发酵罐操作

发酵罐操作

令狐采学

操作前请认真检查冷水机、空压机、反应器、进出水管、气管情况。填好使用说明书。

开机：先打开其他单元上的开关，再打开主机背后的开关。关机：先把控制器上所有单元的参数状态调到off，把进气开关打开后关机；关机时先

关控制器后面的开关，再关其他单元上的开关。

灭菌操作

1、取下马达，平放于桌上。罐顶端套上黑色保护帽。

2、由罐上取下温度传感器，该传感器不需要灭菌。

3、取下PH电缆线，盖上红色保护帽；将PH电极要插到底。务必拧紧电极的上下两个固定螺帽。PH电极灭菌前要标定。PH电极标定：接好电缆后拧开电极的固定螺帽（第一个），将PH电极取出后用去离子水冲洗干净后，轻轻用面纸吸干上

面的水后先放入标准溶液4.01中校正，等控制器上数据稳定后在set zero处输入4.01（不管实际数值的微弱差别）；输入完闭后从标准液中取出电极，冲洗、吸干后放入7.00的标准溶液中，等控制器上数据稳定后在set span处输入7.00（不管实际数值的微弱差别）。PH电极校正后不要关控制器。

4、取下DO电缆线，DO电缆接口处用锡箔纸包好后套上黑色帽。DO电极灭菌完后标定。DO电极要插到底，拧紧电极的上下两个固定螺帽。灭菌前要注意溶氧电极里头的保护液是否还有，没有则要进行添加。

5、取下消泡或液位电缆线，将消泡或液位电缆插到底，灭菌后定位到所需要的高度后就不要再压下去。消泡电极的高度离液面约1.5cm处。

6、拆下发酵罐上和冷凝器上的进、出水管，拆下的同时要用夹子夹住拆下水管的接头处，以防水流出。

7、发酵罐上的过滤器的两端多要用夹子夹死，过滤器的出口处用锡箔包好，所有过滤器的两端多要用夹子夹住。发酵完毕

倒罐后注意检查过滤器是否被打湿，若有则赶快用吸球将其中的液体吹出。

8 、用铁夹夹死收获管上的硅胶管以防在灭菌锅内跑液。收获管不用时上面一定要卡死不移走。

9、在灭菌前.将发酵罐的六个固定螺帽拧松出气，其他螺帽一定要拧紧！灭菌完后打开高压锅后立刻将其拧紧，注意戴上手套防止被烫伤。

10、酸不要放高压锅内灭菌，将空的酸液瓶上的过滤器用锡箔包好，并将瓶盖拧松出汽。灭菌完后去掉锡箔过滤器上的锡箔纸作为出汽口。（注意与酸瓶相连的硅胶管不要卡死）；碱液瓶和硅胶管可以一起灭菌（与碱液瓶相连的硅胶管要卡死）。

11、取下电热夹套将其平铺于桌面。

12、灭菌前调整好搅拌叶的位置，底下的搅拌叶尽量靠近空气分布器，上面的一个位置调整到所加发酵液的中间位置。

13、取样器的位置不要靠近挡板的位置，尽量靠中间位置。

14、灭菌前将取样器的吸球取下。所有的硅胶管不要靠到高压

锅的内壁上。

灭菌完毕后

1、将六个松开的固定螺帽和酸碱瓶盖拧紧。

2、去掉包在过滤器上的锡箔纸和卡硅胶管的夹子。

3、装上马达，若马达内侧润滑油干了，涂上适量的凡士林。

4、接上溶氧电缆线后进行DO电极标定：灭菌完后接上DO 电极的电缆线后在set zero

处输入0；将反应器的空气流量控制在1L/min,Agitation调到100r/min过夜，早上开在set span处输入100后按确认键。5、等温度降到发酵所需温度时接好各进出水管、PH电缆线，消泡电缆线。

6、在放入温度电极之前，先往温度电极的进口里滴加甘油，插入电极后继续滴加到冒出止。注意温度电极要插到底。

7、.检查空压机的输出压力，应在0.7~1.0kg/cm3 范围内。

8、消泡剂的硅胶管要按从下往上顺序在泵上安装。

冷水机工作温度的设定

开机：接好进出水管→打开总电源→进行温度设计→打开循环泵→开始制冷

关机：先关制冷开关→关循环泵开关→同时将进、出水口阀门关闭→关上电源

温度设定：开机→面板显示“PP0.0” →按“移位键”和“调整键”后显示“PP0.1”

→按SET键确认→此时面板显示上限值，按“移位键”和“调整键”设定上限值→按SET键确认→此时面板显示下限值，按“移位键”和“调整键”设定下限值→按SET键确认→再按SET键→再按SET键→面板显示结束标志“”，按SET键回到测量显示，设置结束。

上述操作结束后准备接种

接种准备：准备好铁挡板、打火机、酒精喷壶、接种圈、装95%乙醇的搪瓷缸容器、尖头钳子、活动扳手，接种瓶。

接种操作

1、移开接种口附近的胶管，将铁挡板围住接种口后用酒精喷

壶朝接种口处喷酒精后点着，（注意：如果有火焰顺着酒精溢出铁板外，则需要吹灭铁板两侧溢出的火焰。）

2、将接种圈沾酒精点着后套住接种口处，将扳手或钳子沾酒精后拧开螺帽后用钳子将其夹住拿出，吹灭螺帽和钳子上的火焰后迅速放入装95%乙醇的搪瓷缸容器里。

3、将接种瓶在火焰处拔开后迅速倒入发酵罐内。完毕后用钳子夹出螺帽拧上。整个过程确保无菌操作！

溶氧设定：发酵模式下溶氧的控制由有四种情况：按off键→按control键→ 按Auto键→setup→cascade→选择以下四种模式。

1、None状态：溶氧的控制主要通过增加空气流量和设定好固定的转速来控制。

2、Agit状态：溶氧的控制主要通过提高转速来控制，此状态在空气流量保持不变的情况下溶氧随着细胞消耗降低时通过增加转速来提高溶氧水平。直到转速达到设订的转速上限值为止。该过程为自动控制。

3、02 状态：该状态主要通过控制氧气与空气的混合百分比来控制。溶氧随着氧气百分比的增加而增加。为自动控制过程。

4、Agit/ 02 状态：该状态中溶氧的控制先是通过提高转速来增加的，当转速达到设定的上限值时若实际溶氧值仍没达到所需要的设定值，此时转速控制在上限值，开始以从小到大的百分比自动提高氧气的进入量，直到达到所设定的溶氧值附近为止。该过程亦为自动控制过程。

注意：在使用Agit状态和Agit/ 02 状态时，若实际溶氧值与设定值相差太大，则要确保所设定的搅拌转速上限值不要太大，否则转速会瞬间内增大带来太大的剪切力和大量的泡沫。实际操作中可以同时通过空气流量计的手动控制来辅助操作。

按off键→按control键→ 按Auto键→setup→此时界面中出现的P Gain和 l Gain为两个出厂设定好的参数，不要改动。

其他控制操作：

选择U1：1、开机后→按use键→按U1～U4单元的Fermentation 或cell culture键选择发酵模式或细胞培养模式；连