血清蛋白电泳的临床应用优秀课件
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血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳课件
血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳
5
五、实验操作
➢浸泡：将2×8 cm醋酸纤维薄膜迎着光辨别光泽面和无光泽面。在无光 泽面距短边一端1.5 cm处用铅笔轻轻画一条点样线，将之置于盛有缓冲液 的平皿中，浸泡30 min方可用于点样
➢点样：用镊子取出浸透的薄膜，夹在两层粗滤纸内吸干多余的缓冲液， 然后平铺在玻璃板上（无光泽面朝上）。在另一 载玻片上滴一滴血清， 点样器（用盖玻片的一边）在血清上蘸一下（可来回移动一次），再将点 样器轻印在加样线上，使血清渗透到薄膜内，形成均匀的直线
一、实验目的
✓了解电泳技术的一般原理 ✓学习醋酸纤维薄膜电泳的操作
血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳
1
二、实验原理
➢ 电泳是指带电质点在电场中向本身所带电荷相反的电极移动的现象。在 一定pH条件下，不同的质点由于具有不同的等电点而带不同性质的电 荷，因而在一定的电场中它们的移动方向和移动速度也不同，即它们的 电泳迁移率不同，因此可使它们分离
则成为醋酸纤维素薄膜。该膜具有均一的泡沫状的结构，厚度约为 120μm，有很强的通透性，对分子移动阻力很小
醋酸纤维素薄膜电泳是近年来推广的一种新技术，它具有微量、快速、 简便、分辨力高，对样品无拖尾和吸附现象等优点
本实验以醋酸纤维素为电泳支持物，分离各种血清蛋白。血清中含有清 蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白和各种脂蛋白等。各种蛋白质由于 氨基酸组成、分子量、等电点及形状不同，在电场中的迁移速度不同。 以醋酸纤维素薄膜为支持物，正常人血清在pH8.6的缓冲体系中电泳，染 色后可显示5条区带。其中清蛋白的泳动速度最快，其余依次为α1-、α2-、 β-及γ-球蛋白
➢电泳：将点样端的薄膜平贴在阴极电泳槽支架的滤纸桥上（点样面朝 下），另一端平贴在阳极端支架上。盖上电泳槽盖，使薄膜平衡10 min。 通电，调节电压至160 V，电流强度为0.4～0.6 mA/cm膜宽度，电泳时间约 25 min
血清蛋白电泳ppt课件
生物化学与分子生物学实验教17学中心
肝硬化型
主要特征： Alb均有不同程度的降低，α 1、α 2和β 球蛋 白正常或降低，γ -G明显增高且宽度增加，可见β -γ 桥。
病理生理： 肝细胞受损导致Alb明显降低，β -γ 桥的出现 与血清免疫球蛋白，特别是IgA、IgM、IgG同时增加有关， 其中以IgA影响较大，当IgA和IgM泳动在β 和γ 之间，使β 区带与γ 区带融合而形成β -γ 桥。
区带电泳（按支持介质）：淀粉凝胶电泳 滤纸电泳 醋酸纤维素薄膜电泳 琼脂糖凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳
按支持介质形式：水平式电泳、垂直电泳
按缓冲液pH值：连续pH和不连续pH电泳
生物化学与分子生物学实验教3学中心
临床电泳项目
临床上以琼脂糖电泳法开展的电泳项目：
血清蛋白电泳 免疫固定电泳 尿蛋白电泳 同工酶电泳 脑脊液寡克隆电泳 本周氏蛋白电泳 脂蛋白电泳
血清免疫固定电泳（IFE）
是一种包括琼脂糖凝胶蛋白电泳和免疫沉淀两个 过程的操作，是免疫沉淀反应的一种混合技术。 优势：将血清蛋白电泳、高分辩率、抗原-抗体特 异性免疫反应等有机结合，对蛋白进行分离和定 型，形象地观察Ig的各类重链和轻链分型。
生物化学与分子生物学实验教6学中心
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳结果
正常血清蛋白质电泳图谱
生物化学与分子生物学实验教9学中心
血清蛋白电泳区带
白蛋白区带：主要由白蛋白构成。 α 1-球蛋白区带： α 1-抗胰蛋白酶、 α 1-脂蛋白、 α 1-酸性糖蛋白 、甲状腺结合球蛋白、凝血酶原等。 α 2-球蛋白区带： α 2-巨球蛋白、结合珠蛋白、铜蓝蛋白、 α 2-脂 蛋白、红细胞生成素等。 β -球蛋白区带：主要含铁蛋白、β -脂蛋白、补体C3、C4、β 2-微球 蛋白等。 γ -球蛋白区带含IgG、M、A、D、E免疫球蛋白。
肝硬化型
主要特征： Alb均有不同程度的降低，α 1、α 2和β 球蛋 白正常或降低，γ -G明显增高且宽度增加，可见β -γ 桥。
病理生理： 肝细胞受损导致Alb明显降低，β -γ 桥的出现 与血清免疫球蛋白，特别是IgA、IgM、IgG同时增加有关， 其中以IgA影响较大，当IgA和IgM泳动在β 和γ 之间，使β 区带与γ 区带融合而形成β -γ 桥。
区带电泳（按支持介质）：淀粉凝胶电泳 滤纸电泳 醋酸纤维素薄膜电泳 琼脂糖凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳
按支持介质形式：水平式电泳、垂直电泳
按缓冲液pH值：连续pH和不连续pH电泳
生物化学与分子生物学实验教3学中心
临床电泳项目
临床上以琼脂糖电泳法开展的电泳项目：
血清蛋白电泳 免疫固定电泳 尿蛋白电泳 同工酶电泳 脑脊液寡克隆电泳 本周氏蛋白电泳 脂蛋白电泳
血清免疫固定电泳（IFE）
是一种包括琼脂糖凝胶蛋白电泳和免疫沉淀两个 过程的操作，是免疫沉淀反应的一种混合技术。 优势：将血清蛋白电泳、高分辩率、抗原-抗体特 异性免疫反应等有机结合，对蛋白进行分离和定 型，形象地观察Ig的各类重链和轻链分型。
生物化学与分子生物学实验教6学中心
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳结果
正常血清蛋白质电泳图谱
生物化学与分子生物学实验教9学中心
血清蛋白电泳区带
白蛋白区带：主要由白蛋白构成。 α 1-球蛋白区带： α 1-抗胰蛋白酶、 α 1-脂蛋白、 α 1-酸性糖蛋白 、甲状腺结合球蛋白、凝血酶原等。 α 2-球蛋白区带： α 2-巨球蛋白、结合珠蛋白、铜蓝蛋白、 α 2-脂 蛋白、红细胞生成素等。 β -球蛋白区带：主要含铁蛋白、β -脂蛋白、补体C3、C4、β 2-微球 蛋白等。 γ -球蛋白区带含IgG、M、A、D、E免疫球蛋白。
血清蛋白电泳典型图谱分析.pptx
肾病综合征
肾病综合征时，主要是α2 区的α2巨球蛋白增加，β1 区的ApoB增加所致。
遗传基因突变；或服用β内酰胺类抗生素等导致药物与 白蛋白结合。
低丙球蛋白血症
常见于先天性缺陷或继发性因素（如免疫抑制剂治疗）
高免疫球蛋白血症
高免疫球蛋白(多克隆)，常见于自身免疫性疾病、慢性 感染等
M蛋白
γ区单克隆免疫球蛋白升高，可见于多发性骨髓瘤、淋 巴瘤等疾病
β区M蛋白
因IgA位于β区后部或β和γ区之间，所以单克隆IgA 升高常出现这样图形，主要见于IgA型骨髓瘤 。
M蛋白
M蛋白
即单克隆蛋白monoclonal protein ，是浆细胞或B淋巴细胞 单克隆恶性增殖所产生的一种大量异常免疫球蛋白，其本 质是一种（无功能的）免疫球蛋白或免疫球蛋白片段（重 链，轻链等）。
--毛细管电泳
血清电泳原理
➢ 蛋白质等电点
由于蛋白质含有羧基 “-COOH”和氨基 “-NH2”可 解离成带电荷基团，所以在溶液中有两性电离现象。
当蛋白质溶液处于某一pH时，该蛋白质极性基团解 离正负离子数相等，净电荷为0，此时该溶液的pH值就 是该蛋白质的等电点pI值。
每种蛋白质pI大小是特定的，只与该蛋白质结构有关。
➢ 从正极起依次为白蛋白、a1、a2、b（ b1， b2）、g。 ➢ 区带经丽春红等染料染色后，由光密度扫描仪检测
并自动画出吸光度积分曲线。
血清蛋白电泳正常图谱
Albumin α1 α2 β
γ
正常血清蛋白电泳图谱
白蛋白
a1: a1酸性糖蛋白, a1抗胰蛋白酶，甲胎蛋白等 a2: 结合珠蛋白, a2 巨球蛋白, a脂蛋白, 铜蓝蛋白等 b : 转铁蛋白, b脂蛋白,纤维蛋白原,补体,b2微球蛋白等 g : 免疫球蛋白
聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离血清蛋白质-liuchangppt课件
3. 将梳子轻轻取出，让F液进入梳子形成的加样槽中， 准备加样品。
加样
加样:加样器针尖贴着高玻璃板伸到加样槽 中间位置加样，针尖不要扎破下面的胶面。 加样量:10 ul -50 ul
电泳
1)加样完毕后，将电泳槽盖好盖，与电泳仪相连 接。 2)电泳仪电压调至最大，电流调到最小，打开电 泳仪开关进行恒流电泳。 3)浓缩胶:30mA(150V)
蛋白质、核酸和氨基酸等物质的分离和鉴定。
带电粒子的运动速度---
即带电颗粒在单位电场强度下的泳动速度。
μ = Q X /6πrη
Q 粒子所带电荷量 X 电场强度 r 粒子半径 η 介质的粘度
影响电泳速度的因素
1、内在因素: 样品自身性质
2、外在因素: 电场 缓冲液 支持介质
缓冲液 pH： 解离性质
进入pH8.9的分离胶中,各种蛋白质所带净电荷量 不同而有不同的迁移率。表面电荷多,则迁移快;反 之,则慢.
实验操作
一、制胶(本实验的关键步骤)
1、安装玻板： 将洗净的、带白色边条的玻板水平放好，将
U型硅胶密封条摆好。然后，将不带边条的 短玻板盖在U型硅胶密封条上。
2、安装铁夹：用4只铁夹将安装好的玻板夹 好。
分离胶:40mA(200V) 加样后马上将微量加样器仔细冲洗多遍，以免血清 堵塞针尖。
观察并记录电泳现象
八、剥胶、染色、脱色
• 剥胶：拆开电泳槽装置，用竹镊子轻轻撬开两层 玻璃板，戴上一次性手套，用手和镊子将分离胶 剥离到染色液盘内，染色15分钟。
• 脱色： 将分离胶小心完整地从染色液中移到脱色 液内，脱色三次，每次10分钟（每次更换新鲜脱 色液80-100ml），脱色时在摇床上摇。
当电者方向相反时，会减慢颗粒泳 动速度。 • 分子筛：是凝胶电泳的一个特性。筛孔越小，则颗粒在
加样
加样:加样器针尖贴着高玻璃板伸到加样槽 中间位置加样，针尖不要扎破下面的胶面。 加样量:10 ul -50 ul
电泳
1)加样完毕后，将电泳槽盖好盖，与电泳仪相连 接。 2)电泳仪电压调至最大，电流调到最小，打开电 泳仪开关进行恒流电泳。 3)浓缩胶:30mA(150V)
蛋白质、核酸和氨基酸等物质的分离和鉴定。
带电粒子的运动速度---
即带电颗粒在单位电场强度下的泳动速度。
μ = Q X /6πrη
Q 粒子所带电荷量 X 电场强度 r 粒子半径 η 介质的粘度
影响电泳速度的因素
1、内在因素: 样品自身性质
2、外在因素: 电场 缓冲液 支持介质
缓冲液 pH： 解离性质
进入pH8.9的分离胶中,各种蛋白质所带净电荷量 不同而有不同的迁移率。表面电荷多,则迁移快;反 之,则慢.
实验操作
一、制胶(本实验的关键步骤)
1、安装玻板： 将洗净的、带白色边条的玻板水平放好，将
U型硅胶密封条摆好。然后，将不带边条的 短玻板盖在U型硅胶密封条上。
2、安装铁夹：用4只铁夹将安装好的玻板夹 好。
分离胶:40mA(200V) 加样后马上将微量加样器仔细冲洗多遍，以免血清 堵塞针尖。
观察并记录电泳现象
八、剥胶、染色、脱色
• 剥胶：拆开电泳槽装置，用竹镊子轻轻撬开两层 玻璃板，戴上一次性手套，用手和镊子将分离胶 剥离到染色液盘内，染色15分钟。
• 脱色： 将分离胶小心完整地从染色液中移到脱色 液内，脱色三次，每次10分钟（每次更换新鲜脱 色液80-100ml），脱色时在摇床上摇。
当电者方向相反时，会减慢颗粒泳 动速度。 • 分子筛：是凝胶电泳的一个特性。筛孔越小，则颗粒在
血清清蛋白的分离与电泳鉴定 PPT
(NH4)2SO4
血清
50%饱和度
球蛋白
析出
饱和
清蛋白
析出
二、实验原理（脱盐—凝胶层析）
原理： 1、分子量大的物质不能进入 凝胶粒子内部，随洗脱液从凝 胶粒子之间的空隙挤落下来， 所以大分子物质迁移速度快；
2、小分子物质要通过凝胶网 孔进入凝胶粒子内部，所以小 分子物质迁移速度慢。
10
二、实验原理（电泳）
三、实验结果
（1）样品本身：带电量、分子大小、形状。 Q越多，V越大；r越小，V越大； 球形分子>纤维状
（2）电场强度：X越大，V越大 （3）缓冲液：
pH 决定Q，(pH-PI)越大，Q越多，V越大
结果分析
结果
-
+
层析液
血清
γ
β α2 α1
➢实验名称 ➢ 摘要（目的、方法、结果、结论） ➢ 实验目的 ➢ 实验原理 ➢ 操作要点（主要步骤） ➢ 实验结果 ➢ 结论和讨论 （结果分析、思考题等）
盐浓度
7
水化膜
++ +
碱
+
+
++ +
酸
带正电荷蛋白质
（亲水胶体）
脱水
碱
酸
等点电时的蛋白质 （亲水胶体）
脱水
带负电荷蛋白质 （亲水胶体）
脱水
++ +
+
+
++ +
带正电荷蛋白质
（疏水胶体）
阴离子
阳离子
不稳定蛋白颗粒
带负电荷蛋白质 （疏水胶体）
不同的蛋白质分子，由于其分子表面的极性基团的种类、数目 以及排布的不同，其水化层厚度不同，故盐析所需要的盐浓度 也不一样，因此调节蛋白质的中盐浓度，可以使不同的蛋白质 分别沉淀。
蛋白质电泳分析PPT课件
蛋白质组学研究
蛋白质电泳分析在蛋白质组学研 究中具有重要作用，可用于分离 和鉴定蛋白质，揭示蛋白质的表
达模式和功能。
生物标志物发现
通过蛋白质电泳分析，可以发现 与疾病相关的生物标志物，有助
于疾病的早期诊用于药物靶点 的筛选和验证，以及药物作用机
制的研究，有助于新药研发。
绝对定量
通过灰度扫描电泳图谱中蛋白质条带， 可以计算出各蛋白质条带的相对含量。
通过标准品或已知浓度的蛋白质样品， 可以建立标准曲线，从而对未知浓度 的蛋白质样品进行绝对定量分析。
相对定量
通过比较不同样品中蛋白质条带的灰 度值或亮度，可以计算出各蛋白质的 相对表达量。
04
蛋白质电泳分析的优缺点
优点
03
蛋白质电泳分析结果解读
电泳图谱的解读
01
02
03
蛋白质分子量标准
电泳图谱中通常会有一条 蛋白质分子量标准，用于 参考和标定蛋白质的分子 量。
蛋白质条带位置
通过观察电泳图谱中蛋白 质条带的位置，可以判断 蛋白质的迁移率和分子量 大小。
蛋白质表达量
通过比较不同样品中蛋白 质条带的亮度或密度，可 以判断蛋白质的表达量。
在食品安全和检测领域的应用前景
食品成分分析
蛋白质电泳分析可用于食品中蛋白质的鉴定和含 量测定，确保食品质量和安全。
污染物检测
蛋白质电泳分析可以检测食品中的有害物质和污 染物，如农药残留、重金属等。
转基因食品检测
通过蛋白质电泳分析，可以检测转基因食品中的 外源蛋白质，保障消费者权益。
THANKS
感谢观看
蛋白质电泳分析PPT 课件
目录
• 蛋白质电泳分析概述 • 蛋白质电泳分析实验操作 • 蛋白质电泳分析结果解读 • 蛋白质电泳分析的优缺点 • 蛋白质电泳分析展望
血清蛋白电泳-醋纤电泳、圆盘电泳实用全套PPT
操作(cāozuò)中，注意控制染色和漂洗的时间 ，防止背景过深或某些区带太浅。
第十四页，共29页。
6.记录和分析实验结果(jiē guǒ) 漂洗完毕后将薄膜取出, 放在滤纸上。将薄膜上
的5条色带根据其颜色深浅、形状、大小及相对位置 进行描述、记录在实验本上，并判断分析其结果(jiē guǒ)。
第十五页，共29页。
聚物。聚合后的聚丙烯酰胺凝胶形成网状结构。
第二十页，共29页。
第二十一页，共29页。
三、实验(shíyàn)器材 与试剂
1.实验材料(cáiliào)：正常人血清
2.实验器材：圆盘电泳槽、电泳仪、玻璃管（ 10cm×0.6cm）、洗耳球、培养皿、微量加样器、注 射器、小烧杯
第二十二页，共29页。
调节血浆pH值,维持酸碱平衡 运输营养物质,代谢物,
第十六页，共29页。
注意事项
1、醋酸纤维素薄膜一定要充分(chōngfèn)浸透后才能点样。点样后电泳 槽一定要密闭。电流不宜过大，以防止薄膜干燥，电泳图谱出现条痕。 2、点样时，动作要轻、稳，用力不能太大，以免损坏膜片或印出凹陷影 响电泳区带分离效果。 3、点样应点在薄膜的毛面上，点样量要适量，不宜过多或过少。 4、电泳时应将薄膜的点样端置于电泳槽的负极端，且点样面向下。 5、通电过程中，不准取出或放入薄膜。通电完毕后，应先断开电源后再 取薄膜，以免触电。 6、应控制染色时间。时间长，薄膜底色不易脱去；时间太短，着色不易 区分，或造成条带染色不均匀，必要时可进行复染。
第二十六页，29页。
4.电泳 接通(jiē tōnɡ)电源，上负下正，调节电流3mA/管，电压260V-280V，待示踪 染料离管下口0.5cm时切断电源。
第二十七页，共29页。
第十四页，共29页。
6.记录和分析实验结果(jiē guǒ) 漂洗完毕后将薄膜取出, 放在滤纸上。将薄膜上
的5条色带根据其颜色深浅、形状、大小及相对位置 进行描述、记录在实验本上，并判断分析其结果(jiē guǒ)。
第十五页，共29页。
聚物。聚合后的聚丙烯酰胺凝胶形成网状结构。
第二十页，共29页。
第二十一页，共29页。
三、实验(shíyàn)器材 与试剂
1.实验材料(cáiliào)：正常人血清
2.实验器材：圆盘电泳槽、电泳仪、玻璃管（ 10cm×0.6cm）、洗耳球、培养皿、微量加样器、注 射器、小烧杯
第二十二页，共29页。
调节血浆pH值,维持酸碱平衡 运输营养物质,代谢物,
第十六页，共29页。
注意事项
1、醋酸纤维素薄膜一定要充分(chōngfèn)浸透后才能点样。点样后电泳 槽一定要密闭。电流不宜过大，以防止薄膜干燥，电泳图谱出现条痕。 2、点样时，动作要轻、稳，用力不能太大，以免损坏膜片或印出凹陷影 响电泳区带分离效果。 3、点样应点在薄膜的毛面上，点样量要适量，不宜过多或过少。 4、电泳时应将薄膜的点样端置于电泳槽的负极端，且点样面向下。 5、通电过程中，不准取出或放入薄膜。通电完毕后，应先断开电源后再 取薄膜，以免触电。 6、应控制染色时间。时间长，薄膜底色不易脱去；时间太短，着色不易 区分，或造成条带染色不均匀，必要时可进行复染。
第二十六页，29页。
4.电泳 接通(jiē tōnɡ)电源，上负下正，调节电流3mA/管，电压260V-280V，待示踪 染料离管下口0.5cm时切断电源。
第二十七页，共29页。
医学检验·检查项目：血清免疫蛋白电泳_课件模板
医学检验·各论：血清免疫蛋白电泳 >>>
临床意义：
球蛋白血症、无亲血色白血症、无转铁蛋 白血症、无纤维蛋白血症、血浆铜蓝蛋白 缺乏症、先天性脂蛋白缺乏症、C3缺乏症。 (3)其它：急性炎症、慢性炎症、肝硬化、 肾病综合征、淀粉样变性、冷沉淀球白血 症等。
医学检验·各论：血清免疫蛋白电泳 >>>
正常值：
醋酸纤维膜法： 清蛋白： 0.57～ 0.68 α1球蛋白：0.01～0.06 α2球蛋白： 0.06～0.10 β球蛋白： 0.07～0.15 γ 球蛋白： 0.10～0.20。
医学检验·各论：血清免疫蛋白电泳 >>>
相关检查： 自身免疫性疾病14项、免疫球蛋白三项。
医学检验·各论：血清免疫蛋白电泳 >>>
医学检验·各论：血清免疫蛋白电泳 >>>
简介： 体微粒在分散介质里向阴极或阳极作定向 移动，这种现象叫做电泳。利用电泳现象 使物质分离，这种技术也叫做电泳。
医学检验·各论：血清免疫蛋白电泳 >>>
临床意义：
(1)M-蛋白血症： ①恶性M-蛋白血症： 多发性骨髓瘤、Waldenstron氏综合征(瓦 尔顿斯特罗姆氏巨球白血症、原发性巨球 蛋白血症)等。 ②原发性M-蛋白血症。 ③不完全分子型M-型蛋白血症：重链病、 半分子型骨髓瘤等。 (2)无(低)蛋白血症： 免疫功能缺陷综合征、无(低)
医学检验·各论 血清免疫蛋白电泳
内容课件模板
医学检验·各论：血清免疫蛋白电泳 >>>
简介：
免疫球蛋白是一类有抗体性的球蛋白， 是机体特异性体液免疫反应的物质基础与 执行单位。它的主要功能是与入侵的病原 微生物发生免疫反应(调理、中和、制动、 促进吞噬或溶细胞反应)，保护机体免受 病原体的侵害;清除体内自身抗原物质， 参与免疫调控，保持机体内环境稳定。在 外加直流电源的作用下，胶
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳ppt课件
醋酸纤维素薄膜电泳装置示意图
11
4.电泳：红正黑负。 电压120 V。 电泳时间约40 ~ 50 min。
5.染色：氨基黑10B, 染色1-2 min. 6.脱色：2个表面皿，装入漂洗液，依次漂去多余染
料，直到背景漂白为止。
12
五、结果与分析
1.定性观察：染色后的薄膜上可显现清楚的五条区带。
2.定量测定：光密度仪扫描法，洗脱比色法
2. 点样：毛面向上，用点样器，在距膜一端约1.5 cm 处，点加3-5 μL待分离血清。注意取样适量、均匀； 血清线位置适当，粗细均匀，不能有明显扩散现象。
1.5cm
10
3. 搭桥：首先将双层纱布铺好，分别放置于电泳槽两 端，其下端要浸入缓冲液中。然后，将点好样的薄膜 光面向上平直地贴于电泳槽的支架上。注意桥的方向， 点样的一端位于负极，点样线不能搭在滤纸上。
1
实验一 血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
2
一、实验目的
1.了解电泳的基本原理； 2.掌握电泳分离蛋白质的原理； 3.熟悉醋酸纤维素薄膜电泳的方法。
3
二、实验原理
1.电泳的基本原理 电泳——是带电粒子在电场中向其电性相反的电极 发生移动的现象。 利用电泳技术可进行物质分离、纯化及鉴定。
4
影响带电粒子电泳速率的因素： 1. 带电量 F=qE 2. 分子量 3. 形状
13
六、临床意义
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳在临床上常用于分 析血、尿等样品中的蛋白质，供临床上诊断肝、肾等疾 病参考。
1．肝硬化时清蛋白明显降底，α2和β-球蛋白无显 著变化，而γ球蛋白可显著增加。正常生理情况，清蛋 白与球蛋白之比约为1.5~2.5∶1，而肝硬化时有可能出 现清∶球＜1的情况，常称为清、球比例倒置，说明肝 功能严重受损。
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4.电泳：红正黑负。 电压120 V。 电泳时间约40 ~ 50 min。
5.染色：氨基黑10B, 染色1-2 min. 6.脱色：2个表面皿，装入漂洗液，依次漂去多余染
料，直到背景漂白为止。
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五、结果与分析
1.定性观察：染色后的薄膜上可显现清楚的五条区带。
2.定量测定：光密度仪扫描法，洗脱比色法
2. 点样：毛面向上，用点样器，在距膜一端约1.5 cm 处，点加3-5 μL待分离血清。注意取样适量、均匀； 血清线位置适当，粗细均匀，不能有明显扩散现象。
1.5cm
10
3. 搭桥：首先将双层纱布铺好，分别放置于电泳槽两 端，其下端要浸入缓冲液中。然后，将点好样的薄膜 光面向上平直地贴于电泳槽的支架上。注意桥的方向， 点样的一端位于负极，点样线不能搭在滤纸上。
1
实验一 血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
2
一、实验目的
1.了解电泳的基本原理； 2.掌握电泳分离蛋白质的原理； 3.熟悉醋酸纤维素薄膜电泳的方法。
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二、实验原理
1.电泳的基本原理 电泳——是带电粒子在电场中向其电性相反的电极 发生移动的现象。 利用电泳技术可进行物质分离、纯化及鉴定。
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影响带电粒子电泳速率的因素： 1. 带电量 F=qE 2. 分子量 3. 形状
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六、临床意义
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳在临床上常用于分 析血、尿等样品中的蛋白质，供临床上诊断肝、肾等疾 病参考。
1．肝硬化时清蛋白明显降底，α2和β-球蛋白无显 著变化，而γ球蛋白可显著增加。正常生理情况，清蛋 白与球蛋白之比约为1.5~2.5∶1，而肝硬化时有可能出 现清∶球＜1的情况，常称为清、球比例倒置，说明肝 功能严重受损。
血清蛋白质聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳ppt课件
5. 剥胶
注入蒸馏水做润滑剂，针头螺旋式前进，缓缓剥离。
6. 固定、染色及漂洗
将凝胶柱浸入8号剂中泡10min，进行固定，用9号剂染色10min，用清水 冲洗，放入10号剂中漂洗脱色。
21
结果示意图
γ
β α2 α1
22
注意事项：
1. 丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺是神经毒性试剂，对皮肤有刺激作用， 注意避免直接接触
23
The end! 谢谢！
24
后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用
25
主要经营：网络软件设计、图文设计制作、发布广 告等 公司秉着以优质的服务对待每一位客户，做到让客 户满意！
26
致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、PPT设计、 计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面， 打造全网一站式需求
2. 丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺溶液应装在棕色瓶中，用前检测pH值 是否失效。失效液不能聚合。
3. 加速剂（TEMED）要密封保存，过硫酸溶液现配现用，防止氧化 失效。
4. 配好胶后应尽快灌胶（不要形成气泡） 5. 切记装柱后应用蒸馏水密封 6. 灌胶和电泳时要注意排气泡 7. 加样时不能损伤凝胶表面 8. 电泳时凝胶管不能漏水，并且与电泳池垂直 9. 固体胶切忌倒入水池
20
3. 加样
取血清12μL ，7号试剂12μL混匀，品均加入4管，每管6μL.（加样枪不 可插入过深，以免刺破凝胶，同时要缓慢、均匀，以免搅动缓冲液引起 样品扩散。）
4. 电泳
接通电源，上负下正，先调节电流1mA/管，待示踪染料进入分离胶后调 节为2~3 mA/管，待示踪染料离管下口0.5cm时切断电源。
描。 5. 可进行双向电泳。血清蛋白在醋酸纤维素薄膜电
注入蒸馏水做润滑剂，针头螺旋式前进，缓缓剥离。
6. 固定、染色及漂洗
将凝胶柱浸入8号剂中泡10min，进行固定，用9号剂染色10min，用清水 冲洗，放入10号剂中漂洗脱色。
21
结果示意图
γ
β α2 α1
22
注意事项：
1. 丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺是神经毒性试剂，对皮肤有刺激作用， 注意避免直接接触
23
The end! 谢谢！
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2. 丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺溶液应装在棕色瓶中，用前检测pH值 是否失效。失效液不能聚合。
3. 加速剂（TEMED）要密封保存，过硫酸溶液现配现用，防止氧化 失效。
4. 配好胶后应尽快灌胶（不要形成气泡） 5. 切记装柱后应用蒸馏水密封 6. 灌胶和电泳时要注意排气泡 7. 加样时不能损伤凝胶表面 8. 电泳时凝胶管不能漏水，并且与电泳池垂直 9. 固体胶切忌倒入水池
20
3. 加样
取血清12μL ，7号试剂12μL混匀，品均加入4管，每管6μL.（加样枪不 可插入过深，以免刺破凝胶，同时要缓慢、均匀，以免搅动缓冲液引起 样品扩散。）
4. 电泳
接通电源，上负下正，先调节电流1mA/管，待示踪染料进入分离胶后调 节为2~3 mA/管，待示踪染料离管下口0.5cm时切断电源。
描。 5. 可进行双向电泳。血清蛋白在醋酸纤维素薄膜电
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30
10 种免疫球蛋白
IgA Kappa
IgD Kappa
IgG Kappa
IgM Kappa
IgA Lambda
IgG Lambda
IgM Lambda
IgE Kappa IgD Lambda
IgE Lambda
31
免疫球蛋白的合成过程
1 骨髓 (颅骨,盆骨, 肋骨, 胸骨)
浆细胞 免疫球蛋白
2
• 造血干细胞分化为3类细胞:
- 红细胞
- 粒细胞
- 巨核细胞
3• B淋巴细胞 转化为浆细胞
4• 浆细胞 合成抗体,即免疫球蛋白.
5• 免疫球蛋白 在免疫系统中被用来识别和消 灭如细菌或病毒等外源物
32
正常浆细胞
免疫球蛋白电泳结果
P1 P2 P3 P4 P5
多克隆免疫球蛋白
正常电泳结果
正常
所有浆淋巴细胞同步合成免疫球蛋白= 多克隆免疫球蛋白
-
阴极
++++++++++++++++++
电渗流作用方向
++++++++++++++++++
+ 阳极
8
在毛细管内部的正电荷粒子
同时到受电渗流和电场力的作用，两种作用力方
向一致→快速向负极端迁移
-
阴极
++++++++++++++++++
电场力Байду номын сангаас用方向
+
电渗流作用方向
++++++++++++++++++
beta 2 区：多克隆Ig A ↑ gamma 区：多克隆IgG ↑
21
Beta Gamma 桥
22
电泳图谱---肾病
23
电泳图谱---肾病
肾小球滤过屏障损伤 → 白蛋白流失
• 低白蛋白 • 高α-2
Alpha-2巨球蛋白
24 贾晓辉, 马彧旻. 齐齐哈尔医学院学报. 2009, 30(16): 2015
白蛋白 α-1 酸性糖蛋白
α-1抗胰蛋白酶 结合珠蛋白
α-2 巨球蛋白
免疫球蛋白 C3补体
转铁蛋白 血红素结合蛋白
16
电泳图谱---急性炎症
急性期反应蛋白
白蛋白 α-1 酸性糖蛋白
α -1抗胰蛋白酶 结合珠蛋白 α -2 巨球蛋白
免疫球蛋白 C3补体
转铁蛋白 血红素结合蛋白
17
电泳图谱---慢性炎症
无论是带正电、带负电或不带电的粒子， 都在
----
-
阴极
电渗流的作用下，向阴极迁移，带正电的，受到
同方向的电场力作用， 迁移最快，不带电的迁 移速度次之，带负电的迁移速度最慢， 因为它 受到与电渗流反方向的电场力作用。
---
+
-+----
阳极
--
+
++++++++++++++++++
正电荷电场力作用方向
3
蛋白电泳技术的变迁
• 滤纸电泳 • 醋酸纤维素薄膜电泳 • 凝胶电泳
– 琼脂糖凝胶电泳—临床 – 聚丙烯酰胺凝胶电泳—科研
• 毛细管电泳
– 电泳技术的革命
4
毛细管电泳工作原理Capillarys Electrophoresis Principle
温控装置
检测器
-
负极
电泳方向 氘光源 200 nm
负电荷电场力作用方向
电渗流作用方向 11
毛细管电泳技术的优势
12
毛细管血清蛋白电泳图谱
白蛋白 Alpha-1 Alpha-2
Beta-1 Beta-2 Gamma
白蛋白 α-1 酸性糖蛋白
α-1抗胰蛋白酶 结合珠蛋白 α-2 巨球蛋白
免疫球蛋白 C3补体
转铁蛋白 血红素结合蛋白
13
血清蛋白电泳的临床应用
33
免疫球蛋白电泳结果
浆细胞恶性增殖
多克隆免疫球蛋白 单克隆免疫球蛋白
骨髓瘤
异常电泳结果
M蛋白
34
200 nm
IgG Lambda
IgG Kappa
IgA Lambda
IgA Kappa
IgM Lambda
IgM Kappa
35
正常
多克隆 Igs 异常
单克隆Ig---“M”蛋白
蛋白电泳的应用与临床实验结果的解读
王连升
法国赛比亚公司上海代表处
1
主要内容
• 血清蛋白电泳 • 免疫分型电泳
2
电泳技术的发展历程
19世纪
21世纪
1809年 发现电泳现象
1937年 建立了界面电泳技术 1948年诺贝尔化学奖
1950年后 区带电泳从发展到成熟
1980年 毛细管电泳技术
2001年 sebia首次推出全自动毛细管电泳仪
27
电泳图谱---高免疫球蛋白
原因: 慢性感染、自身免疫病、慢性肝病、慢性肉芽肿
28
血清蛋白电泳图谱常见类型
29
Gamma globulins (免疫球蛋白区带)
• 免疫球蛋白是机体的正常生理成分 • 多克隆 • 分类
– 重链：IgG、IgA、IgD、IgE、IgM – 轻链：κ、λ – 10种类型
毛细管 (内径25微米）
约1万伏高压
+
样本进入
正极
6
毛细管电泳工作原理
++++++++++++++++++ 当毛细管内部充满缓冲液被活化后，在毛细管 内表面的负电荷层上形成了一正电荷层
++++++++++++++++++
毛细管的内表面是带负电荷
7
内部充满电泳缓冲液的毛细管带电后， 毛细管内的正电荷层整体向阴极移动 ，这种现象称之为电渗流
电泳图谱---肾病综合征
低白蛋白
脂蛋白
α -2巨球蛋白
总蛋白浓度降低(低于 60g/l) Alb a1 a2 b1 b2 g
三高一低：高脂蛋白血脂
25
电泳图谱---肾病综合征
性别：男
年龄：24
科室：肾脏内科
诊断：肾病综合征
26
电泳图谱---低免疫球蛋白
原因: 免疫缺陷病、免疫抑制剂、游离轻链病
+ 阳极
9
在毛细管内部的负电荷粒子
同时到受电渗流和电场力的作用，两种作用力方
向相反；电渗流> > > 电场力→向负极端迁移
-
阴极
++++++++++++++++++
电渗流作用方向
--
电场力作用方向（ 负电荷）
++++++++++++++++++
+ 阳极
10
样品进入到毛细管之中的运动
++++++++++++++++++
临床疾病的识别
炎症 肝病 肾病 ……
“M”蛋白的筛查及定量
对疑似骨髓瘤患者检测单克隆免疫球蛋白 早期检出无症状的骨髓瘤患者
对骨髓瘤疾病进行随访及疗效观察
14
Capillarys Electrophoresis
毛细管血清蛋白电泳
15
正常血清蛋白电泳图谱
白蛋白 Alpha-1 Alpha-2
Beta-1 Beta-2 Gamma
18
电泳图谱---肝脏
肝脏是血清蛋白合成的主要器官
白蛋白 Alpha-1 Alpha-2
Beta-1 Beta-2 Gamma
白蛋白 α-1 酸性糖蛋白
α-1抗胰蛋白酶 结合珠蛋白
α-2 巨球蛋白
免疫球蛋白 C3补体
转铁蛋白
血红素结合蛋白
19
电泳图谱---肝病
20
电泳图谱---肝硬化 Beta-Gamma 桥
10 种免疫球蛋白
IgA Kappa
IgD Kappa
IgG Kappa
IgM Kappa
IgA Lambda
IgG Lambda
IgM Lambda
IgE Kappa IgD Lambda
IgE Lambda
31
免疫球蛋白的合成过程
1 骨髓 (颅骨,盆骨, 肋骨, 胸骨)
浆细胞 免疫球蛋白
2
• 造血干细胞分化为3类细胞:
- 红细胞
- 粒细胞
- 巨核细胞
3• B淋巴细胞 转化为浆细胞
4• 浆细胞 合成抗体,即免疫球蛋白.
5• 免疫球蛋白 在免疫系统中被用来识别和消 灭如细菌或病毒等外源物
32
正常浆细胞
免疫球蛋白电泳结果
P1 P2 P3 P4 P5
多克隆免疫球蛋白
正常电泳结果
正常
所有浆淋巴细胞同步合成免疫球蛋白= 多克隆免疫球蛋白
-
阴极
++++++++++++++++++
电渗流作用方向
++++++++++++++++++
+ 阳极
8
在毛细管内部的正电荷粒子
同时到受电渗流和电场力的作用，两种作用力方
向一致→快速向负极端迁移
-
阴极
++++++++++++++++++
电场力Байду номын сангаас用方向
+
电渗流作用方向
++++++++++++++++++
beta 2 区：多克隆Ig A ↑ gamma 区：多克隆IgG ↑
21
Beta Gamma 桥
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电泳图谱---肾病
23
电泳图谱---肾病
肾小球滤过屏障损伤 → 白蛋白流失
• 低白蛋白 • 高α-2
Alpha-2巨球蛋白
24 贾晓辉, 马彧旻. 齐齐哈尔医学院学报. 2009, 30(16): 2015
白蛋白 α-1 酸性糖蛋白
α-1抗胰蛋白酶 结合珠蛋白
α-2 巨球蛋白
免疫球蛋白 C3补体
转铁蛋白 血红素结合蛋白
16
电泳图谱---急性炎症
急性期反应蛋白
白蛋白 α-1 酸性糖蛋白
α -1抗胰蛋白酶 结合珠蛋白 α -2 巨球蛋白
免疫球蛋白 C3补体
转铁蛋白 血红素结合蛋白
17
电泳图谱---慢性炎症
无论是带正电、带负电或不带电的粒子， 都在
----
-
阴极
电渗流的作用下，向阴极迁移，带正电的，受到
同方向的电场力作用， 迁移最快，不带电的迁 移速度次之，带负电的迁移速度最慢， 因为它 受到与电渗流反方向的电场力作用。
---
+
-+----
阳极
--
+
++++++++++++++++++
正电荷电场力作用方向
3
蛋白电泳技术的变迁
• 滤纸电泳 • 醋酸纤维素薄膜电泳 • 凝胶电泳
– 琼脂糖凝胶电泳—临床 – 聚丙烯酰胺凝胶电泳—科研
• 毛细管电泳
– 电泳技术的革命
4
毛细管电泳工作原理Capillarys Electrophoresis Principle
温控装置
检测器
-
负极
电泳方向 氘光源 200 nm
负电荷电场力作用方向
电渗流作用方向 11
毛细管电泳技术的优势
12
毛细管血清蛋白电泳图谱
白蛋白 Alpha-1 Alpha-2
Beta-1 Beta-2 Gamma
白蛋白 α-1 酸性糖蛋白
α-1抗胰蛋白酶 结合珠蛋白 α-2 巨球蛋白
免疫球蛋白 C3补体
转铁蛋白 血红素结合蛋白
13
血清蛋白电泳的临床应用
33
免疫球蛋白电泳结果
浆细胞恶性增殖
多克隆免疫球蛋白 单克隆免疫球蛋白
骨髓瘤
异常电泳结果
M蛋白
34
200 nm
IgG Lambda
IgG Kappa
IgA Lambda
IgA Kappa
IgM Lambda
IgM Kappa
35
正常
多克隆 Igs 异常
单克隆Ig---“M”蛋白
蛋白电泳的应用与临床实验结果的解读
王连升
法国赛比亚公司上海代表处
1
主要内容
• 血清蛋白电泳 • 免疫分型电泳
2
电泳技术的发展历程
19世纪
21世纪
1809年 发现电泳现象
1937年 建立了界面电泳技术 1948年诺贝尔化学奖
1950年后 区带电泳从发展到成熟
1980年 毛细管电泳技术
2001年 sebia首次推出全自动毛细管电泳仪
27
电泳图谱---高免疫球蛋白
原因: 慢性感染、自身免疫病、慢性肝病、慢性肉芽肿
28
血清蛋白电泳图谱常见类型
29
Gamma globulins (免疫球蛋白区带)
• 免疫球蛋白是机体的正常生理成分 • 多克隆 • 分类
– 重链：IgG、IgA、IgD、IgE、IgM – 轻链：κ、λ – 10种类型
毛细管 (内径25微米）
约1万伏高压
+
样本进入
正极
6
毛细管电泳工作原理
++++++++++++++++++ 当毛细管内部充满缓冲液被活化后，在毛细管 内表面的负电荷层上形成了一正电荷层
++++++++++++++++++
毛细管的内表面是带负电荷
7
内部充满电泳缓冲液的毛细管带电后， 毛细管内的正电荷层整体向阴极移动 ，这种现象称之为电渗流
电泳图谱---肾病综合征
低白蛋白
脂蛋白
α -2巨球蛋白
总蛋白浓度降低(低于 60g/l) Alb a1 a2 b1 b2 g
三高一低：高脂蛋白血脂
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电泳图谱---肾病综合征
性别：男
年龄：24
科室：肾脏内科
诊断：肾病综合征
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电泳图谱---低免疫球蛋白
原因: 免疫缺陷病、免疫抑制剂、游离轻链病
+ 阳极
9
在毛细管内部的负电荷粒子
同时到受电渗流和电场力的作用，两种作用力方
向相反；电渗流> > > 电场力→向负极端迁移
-
阴极
++++++++++++++++++
电渗流作用方向
--
电场力作用方向（ 负电荷）
++++++++++++++++++
+ 阳极
10
样品进入到毛细管之中的运动
++++++++++++++++++
临床疾病的识别
炎症 肝病 肾病 ……
“M”蛋白的筛查及定量
对疑似骨髓瘤患者检测单克隆免疫球蛋白 早期检出无症状的骨髓瘤患者
对骨髓瘤疾病进行随访及疗效观察
14
Capillarys Electrophoresis
毛细管血清蛋白电泳
15
正常血清蛋白电泳图谱
白蛋白 Alpha-1 Alpha-2
Beta-1 Beta-2 Gamma
18
电泳图谱---肝脏
肝脏是血清蛋白合成的主要器官
白蛋白 Alpha-1 Alpha-2
Beta-1 Beta-2 Gamma
白蛋白 α-1 酸性糖蛋白
α-1抗胰蛋白酶 结合珠蛋白
α-2 巨球蛋白
免疫球蛋白 C3补体
转铁蛋白
血红素结合蛋白
19
电泳图谱---肝病
20
电泳图谱---肝硬化 Beta-Gamma 桥