体内药物分析常用生物样品处理方法和方法学验证共64页
体内药物分析第三章生物样品与样品制备

建立完善的数据记录与审核制度,确保实验数据的真实性和可追溯性。
效果评价指标设定和持续改进方向
效果评价指标
根据实验目的和要求,设定合理的效果评价指标,如方法回收率、精密度、准确度等,对实验结果进 行客观评价。
持续改进方向
针对实验过程中出现的问题和不足,制定改进措施并持续改进,如优化实验条件、改进操作方法、提 高设备性能等,不断提高体内药物分析的质量和效率。同时,关注新技术、新方法的发展和应用,不 断完善和更新质量保证和质量控制体系。
质量控制样品的使用
使用质量控制样品进行方法验证和日常质量监控,确保实验结果的准 确性和可靠性。
质量控制方法选择及实施过程监控
方法学验证
在建立新的体内药物分析方法时,应进行充分的方法学验证,包括专属性、线性、精密度、准确 度、稳定性等方面的考察,确保方法的可行性和准确性。
过程监控
在实验过程中,采用定期抽查、盲样测试等方式对实验过程进行监控,确保实验操作的规范性和 结果的可靠性。
04 生物样品保存、运输和接 收标准操作流程
保存条件及时限设定原则
保存条件
生物样品应在规定的低温条件下保存,以确保样品的稳定性和防止降解。通常,血浆、血清和尿液等样品应在20°C或更低温度下保存,而一些特殊样品可能需要在-70°C或更低温度下保存。
时限设定
生物样品的保存时限应根据其稳定性和分析物的性质来确定。一般来说,长期保存的样品应在采集后尽快处理并 冻存,以避免分析物的降解或转化。同时,应定期对保存样品进行质量评估,以确保其完整性和可用性。
新型生物样品的保 存与运输
对于细胞和基因等新型生物样 品,同样需要在低温条件下保 存和运输。此外,还应避免反 复冻融和长时间存放,以确保 样品的稳定性和可靠性。
体内药物分析 生物样品与样品制备

二、样品制备时应考虑的问题
其中5个重点问题: (一)药物的理化性质和存在形式 (二)待测药物的浓度范围 (三)药物测定的目的 (四)选用的生物样品类型 (五)样品预处理与分析技术的关系
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三、生物样品的预处理技术
(一)经有机破坏的方法
1.湿法破坏
硝酸-高氯酸法;电热消化器法;电热板消化法; 烘箱消化法。
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二、样品制备时应考虑的问题
预处理时要考虑以下问题: 1.被测组分的理化性质、存在形式、浓度范围 2.测定目的 3.生物样品种类和基质干扰类型 4.样品的化学组成 5.药物的蛋白结合率 6.被测组分在预处理过程中的稳定性 7.样品在收集、储存和预处理过程中的容器污染 8.预处理过程尽量简单、尽可能高的精密度和准确度 9.预处理的最后一步应使被测组分富集 10.选用的分析方法是否具有专属性、是否满足灵敏度要求
第三章 生物样品与样品制备
第一节
生物样品的种类、采集、制备 与贮存 一、生物样品的种类、采集和制备
1
体内药物分析采用的生物样品包括各种 体液和组织,常用的是血液(血浆、血清、 全血)、尿液、唾液、头发、脏器组织、乳 汁、精液、脑脊液、泪液、胆汁、胃液、胰 液、淋巴液、粪便等样品。
其中最常用的是血浆或血清,因为它们 可以较好地体现药物浓度和治疗之间的关系。
抗氧化剂:一些易氧化的药物,可加入维生素C 或其它抗氧化剂。如血浆中儿茶酚类药物常规保存 仅4周,若加入适量VC,则能保存10周。 奥氮平很容易被空气氧化,因此在样品的储存 和提取时加入了25%的维生素C 溶液10ul 作为抗 氧剂
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第二节 生物样品的预处理与制备
进行体内药物分析时,除了极少数情况下只需将 样品进行简单处理就可以直接测定外,都要采取分离、 净化、浓缩、化学衍生化等预处理技术,为测定创造 良好的条件。 样品预处理是体内药物分析中极为重要的环节, 也是分析中最困难、最繁复的工作。由于药物在体内 存在形式不同、待测药物浓度低、生物介质组份繁杂、 待测药物类型众多、理化性质各异等原因,对生物样 品的预处理很难规定固定的程序和模式,而必须结合 实际情况,采取适当的分离、净化、浓集、化学衍生 化等技术。 26
体内药物分析常用生物样品处理方法和方法学验证ppt课件

5 唾液
• 唾液中所含成分比较简单,且容 易获得,但是只有少数药物的唾 液浓度和血浆游离药物浓度具有 相关性,实际使用不多,当药物 血浆结合率高的时候,唾液中药 物的浓度极低,很难检测。
体内药物分析常用生物样品处理方法和方法学验证
生物样品的保存:
• 采样后除立即分析外,为防止药物发生变化,应:短 期保存,可 4℃冷藏;长期保存,可-20℃冷冻,不要 反复冻融,必要时可以加入酶抑制剂和抗氧化剂。
• 全血不易保存,且血细胞中含有 更多的干扰物质,影响测定,故 很少采用全血测定药物浓度。仅 适用于血浆药物浓度太低或者血 浆药物浓度波动大,且难以控制 的药物如:环孢霉素A。
体内药物分析常用生物样品处理方法和方法学验证
2 血浆
• 测定血中药物浓度通常是指测定血浆或血 清中的药物浓度,而不是指含有血细胞的 全血中的药物浓度。
体内药物分析常用生物样品处理方法和方法学验证
③加入强酸 当pH低于蛋白质的等电点时,蛋白质以阳离子形
式存在,加入强酸,可与蛋白质阳离子形成不溶性盐 而沉淀。常用的强酸有:10%三氯醋酸等。血清与强 酸的比例为1:0.6混合,高速离心,就可除去蛋白质。 在酸性下分解的药物不宜用本法除蛋白。
体内药物分析常用生ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ样品处理方法和方法学验证
的氢键发生变化而使蛋白质凝聚。常用的有机溶剂有:乙 睛、甲醇、乙醇、丙醇、丙酮、四氢呋喃等。
血浆或血清与有机溶剂的体积比为1:3时,就可以将90% 以上的蛋白质除去,采用低温高速速离心机16000r/min离 心10min 便可将析出的蛋白质完全沉淀。
体内药物分析常用生物样品处理方法和方法学验证
• 实际应用中,多是取50uL的血浆,加入500uL的有机溶 剂,涡旋离心后,取上清进样;
07体内药物检测与药品检验方法-药物分析

在杂质可获得的情况下,对于含量 测定,试样中可加入杂质或辅料,考察 测定结果是否受干扰,将含有杂质或降 解产物的试样进行测定,与另一个经验 证了的或药典方法比较结果。
检验方法验证>>
四、检测限 检测限系指试样中被测物能被检测出的
最低量。常用的方法如下。 1.目视法 用已知浓度的被测物,试验出能被可靠
解产物、辅料等)可能存在下,采用的 方法能准确测定出被测物的特性。
检验方法验证>>
1.鉴别反应 应能与可能共存的物质或结构相似化
合物区分。不含被测成分的样品,以及 结构相似或组分中的有关化合物,均应 呈负反应。
检验方法验证>>
2.含量测定和杂质测定 色谱法和其他分离方法,应附代表性
图谱,以说明专属性。图中应标明诸成 分的位置,色谱法中的分离度应符合要 求。
(1)血浆的制备
将采取的血液置含有抗凝剂(如:肝素、草 酸盐、枸橼酸盐、EDTA、氟化钠等)的试管中, 混合后,以2500~3000rpm离心5~10min使与血 细胞分离,分取淡黄色的上清液即为血浆。
药物分析>>体内药物分析
(2)血清的制备 P?
贮藏采取血样后,应及时分离血浆或血清,并最好立
即进行检测。如不能立即测定时,应根据药物在血样 中的稳定性及时处置止于具塞玻璃试管或EP管中密塞 保存。短期保存时置冰箱(4℃)中,长期保存时要在 冷冻橱(库)(-20℃)中冷冻保存。 。
放射免疫的灵敏度最高,是在生物样品中加 入理化性质、免疫学特性和待测物相同的经放射 性性同位素标记的待测物,将该待测物与特异性 的抗体结合,用测量放射性的方法测量并计算结 合部分与游离部分的比值,从而确定待测物的量。
第4章体内药物分析方法的建立与验证 体内药物分析课件,药物分析研究生复试用.重点已标红

二、分析方法的建立
分析方法建立之前
需查阅文献资料——充分了解药物在体内的动力学过程,使所拟定
的分析方法避免受到代谢产物的干扰适用于实际生物样品测定
Hale Waihona Puke 文献查阅:摘要——medline,CA;药学文摘,分析文摘。
全文——各种杂志 移植或改进文献方法
建立新方法。
二、分析方法的建立
初步拟定分析方法后 进行一系列试验工作——选择最佳分析条件
第四章 体内药物分析方法 的建立与验证
2012-4
本章内容提要
分析方法的设计依据
分析方法建立的一般步骤 分析方法验证的内容与要求 分析方法验证的相关国际规范 体内药物分析应用示例
第一节 分析方法的设计依据
待测药物与生物介质 体内分析的目的 实验室的设备条件
待测药物与生物介质
同时验证分析方法的可行性——确认是否适用于实际生物样品
分析方法的建立和验证过程——是不可截然划分的 ——为便于讨论而分别叙述
分析方法的建立步骤
第一步:检测条件的筛选 第二步:分离条件的筛选
1 检测条件的筛选
取被测组分(药物或代谢产物)、内标物 质的标准物质(对照品、标准品或符合标 准的原料药)进行试验。 确定最佳检测条件和检测灵敏度(响应值)
二、分析测定的目的与要求
体内药物分析的目的影响分析方法的应用
药代动力学:研究药物在体内吸收、分布、代谢和排泄过程 不必强调方法的简便、快速; 大多采用色谱及其脱线或在线联用技术,如HPLC、LC-MS
临床治疗药物监测: 测定有效治疗浓度范围内药物浓度 方法尽量简便、易行;适用于长期、批量样品的测定
生物制药技术中的生物样品处理与分析方法

生物制药技术中的生物样品处理与分析方法生物制药技术在医药领域的应用日益广泛,其关键环节之一是生物样品的处理与分析。
生物样品处理与分析方法的选择和优化对于保证生物制药产品的质量和效力至关重要。
本文将介绍生物制药技术中常用的生物样品处理与分析方法,包括样品采集、样品前处理、样品分析等,以及其所涉及的原理和应用。
一、样品采集在生物制药技术中,样品采集是第一步,直接影响后续的样品处理与分析结果。
常见的生物样品包括血液、尿液、组织等。
对于血液样品,最常用的采集方法是采用针头抽血,然后将血液转移到适当的采样管中。
对于尿液样品,通常采用尿杯收集新鲜尿液,然后进行必要的保存和处理。
对于组织样品,常用的方法是通过手术或穿刺获取组织样本,并将其保存在适当的容器中。
二、样品前处理生物样品经过采集后,需要进行前处理来去除干扰物和提取目标分析物。
常见的前处理方法包括离心、过滤、沉淀等。
离心是通过旋转离心机使样品分离成上清液和沉淀物,用于去除离心后产生的沉淀物。
过滤是通过使用合适孔径的过滤器去除样品中的固体颗粒和杂质,例如细胞碎块和蛋白质等。
沉淀是通过加入特定试剂使样品中的目标分析物凝聚成沉淀物,然后通过离心或过滤的方式将其分离出来。
这些前处理方法能够有效地去除样品中的干扰物,提高后续分析的准确性和灵敏度。
三、样品分析生物制药技术中的样品分析是通过对样品中的目标分析物进行定量或定性分析,来评估生物制药产品的质量和效力。
常见的样品分析方法包括免疫学分析、核酸分析、代谢物分析等。
1. 免疫学分析免疫学分析是通过检测样品中的特定抗原或抗体来定量或定性样品中的分析物。
免疫学分析常见的方法包括酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫荧光分析、免疫电泳等。
通过这些方法,可以检测生物制药产品中的特定蛋白质、抗体等成分,评估产品的纯度和含量。
2. 核酸分析核酸分析是通过检测样品中的DNA或RNA来定量或定性样品中的分析物。
常见的核酸分析方法包括聚合酶链反应(PCR)、核酸杂交、基因测序等。
体内药物分析-生物样品与样品制备共87页文档

药物不稳定时,用血浆更好
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(3)全血的制备 采集的血液置于
含有抗凝剂的试管中,轻轻混匀,不离心, 防止凝血,保持血浆和血细胞混合在一起。
需要测全血中血药浓度的情况: 测定平均分布于血细胞内、外的血药浓度 血浆药物浓度波动大,且难以控制 血浆药物浓度太低
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(二)尿液 尿药测定的目的与血液、唾液样品
体内药物分析-生物样品与样品制备
幽默来自智慧,恶语来自无能
第三章 生物样品与样品制备
第一节 生物样品的种类、采集、制备 与贮存 一、生物样品的种类、采集和制备
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(1)血浆(plasma)的制备: 血液合后, 离心,分离血细胞,淡黄色上清液 即为血浆。
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唾液的采集
唾液的采集应尽可能在刺激少的安静状态下 进行。一般在漱口后15min收集,至少采集10 min。
采集混合唾液也可用物理或化学的方法刺激, 在短时间内得到大量的唾液。
非刺激法条件下唾液直接流入容器内,流速 慢,仅约0.05 mL/min。
物理刺激法唾液分泌流速为1~3mL/min;
化学刺激法是用酸刺激味觉或者毛果芸香碱 刺激唾液分泌,流速可达5~10mL/min。
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Crouch研究发现:采集方法对唾液中药 物浓度有显著影响,实验证明唾液中可待因 的平均浓度在非刺激条件下比酸刺激条件下 高3.6 倍,比机械性刺激低50%,是商品化 采集装置的77%。
shellee 的实验证明:酸刺激组和非刺激组 相比,非刺激组唾液与血液药物浓度相关 度( 0.901) 明显高于酸刺激组( 0.872) , 说 明酸刺激采集对唾液与血液药物浓度相关 性有不利影响。
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优点:不受时间和地点的限制,可 反复采集,采集时无痛苦、无感染 危险;唾液成分比血液、尿液简单, 提取方便,有时可直接上样测定; 有些唾液中药物浓度可以反映血浆 中游离型药物浓度。
体内药物分析 体内样品分析 (药物分析课件)

分光光度法 薄层扫描法 气相色谱法 高效液相色谱法
免疫法
五、样品的测定方法
方法
紫外-可见分光光度法 荧光分光光度法 原子吸收分光光度法 紫外扫描 荧光扫描 氢火焰监测器 氮磷检测器 电子捕获监测器 质量碎片选择离子监测器 紫外检测器 荧光检测器 电化学检测器 放射免疫法 酶免疫法 荧光免疫法 游离基免疫法
体内药物分析
一、样品的种类
体内药物分析采用的生物样品种类包括体内的各种体液和组织。其中 最常用的是血液(血浆、血清、全血)、尿液和唾液。
二、样品的采集
采集原则
根据不同的分析目的和要求进行选取; 所取样品应能正确反映药物浓度与效 应之间的关系; 样品应易于获取,便于处理、分析。
二、样品的采集
(一)血样 血样包括血浆、血清和全血,是体内药物 分析中最常用的样品。 血样采集方法:静脉取血或毛细血管取血。 血样采集的量:一般取血量为1~3ml。 动物:采血量不宜超过动物总血量的1/10。
四、样品的制备及测定
样品的制备 (一)样品制备方法选择的一般原则
生物样品的类型 药物的理化性质和浓度范围 药物测定的目的 样品制备与分析技术的关系
四、样品的制备及测定
(二)样品的制备方法 1.去蛋白法
(1)加入沉淀剂和变性试剂:加入中性盐、加入酸、加入金属离子。 (2)加入可与水混溶的有机溶剂:如甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、四 氢呋喃等。 (3)酶消化法:最常用的酶是蛋白水解酶中的枯草菌溶素。
二、样品的采集
(二)尿液
测定尿药浓度主要用于药物的 剂量回收、肾清除率和生物利 用度的研究以及药物代谢类型 的测定。体内兴奋剂检测的样 品主要是尿液。
二、样品的采集
(三)唾液
唾液的pH约在6.9±0.5,个体差异较 大,此外尚受到一些其他因素,如有 无刺激,剌激类型、强度与持续时间, 年龄,性别,疾病,药物等的影响。 一些药物的唾液浓度与血浆浓度相关, 样品易得,取样无损害。
体内药物分析 生物样品与样品制备

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滥用药物、抗抑郁药和抗精神病药等药物都 有长期用药的方式,由于药物在头发中的积累和 储存,为这些药物的检测提供了可能性。 尼古丁、卡马西平、阿米替林、多虑平、安 坦、氯丙嗪、泰尔登、三氟拉嗪、氯氮平和氟 哌啶醇等精神药物均能进入头发,但进入头发 的难易程度是不一致的。药物进入头发的难易 程度可能与药物的分子量、极性和脂溶性有关。
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(2)血清的制备 采集的静脉血液置试管中,放置30 min到1 h,由于激活了一系列凝血 因子,血中的纤维蛋白原形成纤维 蛋白,血液逐渐凝固,离心后上层 澄清的淡黄色液体即为血清。
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血浆比血清分离快,而且制取的量约为全血 的50%~60%(血清只有30% ~ 40%), 多数研究者喜用血浆进行分析测定。若血浆中 含有的抗凝剂对药物的测定有影响,则应使用 血清样品。
4. 加入含锌盐及铜盐的沉淀剂 5. 超滤法 6. 酶水解法 7. 加热法 蛋白质大分子不能通过半透膜 游离药物 枯草杆菌酶,贵,时间长 少用 少用
疑问:2、4法中的盐使溶液的极性更强,药物会游离出?
在色谱法中,高浓度的盐会析出,把柱子堵了
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以上去除蛋白质法仅去除了蛋白 质(只起到保护色谱柱的作用),但 内源性的杂质都在,样品浓度还被稀 释。基本上不能用光谱法测定。
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唾液的采集
唾液的采集应尽可能在刺激少的安静状态下 进行。一般在漱口后15min收集,至少采集10 min。 采集混合唾液也可用物理或化学的方法刺激, 在短时间内得到大量的唾液。 非刺激法条件下唾液直接流入容器内,流速 慢,仅约0.05 mL/min。 物理刺激法唾液分泌流速为1~3mL/min; 化学刺激法是用酸刺激味觉或者毛果芸香碱 刺激唾液分泌,流速可达5~10mL/min。
体内药物分析常用生物样品处理方法和方法学验证

体内药物分析常用生物样品处理方法和方法学验证1.血浆血浆样品处理方法主要包括离心、超滤、蛋白沉淀和固相萃取。
首先,通过离心将血清和细胞分离,并将上清液收集。
然后,使用超滤技术去除高分子物质,如蛋白质,以得到更纯净的血浆样品。
接下来,可以使用蛋白沉淀方法去除血浆中的蛋白质,以便进一步分析非蛋白质药物。
最后,固相萃取是常用的药物浓度测定方法,可以通过固相材料吸附目标药物,然后用洗脱液洗脱和浓缩样品,最后定量分析。
2.尿液尿液样品处理方法常采用固相萃取、pH调节、加入稳定剂等技术。
固相萃取可以去除尿液中的杂质,并将药物萃取到固相材料上,然后用洗脱剂将药物洗脱出来。
pH调节可以使药物离子化或去离子化,以提高其固相萃取的效率。
此外,加入稳定剂可以保持样品的稳定性,防止药物分解或降解。
3.组织和细胞组织和细胞样品处理方法包括离心、组织切割、细胞溶解和蛋白沉淀等技术。
首先,通过离心将组织或细胞分离,并收集上清液。
然后,使用组织切割技术将组织样品切成适当的大小。
对于细胞样品,可以使用细胞溶解剂将细胞完全裂解。
最后,蛋白沉淀可以去除样品中的蛋白质,以便进一步分析非蛋白质药物。
方法学验证是为了确保分析方法的准确性和可靠性而进行的步骤和操作流程的验证。
主要包括以下几个方面:1.线性范围验证:验证方法在一定浓度范围内,药物浓度与测定结果之间的关系是否呈线性。
2.灵敏度验证:验证方法的最低检测限、最低定量限和测定范围等指标,以评估方法对药物浓度的敏感度。
3.精密度和准确度验证:通过重复测定和与参考方法比较等方法验证方法的重复性和准确性。
4.选择性验证:验证方法对样品中其他可能存在的干扰物的选择性,以保证药物的测定不受干扰。
5.稳定性验证:验证样品在不同温度、时间、pH条件下的稳定性,以评估样品的保存期限和条件。
综上所述,体内药物分析常用的生物样品处理方法包括血浆的离心、超滤、蛋白沉淀和固相萃取,尿液的固相萃取、pH调节和加入稳定剂,组织和细胞的离心、组织切割、细胞溶解和蛋白沉淀等。
体内药物分析方法的建立和验证护理课件

多组分同时检测
未来体内药物分析将更加注重多 组分同时检测,以全面了解药物
在体内的代谢和分布情况。
体内药物分析方法面临的挑战与机遇
挑战
随着药物种类和数量的增加,体内药物分析的复杂性也在增加,对分析方法的要求也越来越高。同时, 由于人体内环境的复杂性和动态变化,准确测定药物及其代谢物在体内的浓度和行为仍具有很大挑战 性。
机遇
随着新技术的不断涌现,如质谱技术、核磁共振技术等,为体内药物分析提供了更多的手段和工具, 使得更深入地了解药物在体内的行为成为可能。同时,随着临床对个体化治疗的需求增加,体内药物 分析在指导临床用药、评估治疗效果等方面的应用也将更加广泛。
体内药物分析方法未来的发展方向
跨学科融合
体内药物分析将与生物学、 医学、化学等多个学科进 行交叉融合,形成更全面、 系统的研究体系。
体内药物分析方法的 建立和验证护理课件
• 药物分析方法概述 • 体内药物分析方法建立 • 体内药物分析方法验证 • 体内药物分析方法的应用和案例
分析 • 体内药物分析方法的未来发展与
展望
01
药物分析方法概述
药物分析的定义和重要性
药物分析的定义
药物分析是对药物进行全面分析 的过程,旨在了解药物在体内的 性质、行为和作用。
个体化与精准医疗
随着个体化医疗的发展, 体内药物分析将更加注重 个体差异,为精准医疗提 供有力支持。
新技术应用
新技术如人工智能、大数 据等将在体内药物分析中 发挥重要作用,提高分析 的智能化和精准度。
感谢观看
药物分析方法的建立和验证过程
建立药物分析方法
根据研究目的和实验要求,选择合适的分析方法,建立可靠的检测方法和技术。
体内药物分析分析方法

C:内标物与被测物结构相似 3)内标物的应用 内标物应在样本与处理之前加入,与样本在
相同的条件下进样分析,色图谱得待测物和内标物的峰面积和 峰高。以两者比回归得工作曲线 4)多内标的应用 A:同时测定多种药物,且被测药物的理化性质差异大
3.外标法
1)工作曲线法 2)外标一点法 当工作曲线截距为零,mi=Ai/As×ms
2)氮-磷检测器(NPD)是利用有机药物分子通过氢-空气火焰 产生热电离测定 A:检测器火焰处设有加热的碱金属盐,对氮、硫、磷敏感。灵 敏度10-9g/ml B:可检测分子中含有氮、硫、磷的药物 C:氮杂环类药物,氮在母核中,NPD同时检测原形药和代谢物 D:氮在药物的侧链,NPD只能检测原形药
3)电子捕获检测器(ECD)是一种有选择性的高灵敏度检测器 A:对含有电负性原子或官能团的有机和无机物检测敏感 B:需要高纯度的氮气 C:体内分析中用于具有吸电子基团的有机药物,其原理为:
二.薄层扫描法
是指利用薄层扫描测定薄层色谱斑点含量的一种方法 1.实现操作的规范化和自动化
1)光谱测定 用于物质的定性鉴别 2)色谱测定 用于体内药物的定量分析 2.薄层色谱的优化法 1)薄层色谱分离条件的依据 A:被分离物的性质 B:吸附剂的活性 C:展开剂的活性 展开剂千变万化,找到与被测药物、吸附剂 相匹配的展开剂是获得好的分离效果的关键。 D:理想的分离Rf=0.2-0.8间,清晰集中、分离度佳的一组斑点
3)重复性 取该项下的对照品溶液,连续进样5次,其峰面积的 值RSD≤2.0%
4)脱尾因子(T) A:保证精密度、准确度,特别是峰高定量 B:T=W0.05h/2d1
2.内标法
1)内标法的基本原理 将一个已知量,样品中不含有的纯物质加样品中,GC分析。 2)内标物的选用原则
体内药物分析常用生物样品处理方法和方法学验证

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萃取小柱一次性使用,防止交叉污染!
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固相萃取操作一般有五步:
活化——甲醇/乙腈 润湿小柱,活化填料; 平衡——水或适当缓冲液冲洗平衡小柱; 上样——将样品转移上柱,抽去废液; 淋洗——水或缓冲液最大程度洗去干扰物; 洗脱——用小体积的溶剂将被测物质洗脱下来并收集。
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实际应用中,多是取50uL的血浆,加入500uL的有机溶 剂,涡旋离心后,取上清进样;
若沉淀后,信号相应不好,可尝试更换有机溶剂或者 在沉淀时,加入酸或碱,调节pH值,可能会对结果影 响很大;
常用的酸碱有:盐酸,甲酸,乙酸,氨水等。
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优点:操作简单,为方法开发中最先考虑使用的。
尿液中药物浓度较高,但尿液浓度受尿量的影响,通常变 化较大,应测定一定时间内排入尿中药物的总量。
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5 唾液
唾液中所含成分比较简单,且容 易获得,但是只有少数药物的唾 液浓度和血浆游离药物浓度具有 相关性,实际使用不多,当药物 血浆结合率高的时候,唾液中药 物的浓度极低,很难检测。
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HPLC中化学衍生化法,包括柱前衍生化和柱后衍生化两 种方法。
柱前衍生化分析前尽可能将药物进行提取分离后再衍生 化,防止其他含有相同的功能基团的杂质也被衍生化, 影响分离。柱后衍生化是药物经色谱柱分离之后进行的 ,所以可形成对检测器具有高灵敏度的衍生物。
HPLC法常用的衍生化试剂有邻苯二醛、丹磺酰氯、荧胺 等。
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1.沉淀蛋白
①有机溶剂沉淀法 加入水溶性的有机溶剂,可使蛋白质的分子内及分子间
体内药物分析常用生物样品处理方法和方法学验证PPT学习教案

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根据原理分类:
1.正相色谱原理 2.反相色谱原理 3.离子交换原理
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SPE方法的优点:
1.不会发生乳化;2.适用范围广;3.提取效率高; 4.方便快速,可以一次提取分离多种化合物; 5.溶剂消耗少;6.易于实现自动化; 7.离子交换固相萃取利用离子交换原理,同色谱柱的依 据极性大小的分离原理不同,配合使用,可以最大限度 的分离出药物,去除干扰。
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③加入强酸
当pH低于蛋白质的等电点时,蛋白质以阳离子形 式存在,加入强酸,可与蛋白质阳离子形成不溶性盐 而沉淀。常用的强酸有:10%三氯醋酸等。血清与强 酸的比例为1:0.6混合,高速离心,就可除去蛋白质。 在酸性下分解的药物不宜用本法除蛋白。
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④加入锌盐或铜盐沉淀剂
体内药物分析常用生物样品处理方法和 方法学验证
会计学
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一、处理的目的
生物样品进行前处理的目的在于:
1.药物进入体内后,经吸收、分布、代谢,然后排出体外。在体液、组织和 排泄物中除了游离型(原型)药物之外,还有药物的代谢物、药物与蛋白质 形成的结合物、以及药物或其代谢物与内源性物质,如葡萄糖醛酸、硫酸形 成的葡萄糖醛酸甙、硫酸酯缀合物等多种形式存在,需要分离后测定药物及 代谢物。
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定量下限达10 pg级别!
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体内药物分析方法的建立
➢ 待测药物的理化性质及在生物体内的存在状况 ➢ 分析测定的目的与要求 ➢ 生物样品的类型与预处理方法 ➢ 实验室条件
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