MTHFR基因检测与叶酸代谢产科方向
211149167_琼海地区高危妊娠风险人群叶酸代谢障碍相关基因筛查及叶酸服用效果
i
on,s
t
i
l
l
b
i
r
t
h,andt
hep
r
egnancyr
e
l
a
t
edc
omy,spon
l
i
c
a
t
i
onso
ft
he womeni
nt
hetwog
r
oups we
r
ec
oun
t
ed.Re
su
l
t
s:Thegeno
t
l
l
e
l
ef
r
e
i
e
so
f MTHFR
p
ypeanda
quenc
DOI:
10.
3969/
ede
t
e
c
t
edby
PCRt
e
chno
l
ogy.Fo
l
a
t
eme
t
abo
l
i
smr
i
ska
s
s
e
s
smen
to
ft
he
s
ewomenhadbe
enc
onduc
t
ed.458 women wi
t
hou
tf
o
l
a
t
e
me
t
abo
l
i
smr
i
skwe
r
ei
ng
r
oup A,and1505 women wi
T),导 致 MTHFR
叶酸代谢酶检测
叶酸代谢酶基因筛查项目介绍近年来，不育不孕与新生儿出生缺陷发生率呈逐年上升趋势，引起了医疗及政府相关部门的高度重视。
中国疾病预防控制中心妇幼保健中心于2007年先后三次向全国妇幼保健院发出关于开展“妇幼保健遗传检测服务项目”的函，特别强调：“随着人类基因组计划和国际人类基因组单体型图计划的完成，在发达国家基因检测技术也逐渐成为健康医疗体系中的一部分，并已证明能有效降低个人患病风险，同时节约医疗开支”。
同时指出：“为了提升妇幼保健服务的技术含量，将最新的预防检测技术及时应用于妇幼保健服务。
”首期推出了以“孕期叶酸需求遗传检测”为代表的15项“妇幼保健遗传检测服务项目”。
卫生部于2 009年6月发出了关于《增补叶酸预防神经管缺陷项目管理方案》的通知，进一步加大了预防新生儿出生缺陷宣传和管理力度，对各级卫生部门提出了具体要求。
叶酸缺乏是导致新生儿出生缺陷的主要原因。
导致机体缺乏叶酸有两个方面的原因：一是叶酸摄入量不足，二是由于遗传（基因）缺陷导致机体对叶酸的利用能力低下（叶酸代谢通路障碍）。
科学研究证明，通过基因检测技术手段，对人体MTHFR基因及MTRR基因做检测，可以及早发现不同个体对叶酸的吸收利用水平，从而筛查出容易引起叶酸缺乏的高危人群，实现个性化增补叶酸（因人而异地确切给出叶酸补充计划和补充量），从而增强叶酸补充依从性，同时加强产前检查，以降低新生儿出生缺陷风险。
而现实生活中，有超过50%的女性是在无意中受孕的。
当知道受孕后，增补叶酸的关键期往往已滞后了2-3个月，不利于胎儿神经管缺陷的有效预防。
从另一方面，，叶酸增补不应仅仅局限在女性，男性补充叶酸有着同等重要的意义。
科学研究证明，男性体内缺乏叶酸，会导致精子质量降低，精液中精子携带的染色体数量异常，引起新生儿出生缺陷。
机体叶酸水平低下，也是引起不育不孕、自发性流产的重要原因之一。
因此，新婚夫妇准备怀孕前，至少应该做一项“孕期叶酸需求（女性）”及“高同型半胱氨酸血症（男性）”的基因检测，这样更有利于优孕。
crp、叶酸代谢能力基因检测与妊娠期糖尿病的相关性研究
药物与临床57药品评价 2019年第16卷第20期妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)是妊娠前糖代谢正常，妊娠期才出现的糖尿病，妊娠合并糖尿病孕妇中90%以上为GDM，对母儿危害较大[1]。
目前已成为全国妇幼卫生系统的一个沉重负担，该病是在妊娠期首次发生和发现的糖尿病或出现的糖耐量受损、代谢紊乱，给母胎带来诸多不良影响，并增加了母胎死亡率，对母胎远期影响大，有GDM病史的女性患糖尿病和心血管疾病的风险更高[2]。
FIGO明确指出，目前在孕前、孕期及产后GDM的预防、诊断和管理，以及母儿近远期结局方面，还存在很大不足[3]，诸多学者从探索GDM的发病机制出发，以达到防治和管理GDM的目的。
已有研究[4-5]认为同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)在GDM的发病机制中起了重要作用，其机理主要为人体内调控MTHFR、MTRR的基因发生变异，从而造成叶酸代谢与利用能力不足增加Hcy的浓度，此外有研究[6]已报道与炎症反应也有关，而关于炎症因子在叶酸代谢能力障碍中是否发挥关键作用，此类国内外文献尚无报道，因此本研究拟检测分析GDM患者叶酸代谢能力障碍与超敏C反应蛋白(hypersensitive C -reactive protein,hs -CRP)之间的关系，为探明妊娠期糖尿病的发病机制提供理论依据。
1 材料与方法1.1 研究对象 选择2018年于邵阳市中心医院接受产检行口服葡萄糖耐量试验( oral glucose tolerance test,OGTT)试验及叶酸代谢能力基因检测的孕妇，被确诊为GDM的患者50例，孕24～28周，年龄(29.68±3.50)岁，排除妊娠前糖尿病、高血压、肝肾疾病等病史。
选择同期在我院产检时行OGTT试验及叶酸代谢能力基因检测的正常孕妇50例作为观察组，孕24～28周，年龄(28.75±2.09)岁。
育龄期女性叶酸代谢基因与不良妊娠结局的关系分析
文章编号：ＷＨＲ２０１８０３２０６４育龄期女性叶酸代谢基因与不良妊娠结局的关系分析李艳 贾丽丽山东省青岛西海岸新区妇幼保健计划生育服务二中心，山东青岛 ２６６６５５５【摘 要】目的：分析育龄期女性ＭＴＨＦＲ、ＭＴＲＲ基因多态性与不良妊娠结局的相关性。
方法：选择本院有不良妊娠结局的１７６例育龄期女性为观察组，另选同期体检正常的１８２例育龄期女性为对照组，应用ＰＣＲ ＲＦＬＰ法检测叶酸相关基因（ＭＴＨＦＲ、ＭＴＲＲ）多态性分布情况，并通过探讨其与叶酸、Ｈｃｙ水平的关系。
结果：ＭＴＲＲ６６ＡＡ型、ＭＴＨＦＲＣ６７７ＴＴ型血清中的叶酸含量均少于其他基因类型，且Ｈｃｙ水平也较其他基因类型高（犘＜０．０５）。
经Ｌｏｇｉｓｔｉｃ多因素分析发现，ＭＴＲＲ６６ＡＡ与ＭＴＨＦＲＣ６７７ＴＴ是导致孕妇不良妊娠结局发生的独立危险因素。
结论：叶酸代谢基因多态ＭＴＲＲ６６、ＭＴＨＦＲＣ６７７在不良妊娠结局的病理机制中发挥了重要的作用，能够明显增加不良妊娠结局的发生。
【关键词】叶酸代谢基因；不良妊娠结局；ＭＴＨＦＲ；ＭＴＲＲ 目前，大多数女性在备孕期和妊娠早期均会服用叶酸以减少自然流产、胎儿先天畸形等不良妊娠结局发生。
然而，在当前研究中，存在不良妊娠结局者的机体叶酸代谢状况及叶酸的作用机制尚未有确切统一的结论。
为此，本研究将重点探析育龄期女性叶酸代谢基因与不良妊娠结局的相关性。
１ 研究对象和方法１．１ 研究对象选择本院２０１６年１月至２０１７年１２月有不良妊娠结局的１７６例育龄期女性为观察组，其中３８例先天性心脏病、８２例反复自然流产、９例脑积水、３８例染色体异常、７例内脏移位、２例存在上述不良妊娠结局两种或以上；年龄均在２２～３８岁，均龄（２９．５３±３．８４）岁；另选同期无不良妊娠结局正常分娩的１８２例育龄期女性为对照组，年龄在２２～３７岁，均龄（２９．２５±３．５８）岁，两组年龄差异不明显（犘＞０．０５）。
MTHFR基因检测
项目简介：
MTHFR 基因：是亚甲基四氢叶酸还原酶蛋白编码基因，是叶酸代谢与甲硫氨酸代谢中的关 键酶。MTHFR 基因具有多态性，存在 3 种基因型：CC 型、CT 型、TT 型。MTHFR 蛋白可 以使 5,10-亚甲基四氢叶酸还原为 5-甲基四氢叶酸，从而作为甲基的间接供体参与体内嘌呤、 嘧啶的合成及 DNA、RNA、蛋白质的甲基化，同时维持体内正常的同型半胱氨酸水平。正 常的 MTHFR 活性才能维持叶酸甲硫氨酸循环的有效性，保证 DNA 的合成和甲基化的正常进行。 若 MTHFR 酶活性发生变化，则导致 5-甲基四氢叶酸生成障碍，引起 DNA 合成和甲基化异常、 高同型半胱氨酸血症而导致多种遗传性疾病的发生。
3、 MTHFR C677T 基因多态性降低 MTHFR 活性，影响叶酸代谢循环，减少血浆中 5-甲基 四氢叶酸水平，同时伴随其他形式的叶酸的增加。这会影响嘧啶或嘌呤的合成，导致 DNA 合成或修复受损。
MTHFR 基因多态性检测标本采集及出报告时间：病人抽静脉血 2ml（用
EDTA-K2 抗凝）送检验科分子生物诊断室，4 个工作日出报告。 电话：8801063 手机：余宗涛 65327 高波 64444
复杂疾病的病因学诊 断
个体化用药 叶酸个体化解救
高同型半胱氨酸血症 合并高血压患者，其 脑血管疾病风险增加 12 倍速 MTHFR C667T 是血 液同型半胱氨酸浓 度、冠心病和脑卒中 的独立预测因子。 不同 MTHFR 基因型 患者对 5-Fu 等化疗 药物的反应有显著差 异，MTHFR 基因多 态性会影响需要通过 叶酸池代谢的化疗药 物的疗效。
临床意义：
适用科室 不孕不育门诊 生殖中心 孕前教育中心
妇产科
心内科 神经内科
叶酸代谢能力评估及亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性检测试剂盒性能验证
叶酸代谢能力评估及亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性检测试剂盒性能验证许晔琼;赵一琳;高曼秋【期刊名称】《实用检验医师杂志》【年(卷),期】2024(16)1【摘要】目的对江西诺德医疗器械有限公司生产的叶酸代谢能力测定试剂盒进行性能验证,评估该试剂盒能否满足江苏省常熟地区患者对亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因A1298C(rs1801131)及C677T(rs1801133)两个多态性位点的检测需求。
方法收集10例临床样本进行测序,将结果作为“金标准”,同时采用实时荧光聚合酶链反应(PCR)对标本的MTHFR基因多态性位点进行检测,与“金标准”结果比较,验证试剂盒的准确性。
选择测序确定的C677T多态性位点CC及TT基因型标本各1份,A1298C多态性位点AA及CC基因型标本各1例,重复测定5次以验证试剂盒的精密度。
同时对以上4份不同基因型的标本进行DNA浓度测定,根据试剂盒说明书中的性能描述,稀释至最低检出浓度5 mg/L,每例标本各检测3次,要求基因分型结果一致且符合测序分型结果,验证试剂盒的检测下限。
结果所有标本的MTHFR基因多态性位点检测结果与测序结果完全一致,准确率达到100%;对不同基因型的4例标本反复检测5次的结果完全一致,且循环阈值(Ct值)的变异系数(CV)≤5%;而稀释到检测下限的4例标本经过3次重复检测后,仍能准确进行基因分型。
结论采用MTHFR基因A1298C及C677T两个多态性位点检测试剂盒进行基因分型的结果准确、稳定、可靠,能满足实验室对MTHFR基因多态性检测的要求。
【总页数】5页(P73-77)【作者】许晔琼;赵一琳;高曼秋【作者单位】常熟市医学检验所【正文语种】中文【中图分类】R73【相关文献】1.叶酸受体α在胃癌组织中的表达及其与叶酸、亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性以及胃癌生物学行为的关系2.叶酸代谢关键限速酶亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与宫颈癌的关系3.亚甲基四氢叶酸还原酶基因及甲硫氨酸合成酶基因多态性与口服叶酸治疗高同型半胱氨酸血症疗效的关系研究4.四氢叶酸与叶酸对亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性人群妊娠结局影响5.亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性在产前筛查前的性能验证因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
育龄女性叶酸代谢相关基因位点多态性研究
·论著·《中国产前诊断杂志（电子版）》 ２０２２年第１４卷第１期育龄女性叶酸代谢相关基因位点多态性研究陈延冰 梁杰 张艳霞（广东省妇幼保健院，广东广州 ５１１４４０）【摘要】 目的 利用基因检测技术，调查广东地区育龄妇女叶酸代谢相关基因多态性分布，筛查出机体叶酸利用能力有缺陷的高风险个体，为其叶酸增补方案提供科学理论指导。
方法 选取５３８６例育龄妇女作为研究样本，利用ＤＮＡ提取以及多重连接探针扩增（ｍｕｌｔｉｐｌｅｘｌｉｇａｔｉｏｎ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｐｒｏｂｅａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ＭＬＰＡ）检测技术，检测亚甲基四氢叶酸还原酶（ｍｅｔｈｙｌｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｆｏｌａｔｅｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＭＴＨＦＲ）叶酸代谢相关基因多态性分布。
结果 犕犜犎犉犚基因６７７位点ＣＣ、ＣＴ、ＴＴ基因型频率分别为５３．５％、３７．４％、９．１％；犕犜犎犉犚基因１２９８位点ＡＡ、ＡＣ、ＣＣ基因型的频率分别为５９．７％，３５．１％，５．２％。
结论 犕犜犎犉犚基因相关位点的检测可成功筛查出叶酸利用欠缺的高风险育龄妇女，为其叶酸增补方案提供科学量化指导。
【关键词】 叶酸代谢；亚甲基四氢叶酸还原酶；多态现象【中图分类号】 Ｒ３９４．３ 【文献标识码】 Ａ犇犗犐：１０．１３４７０／ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｊｐｄ．２０２２．０１．００９犇犻狊狋狉犻犫狌狋犻狅狀狅犳狋犺犲犳狅犾犪狋犲犿犲狋犪犫狅犾犻狊犿犵犲狀犲狆狅犾狔犿狅狉狆犺犻狊犿犻狀狑狅犿犲狀狅犳犮犺犻犾犱犫犲犪狉犻狀犵犪犵犲犆犺犲狀犢犪狀犫犻狀犵，犔犻犪狀犵犑犻犲，犣犺犪狀犵犢犪狀狓犻犪犌狌犪狀犵犱狅狀犵犠狅犿犲狀犪狀犱犆犺犻犾犱狉犲狀犎犲犪犾狋犺犆犪狉犲犎狅狊狆犻狋犪犾，犌狌犪狀犵狕犺狅狌５１１４４０，犌狌犪狀犵犱狅狀犵，犆犺犻狀犪【犃犫狊狋狉犪犮狋】 犗犫犼犲犮狋犻狏犲 ｉｓｔｏｕｓｅｇｅｎｅｔｉｃｄｅｔｅｃｔｉｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｔｈｅｆｏｌａｔｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｇｅｎｅｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｉｎｗｏｍｅｎｏｆｃｈｉｌｄｂｅａｒｉｎｇａｇｅｉｎＧｕａｎｇｄｏｎｇ，ｓｅｌｅｃｔｈｉｇｈ ｒｉｓｋｇｒｏｕｐｏｆｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓｗｈｅｒｅｔｈｅｂｏｄｙｃａｎｎｏｔｕｓｅｆｏｌｉｃａｃｉｄｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙ，ａｎｄｐｒｏｖｉｄｅｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃａｎｄｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌｇｕｉｄａｎｃｅｆｏｒｗｏｍｅｎ’ｓｆｏｌｉｃａｃｉｄｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ．犕犲狋犺狅犱狊 ｉｓｔｏｓｅｌｅｃｔａｒｅｓｅａｒｃｈｓａｍｐｌｅｏｆ５３８６ｃｈｉｌｄｂｅａｒｉｎｇａｇｅｗｏｍｅｎ，ａｎｄｔｏｄｅｔｅｃｔｆｏｌａｔｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｇｅｎｅｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｒｅｌａｔｅｄｔｏｍｅｔｈｙｌｅｎｅｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｆｏｌａｔｅｒｅｄｕｃｔａｓｅ（ＭＴＨＦＲ）ｕｓｉｎｇＤＮＡｅｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄｍｕｌｔｉｐｌｅｘｌｉｇａｔｉｏｎ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｐｒｏｂｅａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ（ＭＬＰＡ）ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｔｅｃｈｎｉｑｕｅ．犚犲狊狌犾狋狊 ｓｈｏｗｓｔｈａｔｔｈｅｇｅｎｏｔｙｐｅｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓｏｆＣＣ，ＣＴａｎｄＴＴａｔＭＴＨＦＲ６７７ｌｏｃｉｗｅｒｅ５３．５％，３７．４％，９．１％ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ａｎｄｔｈｅｇｅｎｏｔｙｐｅｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓｏｆＡＡ，ＡＣａｎｄＣＣａｔＭＴＨＦＲ１２９８ｌｏｃｉｗｅｒｅ５９．７％，３５．１％，５．２％ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．犆狅狀犮犾狌狊犻狅狀 ｉｓｔｈａｔｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｇｅｎｅｌｏｃｉｏｆＭＴＨＦＲｃａｎｂｅｕｓｅｄｔｏｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｓｅｌｅｃｔｈｉｇｈ ｒｉｓｋｇｒｏｕｐｗｉｔｈｔｈｅｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆｕｓｉｎｇｆｏｌｉｃａｃｉｄ，ａｎｄｐｒｏｖｉｄｅｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃａｎｄｑｕａｔｉｔａｔｉｖｅｇｕｉｄａｎｃｅｆｏｒｔｈｅｉｒｆｏｌｉｃａｃｉｄｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ．【犓犲狔狑狅狉犱狊】 Ｆｏｌｉｃａｃｉｄｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ；Ｍｅｔｈｙｌｅｎｅｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｆｏｌａｔｅｒｅｄｕｃｔａｓｅ（ＭＴＨＦＲ）；Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ；Ｇｅｎｅｔｉｃ；Ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅｓｙｎｔｈａｓｅｒｅｄｕｃｔａｓｅ 《中国出生缺陷防治报告（２０１２）》中提到，我国出生缺陷发生率高达５．６％，叶酸在出生缺陷的防护起到关键作用。
叶酸代谢酶检测(222)
叶酸代谢酶基因筛查项目介绍近年来，不育不孕与新生儿出生缺陷发生率呈逐年上升趋势，引起了医疗及政府相关部门的高度重视。
中国疾病预防控制中心妇幼保健中心于2007年先后三次向全国妇幼保健院发出关于开展“妇幼保健遗传检测服务项目”的函，特别强调：“随着人类基因组计划和国际人类基因组单体型图计划的完成，在发达国家基因检测技术也逐渐成为健康医疗体系中的一部分，并已证明能有效降低个人患病风险，同时节约医疗开支”。
同时指出：“为了提升妇幼保健服务的技术含量，将最新的预防检测技术及时应用于妇幼保健服务。
”首期推出了以“孕期叶酸需求遗传检测”为代表的15项“妇幼保健遗传检测服务项目”。
卫生部于2 009年6月发出了关于《增补叶酸预防神经管缺陷项目管理方案》的通知，进一步加大了预防新生儿出生缺陷宣传和管理力度，对各级卫生部门提出了具体要求。
叶酸缺乏是导致新生儿出生缺陷的主要原因。
导致机体缺乏叶酸有两个方面的原因：一是叶酸摄入量不足，二是由于遗传（基因）缺陷导致机体对叶酸的利用能力低下（叶酸代谢通路障碍）。
科学研究证明，通过基因检测技术手段，对人体MTHFR基因及MTRR基因做检测，可以及早发现不同个体对叶酸的吸收利用水平，从而筛查出容易引起叶酸缺乏的高危人群，实现个性化增补叶酸（因人而异地确切给出叶酸补充计划和补充量），从而增强叶酸补充依从性，同时加强产前检查，以降低新生儿出生缺陷风险。
而现实生活中，有超过50%的女性是在无意中受孕的。
当知道受孕后，增补叶酸的关键期往往已滞后了2-3个月，不利于胎儿神经管缺陷的有效预防。
从另一方面，，叶酸增补不应仅仅局限在女性，男性补充叶酸有着同等重要的意义。
科学研究证明，男性体内缺乏叶酸，会导致精子质量降低，精液中精子携带的染色体数量异常，引起新生儿出生缺陷。
机体叶酸水平低下，也是引起不育不孕、自发性流产的重要原因之一。
因此，新婚夫妇准备怀孕前，至少应该做一项“孕期叶酸需求（女性）”及“高同型半胱氨酸血症（男性）”的基因检测，这样更有利于优孕。
叶酸代谢能力基因检测操作流程
MTHFR C677T , MTHFR A1298C, MTRR A66G基因检测操作流程实验流程一、操作步骤适用仪器：普通PCR仪样本要求：EDTA抗凝剂的静脉全血（100µl），室温保存不超过7天，2～8℃保存不超过1个月，-20℃保存不超过3个月，反复冻融次数不超过5次；DNA的浓度应不低于5ng/μl，A260/ A 280应在1.6~2.0之间。
有血块的样本需经匀浆处理或用组织研磨仪研磨处理后再进行全血DNA的提取。
检验方法：（试剂盒中的检本测卡、阳性/阴性对照卡上标识解释如下：M表示突变型，WT表示野生型，C表示质控线，T表示检测线。
）A：样本DNA的制备试剂盒准备工作：1、清洗液BW-I：用50 ml量筒分别移取35 ml无水乙醇（分析纯）和35 ml异丙醇加入至清洗液BW-I试剂瓶中，颠倒混合均匀，在试剂瓶上标明“已加入醇”和日期，备用。
2、清洗液BW-II：用50 ml量筒移取49 ml无水乙醇加入至清洗液BW-II试剂瓶中，颠倒混合均匀，在试剂瓶上标明“已加入醇”和日期，备用。
3、蛋白酶K准备：取出蛋白酶K，室温解冻，涡旋混匀后备用。
4、磁性微粒准备：将磁性微粒涡旋混匀，保证均一。
实验操作步骤：1.将20 μl蛋白酶K溶液加入2 ml 离心管的管底。
依次加入100 μl全血、200 μl裂解液BL，用涡旋振荡器混合15 sec(以下简称涡旋混匀)，56 ℃水浴20 min。
2.向步骤1裂解处理的样品中依次加入300 μl结合液BI、25 μl的磁性微粒（移取前必须充分涡旋混匀），涡旋混匀，室温静置5 min。
磁性分离5 min，弃上清。
3.从磁性分离器上取出离心管，加入400 μl清洗液BW-I，涡旋混匀，磁性分离至上清澄清（期间上下颠倒数次，以清洗离心管管壁），弃上清；重复本步操作，以400μl清洗液BW-I重复清洗一次。
4.从磁性分离器上取出离心管，加入400 μl清洗液BW-II，涡旋混匀，磁性分离至上清澄清（期间上下颠倒数次，以清洗离心管管壁），弃上清（尽可能弃去所有的清洗液BW-II）。
育龄妇女叶酸代谢相关基因多态性分布研究
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆｔｈｅｆｏｌａｔｅｇｅｎｅｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎｗｏｍｅｎｏｆｃｈｉｌｄｂｅａｒｉｎｇａｇｅ，ａｎｄｔｏｓｃｒｅｅｎｏｕｔ ｈｉｇｈｒｉｓｋｇｒｏｕｐｓｗｉｔｈｐｏｏｒａｂｉｌｉｔｙｔｏｕｓｅｆｏｌｉｃａｃｉｄｂｙｇｅｎｅｔｉｃｄｅｔｅｃｔｉｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｔｏｐｒｏｖｉｄｅｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃａｎｄｒｅａｓｏｎａｂｌｅｆｏｌｉｃａｃｉｄｓｕｐｐｌｅ ｍｅｎｔａｔｉｏｎｐｒｏｇｒａｍｓｆｏｒｗｏｍｅｎｏｆｃｈｉｌｄｂｅａｒｉｎｇａｇｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｏｎｅｈｕｎｄｒｅｄａｎｄｆｏｒｔｙｆｏｕｒｃａｓｅｓｏｆｃｈｉｌｄｂｅａｒｉｎｇａｇｅｗｏｍｅｎｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔ ｅｄｆｏｒｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈ．ＴｈｅＳｉｎｇｌｅＮｕｃｌｅｏｔｉｄｅＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ（ＳＮＰ）ｌｏｃｉｏｆｇｅｎｅｓｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅｆｏｌａｔｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｓｕｃｈａｓｍｅｔｈｙｌｅｎｅｔｅｔｒａ ｈｙｄｒｏｆｏｌａｔｅｒｅｄｕｃｔａｓｅ（ＭＴＨＦＲ），ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅｓｙｎｔｈａｓｅｒｅｄｕｃｔａｓｅ（ＭＴＲＲ）ｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｓｏｍｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓｉｎ ｃｌｕｄｉｎｇＤＮＡｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｏｆＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｐｒｏｄｕｃｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅｇｅｎｏｔｙｐｅｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓｏｆ ＣＣ，ＣＴａｎｄＴＴａｔＭＴＨＦＲ６７７ｌｏｃｉｗｅｒｅ２１．５％，４０．３％ ａｎｄ３８．２％ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＴｈｅｇｅｎｏｔｙｐｅｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓｏｆＡＡ，ＡＣａｎｄＣＣａｔ ＭＴＨＦＲ１２９８ｌｏｃｉｗｅｒｅ７５．０％，２２．２％ ａｎｄ２．８％ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＴｈｅｇｅｎｏｔｙｐｅｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓｏｆＡＡ，ＡＧａｎｄＧＧａｔＭＴＲＲ６６ｌｏｃｉｗｅｒｅ ６３．２％，３１．３％ ａｎｄ５．６％ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ ＢｙｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｓｏｆｇｅｎｅｌｏｃｉｏｆＭＴＨＦＲａｎｄＭＴＲＲ，ｈｉｇｈｒｉｓｋｇｒｏｕｐｓｗｉｔｈ ｐｏｏｒａｂｉｌｉｔｙｔｏｕｓｅｆｏｌｉｃａｃｉｄｃａｎｂｅｓｃｒｅｅｎｅｄｏｕｔｔｏｐｒｏｖｉｄｅｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃｂａｓｉｓｆｏｒｔｈｅｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｏｆｆｏｌｉｃａｃｉｄ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｆｏｌｉｃａｃｉｄｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ；Ｍｅｔｈｙｌｅｎｅｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｆｏｌａｔｅｒｅｄｕｃｔａｓｅ（ＮＡＤＰＨ２）；Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，ｇｅｎｅｔｉｃ；Ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅｓｙｎｔｈａｓｅｒｅｄｕｃｔａｓｅ
亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性在产前筛查前的性能验证
２０２１年１２月 第２８期综合医学论坛亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性在产前筛查前的性能验证张艳秋太仓市疾病预防控制中心，江苏 苏州 215400【摘要】目的：亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因多态性检测是产前筛查的一个重要项目，有助于指导临床，避免新生儿缺陷有重要意义，需确保结果的准确性。
方法：选取门诊进行产前筛查的孕妇样本(覆盖MTHFR三种基因型)，对西安金磁纳米生物技术有限公司的MTHFR C677T基因检测试剂盒进行检测下限、符合率、精密度三方面的性能验证。
结果：MTHFR C677T基因检测试剂盒具有高精密度和符合率，在临床应用中的安全性和有效性均能保证。
结论：MTHFR C677T基因快速层析检测系统实验快速简便，在短时间内就可观察到结果，基本满足对产妇进行产前筛查的要求，可以应用于临床检测。
【关键词】 亚甲基四氢叶酸还原酶基因；产前筛查；PCR+金标免疫层析法；性能验证[中图分类号]R711.6 [文献标识码]A [文章编号]2096-5249(2021)28-0270-03随着二胎政策放开，高龄孕妇与日俱增，这不仅仅要求医师提高剖宫产的手术技能，减少孕产妇死亡率，更为检验科工作人员和临床医师敲响警钟，如何联合协作做好产前筛查，降低新生儿畸形和死亡率。
出生缺陷影响着新生儿的生存和后续生活，也对新生儿家庭产生难以抹去的阴影，更给社会造成了巨大的负担。
现今，新生儿缺陷难以有效治疗，所以临床上多采取产前筛查的方法预防新生儿缺陷发生。
大量研究已经证明，亚甲基四氢叶酸还原酶(Recombinant Methylenetetrahydrofolate Reductase, MTHFR)基因是叶酸代谢通路中的关键代谢酶，亚甲基四氢叶酸还原酶缺陷可以导致5-甲基四氢叶酸合成减少，通过体内生化变化最终导致叶酸水平降低和发生高同型半胱氨酸血症(Hyperhomocysteinemia, Hhcy)。
叶酸基因检测用药指导
药物
预测内容
送检标本
检测项目
基因型
TT CT CC 表型
突变纯合子突变杂合子野生型指标意义
酶活性显著降低↓酶活性降低↓酶活性正常√用药指导增加剂量，延长周期增加剂量，延长周期
常规剂量备注
叶酸疗效外周血/口腔拭子MTHFR C677T 中国疾病预防控制中心妇幼保健中心指南：叶酸利用能力基因检测与风险评估于2008年即已被中国疾病预防控制中心妇幼保健中心列为临床应用指南（参见《妇幼保健医疗临床遗传检测项目资料汇编》第六卷临床应用指南之二十一《叶酸利用能力》）。
MTHFR是叶酸代谢的关键酶。
MTHFR 677位点突变杂合子患者酶活性活性降低35%，突变纯合子患者酶活性显著降低70%。
突变纯合子人群MTHFR活性显著降低，叶酸补充：孕前3个月800微克/天，孕早期0-12周800微克/天，13-40周400微克/天。
突变杂合子人群MTHFR活性降低，叶酸补充：孕前3个月400微克/天，孕早期0-12周800微克/天，13-40周400微克/天。
野生型人群MTHFR 活性正常，叶酸补充：孕前3个月400微克/天，孕早期0-12周400微克/天。
高同型半胱氨酸患者MTHFR基因多态性与叶酸治疗剂量的相关研究
·8·高同型半胱氨酸患者MTHFR基因多态性与叶酸治疗剂量的相关研究郭 倩 聊城市第二人民医院 山东第一医科大学附属聊城二院 252600摘 要：目的…探讨高同型半胱氨酸（HHcy）患者MTHFR基因多态性与叶酸治疗剂量的相关性。
方法…选择2018年7月到2020年8月在我院治疗的HHcy患者216例为研究对象，检测MTHFR基因多态性。
根据MTHFR类型分为A组（677CC型，72例）、B组（677CT型，72例）、C 组（677TT型，72例），每组病患分别给予每天0.4mg、0.8mg、5mg叶酸。
一个月后，比较分析三组同型半胱氨酸（Hcy）水平。
结果…分别服用0.4mg、0.8mg、5mg叶酸，治疗1个月后677CC、677CT、677TT型Hcy水平均明显低于治疗前，差异有统计学意义（P<0.05）。
结论…高同型半胱氨酸患者中MTHFR基因为677CC型，每天给予0.4mg叶酸能明显降低Hcy水平，然而对于677CT型、677TT型，需每天给予0.8mg叶酸才可使Hcy水平有效降低，每天给予5mg叶酸同每天给予0.4mg、0.8mg叶酸并没有显著优势。
关键词：高同型半胱氨酸 MTHFR基因 多态性 叶酸 不同剂量含硫氨基酸由蛋氨酸、半胱氨酸与同型半胱氨酸（Hcy）组成，Hcy属于代谢蛋氨酸的产物，当人体产生的同代谢Hcy相关的辅因子或酶的不足，使代谢Hcy出现障碍，最后导致Hcy水平提高[1]。
正常人生成与清除Hcy需严格维持动态平衡，血浆浓度大约是5~15μmol/L，若外周血Hcy的浓度超过16μmol/L，就使高同型半胱氨酸…（HHcy）。
对Hcy水平产生影响的主要是环境、遗传因素，亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）是对代谢Hcy过程产生影响的关键酶，这类型酶的活性会使代谢Hcy障碍减弱，进而导致MTHFR[2]。
叶酸是组成维生素B的一种，对Hcy再甲基化的过程进行参与，使Hcy水平降低，然而通过研究显示，肿瘤的出现同叶酸息息相关，有食管癌、胃癌、结直肠癌等，叶酸大剂量给予能使Hcy水平降低。
叶酸代谢
孕期叶酸需求基因检测叶酸属于B 族维生素，是DNA 和RNA 合成过程中需要的重要物质，为基因调控的甲基化过程提供甲基供体，参与体内许多重要物质如蛋白质、脱氧核糖核酸(DNA)及血红蛋白等的合成，并协助完成氨基酸的转化，从而在细胞生长、分化、修复和宿主防御等方面起重要作用。
人体不能合成叶酸，必须依靠外源性供给。
叶酸缺乏导致母体同型半胱氨酸浓度升高，会造成胎儿生长迟缓、早产及婴儿低出生体重的危险性增加，还可导致胚胎神经管畸形(NTD)、心脏畸形，使母体习惯性自发流产和妊娠并发症增加。
育龄妇女增补叶酸是我国优生优育相关措施的重要内容之一，1997年，卫生部批准第一个小剂量叶酸片“斯利安”用于临床。
2009年6月，卫生部印发了《增补叶酸预防神经管缺陷项目管理方案》的通知。
临床实践证明，服用叶酸可以使神经管缺陷的发病率下降50-85%。
但我国每年仍还有10万人左右的神经管缺陷发生。
导致机体缺乏叶酸主要有两个方面的原因：一是叶酸摄入量不足，二是由于遗传（基因）缺陷导致机体对叶酸的利用能力低下（叶酸代谢通路障碍）。
另外，孕妇、乳母都处于特殊的生理状态，叶酸需要量增加，更需特别注意叶酸的增补。
与叶酸利用能力相关的关键基因位点：科学研究证实并且机理研究清楚的与甲基类维生素（叶酸及维生素B12）代谢密切相关的基因是MTHFR 和MTRR 。
5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR ）、甲硫氨酸合成酶还原酶（MTRR ）这两个基因变异引起的相应的酶活性降低可阻抑同型半胱氨酸转化为甲硫氨酸，导致低叶酸血症和高同型半胱氨酸血症以MTHFR 基因C677T 位点为例：我国推荐孕期补充量为400微克/天，可以显著降低患儿的出生缺陷，据统计数据显示可以降低胚胎神经管畸形NTDs 发病率，但是仍对15%-59%的人群效果不明显，通过增加合适剂量的叶酸可以进一步降低NTDs 。
通过基因筛查叶酸代谢缺陷人群，个性化增补叶酸：叶酸利用能力基因检测项目涉及的基因及位点如下表所示：风险分级：通过对MTHFR基因和MTRR基因及其相关位点的检测，可以直接发现被检测者叶酸代谢方面（即叶酸的利用能力）的遗传缺陷，从而根据风险高低（相关代谢酶的活性程度）建议更准确的补充剂量。
叶酸代谢及临床应用--孕妇讲堂
叶酸在人体的代谢途径
叶酸对细胞 的分裂生长及核 酸、氨基酸、蛋 白质的合成起着 重要的作用。 MTHFR、 MTRR基因是叶 酸代谢的关键基 因。
MTHFR MTRR基因功能
孕妇为什么要补充叶酸
合理补充叶酸的科学认知-个体有差异
合理补充叶酸的科学认知-基因差异
不同人叶酸代谢相关基因的基因型不同，因此不同人应该补充的叶 酸量不同。
叶酸代谢及临床应用
叶酸及其生理功能
叶酸，也叫维生素B9，是一种水溶 性维生素。 富含于新鲜水果蔬菜。
人体缺少叶酸可导致红血球的异常， 未成熟细胞的增加，贫血以及白血球减 少。叶酸对胎儿发育尤为重要，孕妇
缺乏叶酸有可能导致胎儿出生时出 现低体重、唇腭裂、心脏缺陷等以 及引起胎儿神经管发育缺陷，从而 导致畸形。
叶酸需求基因检测的风险评级
一个健康的宝宝
结束 谢谢大家 ~ ！
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
补充叶酸能降低新生儿神经管畸 形风险
研究表明，孕期每天补充0.4-0.8mg叶酸片，能降低神经管畸形风险50-70%
降
低
-50% -
NTDs
-70%
）的
比
率
（
%
单纯叶酸片
MTHFR基因检测与叶酸代谢产科方向
Hannah Blencowe et al . International Journal of Epidemiology2010;39:i110-i121.
MTHFR C677T基因突变使出生缺陷风险升高
• 母亲677TT纯合子突变使出生神经管缺陷婴儿的风险升高2倍 • MTHFR 677TT基因型妊娠前未服用叶酸的母亲生唇腭裂儿的风险升高 5.9倍 • 677T等位基因型母亲比677 CC基因型母亲生育Down综合征儿的风险升高2.6倍 • 677T等位基因型母亲比677 CC基因型母亲生育先天性心脏病儿高1.2倍
MTHFR基因检测与叶酸代谢产科方向 亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性及临床意义. 国外医学: 遗传学分册. 2005, 28(1): 29-32.
MTHFR 与叶酸代谢
MTHFR基因检测与叶酸代谢产科方向
MTHFR 基因型
MTHFR基因位于1号染色体lp36.3位置， 具有多态性， 存在3种基因型：
MTHFR基因检测与孕期管理
MTHFR基因检测与叶酸代谢产科方向
同型半胱氨酸 5-甲基四氢叶酸 甲硫氨酸 S-腺苷甲硫氨酸（甲基供体）
MTHFR基因检测与叶酸代谢产科方向
MTHFR 基因简介
MTHFR全称为亚甲基四氢叶酸还原酶 (5,10-methylenetetra hydrofolate reductase),它是叶酸-甲硫氨酸代谢途 径中的关键酶。 MTHFR可以使5,10-亚甲基四氢叶酸(5, 10-MTHF)还原为5-甲基四氢叶酸(5MTHF)， 从而为体内嘌呤、 嘧啶的 合成及DNA、RNA、蛋白质的甲基化 提供甲基，同时维持体内正常的同型 半胱氨酸 (Hcy)水平。
MTHFR基因检测与叶酸代谢产科方向
MTHFR C677T基因突变造成叶酸代谢障碍
叶酸
甲硫氨酸
四氢叶酸
S-腺苷甲硫氨酸
5,10-亚甲基四氢叶酸
MTHFR
5-甲基四氢叶酸
DMG 甜菜碱
胆碱
甲基受体
甲基化甲基受体 S-腺苷同型半胱氨酸
-CH3
同型半胱氨酸
MTHFR酶活性下降，导致 5-甲基四氢叶酸生成障碍
1 叶酸代谢障碍与神经管畸 形（NTDs）
神经管畸形(NTDs)是是最严重的出生缺陷之一， 约占所有出生缺陷的1/3。 胎儿神经管畸形的发 生在怀孕的前28天内。
2 叶酸代谢障碍与唐氏综合 症(DS)
唐氏综合症 （DS），又称21-三体综合征或先天 愚型，发病率为1/600-1/800。 母亲的生育年龄、
1.AmJ Epidemiol, 2000, 151(9): 862—877.
2.Am J Epidemiol．2003．157(7)：583-591.
3.Am J Clin Nutr. 1999 ,70(4):495-501.
MTHFR基因检测与叶酸代谢产科方向
4. Cardiol Young. 2013 Feb;23(1):89-98.
4 唇腭裂（NSCL/P）
• 唇腭裂（NSCL/P）是一种常见的先天性缺陷畸形，在中国发病率高达 1.82‰。MTHFR基因C677T的突变会使叶酸的生成减少，进而影响DNA的 合成和HCY（高同型半胱氨酸血症），导致NSCL/P的发生。
3. Cardiol Young. 2013 Feb;23(1):89-98. 4.Am J Epidemiol．2003．157(7)：583-591M. THFR基因检测与叶酸代谢产科方向
MTHFR基因检测与叶酸代谢产科方向
MTHFR C677T 对中国人叶酸转化能力的影响
作者：Krista S Crider 研究机构：亚特兰大疾病控制中心出 生缺陷和发育障碍国家中心 出处：Am J Clin Nutr.2011 Jun;93(6):1365-72 SCI影响因子：6.669
对象和方法：实验选取中国北方怀孕 妇女932名，检测MTHFR 677位点 基因型，采用100µg/d，400µg /d ，4000µg /d，4000µg /w四种方式 补充叶酸，在不同时间点检测血浆、 红细胞叶酸以及血浆Hcy浓度。 实验结论：MTHFR C677T是红细胞 和血浆叶酸以及血液同型半胱氨酸 (Hcy)浓度的独立预测因子。
1.AmJ叶Ep酸ide代mio谢l, 2障000碍, 15是1(9造): 8成62D—8S7的7. 危险因素。
2.Am J Clin Nutr. 1999 ,70(4):495-501. MTHFR基因检测与叶酸代谢产科方向
3 叶酸代谢障碍与先天心脏病（CHD）
• 先天心脏病 （CHD）是导致死胎、死产和新生儿死亡的主要原因。 近年来 我国发病率逐渐增加，每年约20万患儿出生。 叶酸代谢障碍导致的Hcy水平 升高，影响胚胎早期心血管发育。
MTHFR基因酶活性
100% 65% 30%
CC型（野生型） CT型(杂合突变型)
MTHFR CT6T7型7(T纯基合因突突变变型)使得酶活性急剧 下降。
CC
CT
CT
MTHFR基因检测与叶酸代谢产科方向 PLOS ONE. 2013, 8(3): e57917.
MTHFR C677T 突变频率
中国人群中，约29%的人MTHFR基因为 677TT型。
国际遗传学杂志.2007,2;30(1):39-44.
H2O MTHFR C677T基因突变造成叶酸代 谢障碍5-MTHF合成不足 Hcy向甲硫 氨酸的转换发生障碍，引发一系列疾
病。
MTHFR基因检测与叶酸代谢产科方向
MTHFR C677T 基因突变造成叶酸代谢障碍
叶酸代谢障碍导致危害主要有两种方式
MTHFR基因检测与叶酸代谢产科方向 Am J Clin Nutr. 2011 Jun;93(6):1365-72.
MTHFR 677 C→T突变携带者血浆HCY浓度显著上升
MTHFR基因检测与叶酸代谢产科方向
叶酸代谢障碍引发胎儿畸形
¼ of NTD’s are attributed to C677T！