欧蒙抗核抗体谱IgG检测标准操作规程精编WORD版

欧蒙抗核抗体谱I g G检

测标准操作规程精编

W O R D版

IBM system office room 【A0816H-A0912AAAHH-GX8Q8-GNTHHJ8】

抗核抗体谱(IgG)检测标准操作规程

1.目的

规范抗核抗体谱(IgG)检测，保证结果的准确性。

2.适用范围

检验科免疫组工作人员。

3.试剂规格名称与组成

型号名称：ANA 谱 1

靶抗原：nRNP/Sm，Sm，SS-A，Ro-52，SS-B，Scl-70，Jo-1，CENP B，dsDNA，核小体，组蛋白，核糖体 P 蛋白

类型：IgG

基质：抗原包被的检测膜条

规格：16×01(16)

4.预期用途：用于体外定性检测人血清或血浆中的抗 nRNP、Sm、SS-A（天然 SS-A 和 Ro-52）、SS-B、Scl-70、PM-Scl、Jo-1、CENP B、PCNA、dsDNA、核小体、组蛋白、核糖体P 蛋白和 AMA M2 共 14 种不同抗原 IgG 类抗体。

5.适应症：夏普综合征（MCTD），系统性红斑狼疮（SLE），干燥综合征，进行性系统性硬化症，多肌炎皮肌炎、重叠综合征、局限型进行性系统性硬化症（CREST 综合征），原发性胆汁性肝硬化。

6.临床意义：抗核抗体识别是各种细胞核组分（细胞核的生化成份）[1,2]，包含核酸、细胞核蛋白及核糖蛋白。可特征性地出现于许多疾病中，尤其是风湿性疾病[3,4,5]。在炎症性风湿性疾病中，这些抗核抗体的阳性率在 20%到 100%之间，以风湿性关节炎的阳性率最低，在 20%至40%之间。因此，ANA 鉴别诊断在对个别风湿疾病的确认十分必要，而且对自身免疫性疾病的进一步诊断也很有价值。[3,6,7,8,9,10,11]

风湿疾病

—夏普综合征（混合结缔组织病＝MCTD)[8]

—系统性红斑狼疮（SLE)[8, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22]

—干燥综合征（原发性干燥综合征）[5],

—系统性硬化症（系统性硬皮病,SSc)[1, 23],

—局限型系统性硬化症（CREST 综合征） [28]

—多肌炎/皮肌炎[12,15]

—类风湿性关节炎[5]

7.主要组成成分：

8.储存条

件

及有效

期： 2-8°C

保存，不

要冷冻。未

开封前，

除非特别

说

明，试剂盒自生产日起可稳定 18 个月。稀释后的酶结合物和清洗缓冲液需在一个工作日内用完。

9.样本要求

样本：人血清或 EDTA 、肝素或柠檬酸盐抗凝的血浆。

稳定性：待检患者样本于 2-8°C 可稳定 14 天，稀释后的样本应在同一个工作日内检测。

样本稀释：

患者样本用样本缓冲液 1:101 稀释，如可取 15ul 血清用 1.5ml 样本缓冲液稀释并用漩涡混匀器充分混匀。不可用加样器混匀。

6. 底物液

NBT/BCIP （四唑硝基苯胺兰/5-溴-4-氯啶-3-吲 哚-磷酸盐），直接使用

1×

30ml 4×30ml

SUBSTRATE

7. 温育盘

2x8 槽 ---

8. 产品说明书

1 份

1 份

LOT 试剂批号 储存温度

IVD 体外检测 未开封可稳定至

10.检验方法

10.1试剂的准备和稳定性

注意：使用前所有试剂均必须于室温（18-25°C）平衡 30 分钟。从第一次使用起，试剂盒如保存在 2-8°C，并且在没有污染的情况下，可稳定至所标示的有效期。

- 包被抗原的检测膜条：直接使用。为防止膜条发生冷凝，只有当膜条平衡到室温后才可打开包装。取出膜条后应立即密封好原包装并将其保存于 2-8°C。

- 阳性对照：100 倍浓缩。使用时用干净的吸管从瓶中吸取所需阳性对照，用样本缓冲液 1:101 稀释如：15ul 阳性对照用 1.5ml 样本缓冲液稀释并充分混匀。已稀释的阳性对照应在同一个工作日用完。

- 酶结合物：10 倍浓缩。使用时用干净的吸管从瓶中吸取所需酶结合物，并用样本缓冲液 1:10 稀释。如需温育一条检测膜条，用 1.35 ml 样本缓冲液稀释 0.15 ml 酶结合物。已稀释的酶结合物应在同一个工作日用完。

- 样本缓冲液：直接使用。

- 清洗缓冲液：10 倍浓缩。使用时用干净的吸管从瓶中吸取需要量用蒸馏水 1:10 稀释。如需温育一条膜条，用 9ml 蒸馏水稀释 1ml 浓缩缓冲液。稀释后的缓冲液应在同一个工作日用完。

- 底物液：直接使用，对光敏感，使用后应立即盖紧瓶盖。

10.2操作流程

预处理:取出所需的膜条，将其放入温育槽内。膜条上有编号的一面朝上。在温育槽中分别加入 1.5ml 样本缓冲液，于室温在摇摆摇床上温育 5 分钟后，吸去温育槽中的液体。血清温育第一次:

在温育槽中分别加入 1.5 ml 已稀释的血清样本，在摇摆摇床上室温（18°C-

25°C）温育 30 分钟。

清洗: 吸去槽内液体，在摇摆摇床上用 1.5ml 清洗缓冲液清洗膜条 3 次，每次 5 分钟。酶结合物温育第二次:

在温育槽中加入 1.5ml 已稀释的酶结合物（碱性磷酸酶标记的抗人 IgG），于摇摆摇床上室温温育 30 分钟。

清洗: 吸去槽内液体，在摇摆摇床上用 1.5ml 清洗缓冲液清洗膜条 3 次，每次 5 分钟。底物温育第三次:

在温育槽中分别加入 1.5ml 底物液，于摇摆摇床上室温（18°C-25°C）温育 10

分钟。

终止: 吸去槽内液体，用蒸馏水清洗膜条 3 次，每次 1 分钟。

结果判断: 将检测膜条放置在结果判定模板中，风干后判断结果。