紫外分光光度法对嫩肉粉中木瓜蛋白酶活力的测定方法研究
木瓜蛋白酶活力的快速测定
木瓜蛋白酶活力的快速测定
李卫民
【期刊名称】《饮料工业》
【年(卷),期】2009(012)010
【摘要】介绍了一种经多次试验、操作简便、重复性好的木瓜蛋白酶活力的快速测定方法.
【总页数】4页(P30-33)
【作者】李卫民
【作者单位】珠海市永隆饮品有限公司,广东珠海,519030
【正文语种】中文
【中图分类】Q55
【相关文献】
1.紫外分光光度法对嫩肉粉中木瓜蛋白酶活力的测定方法研究
2.十二烷基苯磺酸钠共振散射光谱法测定木瓜蛋白酶活力
3.血清抗胰蛋白酶活力的快速测定法
4.胰蛋白酶活力的快速测定
5.催化共振散射光谱法测定木瓜蛋白酶活力
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木瓜酶活力测定方法的研究
木瓜酶活力测定方法的研究：
木瓜酶活力测定方法是指用来测定木瓜酶酶动力学性质的方法。
木瓜酶是一种多聚苯乙烯酶，具有解除多聚苯乙烯的能力，在食品加工、医药、农业等领域具有重要的应用价值。
常用的木瓜酶活力测定方法有以下几种：
滴定法：使用滴定的方法测定木瓜酶的活力。
在该方法中，通常使用溴甲酚蓝作为指示剂，测定木瓜酶在解除多聚苯乙烯的过程中所消耗的溴甲酚蓝的量。
通过计算溴甲酚蓝的消耗量，可以确定木瓜酶的活力。
分光光度法：使用分光光度法测定木瓜酶的活力。
在该方法中，通常使用苯乙烯为底物，测定木瓜酶在解除苯乙烯的过程中所产生的二乙烯的吸收光谱。
通过计算二乙烯的吸收值，可以确定木瓜酶的活力。
荧光光谱法：使用荧光光谱法测定木瓜酶的活力。
在该方法中，通常使用苯乙烯为底物，测定木瓜酶在解除苯乙烯的过程中所产生的二乙烯的荧光光谱。
通过计算二乙烯的荧光值，可以确定木瓜酶的活力。
以上是常用的木瓜酶活力测定方法，希望这些信息能帮助您了解这一概念。
紫外分光光度法测蛋白酶酶活
2013/05/13紫外分光光度法测蛋白酶酶活1、原理蛋白酶在一定的温度与pH条件下，水解酪素底物，然后加入三氯乙酸终止酶反应，并使未水解的酪素沉淀除去，滤液对紫外光有吸收，可用紫外分光光度法测定。
根据吸光度计算其酶活力。
酶活单位的定义：每1mL粗酶液，在一定温度和pH值条件下，1min水解酪素产生1ug酪氨酸为一个酶活力单位，以（u/mL）表示。
2、试剂和溶液三氯乙酸、氢氧化钠、盐酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、乳酸、乳酸钠、硼酸钠（硼砂）均为分析纯，酪素、酪氨酸为生化试剂。
2.1 三氯乙酸c（CCL3·COOH）=0.4mol/L称取三氯乙酸65.4g，用水溶解并定容至1000 mL。
2.2 氢氧化钠溶液c（NaOH）=0.5mol/L按GB601配制。
2.3 盐酸溶液c（HCL）＝1 mol/L及0.1 mol/L1 mol/L HＣＬ:取90mL浓盐酸溶解于去离子水中，定容至1000mL。
0.1 mol/L HＣＬ：取9mL浓盐酸溶解于去离子水中，定容至1000mL。
2.4 缓冲溶液a、磷酸缓冲液（pH＝7.5）适用于中性蛋白酶称取磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）6.02g和磷酸二氢钠（NaH2PO4·12H2O）0.5g，加水溶解并定容至1000mL。
b、乳酸缓冲液（pH＝3.0）适用于酸性蛋白酶甲液称取乳酸（80％～90％）10.6g，加水溶解并定容至1000 mL。
乙液称取乳酸钠（70％）16g，加水溶解并定容至1000 mL。
使用溶液取甲液8 mL，加乙液1 mL，混匀，稀释一倍，即成0.05moi/L乳酸缓冲溶液。
c、硼酸缓冲溶液（pH＝10.5）适用于碱性蛋白酶甲液称取硼酸钠（硼砂）19.08g，加水溶解并定容至1000 mL。
乙液称取氢氧化钠4.0g，加水溶解并定容至1000 mL。
使用溶液取甲液500 mL、乙液400 mL混匀，用水稀释至1000mL。
木瓜蛋白酶的检测
2、以BAEE为底物测木瓜蛋白酶的活性
BAEE( 苯甲酰一L－精氨酸乙酯）被木瓜蛋白酶 催化水解成苯甲酰一L精氨酸(BA) 和乙醇 ， 可以利用 BA和BAEE在253nm 处光吸收值的不同，用光学法测 定酶活性。 BAEE法底物纯度高，准确性高，重复性 好，操作简便， 最省工省时，连续测定时，一个样品 在10min之内即可完成，但仪器设备昂贵， 成本偏高： 该测定方法尤其适合精酶制品的活性检测及酶动力学 性质的研究， 也常用于商品木瓜蛋白酶制品的活性测 定。
紫外吸光光度法测定化妆品中木瓜蛋白酶的活力 冯健雯
工业生产中木瓜蛋 白酶 的活性检测方法比较 方 焕 生吉萍 吴显荣
十二烷基苯磺酸钠共振散射光谱法测定木瓜蛋白酶活力 黄国霞 蒋治 良 梁爱徐红娣
云南峨山番木瓜中木瓜蛋白酶的初步纯化及活性测定 黄兴奇等
4、实验室木瓜蛋白酶活力测定
(1)样品处理：精确称取0.05g的木瓜蛋白酶干粉于研钵中，加入少量石英砂 和几滴酶稀释液研磨15min,将酶液用蒸馏水少量多次洗入500ml容量瓶 (不 要将石英砂带入)，定溶，摇匀。取样液5ml,加入酶溶解液10ml，混匀盖严， 将酶激活15min以上(激活时半胱氨酸的浓度要高于0.03mol/L，而且要当天 配制，激活的酶最好在2h内测完)备用。
乙醇溶液对木瓜蛋白酶催化活性的影响 何 平 詹福建 丘泰球
初志战 黄卓烈 巫光宏
木瓜蛋白酶的生产工艺研 谭爱娟 王利民
一、木瓜蛋白酶的简介：
木瓜蛋白酶是从南方果王——番木瓜中提取的乳汁，经科 学加工而制成的食品添加剂。木瓜蛋白酶具有很高的蛋白分解 活性，已广泛用于啤酒酿造、肉类加工、动植物蛋白水解制品、 饼干果酱 、果汁加工和果酒的生产上。特别是在啤酒工业上， 木瓜蛋白酶可作为澄清剂 ，将啤酒中游离的蛋白质分解为易溶 于水的短肽 、氨基酸 ，既丰富了营养成分，又防止啤酒在贮 运过程中产生浑浊与沉淀，延长了啤酒的保存期；另外，在麦 芽糖化阶段加入木瓜蛋白酶，可弥补麦芽中蛋酶 活力不足的缺 陷，提高氨基氮的浓度，保证发酵的正常进行，确保产品具有 良好风味；在肉制品加工方面，木瓜蛋白酶可作为肉类的嫩化 剂(如嫩肉粉 )、分解剂(能够将固体肉完全水解为容易消化吸 收的肉汁，例如鸡精、兔精制造等)等 。
木瓜酶活力测定方法的研究
木瓜酶活力测定方法的研究木瓜酶是一种黄酮酶，广泛存在于许多植物当中，具有良好的催化活性。
木瓜酶在食品工业、医药领域和生物技术等方面有着广泛的应用。
因此，准确测定木瓜酶的活力是非常重要的。
本文将针对木瓜酶活力测定方法展开研究。
首先，概述目前常用的木瓜酶活力测定方法，随后详细介绍各种方法的原理、操作步骤以及优缺点。
最后，对其中一种测定方法进行深入研究，以便更好地了解木瓜酶活力的测定过程。
目前常用的木瓜酶活力测定方法包括酚酞法、酪氨酸酶法、pH酶法和萤光素法等。
下面将对这些方法进行简要介绍。
酚酞法是根据酚酞与木瓜酶催化产生的酚酞显色反应来测定木瓜酶活力的一种方法。
该方法操作简单、灵敏度较高，但需要使用有毒的试剂和显色剂。
酪氨酸酶法是一种通过测定木瓜酶对酪氨酸水解的催化活性来测定其活力的方法。
该方法对样品处理要求较高，但操作相对简单，测定结果相对准确。
pH酶法是一种基于酶活性对反应物pH值的变化情况进行测定的方法。
该方法对pH的变化极其敏感，可以用来测定木瓜酶的活力，但依赖较强。
萤光素法是一种通过测定木瓜酶与辣根过氧化物酶的复合物产生的荧光强度来测定木瓜酶活力的方法。
该方法操作相对简单，结果准确，但需要专门设备。
在这些方法中，我们选择了酪氨酸酶法进行深入研究。
该方法原理简单，测定结果准确可靠。
具体的操作步骤如下：1.准备样品：收集所需测定的木瓜酶样品，如酒精或水提液。
2.取适量的酪氨酸溶液，使其浓度与之前的样品相同。
3.在试管中，混合适量的酪氨酸溶液和木瓜酶样品。
对照组中只加入酪氨酸溶液。
4.将试管放入恒温水浴中，温度为37°C，孵育一定时间，使酪氨酸水解反应完全进行。
5.向反应体系中加入适量的硫酸，停止反应。
6.使用分光光度计测定反应体系中产生的对映光的光密度。
7.根据光密度值计算出木瓜酶的活力。
这种方法虽然操作简单，但也有一些局限性。
首先，酪氨酸的浓度需与样品浓度进行匹配，这对样品的处理和准备有一定要求；其次，由于酪氨酸酶活性对各种因素如温度、pH值等有一定依赖性，因此在样品处理过程中需保持温度和pH的稳定。
（食品化学）实验四、蛋白酶酶活力的测定
实验四、蛋白酶酶活力的测定一、原理以酪蛋白为反应底物，令蛋白酶在其最适宜条件下反应一定时间，用三氯乙酸终止反应后过滤或离心得上清液，用Folin比色法测上清液中蛋白酶解物的浓度，计算蛋白酶活力。
蛋白酶活力定义：在一定的条件下，每分钟水解酪蛋白生成与1μg酪氨酸相当的三氯醋酸可溶物所需的木瓜蛋白酶的量，为1个酶活力单位（u）。
二、材料、仪器与试剂（一）材料：木瓜蛋白酶（二）仪器：可见-紫外分光光度计、水浴锅、天平、具塞刻度试管（10、15ml）、漏斗、滤纸、试管架，容量瓶、移液管（1、10ml）、烧杯（25ml）、玻璃棒。
（三）试剂：1福林试剂(Folin试剂)市场购买的Folin试剂。
此溶液使用时加2倍蒸馏水稀释，即成已稀释3倍的福林试剂。
2、中性稀释液－pH7.2磷酸盐缓冲液称取磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H2O)31.2g,定容至1000mL,即成0.2mol/L溶液(A液)。
称取磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)71.63g,定容至1000mL,即成0.2mol/L 溶液(B液)。
取A 液28mL 和B 液72mL,再用蒸馏水稀释1倍,即成0.1mol pH7.2的磷酸盐缓冲液。
3、酪蛋白溶液2g恒重的酪蛋白，用0.5mol/LNaOH溶液润湿后加入80ml pH7.2磷酸盐缓冲液，沸水浴溶解，冷却后，用1 mol/L盐酸调至pH 7.0，再用磷酸盐缓冲液定容至100ml，得浓度为2%的酪蛋白溶液。
临用现配。
4、三氯醋酸溶液称取三氯乙酸(CCL3COOH)65.4g,定容至1000mL，得0.4mol/L三氯乙酸(TCA)溶液5、酪氨酸标准溶液精确称取精确称取在105℃烘箱中烘至恒重的酪氨酸0.1000g，逐步加入6mL 1N盐酸使溶解,用0.2N盐酸定容至100mL,其浓度为1000μg/mL,再用水稀释5倍，得到200μg/mL的酪氨酸标准溶液。
取200μg/mL的标准酪氨酸溶液，配成不同浓度的溶液（0、20、40、60、80、100μg/mL）6、样品溶液称取木瓜蛋白酶0.100g, 置于研钵中,加入相应的缓冲液定容至50mL,得到稀释500倍的酶液（当天配制、稀释）。
木瓜蛋白酶酶活力测定
木瓜蛋白酶酶活力测定1、原理蛋白酶在一定温度与pH条件下，水解酪蛋白底物，然后加入三氯乙酸终止酶反应，并使未水解的酪蛋白沉淀出去，滤液对紫外光有吸收，可用紫外分光光度法测定，根据吸收度计算酶活力。
2、酶活力定义在一定条件下，每分钟水解酪蛋白生成1ug酪氨酸所需的酶的量，为1个酶活力单位（U）。
3、仪器和设备恒温水浴（37±0.2）℃紫外分光光度计4、试剂和溶液4.1、酶稀释液称取L-半胱氨酸盐酸盐（C3H7NO2S·HC L·H2O）5.27g，氯化钠（NaCL）23.4g，加水500ml溶解，另取乙二胺四乙酸二钠2.23g加水200ml溶解，合并两液混匀，用0.1mol/l 氢氧化钠溶液或0.1mol/l盐酸溶液调至pH=5.5，加水稀释至1000ml。
4．2、0.05mol/l磷酸氢二钠溶液称取磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）17.89g，加水溶解，并定容至1000ml。
4.3、酪蛋白溶液称取经硅胶干燥器忠干燥至衡重的酪蛋白0.6g（精确到0.0002g），置烧杯中，假如0.05mol/l磷酸氢二钠溶液80ml。
在沸水浴忠边加热边搅拌，直至完全溶解，冷却后，用0.1mol/l盐酸调至pH=7.0,转移到100ml容量瓶中，加水至刻度。
临用现配。
4.4、三氯乙酸溶液称取三氯乙酸8.995g，加无水乙酸钠14.97g，冰乙酸9.45ml加适量水溶解后，加水使成500ml，振摇均匀。
4.5、酪氨酸标准溶液称取于105℃干燥至衡重的酪氨酸50mg（精确0.0002g）用0.1mol/l盐酸溶解，移入100ml容量瓶中，并用0.1mol／l盐酸调至刻度，摇匀，即可得含酪氨酸50ug／ml的溶液。
4.6、试样溶液称取木瓜蛋白酶0.9g（精确0.0002g）置于研钵中，加入少量酶稀释液研磨20min，用酶稀释液移至250ml容量瓶中，加酶稀释液至刻度，充分摇匀；取出上述液体1ml以酶稀释液稀释，定容20ml，充分摇匀，供测试用（60min内使用）。
紫外吸光光度法测定化妆品中木瓜蛋白酶的活力
紫外吸光光度法测定化妆品中木瓜蛋白酶的活力作者：冯健雯(梧州市产品质量监督检验所,梧州543002)样品用磷酸盐半胱氨酸ＥＤＴＡ缓冲溶液搅拌溶解后,选择一定的ｐＨ值和温度条件,样品中的木瓜蛋白酶能将加入的酪蛋白水解生成可溶解的氨基酸,末水解的酪蛋白用三氯乙酸沉淀后过滤,溶解的水解产物用紫外吸光光度法测定[1]。
1试验部分1.1试剂与仪器磷酸钠溶液:0.05ｍｏｌ·Ｌ-1,称取十二水磷酸氢二钠1.79ｇ溶解于100ｍｌ水中。
柠檬酸溶液:0.05ｍｏｌ·Ｌ-1,将柠檬酸一水合物1.05ｇ用100ｍｌ水溶解。
缓冲溶液:称取十二水磷酸氢二钠17.89ｇ溶于800ｍｌ水中,再将ＥＤＴＡ钠盐二水合物14.0ｇ和盐酸半胱氨酸一水合物6.1ｇ溶于其中。
用1ｍｏｌ·Ｌ-1盐酸或1ｍｏｌ·Ｌ-1氢氧化钠将ｐＨ值调到6.0±0.1,加水定容至1Ｌ。
三氯乙酸溶液:将三氯乙酸30ｇ溶于100ｍｌ水中酪蛋白作用物:将1ｇ干燥的酪蛋白分散在50ｍｌ磷酸钠溶液中,在沸水浴中加热30ｍｉｎ,经常搅拌之,冷至室温,在连续快速的搅拌下,用柠檬酸溶液调ｐＨ值至6.0±0.1,加水定容至100ｍｌ。
标准溶液:1ｍｇ·ｍｌ-1,称取ＵＳＰ木瓜蛋白酶对照标准物100ｍｇ(其活力为100ＰＵ·ｍｇ-1),用磷酸盐半胱氨酸ＥＤＴＡ缓冲溶液溶解,定容100ｍｌ。
标准使用液:移取0.25,0.50,1.00,1.50,2.00,2.50ｍｌ标准溶液于一组10ｍｌ容量瓶中,用缓冲溶液稀释至刻度,摇匀。
酸度计:分度值0.1ｐＨ,ｐＨ6.0±0.1。
超级恒温水浴:40±0.1℃紫外分光光度计:波长200～1000ｎｍ1.2测定方法1.2.1样品处理称取样品1.00～2.00ｇ,加磷酸盐半胱氨酸ＥＤＴＡ缓冲溶液搅拌溶解后转移至50ｍｌ容量瓶中,用缓冲溶液稀释至刻度,摇匀。
木瓜蛋白酶活力测定方法
木瓜蛋白酶活力测定方法分别精密量取酪蛋白溶液5ml，置3支具塞试管中，置40℃水浴中保温10分钟，各精密加入供试品溶液2ml，摇匀，置40℃水浴中，开始记时，准确反应1小时，立即精密加入三氯醋酸溶液5ml，强力振摇混匀，置40℃水浴中放置30~40分钟，使沉淀的蛋白质完全凝固，滤过，滤液作为供试品溶液。
精密量取酪蛋白溶液5ml置另一具试管，于40℃水浴中保温1小时，精密加入三氯醋酸溶液5ml，强力振摇混匀，精密加入供试品溶液2ml，置40℃水浴中放置30~40分钟，滤过，滤液作为空白溶液。
照分光光度法（中国药典2000年版二部附录IV A），以0.1mol/L盐酸溶液为空白，在275nm的波长处测定空白溶液、供试品溶液和对照品溶液的吸收度，按下式计算：效价（单位/mg）=A/As＊Cs＊12/2＊稀释倍数/W式中A为供试品溶液的吸收度减去空白溶液的吸收度：As为酪氨酸对照品溶液的吸收度：Cs为酪氨酸对照品溶液的浓度，ug/mlW为供试品重量，mg;在上述条件下，释放1ug的酪氨酸的酶量为一个活力单位。
试剂酪蛋白溶液：取酪蛋白1g，加0.05mol/L磷酸氢二钠溶液50ml,置沸水浴中煮30分钟，时时搅拌，冷至室温，加0.05mol/L枸椽酸溶液调节PH至6.0±0.1，并迅速搅拌，防止酪蛋白沉淀，用水稀释至100ml（临用新配）。
酶稀释液：取无水磷酸氢二钠3.55g，加水400ml溶解，加乙二胺四醋酸二钠1.1g和盐酸半胱氨酸2.74g，振摇溶解，用1mol/L盐酸或1mol/L氢氧化钠溶液调节PH6.5±0.1，用水稀释至500ml,混匀（临用新配）三氯醋酸溶液:取三氯醋酸17.99g，加醋酸钠29.94g和冰醋酸18.9ml，加适量水溶解后，加水使成1000ml，摇匀。
酶活力测定对照品溶液的制备:精密称取已105℃干燥至恒重的酪氨酸对照品适量，用0.1mol/L盐酸溶液制成每1ml中约含40ug的溶液。
紫外分光光度法对嫩肉粉中木瓜蛋白酶活力的测定方法研究
中木瓜蛋白酶的酶活力大小, 为判断嫩肉粉质量优劣提 供参考依 据。把嫩肉粉 溶于盐酸半 胱氨酸 溶液, 取该
混合液与酪蛋白溶液反应 10m in, 用紫外分光 光度法测 得反应 所生成 酪氨酸 的含量。该 方法具 有较好 的准确
性和重现性, 添加标准回收率为 96 8% ~ 105 8% ; 且步骤简明, 所需测试仪器简单。在该方法条件下, 每分
酶活力是酶性质的重要参数, 显示酶分解底 物能力的强弱。木瓜蛋白酶酶活力的测定, 采用 不同底物衍生的测定方法也不同, 所取得的数值 也不能进行直接比较。传统的作法, 木瓜蛋白酶 是用明胶或血红蛋白作底物来测定的。由于要求 底物具有较高的专一性和便于标准化, 新的测定 方法往往采用合成的 N - 苯甲酰 - L - 精氨酸乙酯 ( BA EE ) [ 3] 。但以 BAEE 为底物的测定 方法所涉 及到的仪器设备昂贵, 成本偏高 [ 4] 。本文采用以 酪蛋白为底物的紫外光谱法来测定嫩肉粉中木瓜 蛋白酶的活力, 该法所需测试仪器简单, 步骤简 明, 容易掌握; 并且该法也常被国内用来测定各 种酶的活力, 所得的数据便于比较。对嫩肉粉中 木瓜蛋白酶活力的测定, 可为嫩肉粉质量优劣提 供一项重要的参考指标。
入三氯乙酸溶液 5m L, 振摇, 置 ( 37 0 2) ! 水
浴中, 反应 10m in后, 准确加入 ( 37 0 2) ! 预
热的底物溶液 5 0mL, 振摇, 于 ( 37 0 2) ! 水
浴中放置 40m in, 用干燥滤纸过滤, 滤液在 2h内
采用分光光度法以水为空白, 在 275nm 的波长处
1 实验部分
1 1 仪器 恒温水浴锅; 751- GW 分光光度计。
1 2 试剂 酪蛋白溶液: 取酪蛋 白 0 6g, 加 0 05m o l/L
紫外分光光度法测蛋白酶酶活[详解]
![紫外分光光度法测蛋白酶酶活[详解]](https://img.taocdn.com/s3/m/f0f89073f4335a8102d276a20029bd64783e62bd.png)
紫外分光光度法测蛋白酶酶活1、原理蛋白酶在一定的温度与pH条件下，水解酪素底物，然后加入三氯乙酸终止酶反应，并使未水解的酪素沉淀除去，滤液对紫外光有吸收，可用紫外分光光度法测定。
根据吸光度计算其酶活力。
酶活单位的定义：每1mL粗酶液，在一定温度和pH值条件下，1min水解酪素产生1ug酪氨酸为一个酶活力单位，以（u/mL）表示。
2、试剂和溶液2.1 三氯乙酸c（CCL3·COOH）=0.4mol/L称取三氯乙酸65.4g，用水溶解并定容至1000 mL。
2.2 氢氧化钠溶液c（NaOH）=0.5mol/L按GB601配制。
2.3 盐酸溶液c（HCL）＝1 mol/L及0.1 mol/L1 mol/L HＣＬ:取90mL浓盐酸溶解于去离子水中，定容至1000mL。
0.1 mol/L HＣＬ：取9mL浓盐酸溶解于去离子水中，定容至1000mL。
2.4 缓冲溶液a、磷酸缓冲液（pH＝7.5）适用于中性蛋白酶称取磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）6.02g和磷酸二氢钠（NaH2PO4·12H2O）0.5g，加水溶解并定容至1000mL。
b、乳酸缓冲液（pH＝3.0）适用于酸性蛋白酶甲液称取乳酸（80％～90％）10.6g，加水溶解并定容至1000 mL。
乙液称取乳酸钠（70％）16g，加水溶解并定容至1000 mL。
使用溶液取甲液8 mL，加乙液1 mL，混匀，稀释一倍，即成0.05moi/L乳酸缓冲溶液。
c、硼酸缓冲溶液（pH＝10.5）适用于碱性蛋白酶甲液称取硼酸钠（硼砂）19.08g，加水溶解并定容至1000 mL。
乙液称取氢氧化钠4.0g，加水溶解并定容至1000 mL。
使用溶液取甲液500 mL、乙液400 mL混匀，用水稀释至1000mL。
上述各种缓冲溶液，均须用pH计校正。
2.5 10g/L酪素溶液称取酪素1.000g，精确至0.001g，用少量0.5mol/L氢氧化钠溶液（若酸性蛋白酶则用浓乳酸2～3滴）湿润后，加入适量的各种适宜pH的缓冲溶液约80 mL，在沸水浴中边加热边搅拌，直到完全溶解，冷却后，转入100 mL容量瓶中，用适宜的ｐH缓冲溶液稀释至刻度。
蛋白酶活性检测实验报告
一、实验目的1. 学习和掌握蛋白酶活性检测的基本原理和方法。
2. 了解蛋白酶的特性和作用。
3. 通过实验，学会使用相关仪器和操作技能。
二、实验原理蛋白酶是一种能够水解蛋白质的酶，其活性是指在一定条件下，蛋白酶催化蛋白质水解的能力。
蛋白酶活性检测通常采用紫外分光光度法，通过测定反应体系中蛋白质的降解程度来评估蛋白酶的活性。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）蛋白酶样品（2）底物：酪蛋白（3）缓冲液：磷酸盐缓冲液（pH 7.0）（4）其他试剂：硫酸铜、碘化钾、氢氧化钠等2. 实验仪器：（1）紫外分光光度计（2）恒温水浴锅（3）电子天平（4）移液器（5）试管（6）烧杯四、实验步骤1. 准备实验试剂和仪器。
2. 配制底物溶液：称取一定量的酪蛋白，加入适量磷酸盐缓冲液，溶解后备用。
3. 设置实验组：（1）取若干个试管，分别加入不同浓度的蛋白酶样品。
（2）在每个试管中加入相同体积的底物溶液。
（3）将试管放入恒温水浴锅中，设定温度为37℃，反应一定时间。
4. 设置对照组：（1）取若干个试管，分别加入相同体积的蛋白酶样品和底物溶液。
（2）将试管放入恒温水浴锅中，设定温度为37℃，反应一定时间。
5. 测定反应体系中蛋白质的降解程度：（1）取一定体积的反应体系，加入硫酸铜和碘化钾溶液。
（2）用紫外分光光度计测定反应体系的吸光度。
（3）根据吸光度计算蛋白质的降解程度。
6. 数据处理和分析：（1）绘制蛋白酶活性与酶浓度、反应时间的关系曲线。
（2）分析蛋白酶的特性和作用。
五、实验结果与分析1. 实验结果：（1）不同浓度的蛋白酶样品对底物溶液的降解程度不同。
（2）随着反应时间的延长，蛋白质的降解程度逐渐增加。
2. 分析：（1）蛋白酶的活性与酶浓度呈正相关，即酶浓度越高，活性越强。
（2）在一定反应时间内，蛋白酶活性随着反应时间的延长而增加，但当反应时间过长时，活性逐渐降低，可能是因为蛋白酶自身发生降解。
六、实验结论1. 通过本实验，掌握了蛋白酶活性检测的基本原理和方法。
分光光度法测定蛋白酶酶活
分光光度法测定蛋白酶酶活1适用范围本方法适用于中性蛋白酶、酸性蛋白酶酶活得测定。
2测定原理蛋白酶在一定得温度与pH条件下,水解酪素(酪蛋白)底物,产生含有酚基得氨基酸(如:酪氨酸、色氨酸等),在碱性条件下,将福林试剂(Ｆolin)还原,生产钼蓝与钨蓝,用分光光度计于波长680nm下测定溶液吸光度。
酶活力与吸光度成正比,由此可以计算产品得酶活力。
酶活单位得定义:每１mL粗酶液,在一定温度与ｐH值条件下,10min水解酪素产生1μg酪氨酸为一个酶活力单位,以(u／ｍL)表示。
3仪器与设备3.1分析天平:精度为0。
0０01g。
3.2紫外分光光度计。
3.3恒温水浴锅:精度±0。
2℃。
3.4PＨ计:精度为0.0１PＨ单位。
4试剂与溶液除非另有说明,在分析中仅使用分析纯试剂与蒸馏水。
4.1福林(Foｌin)试剂市售分析纯福林试剂、4.2福林使用溶液一份福林试剂与两份水混合,摇匀。
4.3碳酸钠溶液(42、4ｇ／L)称取无水碳酸钠(Na2CＯ3)4２.4ｇ,用水溶解并定容至1０0０ml。
4.4三氯乙酸c(ＣCl3COOH)=0、4mｏｌ/Ｌ称取三氯乙酸６５、4g,用水溶解并定容至１000 mL、4.5氢氧化钠溶液ｃ(NaOH)＝0.5ｍol／L称取氢氧化钠片剂２0。
0g,加水90０ml并搅拌溶解,待溶液到室温后加水定容至1000ml,摇匀。
4.6盐酸溶液c(HCL)=1 mol/L及0。
１mol/L1 ｍol/L HＣL:取９０mL浓盐酸溶解于蒸馏水中,定容至1000mＬ。
０、1 ｍol/Ｌ HCL:取9mL浓盐酸溶解于蒸馏水中,定容至100０ｍＬ、4.7缓冲溶液4.7.1磷酸缓冲液(pH＝７。
5,适用于中性蛋白酶)称取磷酸氢二钠(Na２ＨPO4•12Ｈ2Ｏ)6、02ｇ与磷酸二氢钠(NaＨ2ＰO4•1２Ｈ2O)0、5ｇ,加水溶解并定容至1000mL。
4.7.2乳酸缓冲液(ｐH=3。
0,适用于酸性蛋白酶)甲液:称取乳酸(80％～９0％)10、6g,加水溶解并定容至1000 ｍL。
木瓜蛋白酶酶活力测定
木瓜蛋白酶酶活力测定1、原理蛋白酶在一定温度与pH条件下，水解酪蛋白底物，然后加入三氯乙酸终止酶反应，并使未水解的酪蛋白沉淀出去，滤液对紫外光有吸收，可用紫外分光光度法测定，根据吸收度计算酶活力。
2、酶活力定义在一定条件下，每分钟水解酪蛋白生成1ug酪氨酸所需的酶的量，为1个酶活力单位（U）。
3、仪器和设备恒温水浴（37±0.2）℃紫外分光光度计4、试剂和溶液4.1、酶稀释液称取L-半胱氨酸盐酸盐（C3H7NO2S·HC L·H2O）5.27g，氯化钠（NaCL）23.4g，加水500ml溶解，另取乙二胺四乙酸二钠2.23g加水200ml溶解，合并两液混匀，用0.1mol/l 氢氧化钠溶液或0.1mol/l盐酸溶液调至pH=5.5，加水稀释至1000ml。
4．2、0.05mol/l磷酸氢二钠溶液称取磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）17.89g，加水溶解，并定容至1000ml。
4.3、酪蛋白溶液称取经硅胶干燥器忠干燥至衡重的酪蛋白0.6g（精确到0.0002g），置烧杯中，假如0.05mol/l磷酸氢二钠溶液80ml。
在沸水浴忠边加热边搅拌，直至完全溶解，冷却后，用0.1mol/l盐酸调至pH=7.0,转移到100ml容量瓶中，加水至刻度。
临用现配。
4.4、三氯乙酸溶液称取三氯乙酸8.995g，加无水乙酸钠14.97g，冰乙酸9.45ml加适量水溶解后，加水使成500ml，振摇均匀。
4.5、酪氨酸标准溶液称取于105℃干燥至衡重的酪氨酸50mg（精确0.0002g）用0.1mol/l盐酸溶解，移入100ml容量瓶中，并用0.1mol／l盐酸调至刻度，摇匀，即可得含酪氨酸50ug／ml的溶液。
4.6、试样溶液称取木瓜蛋白酶0.9g（精确0.0002g）置于研钵中，加入少量酶稀释液研磨20min，用酶稀释液移至250ml容量瓶中，加酶稀释液至刻度，充分摇匀；取出上述液体1ml以酶稀释液稀释，定容20ml，充分摇匀，供测试用（60min内使用）。
实验三十三 木瓜蛋白酶性质测定
实验三十三木瓜蛋白酶性质测定一、目的：1 、学习并掌握木瓜蛋白酶活性的测定基本原理。
•熟练掌握不同的因素如EDTA 、半胱氨酸、抑制剂、 pH 等对木瓜蛋白酶活力的影响原理和检测技术。
•学习和理解酶学动力学曲线的实验设计和实验方法。
二、原理木瓜蛋白酶（ Papain ）是一种巯基蛋白酶，它分解比胰脏蛋白水解酶更多、更广泛的蛋白底物。
它也具有脂酶活力。
其分子量约为 23000 左右。
在 25 ℃ , pH6.2 时， 1 分钟水解 1 μ mol 分子苯甲酰－ L －精氨酸乙脂的酶量为 1 单位。
木瓜蛋白酶是单条肽链，有 211 氨基酸残基折叠成两部分形成裂缝，酶分子只有 1 个巯基，对酶活力是必需的，激活剂有半胱氨酸，硫化物，亚硫酸盐和 EDTA ；抑制剂有巯基试剂，包括重金属和羧基试剂和过氧化氢。
酪蛋白是一种蛋白质，它被木瓜蛋白酶降解生成的酪氨酸在紫外光区 275nm 处有吸收峰，根据测定 275nm 处的吸收值，可以判定木瓜蛋白酶的酶活力。
吸收值的大小与酪氨酸含量的多少有关，吸收值大说明酪氨酸含量高，也就是说木瓜蛋白酶分解的酪蛋白多，酶活力高。
三.实验材料市售木瓜蛋白酶四.仪器设备（ 1 ）磁力搅拌器（机）（ 2 ）离心机 4000~1000rpm （冷冻式或非冷冻式）（ 3 ） 752 紫外分光光度计（ 4 ）磁力搅拌器（ 5 ）水浴箱（ 6 ）冰箱五.玻璃器皿（以组为单位）试管（ 6 ）， 100 mL 烧杯（ 2 ），吸管（ 1 ）、玻棒（ 1 ），试剂瓶（ 1000 mL 、 500 mL 、 250 mL 等），移液管或移液器 5mL(1) 、 1mL(2) 、 0.5mL （ 1 ），漏斗（ 3 ），滤纸（ 3~6 ）等六.实验试剂配制及实验步骤（一）酶活力测定1 试剂1 · 3mg/ml 木瓜蛋白酶液（用 0.1mol/L 的磷酸缓冲液， pH 7.2 配制）2 · 0.1mol/L 的磷酸缓冲液， pH 7.23 ·激活剂：3.1 用 0.1mol/L 磷酸缓冲液（ pH 7.2 ）配制含 80mmol/L 半胱氨酸，3.2 用 0.1mol/L 磷酸缓冲液（ pH 7.2 ）配制含 8mmol/L EDTA4 · 1% 酪蛋白溶液：用 0.1mol/L 磷酸缓冲液（ pH 7.2 ）配制5 · 15% 三氯乙酸（ TCA ）溶液2 方法（二） EDTA 对木瓜蛋白酶活力的影响1 试剂酸，分别含有 0 ， 0.2,0.4,0.6,0.8,1,2,4mmol/L EDTA 的 8 种混合液3 分析三）半胱氨酸对木瓜蛋白酶活力的影响1 试剂有 0 ， 1 ， 5 ， 10 ，20 ， 30 ， 40 ， 50mmol/L 半胱氨酸的 8 种混合液2 方法3 分析（四）抑制剂对木瓜蛋白酶活力的影响一、试剂1 ·配制浓度分别为 0,0.5,1,2,3,4,5mmol/L 的过氧化氢溶液2 ·用 0.1mol/L 磷酸缓冲液（ PH 7.2 ）配制浓度分别为0.1%,0.2%,0.4%,0.6%,0.8%,1% 的酪蛋白溶液二、方法（ 1 ）不同的抑制剂（过氧化氢）浓度的抑制效果（ 4 ）不同底物浓度，无抑制剂（五）不同 PH 值对木瓜蛋白酶活力的影响1 试剂1 · PH 5.0 缓冲液 0.1mol/L 乙酸－乙酸钠缓冲液PH 6.0 缓冲液 0.1mol/L 磷酸氢二钠－磷酸二氢钠缓冲液PH 7.0 缓冲液 0.1mol/L 磷酸氢二钠－磷酸二氢钠缓冲液PH 7.3 缓冲液 0.1mol/L 磷酸氢二钠－磷酸二氢钠缓冲液PH 7.7 缓冲液 0.1mol/L 磷酸氢二钠－磷酸二氢钠缓冲液PH 8.0 缓冲液 0.1mol/L 磷酸氢二钠－磷酸二氢钠缓冲液PH 9.3 缓冲液 0.1mol/L 硼砂－氢氧化钠缓冲液PH 10.0 缓冲液 0.1mol/L 硼砂－氢氧化钠缓冲液2 ·用以上缓冲液分别配制不同 PH 值的激活剂和酪蛋白溶液3 分析七 . 实验结果分析1. 各实验组分析讨论实验结果，再由老师进行归纳总结。
紫外可见光分光光度计酶活性测定的实验流程和方法
2
文献参考
3A
4
图 4：“单波长λ- 连续”（Singleλ- cont） 方法中己糖激酶测定初步 实验的参数设置
3B
为 测 试 己 糖 激 酶 反 应 的 进 程，先 使 用 “单 波 长λ- 连 续”
（Singleλ- cont）方法进行初步反应。选择的参数可以对反
应混合液的吸光度在一定持续时间内（10 分钟）的变化进
再加入葡萄糖 -6- 磷酸脱氢酶和己糖激酶，充分混匀溶液， 分别在 22 °C、30 °C 和 37 °C 进行测定。
通过己糖激酶测试测定底物 为测定底物，使用与己糖激酶活性检测相同的成分。为测定 样品中未知浓度的 ATP，使用 1 mM 和 0.1 mM 的 ATP 作 为标准品。
BioSpectrometer kinetic 的设置 BioSpectrometer kinetic 紫外 ／ 可见光分光光度计（动力学款） 提供三种方法测定酶的活性（图 3）：
图 2 中描述的检测反应是本用户指南中的一个样例反应。 其目的是为了演示使用 Eppendorf BioSpectrometer kinetic 紫外 ／ 可见光分光光度计（动力学款）进行酶动力学测定的 两种应用：
1) ATP 浓度的酶测定 底物的浓度通过 37 ° C 下定量 ATP 的两点校准法来确定。 这一过程中，在底物转化的线性范围内进行两次测定。该转 化的线性范围需在初步测定中确定。 2) 酶活性的测定 如图 2 所示，己糖激酶反应对温度的依赖性。在 Eppendorf BioSpectrometer kinetic 紫外 ／ 可见光分光光度计（动力学 款）具备可加热比色皿槽，可以对样品进行温度控制：可选 温度范围在 20 °C 到 42 °C 之间。由于酶活性与孵育温度相关， 所以温度调节对于酶活性的精确测定至关重要。因此，分别 在 22 ° C、30 ° C 以及 37 ° C 下测定己糖激酶的酶活性。根 据曲线的线性回归确定准确的酶活性。
木瓜蛋白酶活力的测定
蛋白酶的活力用分解出来的酪氨酸来表示。
目前国内通用的蛋白酶的活力单位定义为: 1min水解出1 g酪氨酸的酶量称为1个单位。
因此，在测定酶活力之前，先用福林酚试剂与已知的不同浓度的酪氨酸反应，作出蓝色深浅程度(用0D值来表示)与酪氨酸浓度关系的标准曲线，然后将酶和底物反应的产物与福林酚试剂作用，在分光光度计上读出光密度，再在标准曲线上推算出相当于多少g的酪氨酸，计算出酶活力单位木瓜蛋白酶是天然复合蛋白酶，通常，测定其酶活力时间长，操作复杂，且需要玛瑙研钵等昂贵仪器。
由于木瓜蛋白酶中的各种酶与酪蛋白作用生成的产物是一致的，即酶催化蛋白质的肽键水解，生成游离的氨基酸或多肽。
因此可以利用福林酚试剂与水解出来的酪氨酸作用，生成蓝色物质，通过分光光度比色法可以计算出酶活力的大小.(1)福林酚试剂:称取钨酸钠(Na2wo4·2H20)25g、钼酸钠Na2MnO4·2H20)25g放入2000m1圆底烧瓶中，加入175ml蒸馏水，再加入50ml 85％的磷酸及100ml浓盐酸。
装好回流冷凝管(接口处包有铝薄或玻璃纸的软木塞)，加热到沸腾，然后用／1、火保持缓和的沸腾状态，回流10h，回流结束后加入150g硫酸锂Li2SO4和50ml水，并在沸腾(不必装冷凝管)时立即加入几滴溴液(应趁热加溴，否则没有充分作用就挥发完了)，待作用数分钟后再煮沸15min，以除去过量的溴。
加溴的作用是除掉溶液中的绿色。
如果溶液仍呈绿色，可再加入几滴溴液，再煮沸除去多余的溴直至试剂呈黄色。
冷却后稀释至1000ml(原液)，过滤，贮于棕色瓶，f临用前将此原液加入2倍蒸馏水稀释而成。
(2)标准酪氨酸溶液称取100mg酪氨酸(预先在105℃烘箱内烘至·匣重)，以0．2N HC1溶解后定容到100ml，再用水稀释5倍，即得到2001,zg／L的酪氨酸溶液.(3)酪蛋白溶液称取酪蛋白2g，置于100ml三角瓶中，加入0．2mol／L NazHPO 61ml，置水浴上搅动使其溶解，然后倾出上清液(可能有少量蛋白质颗粒不能完全溶解)，加入39ml 0．2mol／L NaH2PO ，得到pH 7．0的酪蛋白溶液，其余几种pH 的酪蛋白液可照此法制备，pH 5．8酪蛋白液用H3PO 调节，pH 8．5酪蛋白液可全部用Na2HPO 配制，再用NaOH 调节至8．5。
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图 1 酪氨酸标准曲线 Fig 1 The standard cu rve of Tyrosin e
2 2 精密度 取市售嫩肉粉样品 1, 做 6个平行样, 由表 1
可知, 酶活力相对标准偏差为 2 6% 。
表 1 精密度实验
T ab 1 T he resu lts of the precision te st
中木瓜蛋白酶的酶活力大小, 为判断嫩肉粉质量优劣提 供参考依 据。把嫩肉粉 溶于盐酸半 胱氨酸 溶液, 取该
混合液与酪蛋白溶液反应 10m in, 用紫外分光 光度法测 得反应 所生成 酪氨酸 的含量。该 方法具 有较好 的准确
性和重现性, 添加标准回收率为 96 8% ~ 105 8% ; 且步骤简明, 所需测试仪器简单。在该方法条件下, 每分
测定吸收度 A 0。 另取酪氨酸对照溶液, 以 0 1m ol /L 盐酸溶液
为空白, 在 275nm 处测定吸收度 An。 1 5 结果计算
酶活力
(U
/g)
=
A -A0 An
∀WW∀310 ∀ 11 ∀ n
∀ 1000
式中:
W 3 # 对照品溶 液 每 1mL 中 含 酪氨 酸 的 量, 单位为微克 ( g );
1 实验部分
1 1 仪器 恒温水浴锅; 751- GW 分光光度计。
1 2 试剂 酪蛋白溶液: 取酪蛋 白 0 6g, 加 0 05m o l/L
磷酸氢二钠溶液 80mL, 置沸水浴中煮 30m in, 时 时搅拌, 冷至室温, 加 0 1m o l/L 盐酸调节 pH 值 至 7 0 0 1, 用水稀释至 100mL, 用前配制。
目前市场 上嫩 肉粉 的成 分主要 是木 瓜蛋 白 酶, 木瓜蛋 白酶通过分解胶 原蛋白、弹性 蛋白, 降解胶原纤维和结缔组织蛋白成为小分子的多肽 甚至氨基酸, 令肌肉肌丝和腰筋丝断裂, 因此嫩 肉粉能使老牛肉、猪肚、腊肉等较坚韧肉类迅速 嫩化, 有利消化并提高营养价值, 并可节省烹调 时间与能源, 适合饭店、宾馆及家庭使用 [ 2 ] 。
确反应 10m in后, 加三氯乙酸溶液 5 0mL, 振摇,
于 ( 37 0 2) ! 水浴中放置 40m in, 用干燥滤纸
过滤, 滤液在 2h内采用分光光度法以水为空白,
在 275nm 的波长处测定吸收度 A;
再精 确量取供 试品溶液 1 0mL, 置 于 10mL
具塞试管中, 于 ( 37 0 2) ! 水浴预热 5m in, 加
酶活力是酶性质的重要参数, 显示酶分解底 物能力的强弱。木瓜蛋白酶酶活力的测定, 采用 不同底物衍生的测定方法也不同, 所取得的数值 也不能进行直接比较。传统的作法, 木瓜蛋白酶 是用明胶或血红蛋白作底物来测定的。由于要求 底物具有较高的专一性和便于标准化, 新的测定 方法往往采用合成的 N - 苯甲酰 - L - 精氨酸乙酯 ( BA EE ) [ 3] 。但以 BAEE 为底物的测定 方法所涉 及到的仪器设备昂贵, 成本偏高 [ 4] 。本文采用以 酪蛋白为底物的紫外光谱法来测定嫩肉粉中木瓜 蛋白酶的活力, 该法所需测试仪器简单, 步骤简 明, 容易掌握; 并且该法也常被国内用来测定各 种酶的活力, 所得的数据便于比较。对嫩肉粉中 木瓜蛋白酶活力的测定, 可为嫩肉粉质量优劣提 供一项重要的参考指标。
W # 供试品的取样量, 单位为毫克 ( m g);
10# 反应时间;
11# 测定总体积;
n# 供试品的稀释倍数;
1000# 毫克与克的转换倍数。
在上述条件下, 每分钟水解酪蛋白生成 1 g
酪氨酸所需的嫩肉粉的量为 1个酶活力单位。
215
中国食品添加剂 分析测试
China F ood A dditives
测量次数 酶活力
平均值 标准偏差 RSD ( % )
1
9487
2
9366
3
8938
9253
239
26
4
8972
5
9448
收稿日期: 2009- 05 - 08 作者简介: 欧英杰 ( 1982 - ), 男, 本科, 研究方向为食品检验。
214
木瓜蛋白酶 ( P apa in EC 3 4 22 2) 属 于巯 基蛋白酶, 可水解蛋白质和多肽中精氨酸和赖氨 酸的羧基端, 并能优先水解在肽链的 N 端具有 2 个羧基的氨基酸或芳香 L 氨基酸 ( 如酪氨酸 ) 的 肽键。其最适作用 pH 为 5 0~ 7 0, 在中性或偏 碱性时亦有作用, 耐热性强 [ 1 ] 。
2 结果与讨论
2 1 标准曲线的绘制 用 100 g /mL 的酪氨酸标准溶液配制标准系
列溶液, 在 275 0nm 处进行测定, 并绘制标准曲 线, 见图 1, 以 0 1m o l/L 盐酸溶液为空白。其回 归 方 程 y = 0 0075x - 0 0019, 相 关 系 数 r = 0 9996。在酪氨酸浓度为 0 ~ 100 g /mL 范 围内, 酪氨酸浓度与吸光度具有良好的线性关系。
OU Y ing jie1, ZENG Nuan xi2, FENG Zh i q iang1, XU Pei qin1
( 1. Guangdong F ood Quality Superv ision and Inspection Station, Guangzhou 510308; 2. Guangdong P rov inc ial Pub lic Laboratory o f Food Industry, Guangzhou 510308)
Ab stract: P apa in can decompose prote in into am ino ac ids and is the essential ing redient o fm eat tenderizer. T his paper studied the determ ination o f papa in s' enzym e activ ity inm eat tender izer. The resu lts can be used for estim ating the qua l ity of m ea t tender izer. D isso lve m eat tenderizer in L - cyste ine hydroch lo ride m onohydra te so lu tion, m ix the m eat ten der izer so lution and case in so lu tion for chem ical reaction 10 m inu tes and de tect the content of reac tion product ty ros ine by UV Spectrophotom e try. Th is m ethod just needs s imp le equipm ent and is conven ient, accura te and practica .l T he recove ry ra te w as 96 8% ~ 105 8% . U nde r the conditions, the am ount o fm eat tender izer for decom pos ing casein into 1 g ty ros ine per m inute is defined one enzym e activ ity un it. T his k ind of de finition about enzym e activ ity is usually used in hom e, so the data is convenien t for com pare and conve rsion. A fter determ ination, w e found the enzym e activ ity of papa in in different m ea t tender izers so ld in m arket w ere d ifferen t, and the tende r capab ility o fm eat tende rizers w ere a lso d iffe rent. So how much to use and how long to m arinate the m eat, different m ea t tenderrizers had diffe rent an sw ers. W e also found som e enzym e activ ity w as ze ro, tha t ind icated the papa in had lo st its enzym e activ ity, or the m eat tenderizer had no t added papain. K ey w ords: UV spectropho tom etry; m ea t tender izer; papa in; enzym e activ ity
供试品溶液的制备: 取嫩肉粉约 0 5g, 精密
称定, 加酶稀释液搅拌, 稀释至 100mL。
1 4 测定法
准确量取供试品溶液 各 1 0mL, 分别置于 2
支 10mL 具塞试管中, 于 ( 37 0 2) ! 水浴预热
5m in, 准确加 入 ( 37 0 2 ) ! 预 热的底 物溶 液
5 0mL, 立即振摇, 置 ( 37 0 2 ) ! 水浴中, 精
中国食品添加剂 分析测试
China F ood A dditives
紫外分光光度法对嫩肉粉中木瓜 蛋白酶活力的测定方法研究
欧英杰, 曾暖茜2, 冯志检验站, 广州 510308; 2. 广东省食品工业公共实验室, 广州 510308)
摘 要: 木瓜蛋白酶具有分解蛋白为氨基酸的能力 , 是市场上嫩 肉粉的主 要成分。本文通 过测定 嫩肉粉