非发酵菌
非发酵菌
杭州艾迪康临床检验中心微生物 赵德扬
非发酵菌
非发酵菌是一群需氧或兼性氧、不发酵糖
类能在普通培养基上生长的革兰阴性杆菌 主要存在于外界环境中,其中大多数是条 件致病菌.其种类繁多,在鉴定上较为复杂, 但可以根据基本生化反应来鉴别.
非发酵菌的鉴别
(一)基本生化反应 1 氧化酶试验 在营养平板或半固体培养
少数可作推测性鉴别特征生化 反应非发酵菌的鉴别
3 气味可初步鉴别 铜绿假单胞菌有生姜味，产
碱属有水果味，腐败希瓦菌、恶臭假单胞、洋 葱伯克霍德菌有腐败样气味. 4 色素 色素的产生有利于细菌的鉴别, 但不同 的细菌可形成相似的色素,在非发酵菌中产生黄 色色素的有非发酵菌杆菌 、洋葱伯克霍、施氏 假单胞菌、少动鞘氨醇杆菌、食神鞘氨醇杆菌 等.产蓝绿色色素的有铜绿假单菌，产生荧光色 素的有恶臭假单胞菌、荧光单胞菌和铜绿单胞 菌,产红棕色或淡紫色的腐败希瓦菌产、紫色色 素的有紫色杆菌.
少数可作推测性鉴别特征生化 反应非发酵菌的鉴别
5 动力和氧化酶
㈠动力和氧化酶阴性:不动杆菌 CDC ED-5 CDC NO-1 ㈡动力阴性和氧化酶阳性的非发酵菌: 莫拉菌属威克斯属、金黄杆菌属、尿道寡 源杆菌、鞘氨醇杆菌属. ㈢动力阳性和氧化酶阴性细菌：非发 酵菌唐菖蒲霍德菌、洋葱伯克德菌、浅黄 色单胞菌嗜麦芽窄食单胞菌、少动鞘氨醇 单胞菌
基上作氧化酶试验.麦康凯、SS及其他含 有糖的培养基不能作为氧化酶试验,因糖 分解产酸会有影响. 2 葡萄糖O/F 观察待检菌对葡萄糖是否氧 化发酵或产碱，传统的糖发酵不能作为氧 化发酵,因为糖发酵管含有蛋白胨高.
ห้องสมุดไป่ตู้
非发酵菌的鉴别
3 硝酸盐还原/产气
观察待检菌是否还 原硝酸盐或硝酸盐产气. 4 动力试验 可采用半固体穿剌,玻片滴 法或鞭毛染色,观察待检有无动力,以及鞭 毛的位置和数量. 5 触酶试验 在不含血的培养基上作触酶 试验,区别待检菌阳性/阴性.
[医药卫生]非发酵菌
![[医药卫生]非发酵菌](https://img.taocdn.com/s3/m/c95763c1941ea76e58fa04e2.png)
荧光假单胞菌和污染的血制品关系密切，可见 于近期接受过血液制品而致菌血症的患者。
嗜麦芽窄食单胞菌
窄食单胞菌属,假单胞菌科，嗜麦芽窄食单胞菌 分布广泛，可引起条件感染是一种重要的医院 获得性病原体，本菌可分离于几乎所有部位， 最常见的是呼吸道.
100 100 96
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75 18 0
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1
11
铜绿假单胞菌（P.aeruginosa）
分布广泛，是非发酵菌中最具临床意义的细菌，也是 医院内感染最多见的细菌，主要引起条件感染。
感染多发生于烧伤、急性白血病、器官移植病人及静 脉药瘾者，感染多位于潮湿部位，如气管造口、留置 的导管、创面、外耳道、角膜和渗出性皮肤伤口处
葡萄糖氧化-发酵（O/F试验）
初步分群鉴定试验
1、葡萄糖氧化-发酵（O/F试验）
OF培养基:蛋白胨和养基:应只穿刺培养基顶部4mm，在培养4-6小时 后首次观察结果,24和48小时后再次观察结果。更准确的 方法是湿片法和鞭毛染色。
本菌能够获得多重耐药性和能够在大多数环境表面生存， 所以由本菌引起的医院获得性感染有增加的趋势，医院获 得性感染最常见的是呼吸道或手术部位、应用器械或ICU 的住院患者。
产碱杆菌属
氧化酶阳性的革兰氏阴性杆菌，不分解糖类,周鞭毛， 在含蛋白的肉汤中产氨。
有医学意义的产碱杆菌属主要有 木糖氧化产碱杆菌木糖氧化亚种A.xylosoxidans subsp.
非发酵菌的测定实验报告
一、实验目的1. 掌握非发酵菌的基本概念及分类；2. 熟悉非发酵菌的鉴定方法；3. 提高实验室操作技能，培养科学思维和严谨的工作态度。
二、实验原理非发酵菌是一类不发酵或不分解糖类的革兰氏阴性杆菌，主要包括假单胞菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属、莫拉菌属、黄杆菌属等。
非发酵菌的鉴定主要通过观察菌落特征、进行生化试验、动力与鞭毛观察等手段。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）非发酵菌菌种：假单胞菌、不动杆菌、产碱杆菌、莫拉菌、黄杆菌等；（2）培养基：普通琼脂平板、血琼脂平板、麦康凯琼脂平板、动力半固体培养基、氧化酶试验培养基等；（3）试剂：葡萄糖、乳糖、酵母提取物、酚红指示剂、氧化酶试剂等；（4）实验仪器：恒温培养箱、显微镜、酒精灯、无菌操作台等。
2. 实验仪器：（1）显微镜：用于观察菌落特征；（2）恒温培养箱：用于培养菌种；（3）酒精灯：用于无菌操作；（4）无菌操作台：用于无菌操作。
四、实验方法与步骤1. 菌落观察（1）将菌种接种于普通琼脂平板、血琼脂平板、麦康凯琼脂平板，分别于30℃、37℃培养24小时；（2）观察菌落特征，如菌落大小、形状、颜色、边缘、表面、透明度等；（3）记录观察结果。
2. 动力与鞭毛观察（1）将菌种接种于动力半固体培养基，30℃培养24小时；（2）观察菌种在半固体培养基中的生长情况，如是否有鞭毛、菌落是否呈指状、螺旋状等；（3）记录观察结果。
3. 氧化酶试验（1）将菌种接种于氧化酶试验培养基，30℃培养24小时；（2）观察菌种是否产生氧化酶，即菌落周围是否出现绿色；（3）记录观察结果。
4. 氧化-发酵（O/F）试验（1）将菌种接种于氧化-发酵试验培养基，30℃培养24小时；（2）观察菌种是否产生酸，即菌落周围是否出现红色；（3）记录观察结果。
5. 麦康凯琼脂平板生长情况（1）将菌种接种于麦康凯琼脂平板，30℃培养24小时；（2）观察菌种在麦康凯琼脂平板上的生长情况，如是否生长、生长速度等；（3）记录观察结果。
非发酵菌 PPT课件
3生化反应：OX弱阳性或阴性，H2O2阳性， 能水解明胶，不发酵糖。 4抗原结构：有O抗原和H抗原，O抗原有特 异性。 5.抵抗力：抵抗力强，在水中可存活数月。 对化学消毒剂敏感。
致病性
可引起肺炎型（重症类型）、流感样型 （轻症类型）和肺外感染三种类型； 肺炎型死亡率高 感染后对该菌有一定的抵抗力。
葡萄糖产酸
+
+ + 端鞭毛 +
尿素
－ 无色杆菌属 + 土壤杆菌属
假单胞菌属
第 一节 假单胞菌属 (Pseudomonas)
一、 概述 1. 分类 2. 临床意义 3. 微生物特性 4.微生物检验 (1)检验程序 (2)鉴定 (3)药物敏感性试验(Antibacterial Susceptibility Test)
葡萄糖氧化
木糖氧化 乳糖氧化 精氨酸双水解酶
+
－ ＋ ＋
+
＋ ＋ ＋
+/－
+/－ － ＋
－
－ ＋ ＋
－
－ ＋ －/＋
－
－ ＋ －
鸟氨酸脱羧酶
苯丙氨酸脱氨酶 丙二酸盐利用
＋
＋ ＋
＋
＋ ＋
－
－ ＋
－
－ －
－
－ －/＋
－
－ －
枸椽酸盐利用
明胶液化 生长温度: 37℃ Nhomakorabea＋
－ ＋
＋
－ ＋
＋
＋ ＋
＋/－
－ ＋
＋
－ －
生长温度范围广，最适生长温度为35℃
产生各种水溶性色素：绿脓素、脓玉红素、荧光
素、脓褐素
对理化因素耐受性较强，对多种抗生素耐药
非发酵菌
生物学特性
直或微弯杆菌，有荚膜，单端 直或微弯杆菌，有荚膜， 根鞭毛， 有1根鞭毛，运动活泼 根鞭毛 严格需氧 最适生长温度35℃ 需氧， 严格需氧，最适生长温度 ℃， 4℃不生长，42℃生长 ℃不生长， ℃ 严格需氧，氧化利用葡萄糖 利用葡萄糖、 严格需氧，氧化利用葡萄糖、 MAC生长 生长
血平板上形成大而扁平， 血平板上形成大而扁平， 湿润，边缘不齐， 湿润，边缘不齐，有金属 光泽，有生姜气味的灰绿 光泽， 生姜气味的灰绿 色菌落，并形成透明溶血 色菌落，并形成透明溶血 环。 有时可产生水滴样样菌落， 有时可产生水滴样样菌落， 无色素不溶血（ 无色素不溶血（囊性纤维 化病人） 化病人）
嗜麦芽窄食单胞菌
嗜麦芽窄食单胞菌为有动力杆菌，具有丛极鞭毛， 嗜麦芽窄食单胞菌为有动力杆菌，具有丛极鞭毛， 丛极鞭毛 血平板上菌落粗糙呈淡黄色或浅绿色，有氨气味。 血平板上菌落粗糙呈淡黄色或浅绿色，有氨气味。 赖氨酸脱羧酶试验阳性和DNA酶阳性、氧化酶 酶阳性、 根据 赖氨酸脱羧酶试验阳性和 酶阳性 阴性可很容易与其他假单胞菌区别 可很容易与其他假单胞菌区别， 阴性可很容易与其他假单胞菌区别，本菌葡萄糖氧 化缓慢，可快速氧化分解麦芽糖。 化缓慢，可快速氧化分解麦芽糖。
不动杆菌属
广泛分布于自然和医院环境中， 广泛分布于自然和医院环境中，能在潮湿和干燥的表面 生存，也可存在于健康人的皮肤. 生存，也可存在于健康人的皮肤. 无动力、氧化酶阴性、 无动力、氧化酶阴性、硝酸盐还原阴性 醋酸钙不动杆菌 鲍曼不动杆菌
鲍曼不动杆菌
在非发酵菌中本菌是在临床标本中的分离阳性率仅次于铜 绿假单胞菌而居第二位的条件致病 居第二位的条件致病菌 绿假单胞菌而居第二位的条件致病菌，通常不动杆菌对健 康人体不致病，但对体弱者可引起感染。 康人体不致病，但对体弱者可引起感染。 本菌能够获得多重耐药性和能够在大多数环境表面生存， 本菌能够获得多重耐药性和能够在大多数环境表面生存， 所以由本菌引起的医院获得性感染有增加的趋势， 所以由本菌引起的医院获得性感染有增加的趋势，医院获 得性感染最常见的是呼吸道或手术部位、应用器械或ICU 得性感染最常见的是呼吸道或手术部位、应用器械或ICU 的住院患者。 的住院患者。
非发酵菌
定义
非发酵菌是一大类不能以发酵形式利 用葡萄糖的需氧、无芽孢革兰阴性杆 菌的统称。
主要非发酵菌种类
非发酵菌
铜绿假单胞菌 鲍假单胞菌
伯克霍尔德菌属
洋葱伯克霍尔德菌
窄食单胞菌属
嗜麦芽窄食单胞菌
黄杆菌属
脑膜败血黄杆 菌
产碱杆 菌属
不动杆菌属
鲍曼不动杆菌
感染部位或疾 病 医院获得性肺 炎 败血症
宜选药物 氨苄西林／舒巴坦，头 孢哌酮/舒巴坦 氨苄西林/舒巴坦
可选药物 碳青霉烯类，氟喹诺酮 类 氨基糖苷类，头孢哌酮/ 舒巴坦，碳青霉烯类， 氟喹诺酮类
备注 重症患者可联合 氨基糖苷类 菌株之间对药物 敏感性差异大， 需根据药敏试验 结果选药
• 嗜麦芽窄食单胞菌：首选甲氧苄胺嘧啶/磺胺甲恶 唑（复方新诺明），次选替卡西林-克拉维酸或氨 曲南+替卡西林-克拉维酸。 • 嗜麦芽窄食单胞菌对亚胺培南等碳氢酶烯类天然 耐药。尚无公认的推荐抗菌治疗方案。可根据体 外药敏结果选用复方磺胺甲恶唑（复方新诺明）， 替卡西林-克拉维酸、环丙沙星或左氧氟沙星等。
窄食单胞菌属
嗜麦芽窄食单胞菌
• 嗜麦芽窄食单胞菌为条件致病菌，广泛分 布于自然界的水、土壤和植物中是医院环 境中的常见微生物，在非发酵菌感染中排 第3位。
形态及特征
• 嗜麦芽窄食单胞菌为有动力的需氧革兰阴 性杆菌，具有从及鞭毛，不发酵糖。在多 数培养基上均能生长，在血平皿上呈淡黄 色、淡灰色或淡绿色，有氨味。 • 本菌产生锌离子依赖的金属β内酰胺酶而对 碳氢酶烯类抗生素和β内酰胺酶抑制剂天然 耐药。
兵中流行，造成严重
的公共卫生问题
多重耐药菌与泛耐药菌株
• 多重耐药菌(MDR)是指有多重耐药性的病原 菌。其定义为一种微生物对三类（比如氨 基糖苷类、红霉素、β－内酰胺类）或三类 以上抗菌药物同时耐药。 • 泛耐药菌株(PDR)指除多粘菌素类外，对几 乎所有测试抗菌素耐药。比如对氨基糖苷、 青霉素、头孢菌素、碳氢酶烯系类、四环 素类、氟奎诺酮及磺胺类等耐药。
非发酵菌特征及鉴定思路课件
微生物质谱分析
利用质谱技术对微生物细胞壁进行分 析，获取菌株的分子量信息，进行鉴 定。
03
非发酵菌的鉴定步骤
菌落形态观察
观察菌落大小、形状、边缘、表面和透明度
非发酵菌的菌落形态多样，大小、形状、边缘、表面和透明度等特征有助于初步 鉴别。
观察菌落颜色
非发酵菌的菌落颜色多样，包括白色、黄色、橙色、红色等，不同颜色可能代表 不同的菌种。
确的分类和鉴定。
分类依据
根据基因序列相似性、进化关系 等因素，将非发酵菌分为不同的 分类单元，如属、种、亚种等。
分类标准
根据国际微生物分类学界的共识 和标准，结合形态学、生理生化 特征和分子生物学数据，确定非
发酵菌的分类地位。
系统发育分析
方法
通过构建系统发育树，分析非发酵菌在进化过程 中的位置和亲缘关系。
数据来源
利用多基因序列分析、宏基因组学等方法，获取 非发酵菌的系统发育数据。
树形结构
根据系统发育数据，绘制出非发酵菌的系统发育 树，明确各菌种之间的亲缘关系和进化路径。
05
非发酵菌的致病性与临床意义
非发酵菌的感染途径与症状
感染途径
非发酵菌主要通过呼吸道、皮肤或接 触等途径感染人体。
症状表现
非发酵菌感染的症状多样，常见的有 发热、咳嗽、咳痰、呼吸困难等，严 重时可导致败血症、感染性休克等。
生化试验
通过测定菌株对不同碳源、 氮源的利用以及在特定环 境下的生长情况，了解菌 株的生理生化特性。
血清学试验
利用特异性抗体与抗原的 结合反应，对菌株进行特 异性鉴定。
分子生物学鉴定方法
16S rRNA基因测序
通过对菌株16S rRNA基因的测序，进行系统发育学分析，确定菌 株在分类学上的位置。
非发酵菌群的分类鉴定
• 该菌的生长特性、营养要求、及其它生物 学性状与铜绿假单胞菌极为相似，所不同 的是氧化酶阴性，这是与假单胞菌属相区 别的重要特性；此外，该菌一端具有3根以 上丛鞭毛，运动活泼，可与氧化酶阴性的 不动杆菌属和副百日咳鲍特氏菌相鉴别。
3、鼻疽（类鼻疽）伯克霍尔德菌
• 鼻疽伯克霍尔德菌（Burkholderia mallei） 和类鼻疽伯克霍尔德菌（ Burkholderia pseudomallei）是鼻疽与类鼻疽的病原菌， 属假单胞菌属rRNA同源群的第二群；2000 年被NCCLS/CLSI（National Committee
脑膜炎败血黄杆菌在血琼脂平板和营养琼脂平板上的菌落特征（37℃，18—24h）
• 黄杆菌属目前共分为8个种和4个未命名 的生物群。它们分别是：
• 脑膜炎败血黄杆菌、芳香黄杆菌、短小黄 杆菌、水田黄杆菌、嗜醇黄杆菌、嗜糖黄 杆菌、嗜温黄杆菌、薮内黄杆菌及黄杆菌 Ⅱb、Ⅱe、Ⅱh、Ⅱi群。其中脑膜炎败血 黄杆菌、芳香黄杆菌、短小黄杆菌和黄杆 菌Ⅱb群可引起人类疾病。
支气管腐败 鲍特氏菌
+ — + +
+ +
鲍特氏菌属
鞭毛染色
脂、巧克力色血琼脂及兔血琼脂上均不能生长。
副百日咳鲍特氏菌和支气管腐败鲍特氏菌营养 要求不高，在上述培养基上均能生长。
• 3、该菌属细菌不分解糖类。其它生化反应见 下表。
鉴别要点
鞭毛 动力 37℃
18—24℃ 尿素酶 硝酸盐还原 氧化酶
百日咳 鲍特氏菌
— — — — —
+
副百日咳 鲍特氏菌
—
— — + — —
铜绿假单胞菌镜下形态和在血平板上的菌落特征
铜绿假单胞菌在普通琼脂培养基上的菌落特征
非发酵菌
美洛培南
庆大霉素
阿米卡星
多粘菌素B
环丙沙星
左旋氧氟沙星
11
14 May 2020
菌株量
%R
%I
%S
9828
36
0.1
63.9
10028
29.8
0.1
70
5412
34.8
14.6
50.6
10687
18.2
20.5
61.3
11010
23.6
5.3
71.1
10587
24.5
9.3
66.2
9902
31
23.4
50 45
40 35
30
25 20 15
10
5 0
哌哌拉拉西西林林/他唑头巴孢坦哌酮/舒巴坦
头孢他啶
头孢吡肟
亚胺培南
阿米卡星
环丙沙星左旋氧氟沙星
2006年 2007年 2008年
22
14 May 2020
鲍曼不动杆菌2006～2008年耐药趋势
耐药率%
80
70
60
50
40
30
20
10
0
氨苄西林/哌舒拉巴西坦林/他唑头巴孢坦哌酮/舒巴坦
13.8
52.8
1720
52.5
12.6
34.9
1934
43
6.7
50.3
893
30.6
24.7
44.7
1918
18.7
21.9
59.4
1958
3.5
4.9
91.6
370
30
22.2
47.8
非发酵菌PPT课件
在生物抗病毒、抗炎等活性的代谢产物， 用于新药研发。
疫苗生产
非发酵菌产生的某些代谢产物具有免疫原性，可以作为疫苗用于 预防疾病。
基因工程
非发酵菌可以作为基因工程的宿主细胞，用于外源基因的表达和 产物的生产。
05
非发酵菌的遗传改良与基 因工程
基因克隆与表达
生物能源
非发酵菌可以用于生产生物燃料，如乙醇、丁醇等，具有高效、 环保的优点。
生物材料
非发酵菌可以用于生产生物可降解塑料、生物纤维等，替代传统的 石化产品。
生物农药
非发酵菌可以用于生产生物农药，具有安全、环保、高效的优点。
非发酵菌在环境治理和生物医学中的新挑战
环境治理
非发酵菌在环境污染治理方面具有重要作用，可以用于降解有机污染物、重金属离子等。
营养需求
特殊营养需求
培养基配制
非发酵菌通常需要特殊的营养物质， 如维生素、氨基酸等，以满足其生长 和代谢需求。
为了满足非发酵菌的营养需求，需要 精心配制培养基，确保提供适当的营 养成分。
不同种类营养需求差异
不同种类的非发酵菌对营养的需求存 在差异，有些需要更多的有机氮源， 而有些则需要更多的无机盐。
生物医学
非发酵菌在生物医学领域具有广阔的应用前景，如用于治疗感染性疾病、癌症等，但同时也面临着安全性、有效 性等方面的挑战。
THANKS
感谢观看
代谢途径
糖酵解途径
非发酵菌主要通过糖酵解途径进行能量代谢，将葡萄糖转化为丙 酮酸并产生能量。
丙酮酸的去向
丙酮酸可以进一步转化为其他有机化合物，如脂肪酸、氨基酸等。
不同种类代谢途径差异
不同种类的非发酵菌具有不同的代谢途径，有些能够利用其他有机 化合物作为碳源。
课件：非发酵菌
铜绿假单胞菌的KIA管中加入1-2ml氯仿，用力振摇，静置后， 氯仿层呈蓝绿色为绿脓素 ，如色泽不明显，可于氯仿中加入1N H2SO42滴，再次摇动，绿脓素在其中呈红色。
示教
铜绿假单胞菌
示教
铜绿假单胞菌
示教
粪产碱杆菌
示教
不动杆菌
示教
不动杆菌
O/-
-
-
-
动力
+/-
+/-
+/-
-
+
+
-
ห้องสมุดไป่ตู้
注：+：90%以上阳性；-10%以下的阳性；+/-：约70%为阳性；O：为 氧化。
一、目的：
• 1、掌握铜绿假单胞菌、粪产碱杆菌、嗜麦芽 窄食单胞菌、不动杆菌属细菌各种培养基上 的菌落特征及形态染色特点；
• 2、掌握假单胞菌属、产碱杆菌属、窄食单胞 菌和不动杆菌属细菌之间的鉴别要点
动力
半固体穿刺法、湿片法、鞭毛染色法
色素形成 非发酵菌可形成多种色素，有助于菌种的鉴定。
常见非发酵菌的初步分群鉴定
非发酵菌鉴定较复杂，须先进行初步分群，再进行属种鉴定
试验
假单胞 无色杆 黄杆菌 不动杆 产碱杆 丛毛菌 莫拉菌
菌属
菌属
属
菌属
菌属
属
属
氧化酶 +
+
+/-
-
+
+
+/-
O/F试 验
O/-
O
O
非发酵菌
非发酵菌重要鉴定试验
氧化酶试验 葡萄糖利用（OF试验）
通常用于检测肠杆菌科细菌的培养基不适用于检测非发酵菌，检测非发酵 菌葡萄糖氧化发酵试验中蛋白质和糖的比例为0.2:1，而肠杆菌科用的糖 发酵试验培养基中蛋白质和糖的比例为2:1，高浓度的糖可使细菌产酸量 增加，导致指示剂变色，更易于观察；
非发酵菌
铜绿假单胞菌的鉴定
95%以上的铜绿假单胞菌可通过以下几个特征 鉴定： 氧化酶阳性。 菌落较大，生姜样气味。 绿脓素产生。 鉴定无色素/只产生青脓素的铜绿假单胞菌 42℃能够生长 乙酰胺酶的碱化作用 硝酸盐还原
铜绿假单胞菌的耐药性
细菌耐药机制复杂： 外膜通透性降低 产生灭活酶或钝化酶 主动外排系统将抗生素泵出胞外 产生生物膜
临床意义
分布广泛，是非发酵菌中最具临床意义的细菌， 也是医院内感染最多见的细菌，主要引起条件感 染。 感染多发生于烧伤、急性白血病、器官移植病人 等正常防御机制改变或缺损的患者，感染多位于 潮湿部位，如气管造口、留置的导管、创面、外 耳道、角膜等 囊性纤维化病人呼吸道分离的铜绿假单胞菌具有 生物膜（大量藻酸盐包围了菌体），导致本病的 治疗困难其淡蓝色脓性渗出物及闻到绿脓素的生 姜样气味具有特征性。
醋酸钙不动杆菌 鲍曼不动杆菌 溶血不动杆菌 琼氏不动杆菌 约氏不动杆菌 洛菲不动杆菌
生物学特性
严格需氧、氧化葡萄糖、无动力、氧化酶阴性、 硝酸盐还原阴性的革兰染色阴性球杆菌。 常似双球菌，有时不易脱色，易误认阳性菌； 血平板培养24小时后，形成光滑，不透明，凸起， 无色素形成；溶血不动可产生β溶血 大多数菌株麦康凯平板上生长良好，呈无色或淡 粉红色
2007各医院铜绿假单胞菌对各种抗菌药物 的耐药率
医院 HSH BJH TJH PUH ZJH
716 616 530 473 头孢他啶 443
RJH
329 22.2
GZH PED
329 33.1 170 5.5
SCH GSH
137 29.9 68 4.7
39.7 43 16.7 27.7 25.5
非发酵菌
生化反应：
抵抗力：较强，临床分离株对
多种抗生素耐药
（二）致病性：
可产生多种致病物质：内毒素、外毒 素、菌毛、荚膜、胞外酶和溶血物质 除自然界外，也存在于人体皮肤上及 与外界相通的腔道中。 多为继发感染，如烧伤后的创面感染， 也可引起肺炎、脑膜炎、尿道感染，严重 时可引起败血症，死亡率甚高。
（三）微生物学检验
麦康凯上可形成5种不同形态的菌落：
①典型型：灰绿色，大小不一，扁平湿润， 边缘不齐，表面可见金属光泽。 ②大肠菌群型：圆形凸起，灰白色半透明。
③粗糙型：菌落中央凸起，边缘扁平，表 面粗糙。
④侏儒型：细小无光泽，半透明菌落 ⑤粘液型：光滑凸起呈粘液状
氧化酶＋，O/F 上能氧化分解葡萄糖、木糖产酸、精 氨酸双水解酶＋，枸橼酸盐＋，硝酸 盐＋。
生化反应 氧化酶阴性，触酶阳性， 葡萄糖O/F为氧化型。
不动杆菌属主要菌种生化反应特征：
二、致病性
该菌广泛存在于自然界，属条件致病 菌，也是医院感染的常见病菌之一，常引 起呼吸道、消化道和泌尿生殖道感染。
三、微生物学检查
标本采集：血液、脑脊液、痰液、尿液、脓 汁等。 检验程序： 检验方法： （1）直接镜检：脑脊液、尿液离心取沉淀物 涂片，脓汁和痰液直接涂片染色镜检可见革兰阴性 球杆菌成双排列，细胞内外可见，常染成革兰假阳 性。 （2）分离培养：
非发酵菌 及检验
非发酵菌及检验
非发酵菌（nonfermenters）是指一群 不能利用或仅以氧化形式利用糖类, 生化 特性十分相近的革兰阴性无芽胞杆菌。 括多个菌属，主要有：假单胞菌属 不动杆菌属
产碱杆菌属
莫拉菌属
黄杆菌属
分群依据： 1. 氧化酶试验阳性（不动杆菌及个别假 单胞菌为阴性） 2. 葡萄糖氧化/发酵（O/F）：应开管产 酸，闭管不变。
非发酵菌的耐药及治疗对策
非发酵菌的耐药及治疗对策什么是非发酵菌？非发酵菌是一类不靠发酵代谢获取能量的微生物。
它们生长缓慢，对环境的适应能力相对较弱，更容易在人体内引发感染。
一些非发酵菌种类通常生长于惰性和污秽环境，例如水、土壤或食物中，而其他非发酵菌可以从人和动物的皮肤、口腔和肠道中分离出来。
非发酵菌的耐药性非发酵菌的耐药性往往比其他微生物更高，这意味着它们难以被常见的抗生素杀死。
与其他细菌不同，非发酵菌不使用发酵作为它们的主要代谢方式，而是使用其他化学物质来产生能量。
这使得它们在天然界中生长得更为广泛和适应各种条件，然而却也使得常见的抗生素对其产生的影响较小。
非发酵菌的高度耐药性意味着，它们所引起的感染更加难以治疗，并且药物疗效的预测性很差。
抗生素过度使用的问题也加剧了这个情况。
当前，治疗非发酵菌感染的首选药物是四环素类、氨基糖苷类、多黏菌素E、大环内酯类和喹诺酮类，但是已经发现存在多种产生了抗药性的非发酵菌，这些细菌对抗生素产生的耐药性，随着药品的不断使用而变得更加普遍。
治疗耐药性非发酵菌感染的策略做好预防措施由于非发酵菌的耐药性较强，更应注重预防。
保持好个人卫生、遵循医疗机构的感染预防措施，以及注意食品的选择和烹饪等措施都有利于预防非发酵菌感染。
准确诊断非发酵菌感染准确诊断非发酵菌感染有助于针对性治疗。
但是还需要考虑抗生素选择和使用的范围。
正确的药物治疗是准确诊断非发酵菌感染的前提。
没有明确的敏感性测试可能会导致不必要的药物使用，这不仅对病人没有益处，还可能带来消耗性医疗的问题。
合理使用抗生素一般来说，应该尽可能避免不必要的抗生素使用，以防止抗生素负荷增加和高耐药的情况恶化。
如果一些老年病人或者有免疫缺陷的病人一直使用抗生素，容易导致耐药菌的滋生。
坚持病原学领域的最佳实践，不是简单的使用抗生素，还需要注意抗生素使用的时间和剂量的合理性。
拓展非抗生素治疗选择随着医学技术的不断进步，新的非抗生素药物和新的治疗方法正在不断被开发出来，例如喂养益生菌、使用细胞保护剂和抗氧化剂进行治疗等。
非发酵菌感染及耐药的现状与对策
非发酵菌感染及耐药的现状与对策概述非发酵菌指的是在培养过程中不发酵葡萄糖的细菌，常见的非发酵菌包括铜绿假单胞菌，不动杆菌，肺炎克雷伯杆菌等。
这些细菌通常在人体表面和环境中广泛存在，可以导致多种感染，尤其是在免疫系统低下的患者中。
近年来，非发酵菌的耐药性日益增加，使得治疗这些感染的难度逐渐增大。
因此，对非发酵菌的感染和耐药性进行研究，并制定相应的对策非常必要。
现状1.感染范围扩大：非发酵菌感染的范围正在逐渐扩大，除了常见的呼吸道、泌尿道、伤口等部位外，还可以引起血液感染、肺炎等严重感染。
这些感染往往发展迅速，治疗困难，容易导致死亡。
2.耐药性增加：非发酵菌对多种抗生素的耐药性逐渐增加，包括β-内酰胺类抗生素、氨基糖苷类抗生素、氟喹诺酮类抗生素等。
耐药菌株的出现导致治疗效果差，引发院内感染的流行。
3.传播渠道复杂：非发酵菌主要通过尘土、水源、医疗设备等途径进行传播，尤其是在医疗机构内易造成院内感染。
此外，非发酵菌还可通过接触传播和呼吸道传播。
对策针对非发酵菌感染及耐药性的现状1.加强感染控制措施：医疗机构应加强对非发酵菌感染的监测与控制。
提高医务人员和患者的手卫生、环境卫生和医疗器械的消毒灭菌水平，严格执行感染防控措施。
以降低感染传播机会，防止院内感染的发生。
2.合理使用抗生素：加强医务人员对抗生素的合理应用培训，推行抗生素的规范化使用。
避免滥用、过量使用抗生素，正确使用抗生素，减少耐药菌株的出现。
此外，为了提高对抗生素的选择和疗效监测能力，推广临床微生物学实验室技术及检测设备，减少延迟报告。
3.开发新的治疗方法：针对非发酵菌的耐药性，开发新的治疗方法是重要的对策。
如研发新的抗生素、联合用药方案、免疫治疗等。
此外，了解非发酵菌的致病机制，通过控制其毒力因子的表达，也是一个重要的研究方向。
4.加强监测与研究：加强对非发酵菌感染及耐药性的监测与研究。
监测菌株的耐药性变化，及时了解菌株分布情况，为制定对策提供依据。
4非发酵菌
（二）临床意义
1. 致病因子 （1）侵袭力 粘附素、荚膜多糖 （2）毒素 外毒素、内毒素 （3）绿脓素 （4）侵袭性酶类 弹性蛋白酶、磷脂酶C 2. 所致疾病
医院感染的主要病原菌。烧伤创面感染、皮肤感染、肺部 感染、泌尿道感染、中耳炎、脑膜炎、心内膜炎、败血症 等。也可引起小儿类似沙门菌和霍乱样的严重腹泻。
二、细菌特性
1. 形态染色
革兰阴性杆菌，多为球杆 状，单个存在或成双排列，无 芽胞，无鞭毛，粘液型菌株有 荚膜。
2. 培养特性
专性需氧，营养要求不高，最 适生长温度为37℃，但有些 菌株可在42℃生长。
血琼脂平板：菌落圆形、光滑、 边缘整齐、灰白色，多数菌 株不溶血。
麦康凯琼脂平板：菌落呈粉红 色，但在SS琼脂培养基上只 有部分菌株生长。
可疑菌落
革兰阴性球杆菌 氧化酶阴性
动力 阴性
KIA
底层斜面 不变色
全面生化反应 最终鉴定
报告
寡养单胞菌属 (Stenotrophmonas）
一、分类
寡养单胞菌目前仅一个种，即嗜麦芽寡养单胞菌
（S.maltophilia） 。其分类经过了两次改名： 假单胞菌属（嗜麦芽假单胞菌）→黄单胞菌属（嗜麦芽
24h生长 （非军团菌）
48h后生长பைடு நூலகம்
革兰染色 姬美耐染色
直接荧光抗体 PCR、DNA探针
革兰阴性菌
血琼脂平板 巧克力琼脂平板
革兰阳性菌 非军团菌
BCYE琼脂
生长 （非军团菌）
不生长
生长
可能是军团菌
鉴定： 菌落特征 生化反应 直接荧光抗体染色
黄单胞菌）→窄食单胞菌属（嗜麦芽寡养单胞菌）。
二、细菌特性
1. 形态染色 革兰阴性杆菌，有一端或两端丛 鞭毛，多数在三根以上， 无芽 胞，无荚膜，可产生菌毛。
非发酵菌的基本特点和种类
非发酵菌是一大类不能以发酵形式利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧、无芽胞革兰阴性杆菌的统称，主要存在于外界环境中，有的是人体皮肤黏膜表面的正常菌群组成部分。
非发酵菌的基本特点主要包括：
不能利用或仅能以氧化形式利用葡萄糖。
多数为机会致病菌，即在人体免疫功能低下时容易引发感染。
对多种抗生素具有耐药性，且耐药性较强，容易形成多重耐药性。
非发酵菌的种类繁多，主要包括假单胞菌属、不动杆菌属、黄杆菌属、产碱菌属等。
其中，铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌等在非发酵菌中占有重要地位，并且由非发酵菌引起感染的报告逐渐增多，特别是在医院感染中。
以上内容仅供参考，如需更多信息，建议查阅非发酵菌的相关资料或咨询相关研究学者。
非发酵菌的重要性
非发酵菌的重要性
非发酵菌 (Non-fermentative bacteria) 是指一类在发酵过程中不能产生酒精或其他代谢产物的微生物。
与之相对的是发酵菌，它们能够产生酒精、二氧化碳或其他代谢产物。
非发酵菌在自然界中广泛存在，包括许多细菌、真菌和病毒等。
它们在许多不同的环境下都能生存，包括土壤、水、植物和动物组织中。
非发酵菌的生理功能多种多样，包括生产抗生素、分解有机物、提高免疫力等。
非发酵菌的命名主要基于它们的代谢类型，即它们是否能够产生酒精或其他代谢产物。
例如，一类叫做“醋酸菌”的微生物，能够在发酵过程中产生醋酸。
另一类叫做“嗜盐菌”的微生物，能够在高浓度的盐溶液中生存。
非发酵菌在人类生活中也扮演着重要的角色。
例如，一些非发酵菌可以用于食品发酵和酿造，如啤酒、葡萄酒和醋等。
此外，一些非发酵菌还可以用于医药生产、环境保护等方面。
非发酵菌是指一类在发酵过程中不能产生酒精或其他代谢产物的微生物。
它们的生理功能多种多样，并且在自然界和人类生活中都扮演着重要的角色。
《非发酵菌及检验》课件
非发酵菌感染可引起机体免疫应 答异常，导致免疫损伤和感染扩 散。
临床表现
肺部感染
非发酵菌引起的肺部感染症状包括咳嗽、咳痰、呼吸 困难等。
泌尿系统感染
尿频、尿急、尿痛等泌尿系统感染症状也是非发酵菌 感染的常见表现。
其他感染
非发酵菌还可引起败血症、脑膜炎、心内膜炎等严重 感染，出现相应的临床表现。
诊断与治疗
阴性等。
非发酵菌对某些抗生素敏感或耐 药，因此需要根据药敏试验结果
进行治疗。
非发酵菌在自然界中广泛分布， 如土壤、水源、空气等，也常常 引起医院感染，如伤口感染、肺
炎等。
02 非发酵菌的检测方法
分离培养法
分离培养法是非发酵菌检测的传统方 法，通过选择性培养基将非发酵菌从 样本中分离出来，然后进行形态学和 生化鉴定。
。
非发酵菌感染常引起医院感染爆发事件 非发酵菌对常用消毒剂和抗生素具有较
，如泌尿道感染、呼吸机相关肺炎等。
高的耐药性，给治疗带来困难。
04 非发酵菌的致病性
致病机制
01
黏附作用
非发酵菌能够黏附在人体黏膜上 皮细胞上，进而侵入细胞间隙和 基质，引发感染。
毒素产生
02
03
免疫损伤
部分非发酵菌能够产生毒素，这 些毒素对人体细胞有毒害作用， 导致感染症状。
缺点是分离时间长，容易受到杂菌干 扰，且对某些非发酵菌的分离效果不 佳。
分离培养法的优点是操作简单，对设 备要求不高，适用于大多数非发酵菌 的分离。
免疫学检测法
免疫学检测法利用抗原-抗体反 应的原理，通过特异性抗体检 测非发酵菌的抗原。
免疫学检测法的优点是灵敏度 高、特异性强，适用于大量样 本的快速检测。
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临床意义
• 常引起的是菌血症、脑膜炎、尿路感染、 附睾炎、结膜炎、心内膜炎、连续性腹膜 透析相关的腹膜炎、角膜炎以及广泛的皮 肤黏膜和软组织感染，也可引起医源性败 血症、肺炎等。引起本菌定植与感染的危 险因素有机械通气、广谱抗生素的预防性 应用、化疗、插管和中性粒细胞减少等。
耐药机制
• 1、细菌主动外拍泵的存在。 • 2、灭活抗生素的酶类的产生，如广谱β内
酰胺酶，超广谱β内酰胺酶，金属酶等。 • 3、外膜蛋白的改变或减少使抗生素进入细
菌的通道减少或缺如。 • 4、生物膜的存在使抗生素不能进入细菌细
非发酵菌
定义
非发酵菌是一大类不能以发酵形式利 用葡萄糖的需氧、无芽孢革兰阴性杆 菌的统称。
主要非发酵菌种类
非发酵菌
铜绿假单胞菌 假单胞菌属
伯克霍尔德菌属
洋葱伯克霍尔德菌
鲍曼不动杆菌 铜绿假单胞菌
窄食单胞菌属
嗜麦芽窄食单胞菌
嗜麦芽窄食单胞菌
产碱杆
不动杆菌属
菌属
鲍曼不动杆菌
黄杆菌属
脑膜败血黄杆 菌
非发酵菌共同特征
不动杆菌属
• 不动杆菌属广泛分布于自然界与医院环境 中，能在潮湿和干燥的表面生存，也可生 存于健康人的皮肤。最常见的种类有鲍曼 不动杆菌、洛菲不动杆菌、溶血不动杆菌 和约氏不动杆菌等。
鲍曼不动杆菌
• 鲍曼不动杆菌是仅次于铜绿假单胞菌而居 临床分离阳性率第2位的非发酵菌，为条件 致病菌。由于其能获得多重耐药性且能够 在大多数环境中生存，其引起的医院内感 染有增加趋势。
多重耐药菌与泛耐药菌株
• 多重耐药菌(MDR)是基糖苷类、红霉素、β－内酰胺类）或三类 以上抗菌药物同时耐药。
• 泛耐药菌株(PDR)指除多粘菌素类外，对几 乎所有测试抗菌素耐药。比如对氨基糖苷 、青霉素、头孢菌素、碳氢酶烯系类、四 环素类、氟奎诺酮及磺胺类等耐药。
铜绿假单胞菌
• 铜绿假单胞菌是临床最常见的也是最重要 的假单胞菌，人体的皮肤、肠道、呼吸道 均有存在，其在外界环境中存在的重要条 件是潮湿环境，为条件致病菌，主要引起 院内感染。
形态及特征
• 铜绿假单胞菌在琼脂平板上能产生蓝绿色 绿脓素，有生姜味；伤口感染时形成绿色 脓液。本菌无荚膜、无芽孢、能运动，成 对排列或短链状，专性需氧。菌体O抗原有 两种成分，一为内毒素蛋白，是一种保护 性抗原，另一为脂多糖，有特异性，根据 其结构可将铜绿假单胞菌分为12个血清型。
• 1、不能发酵葡萄糖，非发酵菌在葡萄糖氧 化发酵（OF）培养基中常表现氧化型或产 碱型。
• 2、氧化酶阳性，临床上除不动杆菌和窄食 单胞菌外氧化酶试验均为阳性。
• 3、动力阳性，临床上除不动杆菌和莫拉菌 属外细菌外动力均阳性。
发酵型（F）
氧化型(O)
产碱型(-)
氧化酶阳性
阴性
阳性
动力试验
易感因素
• 本菌产生锌离子依赖的金属β内酰胺酶而对 碳氢酶烯类抗生素和β内酰胺酶抑制剂天然 耐药。
鉴别
• 革兰阴性杆菌,动力阳性；氧化酶阴性,还原 硝酸盐为亚硝酸盐,分解产氨阴性,DNA酶阳 性,水解明胶和七叶苷,赖氨酸脱羧酶阳性。 精氨酸双水解酶，鸟氨酸脱羧酶阴性；吲 哚阴性，一般不分解尿素，氧化分解葡萄 糖和麦芽糖。
窄食单胞菌属
嗜麦芽窄食单胞菌
• 嗜麦芽窄食单胞菌为条件致病菌，广泛分 布于自然界的水、土壤和植物中是医院环 境中的常见微生物，在非发酵菌感染中排 第3位。
形态及特征
• 嗜麦芽窄食单胞菌为有动力的需氧革兰阴 性杆菌，具有从及鞭毛，不发酵糖。在多 数培养基上均能生长，在血平皿上呈淡黄 色、淡灰色或淡绿色，有氨味。
临床意义
• 铜绿假单胞菌引起的医院内感染较常见的 是伤口和创面感染、呼吸道和泌尿道感染， 还可引起中耳炎和毁坏性眼部感染，由此 导致的角膜炎、眼内炎必做急症处理，否 则将永久失明；通过血源型感染可导致心 内膜炎、脑膜炎、脑脓肿、骨和关节感染 等。
临床意义
• 严重的铜绿假单胞菌感染发生在局部组织 损伤或抵抗力降低的患者，如烧伤患者、 各种癌肿患者和应用广谱抗生素、激素、 抗肿瘤药及免疫抑制剂等的患者；早产、 先天畸形儿童和囊性纤维化等疾病及老年 患者也易发生严重的铜绿假单胞菌感染。
形态及特征
• 鲍曼不动杆菌为革兰阴性球菌或球杆菌， 呈多形性，成对排列和或呈短链状，极易 与脑膜炎球菌混淆。涂片时因革兰染色不 易脱色或呈假阴性。无芽孢及鞭毛，无动 力，有荚膜，专性需氧。
鉴别
• 革兰阴性杆菌，无动力；双糖铁培养基的 底层及斜面均不变色；氧化酶阴性，触酶 阳性；不发酵糖类,不还原硝酸盐，吲哚阴 性。氧化分解葡萄糖且不溶血。
• 一般是条件致病菌，主要引起医院内感染 ，免疫功能低下人群感染。
• 1、正常宿主的防御机制受到损害。 • 2、防御机制不足。 • 3、诊疗操作。 • 4、医疗器械污染形成的交叉感染。甚至通
过空气传播。
假单胞菌属
• 假单胞菌属在自然界分布广泛，存在于水、 土壤、空气和动植物体，尤其常见于潮湿 环境中，为条件致病菌，其环境来源主要 是水、潮湿的土壤或污染的医疗器械、输 液和注射。感染常在医院内发生。常见的 种类有铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌、恶 臭假单胞菌、产碱假单胞菌等。
鉴别
• 革兰阴性杆菌，动力阳性；氧化酶阳性， 触酶阳性；能氧化分解葡萄糖和木糖，产 酸不产气，但不分解乳糖和蔗糖。液化明 胶、可分解尿素，还原硝酸盐为亚硝酸盐 和氮气，吲哚阴性，利用枸橼酸盐，精氨 酸双水解酶阳性。乙酰胺水解试验阳性， 在4℃不生长而在42℃可以生长。
致病物质
• 1.粘附素-菌毛 • 2.多糖荚膜 • 3.内毒素，外毒素 • 4.绿脓毒素-催化过氧化氢和超氧化物 • 5.弹性蛋白酶 • 6.磷脂酶C
临床意义
• 医院内感染的常见部位是呼吸道、泌尿道 和伤口，致病条件有抗生素治疗、手术、 应用器械、住ICU病房等，所致疾病包括肺 炎、尿路感染、皮肤和伤口感染、心内膜 炎、脑膜炎和腹膜炎等。
• 从西班牙到挪威，出 现了令人担忧的多重 耐药鲍曼不动杆菌 “入侵”现象
• 在驻阿富汗和伊拉克 美军和英军的外伤士 兵中流行，造成严重 的公共卫生问题