实验动物基本操作

2、固定盒固定 ：此固定方法适用于头、耳部位实 验。
3、固定板（台）固定：此固定方法可使兔俯卧、 仰卧或侧卧固定，适宜于兔头、颈、躯干手术 及其它实验操作。
兔子固定板固定
五、实验犬
（一）抓取 对未经驯服和调教的外购犬抓取时，可用特制的 长柄铁钳夹住犬的颈部，由另一人用布带或粗绳 缚其嘴，并将布带、绳固定在狗耳后颈部，防止 脱落 。
实验动物基本操作
第一节 实验动物的抓取与固定
• 抓取与固定是动物实验的一项基本技术，其目的 是使动物保持在安静的状态下，顺利地进行各项 实验。 • 不同种类的动物的抓取与固定方法不尽一致。 • 同种动物不同实验目的、实验内容，抓取与固定 方法也可以不同。 • 不同实验者的操作习惯上也存在差异。
一、小鼠
实验动物编号标记标准操作规程
1．目的：为了规范实验动物编号标记方法，对分组后的实验动物进行标记编号，制 定本程序。 2．范围：适用于实验动物编号标记的活动。 3．职责：所有实验人员应遵守本规程，动物实验室负责人负责监督和管理。 4．工作程序： 4.1良好的标记方法应满足标号清晰、耐久，简便、适用、无明显损伤、无毒和易辨 认等要求。常用的标记方法有染色法、耳缘剪孔法、烙印法、挂号牌法、挂环法 等。 4.2染色法：染色法是用化学剂在动物身体明显部位如被毛、四肢等处进行涂染，或 用不同颜色等代表一定的编号，来区别各组动物，是实验室最常用、最容易掌握 的方法。 4.2.1常用染色剂：黄色：3％～5％苦味酸溶液 红色：0.5％中性红或碱性品红溶液 咖啡色：2％硝酸银溶液（涂后需光照10分钟） 黑色：煤焦油的酒精溶液 紫色：龙胆紫溶液
日龄/d 体重/g 日龄/d 体重/g 初生 7 20 30 60
60～80 100～120 150～200 170～220 240～300 90 120 180 520～600
330～400 400～470
（三）家兔
家兔的门齿和爪随年龄增长而增长，是年龄鉴 别的重要标志。 青年兔门齿洁白，短小，排列整齐；老年兔门 齿暗黄，厚而长，排列不整齐，有时破损。白色家 兔趾小基本呈红色，尖端呈白色。1岁家兔红色与白 色长度相等； 1 岁以下，红多于白； 1 岁以上，白多 于红。 还可根据趾爪的长度与弯曲度来区别。青年兔 趾爪较短，直平，隐在脚毛中，随年龄的增长，趾 爪露出于脚毛之外，而且爪尖钩曲。另外，家兔皮 薄而紧，眼神明亮，行动活泼的为青年兔；皮厚而 松，眼神颓废，行动迟缓的为老年兔。
（二）固定
实验台固定：用特制的长柄铁钳夹住犬的颈 部后，麻醉动物。将麻醉的犬放在实验台上， 再用粗棉带（绳）固定四肢于实验台上。并将 犬舌拉出。此固定方法仰卧位适用于口腔、颈、 胸、腹、四肢等部位的实验，俯卧位适用于脑、 背部位的实验。
注意： 狗性情凶恶、咬人，特别是对陌生人有攻击性。 对刚购入的狗要特别小心，避免被其咬伤。 在缚嘴时，动作要迅速，捆绑松紧要适中。
打耳孔法：小型动物
4.7 剪趾法：小型动物
第四节 分组
随机化分组
• 避免人为影响
• 例：将14只小鼠随机分成两组。 • ①先将小鼠编为1～14号， • ②在随机数字表上任点一数，按任意方向连续抄 14个随机数字。 编排如下：
• • •
动物编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 随机数字 16 22 77 94 39 49 54 43 54 82 17 37 93 23 归 组 B B A B A A B A B B A A A A
1、徒手固定：对体重较小的大鼠可用拇指、食指捏 住大鼠耳部及颈部皮肤，余下三指紧捏住背部皮肤， 置于掌心，调整好大鼠在手中的姿势即可进行实验 操作。如：灌胃、腹腔注射、肌肉注射、皮下注射 等实验 。
2、固定板固定：方法与小鼠固定板固定相同，
只是需选择更大一些的固定板。 3、固定器（盒）固定：方法与小鼠固定器（盒） 固定相同，只是固定器较小鼠的大。同样适用 于大鼠尾静脉注射。
4.2.2 编号的原则：如动物数在10只以下， 在左前腿上为 1，左腰部为2， 左后腿为3，头部为4，背部为5， 尾基部为6，右前腿为7，右腰部为8， 右后腿为9。如果动物编号超过10， 需要编10～100号码时， 可采用在上述动物的不同部位， 再涂染另一种涂染剂 (如0.5％中性红或品红溶液)斑点， 即表示相应的十位数， 即左前腿上为10，左腰部为20。 如在左前腿上标记红色和黄色斑点， 表示为11，如果红色标记在左前腿上， 而黄色标记在左腰部，是12， 以此类推。如图。 本设施大小鼠采用染色法编号标记。
日龄/d 1 3 4 5 8
外观形态特征 仔鼠裸体鲜红 耳壳露出表皮 脐带瘢痕脱落 能翻身 能爬行
日龄/d 10 9～11 13～15
外观形态特征 能听到声音 全身被白毛，门齿长出 眼皮张开，能跳跃，能抓取东西
18以后
能自行采食，独立生活
2. 根据体重鉴定日龄 ⑴ 小鼠日龄与体重的对应
防止被抓伤。另外抓取时不能只提兔耳或四肢，
也不能用单手只抓颈背部皮肤。
（二）固定
1、徒手固定：用一只手抓住兔的颈背部皮肤，另 一只手抓住兔的两后肢，固定在实验台上。
也可以坐在椅子上用一手抓住兔颈背皮肤和两耳， 大腿挟住兔的后半身，用另一只手抓住两前肢将 兔固定。此固定方法适用于腹腔、肌肉注射，及 经口给药。
• ③奇数代表A织，偶数代表B组 • ④A组： 3 5 6 8 11 12 13 14 • B组： 1 2 4 7 9 10 • ⑤调整分组：接刚才随机数字23继续抄表得随机数 字78，用78除以8（因为需要把A组的8个数字调整 掉一个），得余数6，所以把A组的第6个动物，即 12号动物调整到B组
• ⑥ 最终分组
三、豚鼠
（一）抓取 抓取幼龄豚鼠时，用两手捧起；成熟豚鼠可以用 左手大把抓起。
注意：
豚鼠性情温和，一般不伤人，但胆小易惊，易
造成自伤。抓取时，不能太粗野，更不能抓腰腹部，
在操作过程中，如果豚鼠挣扎，手不要越握越紧， 否则会造成豚鼠呼吸困难，甚至死亡。
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（二）固定
1、徒手固定：
先用左手轻轻扣、按住豚鼠背部。
（一）、抓取 用右手拇指和食指的指腹抓住尾部中央提起。
（二）、固定
1、徒手固定
（1）将小鼠提起放在饲养盒盖子上，轻轻向后拉住。 （2）用左手拇指和食指抓住颈、背部中央皮肤。
（3）翻转抓住颈背部的左手，右手拉住鼠尾再用 左手的小指压住尾根部，使整个小鼠呈一条直线。
2、固定板（器）固定
（1）将小鼠麻醉后，用细绳捆住小鼠四肢。
（2）准备一个15-20cm，边缘钉有5个钉子 的 方木板。 （3）将四肢用细绳固定在木版两侧的钉子 上， 在上颚切齿处用细绳 固定在木版前方的钉子上。
固定板固定适用于大多数动物手术。
小鼠固定器适用于尾静脉注射。
二、大鼠和地鼠
（一）抓取 1、 周龄较小的大鼠和地鼠，可以像小鼠一样 抓住尾部提起。
日龄/d
初生
5
10
15
20
25
30
体重/g
1.8
4.0
6.0
11.0
15.0
21.0
24.0
⑵ 大鼠日龄与体重的对应
日龄/d
体重/g
初生
10
20
30
40
6～7 17～25 35～50 55～90 100～150
日龄/d 体重/g
50
60来自百度文库
70
80
150～210 170～240 210～270 240～320
六、实验猴
不管采用哪种抓取与固定方法，都应遵守的基本 原则是： 1.保证实验人员的安全。 2.防止动物意外损伤，禁止采取粗暴的动作。 因此在抓取与固定动物时，应了解动物的生活 习性，生理解剖结构，体重、体型，实验内容确定 动物的抓取与固定方法。
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第二节 年龄的大致判断
（一）大、小鼠
1、根据形态鉴定日龄（大、小鼠情况基本一样）
（二）豚鼠
一般老年豚鼠牙齿和趾爪长，被毛稀疏无光泽，眼 神呆滞，行动迟缓。而年轻豚鼠牙齿短白，爪短软，眼睛 圆亮，行动敏捷，被毛有光泽，且紧贴身体。 也可根据体重来推断大致年龄。同日龄豚鼠，雌性 体重略高于雄性。与大鼠一样，其体重受多种因素的制约。 实验对年龄要求比较严格时，必须由卡片记录提供准确年 龄。
（四）犬
犬的年龄主要以牙齿的生长情况、磨损程 度、外形颜色等情况综合判定。 仔犬在出生后十几天即开始生出乳齿，2个 月以后开始由门齿→犬齿→臼齿顺序逐渐更换为 恒齿，8～l0个月齿换齐。但犬齿需要1岁半以后 才能长坚实。饲养场饲养的品种犬，可以根据记 录，明确了解年龄，而收购的杂种犬就无法知道 确切年龄。实际中，可根据犬齿更换和磨损情况， 估计犬的年龄。
4.3 烙印法：用刺数钳在动物耳上刺上号码，然后用棉签蘸着溶在酒精中的 墨黑在刺号上加以涂抹，烙印前最好对烙印部位预先用酒精消毒。 4.4 号牌法：用金属制号牌固定于实验动物的耳上或系颈上。耳标签、项圈、 腿圈，中、大型动物。
4.5鼠尾标记编号 用苦味酸溶液涂擦在鼠尾部(图)。
4.6 孔法或剪口法： 耳孔法是用打孔机直接在实验动物的耳朵上打孔编号，根据打在动物耳朵上的 部位和孔的多少，来区分实验动物的方法。用打孔机在耳朵打孔后，必须用消毒 过的滑石粉抹在打孔局部，以免伤口愈合过程中将耳孔闭合。耳孔法可标记三位 数之内的号码。另一种耳孔法是用剪刀在实验动物的耳边上剪缺口的方法，作为 区分实验动物的标记。
⑤ A：3，9，10，12 B；1，4，6 C：2，5，7，8，11 ⑥调整分组：接刚才随机数字10继续抄表得随机数字 61，用61除以5（因为需要把C组的5个数字调整掉 一个），得余数1，所以把C组的第1个动物，即2号 动物调整到B组。 ⑦最终分组 A：3，9，10，12 B；1， 2 ，4，6 C：5，7，8，11
顺势抓紧其肩胛上方皮肤，拇指 和食指环箍其颈部。 用右手轻轻托住其臀部，即可将 豚鼠抓取保定。
2、固定板（器）固定：与大、小鼠，豚鼠固 定板固定基本一致。
四、实验兔
（一）抓取 抓住颈背部皮肤及两耳提起，并用左手托住兔 腹部或臀部，使其重量主要落在左手上。
注意：
家兔温顺，一般不会咬人，但脚爪较锐利，要
2、周龄较大的大鼠可张开左手虎口，迅速将拇、食 指插入大鼠的腋下，虎口向前，其余三指及掌心握住 大鼠身体中段，并将其保持仰卧位，然后调整左手拇 指的位置，紧抵在下颌骨上即可进行实验操作 。
注意： 操作者第一次抓取大鼠时，最好戴防护手 套；不能捉提尾尖，也不能长时间将大鼠悬在 空中。
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（二）固定
年龄 2个月以下 2～4个月 4～6个月 6～10个月 1岁 2岁 3岁 4 ～5 岁 6 ～8 岁 9～10岁 10岁以上
犬齿更换和磨损情况 仅有乳齿(白、细、尖) 更换门齿 更换犬齿(白，牙尖圆钝) 更换臼齿 牙长齐，洁白光亮。门齿有尖突 下门齿尖突部分磨乎 上、下门齿尖突大部分磨平 上、下门齿开始磨损呈微斜面，并发黄 门齿磨成齿根，犬齿发黄、磨损 唇部、胡须发白 门齿磨损，犬齿不齐全，牙根黄，唇边胡须全白
• A组： 3 5 6 8 11 13 14 • B组： 1 2 4 7 9 10 12
例：12只大鼠随机分为3组 ① 大鼠编号1~12 ② 在随机数字表上任点一数，按任意方向连续抄12个随 机数字 ③ 每个数分别用3除，记录余数 ④ 根据余数分组
大鼠编号：1， 2， 3， 4， 5， 6， 7， 8， 9， 10， 11， 12 随机数字：08，27，01，50，15，29，39，39，43，79， 69，10 余数： 2， 0， 1， 2， 0， 2， 0， 0， 1， 1， 0， 1 组别： B， C， A， B， C， B， C， C， A， A，C， A
第三节 性别鉴定
小鼠性别鉴定
小鼠性别鉴定
小鼠性别鉴定
兔的性别鉴定
初生兔仔如阴部孔洞扁圆而略大于肛门， 且与肛门相向、距离较近的是母兔；孔洞呈 圆形而略小于肛门，孔洞向前而距肛门较远 的是公兔。
三月龄以上的兔子，只要看有无阴囊即可 区别公母。
兔子的性别鉴定（雌）
兔子的性别鉴定（雄）
第三节 动物编号
• 动物实验时，当使用的动物数或实验分组数大于1 时，需要对动物个体间或组间区别开来，就需进 行编号与标记。因此编号与标记的目的就是动物 个体与组别的识别。 • 标记的方法很多，良好的标记方法应满足：号码 清楚、持久、简便易认和适用，不影响实验结果 ，对动物的刺激小，标记物对动物无毒性。编号 方法无定法，原则是使实验者能够识别动物个体 和组别。