实验用培养基适用性检查标准操作规程讲述
控制菌检查用培养基适用性检查操作规程
控制菌检查用培养基适用性检查操作规程一、引言本操作规程旨在规范采用适用性检查方法验证控制菌检查用培养基的适用性的操作过程，确保检查结果准确可靠，提高微生物控制的有效性。
二、范围本操作规程适用于生物药品、食品、化妆品等行业的微生物控制实验室。
三、设备和试剂准备1.培养皿和管子：采用符合国家标准的试剂器皿。
2.培养基：根据实际需要选择合适的培养基，确保培养基的质量符合相关标准。
3.培养基密度标准液：用于调整培养基的密度。
4.液体融化装置：用于融化固体培养基。
5.无菌纸片和无菌棒：用于为菌液接种提供无菌工具。
6.灭菌器：用于灭菌培养器皿和试剂。
7.放射源：用于灭菌工作区域。
8.荧光显微镜：用于观察菌落生长。
9.消毒液和洗涤剂：用于清洗工作台和培养器皿。
四、操作步骤1.准备工作台和操作区域，进行必要的消毒和清洁。
2.准备所需的培养基和试剂。
3.确保培养基质量合格，根据需要使用培养基密度标准液调整培养基的密度。
4.打开培养基瓶盖，将培养基倒入清洁的培养皿或管子中，尽量避免有气泡产生。
5.放入灭菌器中进行灭菌，确保培养器皿和试剂的无菌状态。
6.露肩接种法将待测菌液接种于培养皿表面，接种菌液的体积应适量，避免过多或过少。
7.使用灭菌的无菌棒均匀涂抹接种菌液，确保菌液均匀分布在培养基表面。
8.均匀涂抹后，用无菌纸将菌液多余部分吸干。
9.将接种好的培养皿密封，放入恒温培养箱中进行培养，温度和时间根据具体培养基要求确定。
10.培养箱内的培养皿应避免震动和突然变化的温度。
11.培养一定时间后，取出培养皿进行观察。
12.使用荧光显微镜观察菌落生长情况，记录菌落数量和形态特征。
13.根据培养基的功能和使用要求，进行结论判断。
14.清洗灭菌培养器皿和试剂，彻底清洗工作区域，确保无菌状态。
五、质量控制1.确保培养基和试剂的质量符合相关标准。
2.使用灭菌的无菌器皿和试剂，避免污染。
3.严格控制接种菌液的体积，避免过多或过少的接种量。
培养基适用性检查标准操作规程
培养基适⽤性检查标准操作规程培养基适⽤性标准操作规程1⽬的规范培养基适应性检查的标准操作。
2范围本规程适⽤于《中华⼈民共和国药典》2010年版⼆部规定微⽣物限度检查中成品培养基、由脱⽔培养基或按处⽅配制的培养基均应进⾏培养基适⽤性检査。
3责任3.1本规程由质量保证中⼼主任指定⼈员起草。
3.2与本⽂件相关的部门负责⼈参与审阅，企业质量负责⼈批准本⽂件。
3.3质量控制中⼼负责具体实施本规程。
4内容4.1依据4.1.1《药品⽣产质量管理规范》（2010年修订）4.1.2《中华⼈民共和国药典》2010年版⼆部4.2试验⽤菌株及培养基4.3试验⽤仪器设备4.3.1恒温培养箱（30～35℃）、霉菌培养箱（23～28℃）、蒸汽压⼒灭菌器、净化⼯作台、电热⼲燥箱、恒温⽔浴锅、振荡器、电冰箱、天平4.3.2锥形瓶、培养⽫（9cm）、量筒、试管及塞、吸管（1ml分度，10ml分度）4.3.3接种环、⼄醇灯、⼄醇棉球或碘伏棉球、⽕柴、记号笔、灭菌镊⼦、不锈钢药匙、⽩瓷盘。
4.4操作步骤4.4.1菌液的制备接种⼤肠埃希菌、⾦黄⾊葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物⾄营养⾁汤培养基中，于30～35℃培养18～24h。
取30～35℃培养18～24h的⼤肠埃希菌、⾦黄⾊葡萄球菌、枯草芽孢杆菌营养⾁汤新鲜培养物1ml，⽤%⽆菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每1ml 含菌数50～100cfu的菌悬液，备⽤。
接种⽩⾊念珠菌的新鲜培养物⾄改良马丁培养基上，于23～28℃培养24～48h。
取于23～28℃培养24～48h的⽩⾊念珠菌新鲜培养物1ml，⽤%⽆菌氯化钠溶液10倍递增稀释每1ml含菌数50～100cfu的菌悬液备⽤。
接种⿊曲霉菌的新鲜培养物⾄改良马丁琼脂斜⾯培养基上，于23～28℃培养5～7天，加⼊3～%（ml/ml)聚⼭梨酸酯80的%⽆菌氯化钠溶液，将孢⼦洗脱，然后，⽤适宜的⽅法吸出孢⼦悬液⾄⽆菌试管内，⽤含%（ml/ml)聚⼭梨酸酯80的%⽆菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每1ml含孢⼦数50～100cfu的孢⼦悬液备⽤。
103培养基的适用性检查和方法适用性试验操作规程
103培养基的适用性检查和方法适用性试验操作规程一、适用性检查操作规程1.目的适用性检查的目的是评估103培养基在特定微生物种类的培养和生长方面的适用性。
该操作规程旨在确保试验能够准确、可靠地评估103培养基的适用性。
2.实验器材和试剂-103培养基-微生物种类样品-混合废液-恒温培养箱-离心机-吸管或移液管-培养皿或试管3.实验步骤3.1.将103培养基根据要求制备好，确保无菌。
3.2.取微生物种类样品分别接种到103培养基上。
3.3.按照正常培养条件进行孵育，如温度、湿度和气氛条件等。
3.4.观察培养基上的微生物生长情况，记录并比较不同菌株之间的差异。
3.5.对比观察培养基和其他培养基的结果，评估103培养基在不同微生物种类上的适用性。
4.结果与分析4.1.分析培养基上不同微生物种类的生长情况，评估培养基的适用性。
4.2.根据观察结果，可以得出结论，103培养基是否适用于特定微生物种类的培养和生长。
5.结论和建议根据实验结果，验证103培养基的适用性并给出相应的结论和建议，如培养基的优点、缺点、适用范围和注意事项等。
1.目的方法适用性试验旨在评估103培养基在特定微生物检测方法中的适用性，确保能够准确、可靠地检测目标微生物的存在。
2.实验器材和试剂-103培养基-微生物样品-培养皿或试管-移液管或吸管-离心机-过滤膜3.实验步骤3.1.根据目标微生物的检测方法要求，准备好所需的实验器材和试剂。
3.2.用103培养基制备好所需的培养基和培养条件。
3.3.取微生物样品，按照检测方法要求处理样品。
3.4.将处理后的样品分别接种到103培养基上，确保无菌。
3.5.按照检测方法要求进行培养和检测。
3.6.观察培养基上的微生物生长情况，并比较不同微生物检测方法的结果。
4.结果与分析4.1.分析不同微生物检测方法的结果，评估103培养基在特定检测方法中的适用性。
4.2.根据实验结果，可以得出结论，103培养基是否适用于特定微生物检测方法。
培养基灵敏度及适用性检查操作规程
1. 目的：通过培养基适用性检查，确保购买的培养基符合实验要求。
2. 范围：本规程适用于技术质量部实验员对培养基适用性的检查。
3. 职责：质量部实验员负责执行此规程。
4. 内容：4.1 检验依据：《中华人民共和国药典》2015版4.2 试验用具：烧杯、三角瓶、酒精灯、接种环、平皿、试管、吸管、移液枪、滴管、电子天平、电热恒温培养箱、生化培养箱或恒温恒湿培养箱、单人净化工作台、高压蒸汽灭菌器、微生物限度仪、漩涡混合器、试验菌种、检查用培养基等。
4.3 无菌培养基适用性检查：本检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌检查同时进行。
4.3.1 培养基：硫乙醇酸盐流体培养基、胰酪大豆胨液体培养基或胰酪大豆胨琼脂培养基（培养基的配制按《培养基配制操作规程》配制）。
4.3.2 稀释液、冲洗液及其制备方法稀释液、冲洗液配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
a) 0.1%无菌蛋白胨水溶液取蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，滤清，调节pH值至7.1±0.2，分装，灭菌。
b) pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液取磷酸二氢钾3.56g，无水磷酸氢二钠5.77g，氯化钠4.30g，蛋白胨1.00g，加水1000ml，微温溶解，滤清，分装，灭菌。
c) 根据供试品的特性，可选用其他经验证过的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液（如0.9%无菌氯化钠溶液）。
如需要，可在上述稀释液或冲洗液的灭菌前或灭菌后加入表面活性剂或中和剂等。
4.3.3 无菌性检查：每批培养基随机取不少于5支（瓶），置各培养基规定的温度培养14天，应无菌生长。
4.3.4 灵敏度检查4.3.4.1 菌种培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的干燥菌种为第0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus ）〔CMCC（B）26 003〕铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa ）〔CMCC（B）10 104〕枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）〔CMCC（B）63 501〕生孢梭菌（Clostridium sporogenes）〔CMCC（B）64 941〕白色念珠菌（Candida albicans）〔CMCC（F）98 001〕黑曲霉（Aspergillus niger）〔CMCC（F）98 003〕4.3.4.2 菌液制备a) 接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24小时；b) 接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养24～48小时，上述培养物用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu（菌落形成单位）的菌悬液。
培养基使用性检查操作规程
培养基适用性检查操作规程编制人：日期：部门：微生物室审核人：日期：替代：批准人：日期：执行日期：1、目的建立一个培养基适用性检查操作规程。
2、适用范围微生物限度及无菌检查的成品培养基，由脱水培养基或按处方配置的培养基均应进行培养基适用性检查。
3、检验依据按2010年版《中国药典（一、二部）》附录无菌方法进行测试检查。
4、试验所需菌种大肠埃希菌；金黄色葡萄球菌；枯草芽孢杆菌；生孢梭菌；白色念珠菌；黑曲霉。
5、标准规定5.1 无菌培养基使用性检查5.1.1 无菌性：每批培养基随机取不少于5支（瓶），经培养14天应无菌生长。
5.1.2 灵敏度：经培养对照管应无菌生长，试验管接菌小于100cfu均应生长良好。
5.2 微生物限度使用性检查5.2.1 细菌、霉菌和酵母菌计数检查取标准菌株大肠、金葡、枯草、白念、黑曲霉菌50～100cfu,分别接入于测试与对照培养基，经规定温度、时间培养，测试结果测试与对照培养基平均菌落数比不应小于70%。
5.2.2 金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌检查取新鲜标准菌株大肠、金葡、铜绿假单胞菌制备使成10～100cfu菌悬液，分别对测试与对照培养基进行促生长能力、抑制能力及指示能力测试，结果被测培养试验菌的生长反应情况与对照培养基一致。
（液体培养基应记录为生长良好/生长微弱/未生长；固体培养基应记录为符合xx菌特征/不符合xx菌特征）。
5.2.3 大肠埃希菌、大肠菌群检查取新鲜标准菌株大肠、金葡球菌制备使成10～100cfu菌悬液，分别对测试与对照培养基进行促生长能力、抑制能力即指示能力测试，结果被测培养基试验菌的的生长反应情况应与对照培养基一致。
（液体培养基应记录为生长良好/生长微弱/未生长；固体培养基应记录为符合xx菌特征/不符合xx菌特征）。
5.2.4白色念珠菌、梭菌检查取新鲜标准菌株大肠、白念、生孢梭制备使成10～100cfu菌悬液，分别对测试与对照培养进行促生长能力、抑制能力及指示能力测试，结果被测培养基试验菌的生长反应情况应与对照培养基一致。
培养基配制及适用性检查操作规程
XXXXXXXX有限公司质量控制管理制度1 目的：建立培养基配制及适用性检查的标准操作规程，规范实验人员的操作流程。
2 范围：适用于微生物检验人员对培养基的规范管理。
3 依据：《药品生产质量管理规范（2010年修订）》、《中华人民共和国药典》2015年版第四部。
4 职责：4.1 微生物检验员：负责实验室所需求的培养基管理工作，使日常检验可以顺利进行。
4.2微生物检验主管：负责对日常配制培养基的规范操作进行监督。
5 内容5.1 培养基的申购：根据检验项目、工作量和工作进度的需求，提前一个月进行所需的培养基申购。
申购时需指定培养基供应商，必要时进行供应商审计。
5.2 培养基的验收5.2.1 培养基到货后，微生物室检验员应进行验收。
验收内容包括核对品名、数量、规格、生产厂商，应与申购单一致；检查培养基包装有无破损、包装是否完整、产品是否在有效期内。
5.2.2 验收合格后，登记于《培养基领用台账》（附记录文件编号：ZL-041）5.3 培养基的贮藏5.3.1 未开封的培养基贮存低温、干燥、和避光条件下。
已开封的培养基应盖紧，贮存于阴凉处。
5.3.2灭菌后培养基储存期为7天。
5.4 培养基的配制5.4.1培养基的配制和使用应填写《培养基配制及使用记录》（附记录文件编号：ZL-025）。
5.4.2培养基配制方法5.4.2.1 使用商品化合成培养基时，应严格按照厂商提供的使用说明配制，如重量/体积、灭菌条件和操作步骤等。
5.4.2.2 水、容器具要求：培养基配制均采用纯化水，培养基配制所用容器和配套器具应洁净。
5.4.2.3 称量与分装：快速称量所需量的合成培养基（必要时佩戴口罩或在通风柜中操作，以防吸入含有有毒物质的培养基粉末）。
以免吸潮。
先加入适量的水，充分混合。
注意避免培养基结块，然后加水至所需的量。
根据说明书要求选择是否加热。
分装体积不超过容器体积的2/3。
配制斜面等含琼脂的培养基也需加热煮沸至完全溶解后分装。
1SOP-QM-8068-00 培养基配制、使用及适用性检查操作规程
1.目的：建立培养基的配制、使用、适用性检查的操作规程，使其操作规范化，避免人为的错误。
2.范围：本规程适用于微生物限度检查所使用的培养基。
3.责任：本文件由QC检验员负责起草，QA主管审核，质量部经理批准；QC检验员实施。
4.内容：4.1.设备、仪器及用具、试液、培养基、菌种4.1.1设备1.1.1.净化工作台（洁净度为100级）、生化培养箱、恒温培养箱、电热恒温水浴锅、高压蒸汽消毒器、电热恒温干燥箱（最高工作温度300℃）、冰箱。
4.1.2仪器及用具1.1.2.托盘天平、显微镜、酒精灯、灭菌剪刀、接种环、接种针、灭菌镊子、大小橡皮乳头（放于干净带盖的容器中，并定期用70～75%乙醇溶液浸泡）、记号笔。
1.1.3.锥形瓶、吸管、试管、培养皿（90mm）、量筒。
1.1.4.洁净服、帽、口罩（用牛皮纸包严）灭菌，备用。
4.1.3试液1.1.5.消毒液（0.1%新洁尔灭、75%乙醇溶液、5%来苏儿溶液），稀释剂（0.9%无菌氯化钠溶液），靛基质试液（柯凡克试剂或欧-波氏试剂）、结晶紫染液、碘液、95%乙醇、沙黄染液、溴麝香草酚蓝指示剂。
4.1.4.培养基营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基（霉菌及酵母菌计数用）、营养肉汤培养基、胆盐乳糖发酵培养基、胆盐乳糖培养基。
4.1.5菌种大肠埃希菌[CMCC(B) 44102]、金黄色葡萄球菌[CMCC(B) 26003]、枯草芽孢杆菌 [CMCC(B) 63501]、乙型副伤寒沙门菌[CMCC(B) 50094]、白色念珠菌 [CMCC(F) 98001]、黑曲霉 [CMCC(F) 98003]4.2.培养基适用性的检查4.2.1.培养基质量检查对初次使用的或新购进的培养基均要按批准的规定程序进行验证、检验，即适用性检查，即已知菌对照试验，并做好检查记录。
内容包括：名称、配制日期、接种菌名称、接种菌培养（阳性检查）结果、未接种菌培养（阴性检查）结果、PH值、结论、检查日期、检查者。
培养基适用性检查操作规程
培养基适用性检查操作规程
1．目的：检查培养基对相关菌种的适用性，保证微生物实验结果的有效性。
2. 适用范围：适用于首次使用的培养基种类、购入的新批次培养基的适用性检查。
3. 依据：《中国药典》（2010版）四部：无菌检查法/微生物限度检查法-培养基的适用性检查
4. 职责：微生物检验员实施，QA监督。
5. 内容：
5.1 设备和材料
恒温培养箱、无菌培养皿/试管、接种环、酒精灯/火焰喷枪、超净工作台、＜100CFU/ml 的工作菌液、灭菌后的培养基（无菌检查用、计数用）
5.2 培养基适用性检查-无菌检查用
5.2.1 无菌性：
每种培养基每批随机抽取不少于10支，其中5支置30~35℃、另5支置20~25℃培养14天。
14天后均应无菌生长。
5.2.2 灵敏度
取培养基3支，其中2支接种相应的工作菌液各1ml，另1支不接种，作为空白对照，置30~35℃培养3天（或20~25℃培养5天）。
逐日观察结果。
空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，则判定该培养基的灵敏度检查符合规定。
5.3 培养基适用性检查-计数用
取无菌培养皿，吸取相应的工作菌液各1ml注入无菌培养皿，立即倾注培养基，每株试验菌接种2个培养皿，混匀，凝固。
同时用对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
置30~35℃培养48小时（或23~28℃培养72小时），计数。
若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态、大小应与对照培养基上的菌落一致，则判断该培养基的适用性检查符合规定。
6.相关表格：《培养基适用性检查记录》。
培养基适用性检查标准操作规程
培养基适用性标准操作规程第 1 页共4页1目的规范培养基适应性检查的标准操作。
2范围本规程适用于《中华人民共和国药典》2010年版二部规定微生物限度检查中成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检査。
3责任3.1本规程由质量保证中心主任指定人员起草。
3.2与本文件相关的部门负责人参与审阅，企业质量负责人批准本文件。
3.3质量控制中心负责具体实施本规程。
4内容4.1依据4.1.1《药品生产质量管理规范》（2010年修订）4.1.2《中华人民共和国药典》2010年版二部4.2试验用菌株及培养基4.3试验用仪器设备4.3.1恒温培养箱（30～35℃）、霉菌培养箱（23～28℃）、蒸汽压力灭菌器、净化工作台、电热干燥箱、恒温水浴锅、振荡器、电冰箱、天平4.3.2锥形瓶、培养皿（9cm）、量筒、试管及塞、吸管（1ml分度0.01，10ml分度0.1）4.3.3接种环、乙醇灯、乙醇棉球或碘伏棉球、火柴、记号笔、灭菌镊子、不锈钢药匙、白瓷盘。
4.4操作步骤4.4.1菌液的制备4.5.1.1 接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，于30～35℃培养18～24h。
取30～35℃培养18～24h的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌营养肉汤新鲜培养物1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每1ml含菌数50～100cfu的菌悬液，备用。
4.5.1.2 接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基上，于23～28℃培养24～48h。
取于23～28℃培养24～48h的白色念珠菌新鲜培养物1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释每1ml含菌数50～100cfu的菌悬液备用。
4.5.1.3 接种黑曲霉菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，于23～28℃培养5～7天，加入3～5ml0.05%（ml/ml)聚山梨酸酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，然后，用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml)聚山梨酸酯80的0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每1ml含孢子数50～100cfu的孢子悬液备用。
149培养基配制及适用性检查操作规程
4定义培养基：供微生物生长的人工配制养料，一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）以及生长素和水等。
应进行培养基的适用性检查。
5程序5.1培养基的制备按处方生产的符合规定的脱水培养基加纯化水进行配制。
5.2 常用培养基的配制5.2.1 营养琼脂培养基5.2.1.1制法：称取脱水培养基粉末32g,加纯化水至1000ml,煮沸，分装于250ml的锥形瓶中，每瓶200ml,用棉塞塞好，用两层牛皮纸包好，121℃灭菌15min，备用。
5.2.1.2用途：供细菌计数微生物限度检查中的细菌数测定。
5.2.2玫瑰红钠琼脂培养基5.2.2.1制法：称取脱水培养基粉末30.5g,加纯化水至1000ml, 煮沸，分装于250ml的锥形瓶中，每瓶200ml,用棉塞塞好，用两层牛皮纸包好，121℃灭菌15min，备用。
5.2.2.2用途：供霉菌、酵母菌检验。
5.2.3 胆盐乳糖培养基5.2.3.1制法：称取脱水培养基粉末35.8g,加纯化水至1000ml, 煮沸，分装于100ml的锥形瓶中，每瓶100ml,用棉塞塞好，用两层牛皮纸包好，121℃灭菌15min，备用。
5.2.3.2用途：供大肠埃希菌检验。
5.2.4 4-甲基伞型酮葡萄糖苷酸（MUG）培养基5.2.4.1制法：称取脱水培养基粉末2.33g,加纯化水至100ml, 煮沸，分装于20ml的试管中，每支5ml,用棉塞塞好，用两层牛皮纸包好，121℃灭菌15min，备用。
5.2.4.2用途：供大肠埃希菌检验5.2.5 乳糖胆盐发酵培养基5.2.5.1制法：称取脱水培养基粉末3.5g,加纯化水至100ml, 煮沸，分装于25ml的试管中，每管10ml，用棉塞塞好，用两层牛皮纸包好，121℃灭菌15min，备用。
5.2.5.2用途：大肠菌群检验5.2.6硫乙醇盐流体培养基5.2.6.1制法：称取脱水培养基粉末29.25g,加纯化水至1000ml, 煮沸，分装于500ml的玻璃瓶中，每瓶300ml,用胶塞塞好，密封压盖。
实验室管理制度及职责-无菌检查用培养基的适用性检查标准操作规程 SOP-QC-026-V1.0
目的：建立一个无菌检查用培养基适用性检查的标准操作规程。
范围：适用于实验室检验操作者。
职责：实验室检验人员对实施本标准负责。
内容：1、概述：培养基质量是影响微生物检验结果的重要环节，无菌检查用培养基的无菌性检查和灵敏度检查无菌检查结果判断的重要影响因素。
2、培养基适用性检查的范围：2020年版《中国药典》规定微生物检查中成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。
3、试验用菌株金黄色葡萄球菌［CMCC(B)26003］、铜绿假单胞菌［CMCC(B)10104］、枯草芽孢杆菌［CMCC(B)63501］生孢梭菌［CMCC(B)64941］、白色念珠菌［CMCC(F)98001］、黑曲霉［CMCC(F)98003］4、试验用培养基①胰酪大豆胨液体培养基（TSB）或硫乙醇酸盐流体培养基（FTM）②培养基批号：培养基英文首字母简写+年份后两位+月份+号数+配制批（例：2020.12.25配制的胰酪大豆胨液体培养基第一批——TSB20122501）5、试验用稀释剂①0.9%无菌氯化钠溶液②含0.05%（ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液6、试验用仪器设备①恒温培养箱（30—35℃）、恒温培养箱（20—25℃）、湿热灭菌器、生物安全柜。
②锥形瓶、烧杯、试管及试管塞、移液器（100μl—1000μl）、移液器（1ml—10ml）。
③一次性接种环、一次性涂布棒、酒精灯、酒精棉球、打火机、记号笔等。
6、操作步骤：①培养基无菌性检查：每批培养基随机取不小于5瓶(支)，培养14天，应无菌生长。
②培养基灵敏度检查：菌液的制备a接种铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，于30～35℃培养18～24h，取上述培养物1ml，用 0.9%无菌氯化钠溶液或PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10倍递增稀释制成每1ml含菌数不大于100cfu的菌悬液，备用。
微生物实验室培养基适用性操作规程
微生物实验室培养基适用性操作规程建立培养基适用性检查操作规程，保证培养基的质量，确保检验结果的准确性。
本规程规定了培养基适用性检查方法和操作要求，适用于微生物实验室计数用培养基、控制菌检查用培养基的适用性检查。
1、简述1.1 培养基适用性检查试验可用于确定实验室所使用培养基(包括购置的不同批号的成品培养基、不同批号的脱水培养基、按处方自行配制培养基所用不同批次的原材料等)、制备程序（包括水质控制、配制方法、灭菌程序等）、保存条件（温度、湿度、时间及盛装培养基的容器条件等）等是否满足微生物限度检查要求。
1.2 计数用培养基适用性检查包括需氧菌、霉菌及酵母菌总数计数。
1.3 控制菌检查用培养基适用性检查包括促生长能力、抑制能力及指示特性的检查。
2 计数用培养基适用性检查微生物限度检查中计数用培养基有5种，胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基、R2A琼脂培养基、平板计数培养基。
2.1 培养基及配制2.1.1 培养基：胰酪大豆胨琼脂培养基、胰酪大豆胨琼脂对照培养基；沙氏葡萄糖琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂对照培养基；R2A琼脂培养基、R2A琼脂对照培养基；平板计数培养基。
2.1.2 配制：照《培养基配制标准操作规程》配制。
2.2 试剂及稀释剂配制2.2.1 试剂：pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液、聚山梨酯80、氯化钠。
2.2.2 稀释剂配制➢∙pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：称取pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液14.63g,加水1000mL溶解，分装，灭菌（121℃、15min）。
➢∙0.05％（mL/mL）聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：取已经灭菌好的聚山梨酯80（1mL），加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，摇匀，即得。
➢∙0.9％无菌氯化钠溶液：称取氯化钠9.0g，加水溶解使成1000mL，分装，灭菌（121℃、15min）。
3 试剂及消毒液配制3.1 试剂新洁尔灭溶液、84消毒液、苯酚、75％医用消毒酒精。
培养基使用性检查操作规程
培养基使用性检查操作规程一、目的为了保证培养基使用性能的准确性和可靠性，提高实验的可重复性和数据的可比性，制定本操作规程。
二、范围本操作规程适用于所有使用培养基进行实验的实验室。
三、基本要求1.培养基的制备应严格按照相关标准和实验方法进行，确保结果的准确性。
2.培养基的使用前应进行必要的性能检查，包括外观检查、pH值检查、无菌性检查等。
3.培养基的使用应遵循实验室的质量管理体系，在规定的环境下进行操作，保证实验数据的可信度。
四、操作步骤1.外观检查（1）取适量的培养基进入清洁的透明容器中。
（2）观察培养基的颜色、气味、透明度等特征。
（3）如培养基颜色异常、有异味或有悬浮物等异常情况，应停止使用，并报告有关部门。
2.pH值检查（1）取适量的培养基进入清洁的容器中。
（2）使用pH计将电极插入培养基中，稳定数秒。
（3）记录pH值，并与标准值进行对比。
（4）如pH值明显偏离标准值，应停止使用，并调整或重新制备培养基。
3.无菌性检查（1）取适量的培养基进入清洁的容器中。
（2）将容器密封后，通过高压蒸汽灭菌器进行灭菌处理，时间和温度按照实验要求进行设置。
（3）取适量培养基后，进行细菌培养或真菌培养的无菌性检查。
（4）观察培养基是否有细菌或真菌生长，如有生长应停止使用，并进行必要的分析和处理。
4.其他检查（1）根据具体实验需求，进行其他必要的检查，如营养成分检查、凝固性检查、适用菌种检查等。
（2）根据实验室的质量管理要求，记录检查结果，并进行必要的数据分析和报告。
五、质量控制1.操作人员应具备必要的实验技术和操作经验，并参加相关的培训和考核。
2.培养基的制备和使用应符合实验室的相关质量管理体系的要求，包括设备的校准、试剂的验证和记录等。
3.培养基的存储和管理应按照相关规定进行，确保使用时的质量。
4.定期对培养基的性能进行复核，确保实验数据的可靠性。
六、异常处理1.如培养基在外观检查、pH值检查、无菌性检查等环节出现异常，则应停止使用，并进行必要的分析和处理。
SOP-QC10018 培养基适用性检查标准操作规程
培养基适用性检查标准操作规程1. 目的1.目的建立培养基配制适用性检查的标准操作规程，规范实验人员的操作。
2. 范围适用于微生物检验人员对培养基的规范管理。
3. 依据药品生产质量管理规范（2010年版修订）、《中华人民共和国药典》第四部4. 职责4.1 微生物检验员：负责实验室所需求的培养基管理工作，使日常检验正常进行。
4.2 微生物检验主管：负责对日常配制培养基的规范操作进行监督。
5. 程序5.1 培养基的贮藏5.1.1 未开封的胶水培养基贮存于阴谅室，使用培养基处于低温、干燥、和避光条件下。
开封的胶水培养基应盖紧，贮存于阴谅库。
5.1.2 灭菌好的培养基应进行预培养72h检查无菌后，置4～8℃冷藏保存，培养基储存期为7天。
5.2 培养基的配制应填写培养基配制及使用记录。
供试品微生物计数中所使用的培养基应进行适用性检查。
5.3 培养基的质量控制5.3.1 计数培养基适用性检查菌种及菌液制备菌种试验用菌株的传代次数不得超过5代( 从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0代)，并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
计数培养基适用性检查和计数方法适用性试验用菌株见表1。
菌液制备按表 1规定程序培养各试验菌株。
取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液;取黑曲霉的新鲜培养物加入适量含0.05% ( ml/mI)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或含0.05% ( mI/mI )聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。
然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%( mI/ml )聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或含0.05% ( mI/ml )聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液。
菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用;若保存在2～ 8C,可在24小时内使用。
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Date:
质量部QD
目的Purpose
为保障微生物检验的准确性及相关工作特制定本规定。
范围Scope
本程序适用于微生物限度测定培养基的适用性检查及相关工作。
职责Responsibility
分析员：严格按照本操作规程执行。
及时完成各类相关记录。
在主管的指导下进行任何可能的OOS及偏差调查。
主管：监督本操作规程的执行。
对检验员进行必要的培训。
指导任何可能的OOS和偏差调查。
内容procedure
1检验员应根据培养基配制程序或培养基各自的说明书配制培养基。
2试验用菌种及培养基
2.1菌种:
2.1.1培养基灵敏度测试所用的菌株传代次数不得超过5代，从国家药检所或菌种保藏中心购买。
2.1.2枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)[ATCC 6633]
2.1.3大肠埃希菌(Escherichia coli) [ATCC 8739]
2.1.4金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) [ATCC 6538]
2.1.5白色念珠菌(Candida albicans) [ATCC 10231]
2.1.6黑曲霉(Aspergillus niger)[ATCC 16404]
2.1.7伤寒沙门菌(Salmonella) [ATCC 14028]
2.1.8铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) [ATCC 9027]
2.2培养基
2.2.1按照培养基说明书进行配制灭菌。
2.2.2大豆酪蛋白消化肉汤Soybean-Casein Digest Broth
2.2.3大豆酪蛋白消化琼脂Soybean-Casein Digest Agar
2.2.4沙氏葡萄糖琼脂Sabouraud Dextrose Agar
2.2.5肠道菌增菌肉汤Enterobacteria Enrichment Broth Mossel
2.2.6紫红色胆汁葡萄糖琼脂Violet Red Bile Glucose Agar
2.2.7麦康凯肉汤MacConkey Broth
2.2.8麦康凯琼脂MacConkey Agar
2.2.9RV沙门氏菌富集肉汤Rappaport Vassiliadis Salmonella Enrichment Broth
2.2.10木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂Xylose Lysine Deoxycholate Agar
2.2.11甘露醇氯化钠琼脂培养基Mannitol Salt Agar
2.3微生物计数培养基的适用性检查
2.3.1微生物计数用的成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。
2.3.2菌悬液的制备
2.3.3上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.2磷酸盐缓冲液制成每1ml含菌数不大于100cfu的菌悬
液，制备黑曲霉孢子悬浮液时，添加3-5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液
或pH7.2磷酸盐缓冲液，将孢子洗脱。
然后，用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%
（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%菌氯化钠溶液或pH7.2磷酸盐缓冲液制成每1ml含孢子数不大于100cfu
的孢子悬液。
菌悬液在室温下放置应在2小时内使用，若保存在2～8℃可在24小时内使用。
黑曲
霉孢子悬液可保存在2-8℃，在验证过的贮存期内使用。
2.4大豆酪蛋白消化肉汤促生长试验
2.4.1取以上前3种菌悬液各0.1ml(不大于100cfu)，分别注入灭过菌的含有10ml大豆酪蛋白消化肉汤的
试管中，于30℃-35℃培养不超过3天。
同时用相应的上一批通过促生长试验的培养基替代被检培
养基进行上述试验。
培养结束后进行观察，如果肉眼能清晰看到的微生物的生长与上一批通过促生
长试验的培养基的生长情形基本一致，则判定此培养基通过促生长试验。
反之则判定此培养基不符
合规定，未通过促生长试验。
2.5 大豆酪蛋白消化琼脂和沙氏葡萄糖琼脂促生长试验
2.5.1 取以上5种菌悬液各1ml （不大于于100cfu ），分别注入无菌平皿中，立即倾注大豆酪蛋白消化琼
脂，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀、凝固，置30℃-35℃培养不超过3天，计数，后2种菌悬液不超过5天，计数。
再取后2种菌悬液各少于100cfu ，分别注入无菌平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀、凝固，置20℃-25℃培养不超过5天，计数。
同时用相应的上一批通过促生长试验的培养基替代被检培养基进行上述试验。
进行促生长试验的培养基平皿上，微生物生长情况必须与已通过促生长试验的培养基平皿上的微生物生长情况一致或者更好，同时将待测定的培养基上的菌落数与已通过促生长试验的培养基上的菌落数对比，两者之间的比值应处于70%-200%之间,则判定此培养基通过促生长试验；反之则判定该培养基不符合规定，未通过促生长试验。
2.6 控制菌测试所用培养基的适用性检查
2.6.1 控制菌检查用的成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。
2.6.2 菌悬液的制备
2.6.3 上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.2磷酸盐缓冲液制成适宜浓度的菌悬液。
菌悬液在室温下
放置应在2小时内使用，若保存在2～8℃可在
24小时内使用。
2.6.4 控制菌检查用培养基的适用性检查项目包括培养基的促生长能力、抑制能力及指示能力的检查。
各
培养基的检查测试项目及所用菌株见下表
2.7液体培养基促生长能力检查
取试验菌各0.1ml（含菌数不大于100cfu）（见上表）于被检培养基和上一批检验并通过的培养基中，在相
应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养。
两者比较，被检培养基与上一批检验并通过的培养
基比较，微生物生长良好并且相当。
2.8固体培养基促生长能力检查
取试验菌各0.1ml（含菌数不大于100cfu）（见上表）分别涂布于被检培养基和上一批检验并通过的培养基
中，在相应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养。
两者比较，被检培养基与上一批检验并通
过的培养基比较，微生物生长良好并且相当。
2.9液体培养基和固体培养基的抑制能力检查
取试验菌各0.1ml（含菌数不小于100cfu）（见上表）于被检培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度
及最长时间下培养，试验菌应不得生长。
2.10培养基指示能力检查
取试验菌各0.1ml（含菌数不大于100cfu）（见上表）分别涂布于被检培养基和上一批检验并通过的培养基
中，在相应控制菌检查规定的培养温度及时间范围内培养。
被检培养基中生长的菌落在外观和指示反应上
与从此前已检测并批准的培养基批次所获得的菌落是相当的。
3参考文件
Current USP、BP、EP
附件及相关文件Attachment and related documents
R01 微生物计数固体培养基适用性检查记录
R02 微生物计数液体培养基适用性检查记录
R03 微生物控制菌培养基适用性检查记录
历史History
附件编号Attachment No.:R01 微生物计数固体培养基适用性检查记录
Growth promotion test of solid media for Microbial enumeration test
附件编号Attachment No.:R02
微生物计数液体培养基适用性检查记录
Growth promotion test of liquid media for Microbial enumeration test
附件编号Attachment No.:R03 微生物控制菌培养基适用性检查记录
Growth promotion test of media for Specified Microorganisms tests。