马铃薯茎尖脱毒培养技术的研究
马铃薯茎尖脱毒技术体系优化研究
马铃薯茎尖脱毒技术体系优化研究马铃薯是一种粮、菜、饲、工业原料兼用型经济作物,其产量高、营养丰富、适应性强、分布广。
但是在马铃薯的连年种植过程中,产量和品质逐年下降,退化是造成这一后果的主要原因,而解决退化的有效措施就是生产脱毒种薯。
马铃薯茎尖培养脱毒苗是马铃薯脱毒种薯产业的基础,优质快速地茎尖培养为以后脱毒苗和脱毒薯的生产赢得了时间和效益,当前脱毒马铃薯茎尖培养效率低,成苗率和脱毒率达不到预期目的,因此优化马铃薯茎尖脱毒培养方法非常必要。
本试验对茎尖培养的培养基和脱毒方法对脱毒效果的影响进行了系统研究,得出了以下主要结果: 1.激素对马铃薯茎尖分化成苗的影响本试验以MS培养基为基础培养基,添加不同种类及不同浓度的植物生长调节剂,共24个处理组合,研究了不同植物生长调节剂及不同浓度配比对茎尖分化成苗的影响。
结果表明,诱导茎尖分化的成苗不仅与植物生长调节剂的绝对浓度有关,又与不同种类植物生长调节剂的配比有关。
其他条件相同的情况下,添加GA<sub>3</sub>浓度为0.1mg/L时的成苗率比浓度为0.2mg/L时的成苗率高,且差异显著,说明GA<sub>3</sub>的浓度对马铃薯的成苗具有极大影响。
试验得出,培养基中加入0.1mg/LGA<sub>3</sub>有助于马铃薯茎尖更好的生长和分化,0.2mg/L GA<sub>3</sub>对茎尖分化的成苗率有抑制效应。
同等条件下培养基中添加0.1mg/L的IAA和0.2mg/L的IAA相比较,0.2mg/L IAA的成苗率较高,达50%,0.05 mg/L的NAA和0.1mg/L的NAA相比较,0.05mg/L NAA的成苗率较高,可达56.98%,但0.05mg/L的NAA比0.2mg/LIAA成苗率更高,说明使用0.05mg/LNAA作为生长素对马铃薯茎尖的分化生长有较好的促进作用。
马铃薯茎尖脱毒技术研究
马铃薯茎尖脱毒技术研究本试验以马铃薯茎尖分生组织为实验材料,应用单一试剂和组合试剂法对马铃薯茎尖进行消毒预处理,消毒试剂包括酒精、漂白粉、氯化汞、次氯酸钠、次氯酸钙和过氧化氢六种试剂。
通过分析植株染菌和成活等生长情况来判断消毒的效果。
在消毒时长与无菌水冲洗次数上进一步优化,采取酒精处理30s、60s和120s,无菌水冲洗2、4和6次,氯化汞处理2min、3.5min和5min构成三因素三水平正交实验,依据染菌和成活情况确定最优的灭菌组合,结果表明氯化汞处理 3.5min,酒精处理120s,无菌水冲洗6次,马铃薯的脱毒苗无菌成活率可达90%以上采用黄皮薯“中薯一号”、白皮薯“早大白”、紫皮薯“紫薯”,研究不同品种的茎尖分生组织经脱毒培养后的成活情况,结果表明中薯一号的成活率可达到70%,而紫薯的成活率为0%,表明不同品种的茎尖脱毒效果和效率存在显著的差异。
研究了“中薯1号”不同类型的外植体茎尖的脱毒培养情况,包括母薯上、自然环境下植株上的侧芽和培养箱中脱毒幼苗的侧芽茎尖三种。
结果表明母薯上茎尖脱毒培养出的苗染菌率较高,生长情况比较差的,成活率只有50%；培养箱中的是经过脱毒预处理且在无菌环境下生长的侧芽,虽没有自然环境下的苗长势旺盛,但成活率能达到80%,所以采用无菌苗的侧芽尖进行脱毒培养效果最好。
进行了培养基组分的优化,设计了在MS培养基中加入不同浓度的激素PIX以及不同果汁添加物的试验,结果表明激素PIX对促进马铃薯脱毒苗缩短节间,增加茎粗,抑制徒长,促进壮苗有着显著的效果。
当PIX浓度为0.5mg/1和1.Omg/l时,马铃薯的脱毒苗长得最壮,分枝最多,叶子最多,且颜色为绿色,有的是墨绿色。
不同浓度的果汁添加物对脱毒苗均有促进或抑制作用,它们能提供脱毒苗在生长过程中所需要一些微量营养成分、生理活性物质和生长物质等,其中低浓度的水萝卜汁最有助于马铃薯脱毒苗的生长。
马铃薯茎尖脱毒培养技术研究
马 铃薯 茎 尖脱毒 就 是利用 该原 理 ，把茎 尖 剥离 接 种到 培 养基 上 ，进而培养马铃薯种薯或微型薯 。 ２ 操 作 方 法
剪取促芽后的马铃薯块茎上合适大小的芽若干个 ，冲洗干净 后放于烧杯内用纱布封 口，置于 自来水下反复冲洗 ４０分钟，吸干 表面水分放进超净工作台进行深层消毒；先用 ７５％酒精浸泡 ２０～ ４５ｓ，无菌水冲洗 ３次 ；再用 ｏ．１％的升汞浸泡 ８￣１０ｍｉｎ，无菌水冲洗 ５次 ，冲洗时轻轻晃动烧杯时消毒剂彻底被漂洗掉 ，之后置于无 菌 滤纸 待用 。
毒 效果 的 因素进 行 了详 细分析 ，进 一步 阐述 了对病毒 检 测的 常 用方 法。
关 键词 ：马铃 薯 ；茎 尖脱毒 ；病毒 检 测
中图分 类号 ：￥５３２
文 献标 识码 ：Ａ
文章编 号 ： １６７４—０４３２（２０１３）一１０—２３—２
马铃薯是我国重要的粮食作物 ，近年来 ，政府加大力度发展 现代 马 铃 薯 产业 ，促 进 了马 铃 薯 产业 的 快速 发 展 ，种植 面 积 和 鲜 薯产量均居世界首位 ，产业链条逐步拓展 ，经济效益稳步提升。但 是 ，马铃薯是通过块茎进行的无性繁殖 ，在连年种植过程 中土壤 和种薯本身携带的病害逐年严重 ，导致品种退化 ，严重降低了马 铃薯的产量和品质。１９５５年法国 Ｍｏｎｅｌ通过剥离马铃薯茎尖获 得 了不 带病 毒 的 马铃 薯 脱 毒苗 ，引起 了 科学 界 的广 泛 关 注 ，世 界 各地纷纷采用马铃薯茎尖脱毒快繁应用于大田生产 ，提高马铃薯 产量 ，改善其品质。 １马 铃薯 茎 尖脱 毒原 理
微型马铃薯优质种苗的茎尖脱毒培养
微型马铃薯优质种苗的茎尖脱毒培养李进进【摘要】为了保持马铃薯优良品种的遗传特性,以马铃薯茎尖为外植体,MS为基本培养基,添加不同浓度及其配比的外源激素,对马铃薯茎尖进行诱导、增殖、壮苗和微型薯生产研究.结果表明:MS+6-BA1.5mg/L(以下单位同)+NAA0.2 培养基配方适宜茎尖的诱导增殖.并且在合适的培养基配方前提下,分别在单节茎段、2节茎段、3节茎段中加入不同量的活性炭进行实验,得出加入0.2%的活性碳时,腋芽萌发率最高,平均芽长度最为理想,而且芽的长势最强.【期刊名称】《种子》【年(卷),期】2009(028)003【总页数】2页(P88-89)【关键词】微型马铃薯;茎尖脱毒;遗传种性;激素;活性炭【作者】李进进【作者单位】广东轻工职业技术学院,广州,510300【正文语种】中文【中图分类】S532马铃薯(Solanum tuberosum)原产于拉丁美洲，当被发现可以食用后，很快传到世界各地，成为栽培很广的一种作物。
其适应性广，营养价值高，耐贮藏运输，是重要的粮食作物之一，也是一种调节市场供应的重要蔬菜。
但是，从外地引种栽培1～2个周期后，明显发现其遗传种性降低，产量下降，品质变劣，并有卷叶和花叶等现象发生，这是由于病毒引起的遗传种性退化现象。
马铃薯易感染多种病毒，导致薯块变小、畸形、种薯退化等。
实验证明，利用茎尖组织培养结合病毒检测，进行马铃薯脱毒，进而生产脱毒种薯用于生产，可有效地防止种薯遗传种性退化，大幅度提高马铃薯产量。
因为植物病毒是通过植物的微管系统移动，茎尖部位细胞分裂速度快，暂时还没有形成微管系统;而且茎尖分生组织生长素含量很高，足以抑制病毒的增殖。
因此我们取马铃薯芽段2～3 cm，经过一系列消毒，在无菌条件下用解剖镜小心剥取约0.7 mm的茎尖进行培养，以获得无病毒苗。
1.1 材料将具有优良遗传种性的马铃薯沙藏，取其发芽后的芽段。
1.2 试验方法1.2.1 外植体消毒先将表面光滑无病虫害的马铃薯埋在湿润的沙质基质中催芽，待芽长至2～3 cm 时，切取芽段在自来水下冲洗15 min左右，于超净工作台上进行严格的消毒。
马铃薯茎尖脱毒培养关键因素研究
基金项 目： 乌 兰 察 布 职 业 学 院 科 研 项 目（ １ ２ ｗ ｚ ｋ ｙ Ｏ １ ３ ）
作者简介 ： 刘海英（ １ ９ ７ ５ 一 ） ， 女， 硕士 ， 讲师， 从 事 马 铃 薯 组 织 培 养 和 病 毒 检 测 教 学 与研 究 工 作 。Ｅ － ｍａ ｉ ｌ ： ｌ ｈ ｙ ８ ２ １ ＠１ ６ ３ ． ｃ ｏ ｎ ｒ
经 验交 流２ ０ １ ３ ． ８
． 啦 业 蝴 挝地
马铃薯茎尖脱 毒培养关键 因素研究
刘 海英 陈 建保 康 俊 段伟 伟 张祚 恬 （ 内蒙古 乌兰 察布 职业 学 院马铃 薯工 程 系 乌兰察 布 ０ １ ２ ０ ０ ０ ）
摘要 ： 对 马铃 薯 茎尖脱 毒培 养 关键 因素进 行 了分 析 ， 阐述 了马铃 薯 茎 尖脱毒 培 养的 理论 基础 、 影 响 马铃 薯 茎 尖脱毒培 养 的 因素和 条件 ， 指 出 了茎尖培 养脱毒 中尚存在 的一 些 问题 以及相 应 对策 。
关键 词 ： 马铃 薯 ； 茎 尖脱毒 ； 组 织培 养
马铃薯是 粮 、 菜、 饲、 加工兼 用型作 物 ， 适 应 性 内 的许 多植 物 脱 除病 毒 的重 要 方法 ，分 生组 织 顶端
广、 营养丰富、 经济 效 益 高 ， 已成 为世 界 上继 水 稻 、 小 培养 法 已 发展 成 为适 用 于几 乎 所 有无 性 繁殖 作 物脱
左右 。
次 。植 物 分生 组织 中生 长 素 的含 量或 活 性 一般 远 远
具 有抑 制病 毒增 殖 的效果嘲 。 马 铃薯 产 业 对 我 国农 村 经济 发 展 、 国家粮 食 安 高 于其他 组织 ，
马铃薯茎尖脱毒、愈伤组织诱导及分化技术优化研究的开题报告
马铃薯茎尖脱毒、愈伤组织诱导及分化技术优化研究的开题报告一、研究背景和意义马铃薯是我国重要的食用和工业原料作物之一，也是世界上最重要的食用作物之一。
但是，马铃薯叶片、茎尖等组织中常常携带多种病毒，如果不进行脱毒处理，就会对马铃薯的生产和质量造成很大影响。
另外，马铃薯茎尖是愈伤组织诱导和分化的重要材料之一，开展马铃薯愈伤组织的研究对马铃薯的育种和繁殖有着重要的意义。
现有的马铃薯茎尖脱毒及愈伤组织诱导和分化技术存在着一些问题，如操作复杂、效率低下、成本高等问题。
因此，本研究旨在优化马铃薯茎尖脱毒、愈伤组织诱导及分化技术，提高脱毒效率和愈伤组织诱导率，降低成本，并进一步探讨其应用前景和发展方向。
二、研究内容和方法1. 马铃薯茎尖脱毒技术优化研究通过对传统马铃薯茎尖脱毒方法的改进和优化，探索更为高效、稳定的脱毒技术，主要包括以下方面：（1）不同消毒和灭菌方法对茎尖脱毒效果的影响研究；（2）不同处理条件对茎尖脱毒效果的影响研究；（3）茎尖脱毒后的存放条件和时间对其真实性的影响研究。
2. 马铃薯茎尖愈伤组织诱导和分化技术优化研究通过对马铃薯茎尖愈伤组织诱导和分化技术的优化，提高愈伤组织诱导率和分化效率，主要包括以下方面：（1）不同物种、不同品种马铃薯茎尖的愈伤组织诱导率研究；（2）不同植物生长调节剂浓度对愈伤组织诱导和分化的影响研究；（3）外源DNA导入对马铃薯愈伤组织形成的影响研究。
3. 研究方法本研究将采用实验室培养和相关分析方法，包括细胞培养、组织培养、酶活性测定、PCR检测等方法，对马铃薯茎尖脱毒、愈伤组织诱导和分化技术进行优化研究，同时通过对比实验和数据分析，探索更为高效、稳定的脱毒和愈伤组织诱导技术，并对其应用前景做出初步预测。
三、研究预期成果本研究预计通过优化马铃薯茎尖脱毒、愈伤组织诱导和分化技术，取得以下预期成果：（1）探索出更为高效、稳定的马铃薯茎尖脱毒技术，并提高脱毒效率和真实性；（2）提高马铃薯愈伤组织诱导率和分化效率，探索出更为稳定的愈伤组织诱导和分化技术；（3）通过实验数据分析，预测优化技术将应用到实际生产中，并对其发展前景进行初步分析和探讨。
马铃薯茎尖脱毒培养关键因子探析
Ｔｈｅ Ｋｅ ｙ Ｆａ ｃ ｔ ｏ ｒ ｏ ｆ Ｐｏ ｔ ａ ｔ ｏ Ｓ ｈｏ ｏ ｔ －ｔ ｉ ｐ Ｃห้องสมุดไป่ตู้ ｌ ｔ ｕｒ ｅ
（ Ｐ ｏ ｔ ａ ｔ ｏ Ｅ ｎ ｇ ｉ ｎ ｅ ｅ ｒ ｉ ｎ ｇ Ｄ ｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｗｕ ｌ ａ ｎ ｃ ｈ ａ ｂ ｕ Ｃ ｏ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｌ ａ Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ， Ｗｕ ｌ ａ ｎ ｃ ｈ ａ ｂ ｕ ０ １ ２ ０ ０ ０ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
题， 提 出 了结 合 化 学 处理 提 高脱 毒 率 的 有 效措 施 ， 指 出 茎尖 脱 毒 培 养 中 尚存 在 的 一 些 问题 以及 相 应 对 策 。 关键 词 ： 马铃薯 ； 茎 尖 脱毒 ； 组 织培 养
中 图分 类 号 ： Ｓ ５ ３ ２ 文献 标 识 码 ： Ａ １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｊ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ７ — ０ ９ ０ ７ ． ２ ０ １ ３ ． ０ ４ ． ０ １ ９ 文章 编 号 ： １ ０ ０ ７ — ０ ９ ０ ７ ｛ ２ ０ １ ３ ） ４－ ０ ０ ０ ３ ６ — ０ ２
操 作 流 程 如下 ：
国第 一 ２ ０ １ ２年 种 植 面 积 有 所 下 降 ． 但 仍 然 保 持 在 ６ ６ ． ７ ９万
ｈ ｍ０ ． 总产可达 １ ０ ０ ０万 ｔ 左右
１ ． ２ ． １ 选材
于 马 铃薯 生 长 季 在 田间选 取 生 长 健 壮 、品 种 特性
马铃 薯 产 业 对 我 国农 村经 济 发 展 、国家 粮 食 安 全 起 到 了 非 常 重 要 的作 用 由于 马 铃薯 栽 培 属 于 无 性 繁殖 ， 导致 马 铃 薯 如 果 自身 携 带有 病 毒 的话 ． 多代 无 性 繁 殖可 以导 致病 毒 的积 累 ． 造 成 产 量 以 及 品 质 的逐 年 下 降 ， 也 就 是 品种 退 化 。 目前 ． 病 毒 病 是 制 约 马 铃 薯 产 业发 展 的 主 要 因素 。马 铃 薯 茎尖 脱 毒 培 养 手 段 是 解 决 马 铃 薯 病 毒病 最 常 使 用 的方 法 之 一 。通 过分 离 茎 尖 分 生 组 织
马铃薯茎尖脱毒组织培养技术研究综述
马铃薯茎尖脱毒组织培养技术研究综述作者：杨小琴李善才李增伟胡晓燕孙利军来源：《现代农业科技》2009年第22期摘要综述了近几年来马铃薯茎尖脱毒技术的研究进展,从马铃薯生产概况及危害马铃薯的主要因素、茎尖剥离发展历史及原理、茎尖脱毒技术要点、影响马铃薯茎尖脱毒效率的因素方面作了概述并对其发展前景进行了展望,以为马铃薯茎尖脱毒技术发展奠定基础。
关键词马铃薯;茎尖;脱毒;组织培养中图分类号S532文献标识码A文章编号 1007-5739(2009)22-0085-02ReasarchReviewOn Virus-freeTechnology ofPotatoStep-tip Tissue CultureYANG Xiao-qinLI Shan-caiLI Zeng-weiHU Xiao-yanSUN Li-jun(Yulin Institution of Agricultural Sciences,Yulin Shaanxi 719000)AbstractIn the paper,the recent studies on step-tip tissue culture of potato were reviewed. The respects about potato production situation,factors of potato production,historical development, theory and outline of virus-free on step-tip,and influencing factors on virus-free on step-tip tissue culture were summaried.Then the development prospect was presented so as to lay a foundation for the development of potato step-tip virus-free tissue culture.Key wordspotato;step-tip;virus-free;tissue culture马铃薯栽培分布较广,世界上共有148个国家栽培,主要分布在欧洲和亚洲。
马铃薯茎尖组织培养脱毒技术要点
实践技能练习马铃薯茎尖组织培养脱毒技术要点1.马铃薯茎尖组织培养脱毒技术1.1脱毒方法1.1.1选择优质健康的材料所选的植株必须是表现典型品种特性的植株,符合脱毒品种的特征包括株型、叶形、花色等植物学性状及成熟期等农艺性状;植株生长健壮,无明显的病毒性、真菌性、细菌性病害症状;单株产量和大薯率高;适时早收,选择符合品种特性,无病斑、虫蛀和机械创伤的大薯块。
1.1.2选择培养基MS培养基适用于大多数双子叶植物,B5和N6适合大多数单子叶植物,马铃薯茎尖培养基以MS+GA3 0.05mg/l +6-BA0.5～0.1mg/l +NAA0.1～0.2mg/l+2%蔗糖+0.9%琼脂配方效果比较好。
1.1.3剥离和接种薯块休眠后进行室内催芽,待芽长至1～2cm还未展叶时,将芽剪下,然后放入烧杯,用纱布封口,在自来水下冲洗半个小时,取出放到操作台上进行消毒。
消毒方法是将芽在75%的酒精中过一遍(约20秒),然后用次氯酸钠溶液稀释为2%～3%,浸泡2分钟,然后用无菌水清洗3～5次。
将消毒过的芽放在垫有吸水纸的培养皿上,每次消毒的芽不要太多,以防放置时间过长,茎尖褐变(消毒过程中所用器具均已事先高温灭菌)。
在操作台使用前先打开紫外线消毒30分钟,然后关闭紫外线灯,打开风机。
实验前换专用服装,双手用75%酒精擦拭消毒,取消毒处理过的芽,以无菌镊子固定,在30～40倍解剖镜下进行茎尖分生组织剥离。
用解剖针小心地除去茎尖周围的叶片组织,暴露出顶端圆滑的生长点,用解剖针切取0.1～0.3mm,带有1～2个叶原基。
茎尖剥离时为防止解剖镜近距离灯光烤伤茎尖分生组织,解剖镜光源要用冷光源照明。
切取的茎尖分生组织随即接种到培养基上,切面接触琼脂,置于培养室进行离体培养。
1.1.4培养条件将已接种外植体的试管置温度23℃～25℃,光照3000lx、在光周期13～16小时/天的培养室中培养2～4周即可成苗。
2.茎尖培养的关键技术环节2.1剥取适当大小的茎尖通常培养茎尖越小,产生幼苗的无毒率越高,但成活率越低。
榆林市马铃薯茎尖脱毒培养探究
着 的培养 基 ， 短 较长 的根 系 ， 剪 去掉 太 多 的 叶 片 ，
然后用 多菌 灵溶 液 蘸 根 ， 刚 移栽 的试 管 苗 最 主 刚 要 的就是保 湿 、 光 。一般 下午 ４ 遮 —５点移 栽 ，— ７ １ ０ｄ可 以缓 苗 ， 周 后可 以去 掉 遮 阳 网及塑 料 膜 ， ２
植物 茎尖脱 毒培 养 的成 败不 仅 与培养 基 的组
分有 关 ， 且与 块茎 的选择 、 化 、 芽处 理 、 尖 而 钝 催 茎 剥离、 接种 也有 直接 关系 。 ３ １ 培 养基 的配置 ． 培养 基 的成份 有 ６大类 ， 包括无 机 养分 （ 大量
２ 可 行 性
首先 ， 榆林位 于 陕西省 最 北部 ， 地处 毛 乌素 沙
薯病毒 病最有效 的方法 就是培育 和推广脱 毒种薯 ，
就是通 过对马铃 薯块 茎进 行 病毒 钝 化 、 芽处 理 ， 催 通过茎 尖 剥 离 、 生 组 织 培养 而脱 去 Ｐ Ｓ Ｐ 分 Ｖ 、 ＶＹ、
Ｐ 、 Ｌ Ｖ 和 Ｐ Ｔ 等 病 毒 、 病 毒后 培 育 试 管 ＶＳ Ｐ Ｒ ＳＶ 类
附加 Ｃ Ｐ ０ １ ／） 明显提 高茎 尖脱 毒 Ｐ Ｕ（ ． —１ｍｇ １可
（ 下转 第 １ ０页 ） ０
收 稿 日期 ： ０ １ １ １ｌ ２ １ － ４
作 者 简 介 ： 成 文 （ ９ ５ ） 男 ， 西 横 山人 ， 学 本 科 学历 ， 师 。 汪 １ ７ 一， 陕 大 讲
陕
西
农
业
科
学
榆 林 市 马铃 薯 茎 尖 脱 毒 培 养 探 究
汪 成 文
（ 林农 业学校 ， 西 榆 林 榆 陕
７ ９０ １ ０ ０）
马铃薯微茎尖培养脱毒快繁技术
５１ 瓶 苗污 染 与 环 境 污 染 。① 培 养 基 及 使 用 器械 ．
灭 菌不 彻底 。② 外植 体 消毒不 彻底 或封 口不严 。③
操 作人 员不遵 操 作规程 。④ 无 菌操 作 和培 养环 境 不 清 洁 。⑤ 超净 工 作 台过滤 装置 失 效或 培养 容器 破损
以及 盖 子 口径 过大 。 ５２ 污染 的预 防措施 ．
关 键词 ：马铃 薯 ：组 织培养 ：脱毒 ；快繁
１ 脱毒前 的 准备
１１ 工 具 准 备 。７ ％ ～７ ％酒 精 、２ ． ０ ５ ％次 氯 酸 钠 溶 液 或 ０１ ～１ ． ％ ％升 汞 溶 液 、无 菌 水 、 手 表 、玻 璃
棒 、废 液缸 、解刨 刀 、镊 子 。
１ 培养 基准 备 。培 养基 ＭＳ＋ Ｎ ００ ／ ． ２ ＡＡ ．ｌ Ｌ＋ ｍｇ ６Ｂ Ｏ１ － Ａ ． ｍ Ｌ＋蔗 糖 ３ Ｌ＋琼 脂 ５ ／ （Ｈ 值 Ｏ ．５ｇ ｐ Ｌ
消毒 的无 菌纸 上吸干 水分 。
３ 茎 尖剥 离及诱 导培 养
在超 净工 作 台上 ，在 带 有适 当 光源 的解 剖镜 （ ８
～
５２１ 灭菌 。培养 基 以及 接种 过程 中使 用 的所 有 器 ．． 械 必须 在高压 灭菌 锅 里进 行灭 菌 。需注 意 ： 火菌 要 彻 底 。锅 内需 灭 菌 的培 养 基不 能堆 放 过满 。升 温和
马 铃 暮 徵 茎 尖 培 养 脱 毒 快 繁 技 术
摘 要 ：马铃 薯 生 产 中 多采 用 块 茎进 行 无性 繁
苗 ，用 清 水 洗 去 附着 于根 部 的 培养 基 ，动 作 要轻 ， 应避 免造 成伤 根 ，然后 栽入 准备 好 的基 质 中 。尽 量 不要 弄伤 植株 ，然 后把 苗周 围的基质 压 实浇透 水 。 ４３ 移栽 后 的管理 －
马铃薯茎尖脱毒原理
马铃薯茎尖脱毒原理
马铃薯茎尖脱毒是一种繁殖马铃薯无病毒种薯的方法，其原理主要包括以下几个方面：
1. 选择健康的无病毒马铃薯株作为原材料：无病毒种薯是实施茎尖脱毒的前提，必须从健康无病毒的马铃薯植株中取得茎尖。
2. 茎尖提取：通过将马铃薯植株的茎尖分离出来，使得其中的细胞组织含有较少或无病毒。
3. 培养无菌苗：将茎尖放入含有适当培养基的无菌环境下，使其进行快速繁殖，得到无菌苗。
4. 消毒处理：在培养过程中，对无菌苗进行适当的消毒处理，使用消毒剂来杀灭任何可能存在的病原体。
5. 体外繁殖：对于无菌苗进行多次体外繁殖，通过分化、分裂和再生形成较多的植株。
6. 茎切：将培养好的植株的茎部进行切割，得到茎片。
7. 反复培养：将茎片放在培养基上进行反复培养，使其再次繁殖和生长。
8. 移植至土壤：将培养好的茎片移植至含有营养适当的土壤中，进行生长和发育。
通过上述步骤，茎尖脱毒的原理在于采取无菌培养的方式，通过对茎尖进行多次培养和消毒处理，从而去除或大幅降低马铃薯植株中可能存在的病毒污染，最终获得无病毒状况的种薯。
这样的种薯具有较高的健康度和繁殖性，能够保证马铃薯植株的高产高质。
马铃薯茎尖培养实验报告
马铃薯茎尖培养实验报告黄佳妮 27号马铃薯属茄科植物，是分布很广的一种重要作物，既可作粮食，又可作蔬菜，具有重要的经济价值。
在生产中多采用块茎进行无性繁殖，在繁殖过程中易受病毒和细菌侵染导致产量下降。
利用无菌操作通过组织和细胞培养，不但可以产生去病毒的试管苗，还可以缩短生长周期，而进行大批量的快速繁殖。
1 材料与方法1.1实验材料：马铃薯块茎1.2实验方法：1) 配制培养基：MS+GA30.05mg/L+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L+3%蔗糖15g+0.7%琼脂3.5g2) 取材：采用在室内发芽，当芽长到4~5cm时，即可用于剥取茎尖。
3) 消毒：自来水下冲洗20~30min，切成单芽茎段。
将顶芽或侧芽连同部分茎段用70%酒精浸泡5~10s，无菌水冲洗1次，再经0.1%升汞处理8~10min，用无菌水冲洗3~5次。
4) 茎尖剥离：在超净工作台上，剥取茎尖，剥离时一手用镊子将茎芽按住，另一只手用解剖针将叶原基仔细剥掉。
当圆亮半球形的茎尖生长点充分暴露出来时，用锋利的刀片切下大小0.1~0.25mm，带1~2个叶原基的茎尖，并迅速接种到诱导培养基上。
5) 培养：培养条件：温度20~26℃，光照16h/d，光照强度3000lx。
2~3周可形成小芽，4~6周长成小植株。
2 关键技术选择合适的培养基是茎尖培养成功与否的关键，根据前人的实践经验，我们发现MS+GA30.05mg/L+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L+3%蔗糖15g+0.7%琼脂3.5g，PH5.8，为比较好的培养基组合。
其次，每次消毒的芽不要太多，以防放置时间过长，茎尖褐变，用解剖针剥离茎尖时要小心地除去茎尖周围的叶片组织，不要用解剖针来回挑，使芽上的病毒带到茎尖。
3 技术路线图马铃薯块茎20min切成单芽茎段分装接种剥离茎尖瓶1 2 3 44 结果与分析4.1实验结果实验只进行到初代培养，共接种了两批，第一批的培养一段时间后不见有生长，第二批基本成功，有长出愈伤组织并生长出小芽。
马铃薯茎尖脱毒培养技术的研究进展
生 组织 旺 盛 的新 陈 代谢 活 动 。病 毒 的 复制 须利 用 寄 理后 再 进 行茎 尖 剥 离 ，发 现 可 以完 全脱 除 马 铃薯 卷 主 的 代谢 过 程 ，无 法 与分 生 组织 旺盛 的代 谢 活 动竞 叶病 毒 （ Ｌ Ｖ） Ｐ Ｒ ，用 变 温 培 养 处 理 ，Ｖ 脱 毒 率 为 ＰＸ 争 ； ２ 分生 组 织 缺乏 真 正 的维 管组 织 。大 多 数 病 毒 ９ 。 ， （） ６２ 比恒 温热 处 理 Ｐ Ｘ 的脱 毒 率高 。王 秀英 ｌ研 ％ Ｖ １ ｌ 】 在 植 株 内通 过 韧 皮部 进行 迁 移 ，或 在 细胞 间通 过胞 究 表 明 ： 高温 预 处 理对 提 高茎 尖 脱 毒率 效 果 明显 ， 可 问连 丝传 输 ， 为细 胞 与细 胞 间 的移 动速 度 较慢 ， 因 在 以把 不易脱 去 的 Ｐ Ｘ、Ｖ 、Ａ ｖ Ｐ Ｓ Ｐ ＭＶ脱 去 。 Ｓ Ｖ Ｐ Ｔ ｄ是 最 快 速 分 裂 的组 织 中病 毒浓 度 高 峰被 推 迟 ；３ 高 浓 度 难 以除去 的 ， 一 般 的方 法很 难 获得 无 病 毒植 株 ， （） 用 但 的生 长素 。分 生组 织 的生长 素 浓度通 常 很高 ， 可能 影 经过 热处 理则 可 以除去 。 罗玉等 ＿采 取选 健康 整薯 室 ｌ ７ Ｊ
因素 做 出综 述 ．以期 为 马铃 薯茎 尖 脱 毒技 术 的 深入 而 很少 伤 害 寄 主组 织 ， 而抑 制病 毒 的增殖 、 缓病 从 减 研 究 提供参 考 。
毒 在植 株体 内的扩增 速度㈣。 因此 热处 理 可 以提 高 培 养 中去 除病 毒 的能 力 ，但 不 同病 毒 对 高温 预 处 理 的
病 毒是 来 自其 它寄 主植 物 的病毒 。
由于 不 同病 毒在 茎尖分 布 不 同 ， 脱毒 的效 果也 与
马铃薯种薯的茎尖脱毒培养技术.
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5．茎尖培养与病毒检测
5．2 培养 5.2.1外植体培养
从已催出芽（芽长一般2—4cm）的干净健康马铃薯块茎上掰下芽， 用自来水冲洗干净，放入0.1—0.15%的升汞溶液中浸泡8—10分钟，在超 净工作台上消毒完后，放入无菌水中浸泡6次，每次5分钟，然后接种到 MS＋6－BA1.5mg/L（毫克/升）＋GA3 0.5mg/L＋IBA0.5mg/L＋琼脂8g/L ＋蔗糖30g/L（PH值为5.8）的培养基上，每个培养瓶接种1—5个外植体。
任务二马铃薯种薯的茎尖 脱毒培养技术
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1．材料的选择
选择具有 该品种典型特 性、生长健壮 的单株（或无 性系），结合 产量情况，选 择高产、大薯 率高、无病斑 的单株作为茎 尖脱毒的基础 材料，以提高 脱毒效果。
马铃薯种薯
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4．剥离茎尖和接种
在超净工作台上，将消毒过的芽置于40X的解剖镜下，一手用一把眼 科镊子将芽按住，一手用灭过菌的解剖针将叶片一层一层仔细剥掉，直 至露出圆亮的生长点，用锋利的无菌解剖针小心切取0.3毫米以下的带12个叶原基的茎尖，随即将茎尖接种于已准备好的马铃薯茎尖培养基上， 以切面接触琼脂。
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5．茎尖培养与病毒检测
5．3病毒检测
病毒检测的目的，是鉴定所获得的试管苗是否完全脱除所有病毒。
病毒检测方法一般采用指示植物鉴定法、电镜检测法或抗血清鉴定法。
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谢 谢 / THANKS
浅谈马铃薯茎尖脱毒培养技术的研究进展
２０Ｉ３（２）
西 昌 农 业 科 技
·１５·
的发 育 ，但 可 以提高 脱 毒率 ． 制 剂对 马 铃薯 茎 尖 培养脱 毒是 否有 相 同 的效果 ，值 得研 究和探 讨 。刘 华 、冯高 采用 不 同浓 度 高 锰 酸钾 、过 氧 化氢 、新 洁 尔灭 、尿素稀 释 液对 马铃 薯进 行浸 种处 理 ，发 现 病毒 钝 化 明显 。用处 理 过 的薯 块 做种 薯 ，产 量 明显 提 高 。 而Ｃａｓｓｅｌｌｓ，Ａ．Ｃ等 （ｍ 将 病 毒 唑加 入 培养 基 中 ，培 养 马 铃薯 的分 生组 织 和外 植 体 ，可脱 除 马铃 薯 的Ｘ、Ｙ、Ｓ 和Ｍ病 毒 。 ２．３ 热 处理 的使 用
马铃薯茎尖培养脱毒研究进展
组培课程论文题目马铃薯茎尖培养脱毒研究进展学院生命科学技术学院专业生物技术(制品方向)姓名刘小强指导教师李胜职称教授甘肃农业大学生命科学技术学院二〇一一年六月马铃薯茎尖培养脱毒研究进展刘小强（甘肃农业大学生命科学技术学院09级甘肃兰州 730070）摘要: 综述了马铃薯茎尖培养脱毒的原理,影响马铃薯茎尖培养脱毒的因素，马铃薯试管苗快繁技术与培养条件优化等方面的研究进展,指出了茎尖培养脱毒中尚存在的一些问题。
关键词: 马铃薯；茎尖培养脱毒；脱毒试管苗；前景马铃薯是世界上第四大粮食作物，属茄科茄属双子叶植物，其特点是产量高、营养丰富、适应性强、经济价值较高，又是重要的工业原料。
随着农业产业结构的调整和国内外马铃薯加工业的不断发展扩大，市场对马铃薯的需求也逐渐增多，近年来，我国马铃薯的栽培面积不断扩大，占世界第二位。
但是长期以来有“植物癌症”之称的病毒病一直困扰着马铃薯生产的发展。
马铃薯整个生育期均易感染多种病毒病，在我国马铃薯产区危害马铃薯的主要病毒和类病毒有：马铃薯X 病毒（PVX）、马铃薯Y 病毒（PVY）、马铃薯卷叶病毒（PLRV）、马铃薯A 病毒（PVA）、马铃薯S病毒（PVS），还有一种类病毒-马铃薯纺锤块茎类病毒（PSTVD）。
其中PVY、PLRV、PVX 是危害马铃薯最严重的病毒。
田间表现使植株矮小，叶片翻卷、花叶、皱缩，马铃薯品种种性退化，品质变劣，甚至失去种用价值。
目前主要通过茎尖脱毒获得脱毒试管苗的方法防治该病的发生。
目前,马铃薯茎尖培养脱毒的研究及在生产上的广泛应用取得了巨大的经济效益。
近年来, 这方面的研究又取得了不少研究成果, 现作一综述。
1 马铃薯病毒病及茎尖培养脱毒原理目前, 在马铃薯作物上已发现了多种病毒、类病毒以及植原体, 已报道的就有25 种之多, 但仅少数病毒危害严重, 如马铃薯Y 病毒( PVY) 、马铃薯卷叶病毒(PLRV) 、马铃薯A 病毒和 X 病毒(PVA、PVX) 以及马铃薯纺锤块茎类病毒(PSTVD) 等。
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危害马铃薯的病毒有30种之多，如 X病毒、S病毒、Y病毒、M病毒、A 病毒、花叶病毒、纺锤形块茎病毒 等。由于马铃薯是无性繁殖作物， 病毒逐代积累，日益严重，引起严 重退化。马铃薯病毒可使块茎产量 减少50%~80%。
一、马铃薯脱毒技术:
马铃薯在营养繁殖时易受病毒的浸染， 当条件适合时，病毒就会在植株内增殖， 转运和积累，随着世代传递，病毒危害 逐年加重，一般可造成减产50％以上。 研究发现，有30多种病毒易感染马铃薯， 并引起品种退化，严重影响马铃薯的生 产。通过微茎尖组织培养技术能从马铃 薯体内脱除PLRV、PVY、PVA、PAF、 PVG、PVM、PSW等病毒。
因此，采用组织培养技术，通过一 定良种繁殖体系，生产优质种薯， 是保证马铃薯高产、稳产的一项有 效措施。
1．脱毒种薯生产程序
采用微茎尖组织培养的方法，诱导出苗， 采用联免疫吸附试验法或指示植物方法 鉴定马铃薯病毒和类病毒，经鉴定后， 无主要病毒及类病毒的试管苗可定为脱 毒试管基础苗。
试管基础苗在无菌条件下，采用固体、 液体培养基相结合的方法，进行扩繁基 础苗，在防虫网室栽植或封闭温室扦插， 生产出原原种（或称脱毒小薯）。用原 原种在一定隔离条件下产生原种1代， 以后逐级称为原种2代、良种1代、良种 2代。
培养条件：温度21~25℃、光量20003000 lx(勒克斯)、光照12h/d。 2-3周愈伤，4-5周绿点，3--6月长成2-3 厘米小芽，越慢越好，出芽很快的扔掉。
（2） 继代和生根
培养成功的马铃薯脱毒苗，经ELISA（试剂盒） 鉴定后（试管苗应每3月检测一次，每年4次） 鉴定后，采用固体、液体培养基相结合方法扩 繁。取试管苗单节切段扦插在（或平放）固体 培养基上，每瓶可插20个左右茎段，经20d左 右发育成5~10cm高小植株，继续进行切段繁 殖，此法速度快，每月可繁殖5~8倍，试管苗 多节接种在液体培养基上，进行浅层静止液体 培养。
马铃薯茎尖脱毒培养技术的 研究进经济作物。 适应性广，营养价值高，耐贮藏适运 输，既是一种重要的粮食作物也是一 种调节市场供应的重要蔬菜。马铃薯 原产于拉丁美洲，当被发现可以食用 后，很快传到世界各地，成为栽培很 广的一种作物。
但是，当发现从外地引种栽培1~2 个周期后，明显发现产量降低，植 株变矮，并有卷叶的现象产生，经 检测证明这是由于病毒引起的退化 现象。
2．茎尖培养脱毒 （1） 取材和培养
一般多采用在室内发芽，芽经热处理（38℃） 2周。然后取顶芽或侧芽1厘米的茎尖，在自 来水下冲洗干净，无菌条件下先用70％的酒 精浸润组织15-20秒，再用2％的次氯酸钠溶 液浸泡4-5min，然后用无菌水冲洗3次。
把消毒好的芽放在解剖镜下仔细剥离， 逐层剥去幼叶，露出圆滑的生长点，可 以留1-2个叶原基，0.2—0.3毫米，随即 接种于MS液体培养基上，每升加 0.1mgNAA(萘乙酸 ) 、0.2mgGA3 (赤霉 素 ) 、0.5BA(细胞分裂素)，2%蔗糖，p H值5.8。
三、马铃薯无病毒株的繁殖和保存
1．无病毒株的繁殖 通过茎尖培养只能得到很少的无病毒植株，而 生产上需要数以万计的健康种薯。同时无病毒 植株并没有对该病毒获得免疫能力，仍会在繁 殖中再次侵染。如何在以后繁殖中防止受病毒 再侵染是很关键的一环。目前在生产上来用的 方法很多，下面介绍主要的几种。
（１） 直接块茎繁殖 （２） 扦插繁殖 （３） 组织培养切段繁殖 A：继代培养 B：低温保存
2、鉴定寄主的准备
马铃薯常用的鉴定寄主植物有苋科的千日红，茄 科的洋酸浆、毛曼佗罗等。寄主植物应在无虫网室中 培养。
３.接种液制备及接种 叶片洗净后。在消毒的研钵中研成糊状，用 纱布滤出汁液，再用蒸馏水稀释１０倍作为 接种物，在鉴定寄主植物的叶面，６００目 的金刚砂混入接种物中，然后用左手心紧靠 在寄主的背面，以右手实指蘸取接种液，均 匀的在叶背面擦过，以不造成叶片产生伤痕 为度，最后把叶面上多余的接种物用清水冲 洗干净，放置在１５～２４的防虫室中，一 般５－１０天可发病。
3. 脱毒苗切繁
基础苗成活进入正常后便可切繁，但切繁量 的多少和质量的高低，除与前边提到的水与 温湿度条件有关外，能否掌握正确的切繁方 法和适宜的切繁苗龄也是非常重要的。脱毒 苗切繁主要是剪取顶部芽尖茎段（主茎芽尖 和腋芽芽尖）直接扦插。
二、马铃薯无病毒苗的鉴定材料
1、指示植物鉴定
在马铃薯的病毒鉴定中，汁液鉴定是最常用的方法， Ｘ病毒、Ｓ病毒和纺锤块状病毒很容易通过汁液 来接种。
培养基：MS+NAA0.2-0.5+D-泛酸钙10， 3%蔗糖，20-25度，3000-4000LX，1416小时光照，每3周继代一次，单芽茎段 约1厘米，可插也可平放，原则试管苗用 2年—3年。
(3) 驯化
为增强试管苗对温室内环境条件的适应能力， 移植前对试管苗要进行光、温锻炼。炼苗期温 室内的温度：白天23~27℃，夜间不低于14℃。 炼苗的具体方法是：移植前7d左右，将长有 3~5片叶、高2~3cm的试管苗，在不开瓶口的 状态下，从培养室移至温室排好。为防止强光、 高温灼伤试管苗，在温室顶上加盖一层黑色遮 阳网。