大有分歧.而二个真验的相共面皆是应用免疫教基根源基本理——即抗本与抗体特同性分离的本理，通过化教反应使标记表记标帜抗体的隐色剂隐色去决定构造细胞内蛋黑量，对于其举止定位、定性及相对于定量的钻研.一、石蜡切片构造教惯例造片技能中最为广大应用的要收.石蜡切片出有但是用于瞅察仄常细胞构造的形态结构，也是病理教战法医教等教科用以钻研、瞅察及推断细胞构造的形态变更的主要要收，而且也已相称广大天用于其余许多教科范围的钻研中.1、牢固：将新陈构造切成小块，牢固于4%多散甲醛过夜.凝固构造中的物量身分，尽大概脆持其活体时的结构.共时能使构造硬化，有好处切片的举止.2、脱火：为了缩小构造资料的慢遽中断，应使用从矮浓度到下浓度递加的程序举止经70%、85%、95%曲至杂酒粗（无火乙醇），屡屡时间为1小时.牢固后的构造资料需与消留正在构造内的牢固液及其结晶重淀，可则会做用后期的染色效验.3、透明：时常使用的透明剂有二甲苯，二甲苯是石蜡的溶剂.杂酒粗出有克出有及与石蜡相溶，还需用能与酒粗战石蜡相溶的溶剂，替换出构造内的酒粗.资料块正在透明剂浸渍历程称透明.4、浸蜡：先把构造资料块搁正在熔化的石蜡战二甲苯的等量混同液浸渍1小时.先后移进2个熔化的石蜡液中浸渍1小时安排.5、包埋：以少许热蜡液将其底部赶快揭附于包埋盒内上，而后置于速冻台，让石蜡牢固.6、切片：切片刀的钝利与可、蜡块硬度是可适合皆间接做用切片品量，可将蜡块至于热火中改变蜡块硬度.常常切片薄度为5微米，用毛笔沉托沉搁正在37度火浴中展片.7、揭片与烤片：将火浴中展片捞至玻片上铺正，而后将载玻片搁进37℃温箱中搞燥.8、切片脱蜡及火化：搞燥后的切片置于二甲苯中举止脱蜡，而后依次使用从下浓度到矮浓度递减的程序举止经杂酒粗、95%、85%、70%举止火化.9、染色：典范的苏木粗战伊黑：细胞核被苏木粗染成紫蓝色，普遍细胞量及非细胞身分被伊黑染成粉黑色.真验支配简朴.免疫组化：指戴隐色剂标记表记标帜的特同性抗体正在构造细胞本位通过抗本抗体反应战构造化教的呈色反应.二、冰冻切片：冰冻切片是一种正在矮温条件下使构造赶快热冻到一定的硬度，而后举止切片的一种要收.创造历程较石蜡切片快速、烦琐，果多应用于脚术中的赶快病理诊疗.一、与材：应尽大概快天采与新陈的资料，预防构造爆收死后变更.二、速冻：1、将构造块仄搁于硬塑瓶盖大概特造小盒内（曲径约2cm）.2、如构造块小可适量加OCT包埋剂浸出构造，而后将特造小盒慢慢仄搁进衰有液氮的小杯内.3、当盒底部交战液氮时即启初气化沸腾，此时小盒脆持本位切勿浸进液氮中，约莫10-20s构造即赶快冰结成块.4、正在造成冻块后，即可置进恒热箱切片机冰冻切片.5、若需要保存，应赶快以铝箔大概塑料薄膜启包，坐时置进-80℃冰箱贮存备用.三、牢固：1、样品托上涂一层OCT包埋胶，将速冻构造置于其上，4℃冰箱预热5-10min让OCT胶浸透构造.2、与下构造置于锡箔大概者玻片上，样品托速冻.3、构造置于样品托上，其上再加一层OCT胶，以真足覆盖为宜，速冻架（PE）上30min.四，切片：1、恒温冰冻切片机为较理念的冰冻切片机，其基础结构是将切片机置于矮温稀关室内，故切片时出有受中界温度战环境做用，可连绝切薄片至5-10μm.2、切片时，矮温室内温度以-15℃ ~ -20℃为宜，温度过矮构造易破碎，抗卷板的位子及角度要适合，载玻片附揭构造切片，切勿上下移动.3、切佳室温搁置30min后，进4℃丙酮牢固5-10min，烘箱搞燥20min.PBS洗5min×3.4、举止抗本热建复，微波热建复也可，室温自然热却.可用3%H2O2孵育5-10min，与消内源性过氧化物酶的活性.五、免疫荧光染色：1、冰冻切片室温晾搞15min，可用含10%仄常山羊血浑的PBS室温启关切片1小时（此步可出有洗）.2、滴加适合比率稀释的一抗大概一抗处事液（抗体的量视构造大小而定，准则是不妨匀称覆盖构造里，且包管所有历程中出有会使构造搞涸）.3、将切片搁正在加了PBS的免疫组化干盒，室温孵育2小时大概4℃过夜.4、第二天先将干盒搁到37℃回温1h，而后吸与片上的一抗举止回支，将切片拔出到小染缸PBS浑洗.5、滴加用PBS稀释佳的二抗（躲光）置于分子杂接箱中37℃孵育1小时.回支二抗，切片置于染缸内，PBS洗5min×3次.6、滴加DAPI处事液染核，室温10-20min（处事浓度0.1%染色15min）.7、回支DAPI，滴加5-10μl抗荧光衰减启片剂大概中性树胶，用处理搞洁的盖玻片启片，即可到荧光隐微镜大概者共散焦隐微镜下瞅察拍照.8、搞佳的切片搁正在切片盒内，置于4℃冰箱，可保存一周安排.对于比：。
石蜡切片和冰冻切片都适合质谱成像分析
石蜡切片和冰冻切片都适合质谱成像分析
石蜡切片和冰冻切片都是质谱成像分析中常用的技术。
它们各自具有优点，可以根据实验需求进行选择。
石蜡切片法是将组织样本固定在石蜡块中，然后用切片机切成非常薄的切片(通常在20-50微米之间)。
这种方法的优点在于其切割厚度均匀，可以提供高质量的细胞和组织的图像。
此外，由于使用的是石蜡作为固定剂，因此可以得到长期保存的切片。
石蜡切片也有其缺点。
石蜡本身是一种有机物质，可能会对某些生物分子产生影响。
石蜡切片需要经过一系列复杂的处理步骤，包括脱水、包埋、切片等，这可能增加实验的复杂性和时间成本。
相比之下，冰冻切片法则是在冷冻状态下快速切割生物组织并立即冻结以保留其完整性。
这种方法的优点在于它可以提供实时观察的活体细胞和组织结构，对于研究动态过程非常有用。
此外，冰冻切片不需要使用石蜡或其他固定剂，因此不会对生物分子产生影响。
然而，冰冻切片也有其挑战。
由于是在冷冻状态下进行切割，因此切片的质量可能受到冷冻损伤的影响。
此外，冰冻切片需要在极短的时间内完成，这可能对切片机的性能要求较高。
石蜡切片和冰冻切片都适合质谱成像分析，选择哪种方法取决于具体
的实验需求。
如果需要长期保存的高质量图像，或者需要研究静态结构和三维形态，那么石蜡切片可能是更好的选择。
而如果需要实时观察活体细胞和组织结构，或者对时间敏感，那么冰冻切片可能更合适。
乳腺肿瘤术中快速冰冻切片与常规石蜡切片病理诊断准确率的比较研究
乳腺肿瘤术中快速冰冻切片与常规石蜡切片病理诊断准确率的比较研究乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一，早期诊断和治疗对患者的生存率具有重要影响。
在乳腺癌手术中，病理诊断是非常关键的一环。
传统的石蜡切片需要几天的时间才能出具结果，这对于术后治疗和患者的病情评估来说具有一定的不便。
而快速冰冻切片技术可以在手术过程中快速获取组织病理学信息，有利于术中决策和术后治疗计划的制定。
本研究旨在比较乳腺肿瘤术中快速冰冻切片与常规石蜡切片病理诊断准确率，以期为乳腺癌术中病理诊断提供更为准确和高效的方法。
一、快速冰冻切片技术快速冰冻切片技术是指在手术过程中，将新鲜取得的组织标本迅速冷冻后切割成薄层，然后染色和镜检。
该技术可以在30分钟内获得组织病理学结果，对于术中判断切缘情况和淋巴结转移等具有重要意义。
快速冰冻切片技术主要适用于术中决策、病变边界不清晰、肿块与周围组织粘连等情况。
二、常规石蜡切片技术常规石蜡切片技术是指将新鲜取得的组织标本固定、脱水、浸入熔蜡后切割成薄层，然后染色和镜检。
这个过程需要数天的时间，对于术后治疗和预后评估来说不够及时。
三、研究方法本研究选取了连续行乳腺癌手术的患者为研究对象，根据术中取得组织标本的情况进行分组，一组进行快速冰冻切片病理诊断，另一组进行常规石蜡切片病理诊断。
比较两组病理诊断的准确率和一致性。
四、研究结果经过研究发现，在乳腺肿瘤术中，快速冰冻切片病理诊断与常规石蜡切片病理诊断的准确率存在一定差异。
快速冰冻切片的诊断结果在术中具有较高的准确性，能够更加直观地观察组织形态和肿瘤边界，对淋巴结转移的判断也更为准确。
而常规石蜡切片的诊断结果需要数天的时间，对于术后治疗和预后评估来说时间较长，但在组织形态和亚细胞结构的观察上具有优势。
六、研究展望本研究在乳腺癌术中病理诊断方面取得了一定的成果，但仍然存在一些不足之处。
在样本选择和数据分析上尚有待进一步完善。
未来可以结合更多的临床实例进行研究，以验证研究结果的稳定性和可靠性。
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石蜡切片与冰冻切片培训教程
石蜡切片和冰冻切片优缺点比较
冰冻切片
概述：冰冻切片是将活组织迅速冰冻、切片、染色，进行病理诊断的方法。
主要应用:（1）快速病理诊断（2）显示组织中的脂质（3）在组织化学上显示酶活性（4）神经组织学的镀银和镀金染色法（5）免疫荧光的研究
准备材料：（1）切片机刀片（2）冰冻包埋剂（3）液氮罐（4）液氮专用冻存管（5）组织镊（6）手术刀或组织剪（7）培养皿（8）生理盐水（9）粘附载玻片
冰冻切片机仪器说明
功能键说明
灯光开关按钮，用于冷冻箱照明。
手动除霜按钮，用于激活和终止手动除霜。
锁定按钮，锁定解锁定控制面板以避免无意修改输
入的参数。
要锁定或解锁定，按下约5秒。
用箭头所指的+和-键在钟型标记的面板上可以设
置实际时间。
按下或按钮超过1秒，时间值连续增加
或减少（自动重复功能）。
功能键说明
紫外灯开关按钮，用于冷冻箱消毒，开启后30分
钟后自动熄灭
用箭头所指的+和-键设置自动除霜循环的起始。
同
时，时和分标记之间的闪烁。
自动除霜循环每24小时进行一次。
用+和-键设置冷冻箱的温度。
实际温度是标准读数。
要显示需要的数值，触摸+和-键。
用+和-键置需要的数值。
按下或按钮超过1秒，冷冻盒温度值连续增加或减少。
完成设置后5秒将显示实际值。
用于激活元件冷冻快速冷冻站。
一旦激活，制冷系
统的压缩机将在40秒后启动以加强热传导效应。
仪器无元件显示为“”，有元件显示为“”。
功能键说明
粗调后退按钮，用于标本远离刀片的快速移动。
微调后退按钮，用于标本远离刀片的慢速移动。
粗调前进按钮，用于标本靠近刀片的快速移动。
微调前进按钮，用于标本靠近刀片的快速移动。
（注意：以上粗调和微调按钮均可采用点按步进移动或长按连续移动。
）
冰冻切片操作流程
①取材：手术过程中取下的新鲜组织，不能太大太厚，厚者冰冻费时，大者难以切完整，大小约为24×24×2；
②设定冷冻温度：应视不同的组织选择不同的冷冻箱冷温度,冷冻不足无法切片，冷冻过度切片易碎，如：a 软骨、睾丸、脾脏等高密度组织，冷冻箱温度在-10 ～15℃；b 甲状腺、脑、心脏、肌肉等组织，温度在-15～25℃；c 肝、乳腺、膀胱等含脂肪的组织，温度在-25℃以下。
③包埋冷冻：取出组织标本盘，放平摆好组织，周边滴上包埋剂（一般为），速放于冷冻台上，冰冻。
小组织应先取一标本盘，滴上包埋剂让其先冷冻，再放上组织，滴上包埋剂冷冻。
④修平组织：将冷冻好的组织块，夹紧于切片机标本头上，启动粗进退键，转动旋钮，将组织修平。
⑤调节防卷板与切片：制作冰冻切片，关键在于防卷板的调节上，这就要求
操作者要细心，准确地将其调较好，调校至适当的位置。
调好切片厚度，切片时，切出的切片能在第一时间顺利地通过刀与防卷板间的通道，平整地躺在持刀器的铁板上。
这时便可掀起防卷板，取一粘附载玻片，将其附贴上即可。
冰冻切片冷冻温度选择表
冰冻切片常见问题、原因、解决方法
石蜡切片
概述：石蜡切片法是以石蜡作包埋剂，用旋转切片机将材料切成薄片，经一系列处理制成永久制片的方法。
准备材料：
（1）切片机刀片（3）液氮罐（4）液氮专用冻存管（5）组织镊（6）手术刀或组织剪（7）培养皿（8）生理盐水（9）载玻片（10）乙醇（11）二甲苯（12）福尔马林（13）蜡（14）包埋盒（注意：若自己进行石蜡包埋还需准备
10-14号材料）
石蜡切片制片流程
组织取材→福尔马林溶液固定过夜→70％酒精2－4小时→85％酒精2－4小时→95％酒精（Ⅰ）2－3小时→95％酒精（Ⅱ）1－2小时→100％酒精（Ⅰ）1－2小时→100％酒精（Ⅱ）0.5－1小时→100％酒精：二甲苯（1：1）0.5－1小时→二甲苯（Ⅰ）20—30分钟→二甲苯（Ⅱ）10—20分钟→浸蜡（Ⅰ）40分钟→浸蜡（Ⅱ）40分钟→组织包埋→蜡块整修，切片→选片、粘片及展片→贴好的切片置于烤片机烤干30分钟~120分钟
（注意：组织大小：约1.5*1.5*0.5厘米福尔马林溶液配制：40%甲醛100,磷酸二氢钠4克，无水磷酸氢二钠6.5克，蒸馏水900）
石蜡切片机操作规程
1.打开切片机后背开关，将蜡块固定于切片机头上的标本夹内，使用修片模式，设置好修片厚度，调整蜡块到稍离开刀口能够切到的位置上，注意蜡块组织切面与切片刀口要垂直平行。
2.匀速摇动手轮并点按微调按钮调整蜡块切面恰好与刀口接触，接触后摇动手轮进行修片。
3.修片时若发现蜡块切面与切片刀口不够垂直平行可以通过标本夹旁边的控制杆与标本切面角度调节旋钮来调整蜡块切面。
调整后稍微调整蜡块离开刀口一点再重复第2步重新修片。
4.修片修到可以切出完整的最大组织切面时切换回切片模式，设置好切片厚度进行切片，注意前一两个切片的厚度还没更换好应舍弃。
5.切出蜡带后，右手用镊子夹住蜡带粘住刀口的一端轻轻拉起，尽可能将蜡带拉直展开，左手用毛笔拖住蜡带中间，转移轻铺于选片盒中。
6.在选片盒中用镊子将蜡带分成你需要的段数，并将一些破损的切片夹开去除，用已标记好的载玻片捞片。
7.将已粘片的载玻片置于预热好水温（42℃~45℃）的展片机内进行展片，一般几秒即可使切片展平，然后将载玻片置于预热好（65℃~70℃）的烤片机上烤干，烤片时间为30分钟~120分钟。
8.使用完切片机后，锁好手轮，取下蜡块，卸下刀片，关闭切片机，用毛笔清理切片机，稍微往上提并拉出切片废料U型盘进行清理。
石蜡切片机仪器说明
石蜡切片常见问题及原因
1、切片上卷且不能形成连续蜡带。
原因：
a、切片刀不够锋利
b、切片刀与蜡块角度不当
c、石蜡硬度过大，黏度不够
d、蜡块四周留蜡边太少
2、切片上出现裂纹。
原因：
a、切片刀上有小缺口或刀不平整
b、组织中可能含有较硬的物质，如包埋纸、线头、钢丝等
c、组织过硬变脆(如凝血块、胶冻样物质、甲状腺、腺瘤等)
d、石蜡中含杂质较多
e、包埋时石蜡冻结太慢
3、切片粘附在刀上或蜡块上且不易取下。
原因：切片时有静电作用，产生静电吸引，在冬季或气候干燥时最常出现这种情况。
4、切片易碎或组织脱出与石蜡分离。
原因：
a、组织固定不佳、脱水透明不够
b、浸蜡时间过长、温度过高
c、组织脱出是由于脱水透明时间不够，或组织中含有酒精，石蜡不易渗入组织中，故导致石蜡与组织分离
d、石蜡、二甲苯使用时间过久
5、切片皱缩。
原因：
a、刀片过钝
b、标本过热
c、切片速度太快
6、仪器没有显示。
原因
a、电缆连接不正确
b、保险丝故障
c、控制面板的电缆连接不正确
d、电压选择开关设置不正确
石蜡切片机与冰冻切片机的安全事项
1．刀片很锋利，安装与拆卸刀片时需小心注意，可使用镊子操作以免割伤。
2．操作切片机手轮时离开手轮就要锁住手轮以免接触切片机内部时割伤。
3．清理切片机时需先把刀片拆卸出来再进行清理。
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