地中海贫血基因检测-PCR扩增 2(13检本)
地中海贫血基因检测操作规程益生堂
α-地中海贫血基因检测操作规程（益生堂）一、目的：对筛查出来的地贫疑似病例和需要进行地贫产前诊断的夫妇提供进一步的确认。
二、适用范围：适用于益生堂PCR扩增、琼脂糖电泳技术等分析的操作。
三、原理：应用特异的PCR引物选择性地扩增不同类型的α-地中海贫血基因，通过琼脂糖凝胶电泳的带型分析，诊断α-地中海贫血基因缺失型。
四、操作规程（一）标本收集、标本保存、标本转运1、静脉采血：从肘静脉或手背静脉抽取静脉血1mL以上，将血液沿管壁缓慢注入加有EDTA或枸橼酸钠的试管内，轻轻混匀，即为抗凝全血。
羊水的采集：由临床医师经腹壁行羊膜穿刺取得。
采集羊水时速度不宜太快，标本抽取量也不宜太多，一般10-15mL即可。
2、标本一经采集，则应尽快送至实验室检测，抗凝全血室温放置不超过4小时，4℃保存不超过一周，-20℃保存不超过半年，应避免反复冻融。
3、标本装入试管密封，再装入塑料袋中，置冰壶或泡沬箱加冰袋密封运输，在运输过程中应避免剧烈震荡。
4、注意事项（1）抗凝时，不能用肝素抗凝。
（2）采集羊水穿刺羊膜要在妊娠16周羊水达到200mL以后才能进行。
（二）全血DNA提取操作规程1、所需试剂及仪器：试剂由益生堂生物技术（深圳）有限公司提供，包含核酸提取试剂、扩增管、模条、无水乙醇，1.5mL离心管.仪器有黑马和博日扩增仪、台式高速离心机、旋涡振荡器、真空旋转干燥仪、电泳仪、电泳槽、分子杂交仪、凝胶成像系统。
2、实验前准备工作2.1、准备好1.5mL无菌离心管及无菌吸头。
2.2、变性液在每次使用前应充分摇匀以保证提取质量。
3、操作步骤（1）在1.5mL离心管中加入250μL充分摇匀的变性液及100μL抗凝全血，充分混匀，室温放置5分钟。
也可选择以下操作步骤，以获得更高质量的DNA：在1.5mL离心管中加入1mL无菌水及100μL抗凝全血，充分混匀，室温放置5分钟以裂解红细胞。
13000rmp离心1分钟，弃上清，保留管底白细胞块。
pcr反向点杂交检测地中海分型报告
pcr反向点杂交检测地中海分型报告PCR反向点杂交检测地中海分型报告一、引言地中海贫血是一种常见的遗传性血液病，主要分为地中海贫血（β-地中海贫血）和地中海贫血症（α-地中海贫血）。
PCR反向点杂交（PCR-RFLP）是一种常用的分子生物学方法，可用于检测地中海分型。
本报告旨在详细介绍PCR-RFLP技术在地中海分型检测中的应用。
二、PCR反向点杂交原理1. PCR原理PCR是聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction）的缩写，是一种通过体外扩增DNA片段的方法。
它利用DNA聚合酶酶活性，在特定条件下，使DNA模板得到高效扩增。
2. 反向点杂交原理反向点杂交是一种基于DNA序列特异性识别的方法。
它通过将目标DNA序列与特异性引物结合，并经过适当处理后，通过电泳或其他方法进行检测。
三、PCR-RFLP技术在地中海分型检测中的应用1. 样本采集和DNA提取需要从受检者身上采集样本，如静脉血或口腔黏膜细胞。
通过常规方法提取DNA，如酚/氯仿法或商用DNA提取试剂盒。
2. PCR扩增使用特异性引物对目标基因进行PCR扩增。
对于β-地中海贫血，通常选择扩增β-地中海贫血突变的片段；对于α-地中海贫血，通常选择扩增α-地中海贫血突变的片段。
3. 酶切反应将PCR产物与适当的限制性内切酶一起进行酶切反应。
限制性内切酶是一种能够识别特定DNA序列并在该序列上切割的酶。
4. 胶电泳分析将酶切产物经过胶电泳分离，并使用合适的染料染色。
在紫外光下观察和记录胶图。
根据不同基因型的特点，可以确定受检者的地中海分型。
四、结果解读根据PCR-RFLP结果，可以得出以下结论：1. 如果在PCR-RFLP分析中观察到明显的限制性内切酶位点差异，即PCR产物经过酶切后出现不同长度的片段，可以判断受检者为地中海贫血（β-地中海贫血）或地中海贫血症（α-地中海贫血）。
2. 通过比对PCR-RFLP结果与已知标准样本的电泳图，可以进一步确定受检者的具体地中海分型。
β地中海贫血基因检测PCR-反向点杂交法课件
35cycles
β地中海贫血基因检测PCR-反向点杂交法
3.杂交 ：
15ml管 探针膜条（做好记号） A液 5-6ml DNA溶液（PCR产物）25ul
沸水浴10min
42℃杂交1.5小时以上
β地中海贫血基因检测PCR-反向点杂交法
4.洗膜 ： 50ml塑料管
B液 40ml
42预热
取出膜条，置于 50ml塑料管中
β地中海贫血基因检测PCR-反向点杂交法
⑵PCR的反应动力学： PCR的三个反应步骤反复进 行，使DNA扩增量呈指数上升。反应最终的DNA 扩 增量可用Y＝(1＋X)n计算。Y代表DNA片段扩增后的 拷贝数，X表示平(Y)均每次的扩增效率，n代表循 环次数。平均扩增效率的理论值为100%，但在实际 反应中平均效率达不到理论值。 反应初期，靶序 列DNA片段的增加呈指数形式，随着PCR产物的逐渐 积累，被扩增的DNA 片段不再呈指数增加，而进入 线性增长期或静止期， 即出现“停滞效应” ，这种 效应称平台期数、PCR 扩增效率及DNA聚合酶PCR的 种类和活性及非特异性产物的竟争等因素。大多数 情况下，平台期的到来是不可避免的。
β地中海贫血基因检测PCR-反向点杂交法
PCR反应的基本成分包括：模板DNA(待扩增DNA)、引物、4种脱氧 核苷酸(dNTPs)、DNA聚合酶和适宜的缓冲液。类似于DNA的天然 复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。 PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的高 温变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链 或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物 结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的低温退火(复性)： 模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板 DNA单链的互补序列配对结合；③引物的适温延伸：DNA模板--引 物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列 为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板 DNA 链互补的半保留复制链重复循环变性-退火-延伸三过程，就 可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环 的模板。每完成一个循环需2～4分钟， 2～3小时就能将待扩目 的基因扩增放大几百万倍。
地中海贫血检测方法
地中海贫血检测的方法目前,用于地中海贫血检测的方法的代表性技术大体可分为以下两类:检测基因缺失突变的单管多重跨越断裂点PCR技术和多重连接探针扩增技术(MLPA);检测基因点突变的反向点杂交技术(RDB)、变性高效液相色谱技术(dHPLC)]和DNA序列分析技术等。
此外,最近发展的基于实时荧光PCR平台的新技术,如用于α地贫缺失拷贝数定量的实时荧光PCR直接检测技术、以及用于检测β地贫点突变的基于探针熔解曲线的基因分型技术(PMCA),可能是下一步更新换代的技术选择。
上述胛p PCR、RDB和MLPA等为地贫检测的主流技术。
1.Southern 印迹法优点：分析缺失型α-地中海贫血分子缺陷的可靠技术缺点：操作繁冗，不宜作为常规手段2.联合检测平均红细胞参数（MCV、MCH）+红细胞脆性检测+Hb（血红蛋白）电泳MCV：平均红细胞容积 MCH：平均红细胞血红蛋白量3.PCR-RDB法（PCR/寡核苷酸探针反向斑点杂交法）检测中国南方常见的17种β地贫突变：CD41～42(-TCCT)、IVS-2 nt654 C →T、-28 A→G、CD71～72（+A）、CD71～72（+T）、CD17 A→T、CD26 G→A、CD31（-C）、CD27～28（+C）、CD43 G→T、-32 C→A、-29 A→G、-30 T→C、CD14～15（+G）、CAP、Int及IVS-1 nt5 G→C4.α地中海贫血的基因诊断依据Gap-PCR原理采用单管四重PCR法（多重PCR技术）对其基因组DNA进行扩增，同时检测-α3.7、-α4.2、--SEA和正常对照4种等位基因型，采用1.2％琼脂糖凝胶电泳分离扩增产物，通过片断大小判断患者的基因型。
5.采用PCR-RFLP方法检测非缺失型α地贫Hb Constant Spring(HbCS)。
β-地中海贫血基因检测(PCR-反向点杂交法)
pcr扩增
DNA提取
利用特定的试剂从血细胞中提取出DNA。
pcr扩增
使用聚合酶链式反应（PCR）技术对DNA进行扩增，使其数量增加，便于后续 的检测。反向点Fra bibliotek交制备探针
将目标基因序列设计成特定的探针，并固定在尼龙膜上。
杂交反应
将扩增后的DNA与固定在膜上的探针进行杂交，通过碱基互 补配对原则，将目标基因序列特异性地结合在膜上。
纳米技术
利用纳米材料和纳米技术提高检测的灵敏度和特异性，降 低检测误差。
要点二
基因组编辑技术
利用CRISPR-Cas9等基因组编辑技术，对β-地中海贫血基因 进行精确编辑和修复，从根本上治疗地中海贫血。
临床应用的拓展
早期筛查
将β-地中海贫血基因检测纳入新生儿筛查 计划，实现早期发现和干预，降低疾病对 患儿的影响。
β-地中海贫血基因检测(pcr反向点杂交法)
• β-地中海贫血基因检测介绍 • pcr-反向点杂交法介绍 • β-地中海贫血基因检测(pcr-反向点
杂交法)流程 • β-地中海贫血基因检测(pcr-反向点
杂交法)的临床意义
• β-地中海贫血基因检测(pcr-反向点 杂交法)的未来发展
01
β-地中海贫血基因检测介绍
03
耗时长：需要进行PCR扩增和杂交反应， 整个过程需要一定时间。
04
对实验条件要求高：需要严格控制实验条 件，避免交叉污染和假阳性结果。
03
β-地中海贫血基因检测(pcr-反 向点杂交法)流程
样本采集和处理
血液样本采集
从患者静脉抽取适量血液，用于 后续的基因检测。
样本处理
将采集的血液进行离心，分离出 血浆和血细胞，保留血细胞用于 后续的DNA提取。
地中海贫血基因检测和结果分析
γ地中海贫血 δ地中海贫血 εγδ地中海贫血 溶血性异常血红蛋白（如HbS、C等） 地中海贫血样变异（如Hb CS、E等） 其他异常血红蛋白（如Hb M、Coimbra等）
.
4
地中海贫血分类
1、按照一个单倍型上的-珠蛋白基因的功能缺陷定义
0地贫（也有称地贫1） ：-珠蛋白基因完全
基因记为--/
β-地中海贫血 携带者 复合α-地中海贫血 中间型地中海贫血
δ-地中海贫血 携带者 复合α-地中海贫血
血红蛋白结构变异 携带者 复合α-地中海贫血 复合β-地中海贫血
总计
分组
阳性样本数
%
886
15.32
363
6.27
498
8.6
25
0.43
370
6.39
287
4.96
79
1.36
4
0.07
9
0.16
（--sea,-3.7,-4.2)。 β地贫：先检测点突变，然后检测少见的缺失型。
大部分β地贫都是点突变型。
.
27
血红蛋白病的筛查及.基因诊断的技术流程 28
产前地贫携带者筛查策略
产检对象（孕妇及其配偶） 血液五分类分析（关注MCV和MCH）+血红蛋白电泳（Hb A2)
同时正常 仅异常血红蛋白
必要时测序或选择其 中一种地贫检测
16
中国南方人群最为常见的地贫类型
.
17
二、地中海贫血的致病机制
血红蛋白
链
链
红细胞 链
铁链 血红素
●胎儿血红蛋白主要由两条珠蛋白链、两条珠蛋白链组成，还含有 γ链、ɛ链、ζ链组成
●成年人的血红蛋白由两条珠蛋白链和两条珠蛋白链组成
多重PCR用于缺失型α地中海贫血的基因检测
文章编号(Article ID):1009-2137(2004)04-0472-03·论著·多重PCR用于缺失型α2地中海贫血的基因检测吴洁莹,廖灿,李坚,黄以宁广州市妇婴医院优生围产研究所,广州510180摘要 为了探讨多重PCR技术在检测我国南方常见缺失型α2地中海贫血中的临床应用,观察缺失型α2地中海贫血的基因分布频率,采用单管多重DNA扩增的方法(M2PCR)对经血红蛋白定量分析初步诊断为标准型和静止型α2地中海贫血及血红蛋白H(HbH)病的145例患者进行基因检测。
扩增产物经1.2%琼脂糖凝胶电泳,出现1.3及1.8kb条带者,提示为22SEA/αα;1.6及1.8kb条带者为2α4.2/αα;1.8及2.0kb条带者为2α3.7/αα;1.3及1.6或2.0kb条带,提示为缺失型HbH病(22SEA/2α4.2或22SEA/2α3.7)。
结果表明,145例受检者中发现100例22SEA/αα(68.9%), 15例2α3.7/αα(10.3%),8例2α4.2/αα(5.52%),2例2α3.7/2α4.2(1.38%),2α3.7及2α4.2纯合子各1例(0.69%);14例22SEA/2α3.7(9165%),2例22SEA/2α4.2(1.38%);另有2例患者产前诊断证实为Bart水肿胎儿。
结论:运用多重PCR 技术可以准确、简便、快速地检测我国南方地区常见的2α3.7、2α4.2、22SEA3种缺失型α2地中海贫血,这一技术对α2地中海贫血的大人群筛查及携带者的检出是一种较为理想的方法。
关键词 多重PCR;α2地中海贫血;缺失型α地中海贫血;基因缺失中图分类号 R556161文献标识码 AMultiplex PCR for Detecting G enotypes of Deletionalα2ThalassemiaW U Jie2Yi ng,L IA O Can,L I Jian,HUA N G Yi2N i ngInstit ute of Eugenics and Peri natalogy,Guangz hou M aternal and Neonatal Hospital,Guangz hou510180,Chi naAbstract To investigate the clinical application of multiplex PCR in detecting genotypes of deletionalα2thalassemia in S outh China and observe the distribution frequency ofα2globin gene deletion,145patients with silent carrier,alpha tha2 lassemia trait or HbH were identified by M2PCR and1.2%agarose gel electrophoresis.There are1.3,1.6,1.8and2.0kb bands which indicate22SEA,2α4.2,ααand2α3.7,respectively.The results showed that among145patients,100pa2 tients with22SEA/αα(68.9%),15with2α3.7/αα(10.3%),8with2α4.2/αα(5.52%),2with2α3.7/2α4.2(1.38%),1 with2α3.7/2α3.7(0.69%),1with2α4.2/2α4.2(0.69%),14with22SEA/2α3.7(9.65%),2with22SEA/2α4.2(1.38%)were found.Two patients prenatal diagnosed were confirmed with Bart′s hydrops fetuses.In conclusion,M2PCR analysis is a simple,rapid and accurate method for detection ofα2thalassemia gene deletion.This technique is helpful in screening,car2 rier identification and prenatal diagnosis of deletionalα2thalassemia.K ey w ord Multiplex2PCR;α2thalassemia;deletionalα2thalassemia;gene deletionJ Ex p Hem atol2004;12(4):472-474α2地中海贫血(α2thalassemia)是因珠蛋白基因缺失或突变使血红蛋白的4条珠蛋白肽链合成障碍而引起的溶血性贫血,是世界上最常见的人类单基因遗传病之一1,也是我国长江以南各省发病率最高、影响最大的遗传病之一。
地中海贫血基因报告单
地中海贫血基因报告单
姓名: 性别:
年龄: 出生日期:
检测日期:
1. 基因检测结果
您的基因检测结果显示，您携带了地中海贫血症状的致病基因。
该基因是使人体不产生足够的血红蛋白，增加贫血的风险。
2. 发病风险
由于您携带了地中海贫血症状的致病基因，因此您的发病风险
高于正常人口。
如果您计划要生育或者已经怀孕，你的子孙也有
可能携带该致病基因并且有发生地中海贫血的风险。
我们建议您
谨慎考虑生育计划，避免将地中海贫血基因遗传给孩子。
3. 预防措施
虽然目前没有特效治疗地中海贫血的方法，但借助一些有效的措施你可以远离地中海贫血的风险。
生活中，尽可能避免暴曝在紫外线照射下，合理运动及饮食，增强体质。
如果您是地中海贫血的患者，应该避免饮酒和吸烟。
虽然您携带地中海贫血基因，但是请不要过分担心。
我们提供的检测以及预防措施可以帮助你预防地中海贫血疾病的发生。
如有任何问题可随时咨询我们，我们将竭尽所能为您提供帮助。
地中海贫血基因检测实验步骤
地中海贫血基因检测实验步骤地中海贫血（Mediterranean anemia），又称为地中海型家族性小红细胞性贫血，是一种常染色体隐性遗传病。
该病是由珠蛋白基因缺陷引起的，导致血红蛋白结构异常，造成红细胞携氧能力减弱。
地中海贫血的基因检测通常涉及以下几个步骤：1. 样本采集：- 采集患者的血液样本或使用拭子采集口腔黏膜细胞。
2. DNA提取：- 从血液或细胞样本中提取DNA。
这通常涉及破坏细胞膜和核膜，然后使用化学试剂纯化DNA。
3. PCR扩增：- 利用聚合酶链反应（PCR）技术，特异性地扩增珠蛋白基因的特定片段。
这通常涉及设计针对基因突变热点区域的引物，并通过循环加热和退火步骤使目标DNA片段指数级增长。
4. 凝胶电泳：- 将PCR产物通过凝胶电泳进行分离，根据大小将不同长度的DNA片段分开。
这有助于识别是否存在特定的突变。
5. 基因测序：- 对PCR产物进行测序，以识别可能的基因突变。
测序可以揭示DNA序列中的碱基替换、插入或缺失，这些改变可能与地中海贫血的发生有关。
6. 突变分析：- 将测序结果与已知的突变数据库进行比对，以确定是否存在与地中海贫血相关的特定基因突变。
7. 数据解读：- 根据突变分析的结果，结合患者的临床症状和家族史，医生或遗传顾问将解释检测结果，并提供遗传咨询服务。
8. 报告编写：- 编写一份包含检测结果和相关解释的报告，供医疗专业人员和患者参考。
基因检测对于诊断地中海贫血非常重要，它不仅可以帮助确诊患有该病的个体，还可以为家族成员提供风险评估和遗传咨询。
随着科技的进步，新的检测技术（如芯片基因分型和下一代测序）正在使地中海贫血的基因检测变得更加快速和精确。
地贫基因检测正常报告
02
CHAPTER
检测结果
基因型分析
01
基因型分析结果显示，受检者不 存在地中海贫血基因突变，属于 正常基因型。
02
受检者未检测到常见的α和β地中 海贫血基因突变位点，说明受检 者不存在地中海贫血的遗传风险。
血红蛋白分析
血红蛋白分析结果显示，受检者的血 红蛋白水平正常，没有出现贫血症状。
受检者的红细胞形态和数量均在正常 范围内，没有出现红细胞大小不均、 畸形红细胞等异常现象。
定期复查
对于存在地贫基因携带者的情况，建议定期进行复查，以便及时发现 异常情况。
预防措施
在日常生活中，应采取相应的预防措施，如避免接触有害物质、合理 饮食、保持健康的生活方式等，以降低地贫基因发病的风险。
05
CHAPTER
参考文献
参考文献
参考文献1
地中海贫血基因检测正常报告解 读
参考文献2
地中海贫血基因检测技术及其应 用
地贫基因检测正常报告
目录
CONTENTS
• 检测背景 • 检测结果 • 结论与建议 • 注意事项 • 参考文献
01
CHAPTER
检测背景
目的和意义
01
02
03
诊断地中海贫血
地中海贫血是一种遗传性 疾病，通过地贫基因检测 可以确诊患者是否携带地 贫基因。
ห้องสมุดไป่ตู้预防地贫遗传
了解夫妻双方是否携带地 贫基因，预测后代患地贫 的风险，为预防措施提供 依据。
遗传风险较低
由于受检者没有地中海贫 血基因突变，其遗传给下 一代的风险较低。
无需进一步治疗
由于受检者基因型正常， 目前无需进行任何针对地 中海贫血的治疗。
5β地中海贫血基因检测试剂盒(荧光PCR法)产品说明书--20190301雷彩霞修改
β-地中海贫血基因检测试剂盒（荧光PCR法）说明书【产品名称】通用名称:β-地中海贫血基因检测试剂盒（荧光PCR法）【包装规格】24人份/盒【预期用途】本试剂盒用于定性检测β-地中海贫血基因突变情况，以EDTA抗凝全血为检测样本，适用于临床β-地中海贫血基因突变的诊断。
β-地中海贫血是一组遗传性疾病，其临床表现多样，由轻到重，甚至危及生命，导致患者在未成年即夭折甚至胎死腹中，给家庭和社会带来巨大的负担。
且目前尚无根治手段，国内外都没有疗效标准。
因此控制和降低β-地中海贫血患儿的出生率才能有效地监控该病的发生，通过人群筛查和遗传咨询，对有携带β地贫基因的孕龄夫妇所孕胎儿实施产前诊断，是目前最有效的控制重症β-地中海贫血患儿出生的方法。
【检验原理】本试剂盒能够检测24种β-地中海贫血基因类型（具体信息见附表1），采用八联PCR管进行检测，12管一人份，共12支扩增液（扩增液检测突变类型及对应的荧光通道信息详见附表2），每个反应管检测两种突变型和两种野生型，分别通过四个不同的荧光通道读取信息。
根据文献，我们参照人类β-地中海贫血基因情况以包括突变情况的一段基因序列作为靶序列，设计特异性突变检测引物探针、特异性野生型检测引物探针，采用基因扩增技术对核酸特异性基因进行检测。
突变型情况由FAM、HEX指示，野生型情况由ROX、CY5指示，对β-地中海贫血基因进行特异性检测，为临床检验提供实验室辅助诊断的依据。
本试剂盒使用核酸提取试剂提取基因组DNA。
试剂盒添加了防污染成分UNG酶，UNG酶可将反应体系中已有的U-DNA污染物中的尿嘧啶碱基降解，并在随后变性这步的条件下DNA链断裂,消除由于污染DNA产生的扩增，保证扩增结果的特异性，准确性。
【主要组成成分】试剂盒1：编号扩增液类型规格数量引物探针类型1 β地贫1 扩增液24人份/支1支41-42M引物探针，IVS-Ⅱ-5M引物探针2 β地贫2扩增液24人份/支1支654M引物探针，43M引物探针3 β地贫3扩增液24人份/支1支26M引物探针，30M引物探针4 β地贫4扩增液24人份/支1支27-28M引物探针，IVS-1-1M(T)引物探针5 β地贫5扩增液24人份/支1支31M引物探针，-28M引物探针6 β地贫6扩增液24人份/支1支17M引物探针，-29M引物探针7 β地贫7扩增液24人份/支1支IVS-1-1M(A)引物探针，71-72M（A）引物探针8 β地贫8扩增液24人份/支1支14-15M引物探针，41M引物探针9 β地贫9扩增液24人份/支1支IVS-1-5M引物探针，71-72M（T）引物探针10 β地贫10扩增液24人份/支1支-31M引物探针，CAP40-43M引物探针11 β地贫11扩增液24人份/支1支IntM引物探针，-32M引物探针12 β地贫12扩增液24人份/支1支CAP-1M引物探针，-30M引物探针组成成分生化组成规格数量H-2应缓冲液4-羟乙基哌嗪乙磺酸、氯化钾、氯化镁、硫酸铵、甲酰胺、脱氧核糖核苷三磷酸1.5mL/支4支A酶混合液Taq DNA聚合酶、尿嘧啶糖基化酶、酶储存液A 50μL /支3支稀释缓冲液三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、三羟甲基氨基甲烷 1.5mL/支6支TE缓冲液三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、三羟甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸二钠盐1.5mL/支2支石蜡油 1.5mL/支5支试剂盒2：组成成分生化组成规格数量β地贫阴性对照生理盐水500μL/支1支β地贫阳性对照质粒500μL/支1支注：本试剂盒由试剂盒1和试剂盒2组成。
地贫基因检测报告单
地贫基因检测报告单
尊敬的用户：
您好！感谢您选择本机构进行地贫基因检测。
根据您提供的样本，我们已完成检测并生成了检测报告单，现将结果详细通知如下：
一、检测结果。
1. 地贫基因检测结果，阴性。
2. 检测方法，PCR扩增技术。
3. 检测时间，2022年10月15日。
二、结果解读。
根据我们的检测结果，您的地贫基因检测为阴性，即您并未携带地贫基因。
这意味着您在遗传上并不具有地贫症的风险，也不会将地贫基因传递给下一代。
这对于您个人和家庭来说都是一个好消息。
三、建议和注意事项。
虽然您的地贫基因检测结果为阴性，但我们仍建议您保持良好的生活习惯，包括均衡饮食、适量运动、定期体检等。
此外，如果您计划要孩子，我们也建议您在孕前进行全面的遗传咨询和检测，以确保孩子的健康。
四、关于地贫基因。
地贫是一种常见的遗传性疾病，患者因体内血红蛋白合成障碍而导致贫血。
地贫症主要由地中海贫血、遗传性珠蛋白病等引起，患者常出现贫血、黄疸等症状。
地贫基因主要通过父母遗传给子女，因此对于有地贫家族史的人群，进行地贫基因检测是非常有必要的。
五、结语。
感谢您选择本机构进行地贫基因检测，并信任我们的专业技术。
如果您对检测结果有任何疑问或需要进一步咨询，欢迎随时联系我们的专业医生团队，我们将竭诚为您解答疑惑。
最后，祝愿您和您的家人健康幸福！
此致。
敬礼。
地贫基因检测中心敬上。
地贫基因检测实验报告(3篇)
第1篇一、实验背景地中海贫血（Thalassemia）是一种由于珠蛋白基因缺陷引起的遗传性溶血性贫血病。
根据珠蛋白基因突变的不同，地中海贫血可分为α-地中海贫血和β-地中海贫血两大类。
本实验旨在通过分子生物学技术对疑似地中海贫血患者进行基因检测，以确定其基因型，为临床诊断和治疗提供依据。
二、实验目的1. 确定疑似地中海贫血患者的基因型。
2. 为临床诊断和治疗提供科学依据。
三、实验材料1. 样本：疑似地中海贫血患者的血液样本。
2. 试剂：DNA提取试剂盒、PCR试剂盒、DNA测序试剂盒等。
3. 仪器：PCR仪、电泳仪、测序仪等。
四、实验方法1. 样本DNA提取：采用DNA提取试剂盒提取疑似地中海贫血患者的血液样本DNA。
2. PCR扩增：根据α-地中海贫血和β-地中海贫血的基因突变位点，设计特异性引物，进行PCR扩增。
3. PCR产物检测：通过琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，观察条带情况。
4. DNA测序：对扩增产物进行DNA测序，确定基因突变位点。
5. 基因型分析：根据测序结果，分析疑似地中海贫血患者的基因型。
五、实验结果1. 样本DNA提取：成功提取疑似地中海贫血患者的血液样本DNA。
2. PCR扩增：成功扩增出α-地中海贫血和β-地中海贫血的基因片段。
3. PCR产物检测：电泳结果显示，扩增产物大小与预期相符。
4. DNA测序：测序结果显示，疑似地中海贫血患者的基因存在突变。
5. 基因型分析：根据测序结果，确定疑似地中海贫血患者的基因型为α-地中海贫血杂合子。
六、讨论与分析1. α-地中海贫血是一种常染色体隐性遗传病，主要由于α-珠蛋白基因缺陷引起。
本实验通过PCR和DNA测序技术，成功检测出疑似地中海贫血患者的基因突变，为临床诊断提供了依据。
2. α-地中海贫血的基因型可分为纯合子和杂合子。
本实验结果显示，疑似地中海贫血患者的基因型为α-地中海贫血杂合子，提示其可能表现为轻型α-地中海贫血或无症状携带者。
β-地中海贫血基因检测(PCR-反向点杂交法) ppt课件
（PCR-反向点杂交法）
β-地中海贫血（简称β-地贫）是一种由于β珠蛋白基因突变导致肽链表达失衡而产生的单基 因遗传血液病，多由β-珠蛋白基因点突变所致， 是我国南方各省最常见、危害最大的遗传病之一。 在中国人群中常见的突变位点有CD41-42(-TCTT)、 CDL7(A→T)、IVS-Ⅱ-654(C→T)和TATAbox28(A→G)等位点。因本病多为点突变所致，故常 用PCR加反向点杂交(RDB)确定突变类型。
反向斑点杂交技术
反向斑点杂交(reverse dot blot，RDB)是Saiki等提 出的一种斑点杂交技术，该技术采用固化了多种特异 性探针的膜条与扩增靶序列杂交，使一次杂交即可同 时筛查被检DNA中的多种突变。这种以膜上固定探针取 代固定靶DNA的方式，改变了传统杂交法一次只能检测 一种突变的模式，具有快速、简便、高敏感度和特异 性强的特点，尤其在基因突变检测、基因分型、病原 体的检测等领域有其独特的优势。
5.显色
A液：POD=2000:1,轻摇保温30min,后用A液 洗膜2次，各5分钟。C液室温洗膜2min,之后置 显色液避光显色20min
杂交反应条件按照试剂盒要求
结果判断 杂交膜条 β-28/βN标本
β-28/ β-28标本 βIVS-II-654/ βN标本
β CD41-42/ βN标本 βCD17/ βN标本
PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：
①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后， 使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为 单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；
②模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单 链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列 配对结合；
地中海贫血基因检测报告单怎么看
地中海贫血基因检测报告单怎么看尊敬的客户：
感谢您选择我们的地中海贫血基因检测服务。
检测报告单中包
含了您基因检测的具体结果和相关解释，本文将为您详细介绍报
告单的各项内容。
1.个人信息
在报告单的顶部，您能看到个人信息的栏目，这一栏中列出了
您的姓名、出生日期、性别等个人信息，方便您快速辨认。
2.样品信息
接下来这一部分将提供样品信息，其中包括样品编号、检测日
期等信息。
这些信息将有助于查找和追踪样本的来源和检测过程。
3.基因检测结果
在报告单的核心部分，我们提供了详细记录您基因检测结果的信息表格。
这张表格中第一列列出了与地中海贫血相关的11种基因突变，第二列将显示每种突变在您的基因中的状态。
基因会有两个拷贝，一份来自母亲，一份来自父亲，分别对应第三列和第四列。
我们将所有可能的基因状态进行解释和分类，以便您更好地了解您的基因情况。
4.检测建议
报告单的最后一部分是检测建议，我们将对您检测结果进行评估和分类，并给出适当的建议。
此建议并非诊断结果，仅作为一个参考，如果您需要进一步的诊断和治疗信息，请咨询专业医生的建议。
总结：
基于个人成因的地中海贫血检测是一种安全、快捷、准确的诊断方法。
通过检测报告单中的各项数据，您可以更好地了解自己的基因信息并得出适当的诊断建议。
如果您有任何关于报告单中数据的提问，或者需要进一步地了解我们的检测服务，可以随时联系我们的专业团队。
再次感谢您的选择和信任。
地中海贫血检查报告单
地中海贫血检查报告单报告日期：_______________
报告编号：_______________
受检者基本信息：
姓名：_____________ 性别：_____________ 年龄：_____________
联系方式：__________________________
检测项目：
地中海贫血基因检测
检测结果：
受检者_____________基因筛查结果如下：
□ α0型□ α+型□ β0型□ β+型□ 总体特缺□ 无异常
检测人员：
检测机构：__________________________
报告说明：
地中海贫血是一种遗传性疾病，通常由父母双方至少携带其中一种基因而遗传给子女。
本次检测结果显示，受检者
_____________基因筛查结果为_____________。
特别是β0型和α0型地中海贫血基因是几乎不产生血红蛋白的严重型，患者会有严重的贫血、黄疸、脾大、肝大、发育不良等，常常在幼年时期就发现症状。
受检者或代理人应仔细阅读本报告，如有疑问请咨询医师或遗传咨询师，建立完善的个人和家庭遗传史档案，采取科学有效的措施。
建议在孕前咨询医生，进行基因检测和遗传咨询，减少地中海贫血的遗传风险。
此报告仅基因检测报告，仅供参考。
如需更加全面的检测结果，需结合其他化验结果及医疗检查结果来判断。
签字：__________________________
注：本报告一式两份，一份为受检者保存，一份为检测机构存档。
地贫实验报告思考
一、实验背景地中海贫血（Thalassemia），又称地中海型贫血，是一种遗传性血红蛋白合成障碍的疾病。
该病主要发生在地中海沿岸、东南亚以及我国南方等地区。
地中海贫血患者由于血红蛋白合成不足，导致红细胞形态异常、寿命缩短，严重者可引发贫血、肝脾肿大、骨骼变形等并发症，甚至危及生命。
近年来，随着分子生物学技术的不断发展，地中海贫血的基因诊断技术逐渐成熟。
本研究旨在通过实验，探究地中海贫血基因诊断方法，为临床诊断和治疗提供理论依据。
二、实验目的1. 掌握地中海贫血基因诊断的基本原理和操作步骤；2. 了解地中海贫血基因突变类型及其对血红蛋白合成的影响；3. 评估不同基因诊断方法在临床应用中的优势和局限性。
三、实验材料与方法1. 实验材料（1）实验样本：选取10份地中海贫血患者样本和10份正常对照样本；（2）试剂：PCR试剂盒、DNA提取试剂盒、限制性内切酶、DNA连接酶、Taq DNA聚合酶等；（3）仪器：PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统等。
2. 实验方法（1）DNA提取：采用酚-氯仿法提取实验样本中的基因组DNA；（2）PCR扩增：针对地中海贫血基因突变位点设计特异性引物，进行PCR扩增；（3）限制性内切酶酶解：将PCR产物进行限制性内切酶酶解，观察酶切产物条带；（4）电泳分析：将酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳，观察条带变化，判断是否存在突变。
四、实验结果与分析1. DNA提取结果实验成功提取了10份患者样本和10份正常对照样本的基因组DNA，A260/A280比值在1.8-2.0之间，符合实验要求。
2. PCR扩增结果通过PCR扩增，成功扩增出地中海贫血基因的突变位点。
10份患者样本均出现异常条带，而10份正常对照样本则无异常条带。
3. 限制性内切酶酶解结果对PCR产物进行限制性内切酶酶解，发现10份患者样本酶切产物与正常对照样本存在差异。
患者样本酶切产物条带数量、位置和大小均与正常对照样本不同。
4. 电泳分析结果电泳结果显示，患者样本与正常对照样本在特定位置出现差异条带。
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PCR
温 94
度
72
（℃）
55
22
1
2
3
高温变性 低温退火 适温延伸
DNA 2
形 成
条变
单性
子链延伸
链
DNA加倍
DNA单链
与引物复性
DNA双螺旋
1
2
3
4
时间（min）
重复1~3步 25~30轮
目的DNA片段 扩增100万倍以上
5
PCR原理:实质就是体外基因复制技术
.
靶序列
Mg2+
dCTP dGTP dUTP dATP
序列不能生成相应的扩增产物而缺失序列 可以扩增出特定长度的片段。
Primer
Taq DNA聚合酶 AmpErase
靶序列引物退火55 °C 加热变性95-PCR）
• 根据α-地贫3种缺失范围及断裂点，分别设计 特异引物同时检测，在3种缺失片段的共同 区域还设计一对正常内对照引物，当发生任 一种缺失纯合子或双重杂合子该正常对照不 扩增;根据阳性扩增片段组合结果诊断各种不 同基因型。
仪器设备
• 离心机 • 加样枪 • PCR扩增仪（使用介绍）
• 1、PCR扩增循环条件的设置(PCR仪请使用热盖)：若用 没有热盖的PCR扩增仪，则需在反应体系中加入液体石蜡 等矿物油封闭体系以防止反应过程中液体的蒸发。
• 2、 扩增结束后，不立刻电泳请取出放冰箱保存
操作步骤
• 1 血液DNA提取(略),取出冻存的DNA 解冻
• 2 试剂准备 取所需的反应管PCR Mix-A,若管
盖上有液体附着的 请低速离心数秒 • 3、加样
在反应管上做好标记，分别加2-4ul 已提取的待测样品、阴性质控、阳性 质控，终反应体积为25ul，低速离心 数秒。转移至扩增区
质量控制
• 1 阴性质控（ 灭菌双蒸水 ） • 2 阳性质控（缺失型/突变型）
PCR-Mix-I（紫色管）23μL
DNA模板
2μL
Total
25μL
50℃
15min
95℃
10min
94℃
1 min
50℃
30s
35 cycles
72℃
30s
72℃
5min
试剂
试剂盒组成： • （1）PCR反应液
（已包含PCR扩增所需的缓冲液、引物、 dNTPs、 DNA聚合酶等） • （2）纯水
DNA模板
Total
• 96℃ • 98℃
65℃ 72℃ • 98℃ 65℃ 72℃ • 72℃
5 min 45sec 90sec 3 min 30sec 45sec 3 min 10 min
4μL 25μL
（10cycles）
（25cycles）
PCR扩增 （-地中海贫血）
• 用生物素标记的引物扩增待测样品DNA
α-地贫基因缺失示意图
正常内对照
ζ
ψζ
ψα2
ψα1
α2
α1
1
-a3.7
-a4.2
--SEA
-地贫 PCR实验原理
• 设计特异的PCR引物且其5‘端用生物素进 行标记，扩增获得一定长度的DNA片段， 该片段包含了所要检测的各个位点。
操作步骤
• PCR扩增 （α-地中海贫血）
PCR-Mix-I （蓝色管）21μL
随病人标本检测,不同缺失/突变类型 可以依次轮流循环作为质控检测
PCR 常见问题之一
q 假阳性
现象：空白对照出现目的扩增产物
M+- 1 2
PCR 常见问题之二
q 无扩增产物
现象：正对照有条带，而样品则无；
M 样品 样品 正对照
注意事项
• 1 在运输过程中会有PCR反应液附着在管 壁/盖上，因此请在使用前先离心，以保证 PCR反应体系的体积及防止潜在的污染。
地中海贫血基因检测
PCR扩增DNA
实验目的
• 1、掌握PCR的原理 • 2、熟悉PCR操作过程 • 3、了解PCR的临床应用
实验原理
PCR（Polymerase Chain Reaction）：聚合酶链式反应， PCR过程类似于DNA的天然复制过程，包括DNA双链解开， 引物配对，合成三步；
• 在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以特定引物为 延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，体外复制出与母 链模板DNA互补的子链DNA的过程。
• 2 PCR反应的加样量多数是微量的，所以 加样时应把枪头伸进液面下加样，并注意 确保试剂确实加进去了！
• 3 加样过程中注意防止污染样品及试剂。 • 4 置PCR仪进行PCR反应前，PCR管要盖
紧，否则使液体蒸发影响PCR反应。
思考
• 1、试述PCR技术的基本原理。 • 2 、问：在Gap-PCR中为什么α正常DNA