可见分光光度法测定水中微量铁.pptx
可见分光光度法测定水样中微量铁的含量
实验三 可见分光光度法测定水样中微量铁的含量一、实验目的：1、掌握722型分光光度计构造及使用方法。
2、掌握标准曲线的绘制，并通过标准曲线测出水样中Fe3+的含量。
二、实验原理：在可见光区的吸光光度测定中，若被测组份本身有色，则可直接测定。
若被测组份本身无色或色很浅，则可利用显色剂与其反应（即显色反应），使生成有色化合物，进行吸光度的测定。
大多数显色反应是络合反应。
对显色反应的要求是：1、灵敏度足够高，一般选择产物的摩尔吸光系数大的显色反应，以适合于微量组份的测定；2、选择性好，干扰少或容易消除；3、生成的有色化合物组成恒定，化学性质稳定，与显色剂有较大的颜色差别。
在建立一个新的吸光光度方法时，为了获得较高的灵敏度和准确度，应从显色反应和测量条件两个方面，考虑下列因素：1、研究被测离子、显色剂和有色化合物的吸收光谱，选择合适的测量波长；2、溶液PH值对吸光度的影响；3、显色剂用量、显色时间、颜色的稳定性及温度对吸光度的影响；4、被测离子符合比尔定律的浓度范围；5、干扰离子的影响及其排除的方法；6、参比溶液的选择。
此外，对方法的精密度和准确度，也需进行试验。
铁的显色试剂很多，例如硫氰酸铵、巯基乙酸、磺基水杨酸钠等。
邻二氮菲是测定微量铁的一种较好的试剂，它与二价铁离子反应，生成稳定的橙红色络合物（l g K稳=21.3），最大吸收波长入max=510nm。
Fe2+ + 22+此反应很灵敏，摩尔吸光系数ε为1.1×104。
在PH2~9之间，颜色深度与酸度无关，颜色很稳定，在有还原剂存在的条件下，颜色深度可以保持几个月不变。
本方法的选择性很高，相当于铁含量40倍Sn2+、A13+、Ca2+、Mg2+、Zn2+、SiO32-；20倍的Cr3+、Mn2+、VO3—、PO43—；5倍Co2+等均不干扰测定，所以此法应用很广。
分光光度法中，当入射光波长一定，溶液的温度一定，液层厚度一定时，根据Beer定律可得：A=K c即在一定条件下，吸光度与溶液的浓度成正比。
分光光度法测定微量铁
分光光度法测定微量铁分光光度法是指利用物质吸收和透过不同波长的可见光或紫外线，对试样中的成分进行测定的方法。
微量铁是指含铁浓度较低的样品。
本文将介绍如何利用分光光度法测定微量铁的原理、仪器、操作步骤及数据处理方法。
一、原理铁离子在紫外-可见吸收光谱中有很强的特征吸收峰。
在波长范围为200-800nm处，铁离子的最强吸收峰位于400-500nm区域内。
因此，利用紫外-可见分光光度法测定铁离子可以选定适当的波长进行测定。
对于微量铁的测定，常采用1，10-菌落素橙（1，10-phenanthroline orange）作为配合剂，形成铁离子和1，10-菌落素橙配合物，从而实现铁离子的高选择性分析。
配合物的吸收峰位于510～530nm，可以通过分光光度法进行测定。
二、仪器分光光度计三、操作步骤1、制备标准曲线：将铁标准溶液分别加入一系列标准量瓶中，其浓度可控制在0-1.2μg/mL之间，然后分别加入一定量的1,10-菌落素橙溶液，通常为1mL。
用去离子水稀释至刻度线，搅拌均匀。
最后在分光光度计上，以510-530nm为波长进行测定吸收度，根据标准曲线计算出所测样品中铁的浓度。
2、取待测样品：取适量的待测样品，加入足够的1,10-菌落素橙溶液，在水浴中加热混合溶液，待其冷却后取1mL加入10mL容量瓶中，用去离子水稀释至刻度线，搅拌均匀即可。
3、测量：在分光光度计上以510-530nm为波长进行测定吸收度，记录读数。
四、数据处理方法1、标准曲线的绘制：以铁标准溶液的浓度为横坐标，以吸收度为纵坐标，绘制浓度-吸收度曲线。
2、计算未知样品的铁浓度：根据标准曲线计算出所测样品中铁的浓度。
3、参考范围：根据不同的样品类型和所测铁的含量确定参考范围。
分光光度法测定微量铁
分光光度法测定微量铁
一、实验目的：
1.学习分光光度法的原理。
2.掌握T22型分光光度计的工作原理和操作方法。
二、实验原理
朗伯-比尔定律
T=I t /I 0
A=-lgT A=εbc=kc
分别代表 吸光系数、光程、浓度。
三、实验步骤
1、标准曲线的绘制
取6只50mol 容量瓶，分别加入Fe 3+标液0ml 、0.1ml 、0.2ml 、0.3ml 、0.4ml 、0.5ml ，于每只容量瓶中加入10%盐酸羟胺1.0ml 、1mol/lNaAc 溶液5.0ml 、0.5%邻菲啰啉溶液3.0ml ，加水稀释、定容、摇匀，以蒸馏水为参比，在510nm 波长下，1cm 比色皿内，测定溶液的吸光度A ，绘制
A-C 曲线。
2、样品的测定
移取Fe 试样25ml 至50ml 容量瓶，分别按上述用量加入各试液，稀释，定容，摇匀，在510nm 下，1cm 比色皿，测定吸光度A 。
四、数据记录和处理
吸光度A 随浓度变化
浓度C （10-6mol/l ） 0 0.36 0.72
1.08 1.44 1.8 吸光度A 0 0.005 0.009 0.017 0.021 0.043
Fe 试样吸光度为0.032据图可大概测出其浓度为1.7×10-6/l。
水中铁的测定(课堂PPT)
四、实验步骤
• 四、实验步骤 • 1. • 1) 10μg•mL-1铁标准溶液配制 准确称取0.8634g硫酸铁铵NH4Fe(SO4)2•12H2O于
100mL烧杯中，加60mL 3mol•L-1 H2SO4溶液，溶解后定容至1L，摇匀，得 100μg•mL-1储备液(可由实验室提供)。用时吸取10.00mL稀释至100mL，得10μg•mL1工作液。 • 2) 系列标准溶液配制 取6个50mL容量瓶，分别加入铁标准溶液0.00，2.00，4.00， 6.00，8.00，10.00mL，然后加入1mL盐酸羟胺，2.00mL邻二氮菲，5mLNaAc溶液(为 什么?)，每加入一种试剂都应初步混匀。用去离子水定容至刻度，充分摇匀，放置 10min。
• 2. • 选用1cm比色皿，以试剂空白为参比溶液(为什么?)，取4号容量瓶试液，选择440～
560nm波长，每隔10nm测一次吸光度，其中500～520nm之间，每隔5nm测定一次吸 光度。以所得吸光度A为纵坐标，以相应波长λ为横坐标，在坐标纸上绘制A与λ的吸收 曲线。从吸收曲线上选择测定Fe的适宜波长，一般选用最大吸收波长λmax为测定波长。
邻二氮菲分光光度法测定 铁的含量
————10环工2第一组
1
一、实验目的
• 1.学会吸收曲线及标准曲线的绘制，了解分
• 2.掌握用邻二氮菲分光光度法测定微量铁的
• 3.学会722S型分光光度计的正确使用，了 解其工作原理。
• 4.学会数据处理的基本方法。 • 5.掌握比色皿的正确使用。
2
二、实验原理
3
+ Fe2+
N Fe N
NN
NN
• 此配合物的lgK稳=21.3，摩尔吸光系数ε510 = 1.1×104 L•mol-1•cm-1， 而Fe3+能与邻二氮菲生成3∶1配合物，呈淡蓝色，lgK稳=14.1。所以 在加入显色剂之前，应用盐酸羟胺(NH2OH•HCl)将Fe3+还原为Fe2+，
分光光度法测水中的铁 ppt课件
附近，每隔5~10nm测一 次吸光度
以波长λ为横坐标， 吸光度A为纵坐标，
绘制吸收曲线
从吸收曲线上选择 最大吸收波长λmax
7
标准曲线的制作
用吸量管分别移取 铁标准溶液0.0、1.0、 2.0、4.0、6.0、8.0、
10.0mL
分别放入7个 50mL比色管中
加入1mL 盐酸羟胺溶液 2mL 邻二氮菲溶液 5mL 缓冲溶液
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分光光度法测水中的铁
1
邻二氮菲测定水样中铁的含量
❖ 目的要求 ❖ 1.熟悉根据吸收曲线正确选择测定波长的方法。 ❖ 2.学会制作标准曲线的方法。 ❖ 3.掌握邻二氮菲分光光度法测定铁的原理及方法。
可见分光光度法测定水中的铁离子
可见分光光度法测定水中的铁离子光度法是分析化学中一种常见的定量分析方法，在水体中测定铁离子的含量也是常用的方法。
可见分光光度法是光度法中的一种，通过水中铁离子在可见光波长范围内吸收不同强度的光线，来测量其浓度。
下面将从原理、仪器设备、实验步骤和注意事项四个方面介绍可见分光光度法测定水中的铁离子。
一、原理可见光是原则上人眼可以看到的波长范围，它在400~760nm的范围内。
铁离子溶液经过对可见光的吸收后，吸收后的光线传送到光电管中被检测到，从而确定铁离子的浓度。
当水中铁离子存在于最佳吸收波长处（约在510nm波长范围内）时，吸光度与浓度成正比，可以通过绘制标准曲线得出水中铁离子的浓度。
二、仪器设备可见分光光度法测定水中铁离子需要的仪器设备包括分光光度计、玻璃仪器（量筒、烧杯、移液管等）、铁离子标准样品、硝酸铁（III）溶液、氢氧化钠溶液等试剂。
三、实验步骤1. 将分光光度计设置为可见光波长范围，并打开仪器通电预热。
2. 准备一系列的标准铁离子溶液，按照不同的浓度进行标号，将各标准溶液置于量筒内并使用去离子水定容定量，摇匀后使用分光光度计分别进行测定并记录吸光度值。
3. 获取未知浓度的样液，也是按照一定的比例稀释后测定。
读出吸光度值并转化为铁离子浓度。
4. 绘制标准曲线，根据样品的吸光度，查出所测样液的铁离子浓度。
四、注意事项1. 用硝酸铁（III）溶液和氢氧化钠溶液制备铁离子标准溶液时，应注意安全操作，避免触及皮肤和吸入到呼吸道中。
2. 量筒、移液管等玻璃仪器应保持干净，以免影响实验结果。
3. 分光光度计的光程和孔径必须一致，并且需要在测定光线过程中保持稳定。
4. 使用分光光度计时应使用去离子水进行清洗打扫，并注意避免碰撞或摩擦。
综上所述，可见分光光度法测定水中铁离子的原理清晰易懂，操作步骤简单，可以快速准确地测定水体中铁离子的浓度。
在实验过程中，应注意实验室安全，保证仪器的准确性和不受干扰，以获得可靠的实验数据。
《分光光度法测铁》课件
分光光度法测铁的步骤
准备标准铁溶液和待 测溶液。
将待测溶液放入比色 皿中，放入分光光度
计的光路中。
调整分光光度计波长 至500nm左右，测量 待测溶液的吸光度。
将待测溶液的吸光度 与标准铁溶液的吸光 度进行比较，根据校 准曲线计算待测溶液
中的铁浓度。
02
实验材料与设备
实验材料
铁标准溶液 缓冲溶液
04
结果分析
数据处理
01 原始数据整理
将实验过程中获得的所有数据整理成表格，包括 空白对照组和实验组的数据。
02 绘制标准曲线
根据不同浓度的铁标准溶液的吸光度值，绘制标 准曲线，用于后续结果分析。
03 数据筛选与处理
对实验组的数据进行筛选，排除异常值，并对数 据进行适当的数学处理，如计算平均值、中位数 等。
分光光度法具有灵敏度高、操作简便、准确度高 03 、适用范围广等优点。
分光光度法的原理
01 当一束光通过溶液时，光线会被溶液中的物质吸 收，吸收程度与物质的浓度和波长有关。
02 不同物质对不同波长的光的吸收程度不同，因此 可以通过测量特定波长的光的吸收程度来分析物 质。
02 在分光光度法中，通常使用单色器将光源发出的 复合光分离成单一波长的光线，然后通过测量溶 液对这种光的吸收程度来分析物质。
消解
根据实验要求，选择适当 的消解方法，如酸消解、 碱消解等，对样品进行消 解处理。
过滤与定容
将消解后的样品进行过滤 ，去除残渣，并用适当的 溶剂定容，得到待测溶液 。
标准曲线的绘制
01 标准品准备
根据实验要求，选择合适浓度的铁标准溶液。
02 绘制标准曲线
根据实验原理，将不同浓度的铁标准溶液加入到 相应的试剂中，按照实验步骤操作，绘制标准曲 线。
饮用水中微量铁的测定1
3 Fe3+ 与邻二氮菲生成蓝色配合物，所以用盐酸羟胺将Fe3+ 还原为 Fe2+ 同时也可以消除水中氧化剂干扰。 PH值选择范围2~9，PH小于2显色缓慢而色浅，酸度过低易水解，橙红 PH值选择范围2~9，PH小于 显色缓慢而色浅，酸度过低易水解， 值选择范围2~9 小于2 色配合物最大吸收波长为508nm, =1100。 508nm,ε=1100 色配合物最大吸收波长为508nm, =1100。 实验仪器与试剂 仪器：分光光度计，容量瓶（9个），分析天平。 仪器：分光光度计，容量瓶（ ），分析天平 分析天平。
Hale Waihona Puke 最大吸收波长的测订波 长 nm 吸 光 度 450 460
. . . . .. 600
分光光度计测标准铁 容液最大吸收波长 波长范围450600nm 间隔10nm
实验方法与步骤 1. 取100ml容量瓶8个，分别加入铁标准溶液
0.025ml,0.50ml,1.00ml,2.00ml,3.00ml,4. 00ml,5.00ml各加入纯水至50ml，各加入 1ml盐酸胺，小火煮沸，冷却,滴加盐酸之pH 为7。
铁含量 （ug) 铁浓度 （ug/m l 吸光度 0.00 0.025 0.050 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5
注意事项
1.实验前应检验吸收池是否配对 必要时进 行校正 2.吸收池内外清洁透明 如有气泡或成颗粒 应重新装液 3.吸收池用毕应充分洗净保存 关闭仪器 放 好干燥剂 防尘
水中微量铁的测定
目的要求 1 掌握紫外－可见 掌握紫外－ 分光光度计的使用 2 掌握用邻二氮菲 光谱法测定水中铁含 量的操作方法 实验原理
亚铁离子与临二氮菲生成稳定的配合物（PH2~9） 2 亚铁离子与临二氮菲生成稳定的配合物（PH2~9）
分光光度法测定水中微量铁
5 思考与讨论
1.本实验中哪些试剂应准确加入，哪些不必严格准确 加入? 加入溶液的顺序能否颠倒？为什么? 2.加入乙酸钠的目的是什么?
谢谢！
3 仪器和试剂
1）主要仪器
仪器 规格/型号
分光光度计 T6新世纪紫外可见分光光度计(含比色皿)
容量瓶
移液管
50、100、1000mL等
1、2、5、10mL等
3 仪器和试剂
2）主要试剂
试剂 铁标准液
盐酸羟胺 邻二氮菲 乙酸钠
配制浓度 10 ug/mL
10 % 0.15 % 1 mol/L
仪器基本结构和使用注意事项
光 源
单色器
吸收池
检测器
数据处理系统
1) 可见光区用玻璃吸收池（比色皿）； 2) 吸收池用于盛放分析试样，使用前用试液润洗2-3次； 使用完毕后，立即用蒸馏水或有机溶剂冲洗干净，并擦 净水渍；比色皿透光面切勿直接用手接触，保持洁净， 先用滤纸吸干、再用擦镜纸擦净外部液体；
4 实验步骤
（1）配制溶液
A--吸光度,表征物质对光吸收程度的量 Ii--入射光强 It--透射光强 T--透过率 --摩尔吸光系数 b--液层厚度（光程长度） c--被测物浓度
2 实验原理
根据朗伯-比耳定律：A=ε bc，当入射光波长λ 及光程b 一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质 的浓度c成正比。只要绘出A-c标准曲线，测出试液的吸光度， 就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即未知样中铁的含量。
（2）吸收曲线的绘制和测量波长的选择
4 实验步骤
（3）标准曲线的绘制
用1cm比色皿，以试剂空白为参比溶液，在选定 波长（510nm）下，测定1-5号标准溶液的吸光度。以 铁标准液浓度c为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制A-
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可见分光光度法 测定水中微量铁
仪器分析检验技术课程
@秋叶语录
可见分光光度法 测定水中微量铁
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分光光度法的分类（分子吸收）
分Hale Waihona Puke 光度法（分子吸收）紫外分光光度法，波长有效范围350-200nm 可见分光光度法，波长有效范围380-780nm 红外分光光度法，波长有效范围0.75-1000um
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分光光度法的特点
➢仪器简单 01
➢微量组分测定06
不适于常量组分的测定， 因为准确度不及化学法， 适用于测定低含量和微 量组分。
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分光光度法的基本原理
根据朗伯-比耳定律：
A=εbc
入射光波长λ不变 ε不变
可见光区的吸光度测定：
光程b不变
被测物质有色
测定
未知
已知
A∝c
被测物质无色
显色反应
稀溶液无色
橙红色
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第四节 定量分析
仪器简单、价格便宜 （几千元）操作方便。
➢灵敏度高 02
可测10－5－10－6范围最 低可测10－7mol/L。
➢分析速度快 03
几分钟即可。
➢误差较大 04
相对误差在2％～5％,若 采用精密分光光度计进 行测量相对误差可达1 ％～2％。
➢应用广泛 05
可用于测定金属、非金 属、无机和有机化合物 等。在国内外的环境监 测分析法中占有很大的 比重。
2
xi x
i 1
a y bx
用回归方程画出的曲线称为校正曲线，回归方程的质量
用相关系数 来衡量, 越接近1越好，一般 0.999
n
2
xi x
=b i1
n
2
yi y
i 1
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操作注意事项：
1.根据朗伯-比耳定律，在当入射光波长λ及光程b一定时，在一定浓度范围内，只要确定被测物质吸光 度和被测物质浓度之间的关系，即可求出未知样的含量。 2.标准使用溶液浓度很低一般不直接配出，主要是因为低浓度溶液不易保存，另外在配制低浓度溶液 所需质量较小，称量的相对误差会较大。所以先配制较大浓度的标准储备液，需要时再稀释成所需的 标准使用液。 3.回归方程的线性关系γ越接近1越好，一般要求γ≥0.999，此方程方可使用。其中标准序列溶液配制是 否准确是回归方程质量好坏的关键因素。因此在配制标准序列溶液时容量瓶和吸量管的操作需规范、 熟练。 4.标准曲线需定期校正。当测定条件改变时需重新绘制标准曲线，条件不变时不必每次都绘制标准曲 线，但需配制一个标准溶液定期校正。
3)标准曲线定期校正 条件变化工作曲线应该从新绘制，条件不变也要定期进
行校正，可在测定试样时带一个标样进行校正 4）回归方程(最小二乘法）
(设直线方程为：y = a + b x 或 A = a + b c a、b为回归系数，a截据，b为斜率，该方程称为回归方程
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n
xi
x
yi
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