马铃薯茎尖脱毒培养技术的研究

因此，采用组织培养技术，通过一 定良种繁殖体系，生产优质种薯， 是保证马铃薯高产、稳产的一项有 效措施。
1．脱毒种薯生产程序
采用微茎尖组织培养的方法，诱导出苗， 采用联免疫吸附试验法或指示植物方法 鉴定马铃薯病毒和类病毒，经鉴定后， 无主要病毒及类病毒的试管苗可定为脱 毒试管基础苗。
试管基础苗在无菌条件下，采用固体、 液体培养基相结合的方法，进行扩繁基 础苗，在防虫网室栽植或封闭温室扦插， 生产出原原种（或称脱毒小薯）。用原 原种在一定隔离条件下产生原种1代， 以后逐级称为原种2代、良种1代、良种 2代。
培养基：MS+NAA0.2-0.5+D-泛酸钙10， 3%蔗糖，20-25度，3000-4000LX，1416小时光照，每3周继代一次，单芽茎段 约1厘米，可插也可平放，原则试管苗用 2年—3年。
(3) 驯化
为增强试管苗对温室内环境条件的适应能力， 移植前对试管苗要进行光、温锻炼。炼苗期温 室内的温度：白天23~27℃，夜间不低于14℃。 炼苗的具体方法是：移植前7d左右，将长有 3~5片叶、高2~3cm的试管苗，在不开瓶口的 状态下，从培养室移至温室排好。为防止强光、 高温灼伤试管苗，在温室顶上加盖一层黑色遮 阳网。
马铃薯茎尖脱毒培养技术的 研究进展
第一组: 演讲人:
前言:
马铃薯是一种全球性的重要经济作物。 适应性广，营养价值高，耐贮藏适运 输，既是一种重要的粮食作物也是一 种调节市场供应的重要蔬菜。马铃薯 原产于拉丁美洲，当被发现可以食用 后，很快传到世界各地，成为栽培很 广的一种作物。
但是，当发现从外地引种栽培1~2 个周期后，明显发现产量降低，植 株变矮，并有卷叶的现象产生，经 检测证明这是由于病毒引起的退化 现象。
2、鉴定寄主的准备
马铃薯常用的鉴定寄主植物有苋科的千日红，茄 科的洋酸浆、毛曼佗罗等。寄主植物应在无虫网室中 培养。
３.接种液制备及接种 叶片洗净后。在消毒的研钵中研成糊状，用 纱布滤出汁液，再用蒸馏水稀释１０倍作为 接种物，在鉴定寄主植物的叶面，６００目 的金刚砂混入接种物中，然后用左手心紧靠 在寄主的背面，以右手实指蘸取接种液，均 匀的在叶背面擦过，以不造成叶片产生伤痕 为度，最后把叶面上多余的接种物用清水冲 洗干净，放置在１５～２４的防虫室中，一 般５－１０天可发病。
危害马铃薯的病毒有30种之多，如 X病毒、S病毒、Y病毒、M病毒、A 病毒、花叶病毒、纺锤形块茎病毒 等。由于马铃薯是无性繁殖作物， 病毒逐代积累，日益严重，引起严 重退化。马铃薯病毒可使块茎产量 减少50%~80%。
一、马铃薯脱毒技术:
马铃薯在营养繁殖时易受病毒的浸染， 当条件适合时，病毒就会在植株内增殖， 转运和积累，随着世代传递，病毒危害 逐年加重，一般可造成减产50％以上。 研究发现，有30多种病毒易感染马铃薯， 并引起品种退化，严重影响马铃薯的生 产。通过微茎尖组织培养技术能从马铃 薯体内脱除PLRV、PVY、PVA、PAF、 PVG、PVM、PSW等病毒。
三、马铃薯无病毒株的繁殖和保存
1．无病毒株的繁殖 通过茎尖培养只能得到很少的无病毒植株，而 生产上需要数以万计的健康种薯。同时无病毒 植株并没有对该病毒获得免疫能力，仍会在繁 殖中再次侵染。如何在以后繁殖中防止受病毒 再侵染是很关键的一环。目前在生产上来用的 方法很多，下面介绍主要的几种。
（１） 直接块茎繁殖 （２） 扦插繁殖 （３） 组织培养切段繁殖 A：继代培养 B：低温保存
培养条件：温度21~25℃、光量20003000 lx(勒克斯)、光照12h/d。 2-3周愈伤，4-5周绿点，3--6月长成2-3 厘米小芽，越慢越好，出芽很快的扔掉。
（2） 继代和生根
培养成功的马铃薯脱毒苗，经ELISA（试剂盒） 鉴定后（试管苗应每3月检测一次，每年4次） 鉴定后，采用固体、液体培养基相结合方法扩 繁。取试管苗单节切段扦插在（或平放）固体 培养基上，每瓶可插20个左右茎段，经20d左 右发育成5~10cm高小植株，继续进行切段繁 殖，此法速度快，每月可繁殖5~8倍，试管苗 多节接种在液体培养基上，进行浅层静止液体 培养。
3. 脱毒苗切繁
基础苗成活进入正常后便可切繁，但切繁量 的多少和质量的高低，除与前边提到的水与 温湿度条件有关外，能否掌握正确的切繁方 法和适宜的切繁苗龄也是非常重要的。脱毒 苗切繁主要是剪取顶部芽尖茎段（主茎芽尖 和腋芽芽尖）直接扦插。
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二、马铃薯无病毒苗的鉴定材料
1、指示植物鉴定
在马铃薯的病毒鉴定中，汁液鉴定是最常用的方法， Ｘ病毒、Ｓ病毒和纺锤块状病毒很容易通过汁液 来接种。
2．茎尖培养脱毒 （1） 取材和培养
一般多采用在室内发芽，芽经热处理（38℃） 2周。然后取顶芽或侧芽1厘米的茎尖，在自 来水下冲洗干净，无菌条件下先用70％的酒 精浸润组织15-20秒，再用2％的次氯酸钠溶 液浸泡4-5min，然后用无菌水冲洗3次。
把消毒好的芽放在解剖镜下仔细剥离， 逐层剥去幼叶，露出圆滑的生长点，可 以留1-2个叶原基，0.2—0.3毫米，随即 接种于MS液体培养基上，每升加 0.1mgNAA(萘乙酸 ) 、0.2mgGA3 (赤霉 素 ) 、0.5BA(细胞分裂素)，2%蔗糖，p H值5.8。