【CN109797162A】马铃薯卷叶病毒侵染性克隆及其构建方法【专利】
马铃薯卷叶病毒中国株(PLRV-Ch)ORF2a基因5'端的克隆和序列分析
马铃薯卷叶病毒中国株(PLRV-Ch)ORF2a基因5'端的克隆和序列分析赵国芬;张鹤龄【期刊名称】《内蒙古师范大学学报（自然科学汉文版）》【年(卷),期】2004(033)001【摘要】用设计合成的一对特异性引物,以马铃薯卷叶病毒中国株PLRV-Ch的RNA为模板,经反转录PCR扩增,将获得ORF2a的5'端0.6kb cDNA克隆于pUC19中,构建成重组质粒pLR8.PCR检测和酶切检测表明,获得了ORF2a的5'端0.6kb cDNA克隆,从该cDNA两端进行了两次序列分析,并将获得的核苷酸序列与国外报道的4个PLRV分离株的相应区域的同源性进行了比较,5个序列间具高度同源性.【总页数】4页(P67-70)【作者】赵国芬;张鹤龄【作者单位】内蒙古农业大学,生物工程学院,内蒙古,呼和浩特,010018;内蒙古大学,生命科学学院,内蒙古,呼和浩特,010021【正文语种】中文【中图分类】Q939.46【相关文献】1.马铃薯卷叶病毒中国株(PLRV-Ch)复制酶基因结构研究 [J], 张鹤龄;梁成罡;张彤;哈斯阿古拉;赵国芬2.马铃薯卷叶病毒分离株外壳蛋白基因和17k蛋白基因的克隆及序列分析 [J], 吴志明;朱水芳;田文会;张成良3.马铃薯卷叶病毒中国株(PLRV-Ch)ORF2a基因特征分析 [J], 赵国芬;张鹤龄;哈斯阿古拉4.马铃薯卷叶病毒中国株(PLRV-Ch)ORF2a基因3′端的克隆和序列分析 [J], 赵国芬;张鹤龄;哈斯阿古拉5.马铃薯卷叶病毒中国分离株外壳蛋白基因及其上游先导序列的cDNA克隆和序列分析 [J], 赵福宽;张鹤龄;梁成罡;哈斯阿古拉;刘纪麟;郑用琏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
马铃薯三种病毒的多重PCR检测方法构建
马铃薯三种病毒的多重PCR检测方法构建乔楠;曹佳;李霞【期刊名称】《农业科学与技术（英文版）》【年(卷),期】2011(012)008【摘要】[目的]为马铃薯三种病毒建立多重PCR方法：PVA（马铃薯病毒A），TMV（烟草叶片病毒）和PVY（马铃薯病毒Y）。
[方法]根据PVA，TMV和PVY Genbank中可用的序列，设计用于建立多重PCR方法，并通过PCR扩展三种病毒的靶基因的重组质粒作为参考标准，以敏感性试验用于敏感性试验; PVX（马铃薯病毒X），PVM（马铃薯病毒M），PVS（马铃薯病毒S），PVV（马铃薯病毒V）和CMV（黄瓜马赛克病毒）用于进行疑似感染病毒的11个样品的特异性试验和检测。
[结果]检测PVA，TMV和PVY的限制分别为14,14和14份/ mL。
用其他病毒观察到NO交叉反应性。
通过三种病毒感染11个样品。
[结论] PVA，TMV的多重PCR， Pvy三种土豆成功建立，为检测TE提供了依据马铃薯病毒的杂志。
％[目的]构建马铃薯a病毒（马铃薯病毒，pva），烟草花叶病毒（烟草mosaicvirus，tmv），马铃薯y病毒（马铃薯病毒，pvy）3种马铃薯主要易受感染的病毒的多重PRC（多重PCR）检测方法。
[方法]〖Genbank公布的PVA，TMV，PVY基因序列分子设计设计物，建立3种马铃薯病毒的多重PCR方法;通过构建3种病毒PCR扩增目的基础的使用于制备品种传单敏感性敏感性，利用PVX（马铃薯病毒X），PVM（马铃薯病毒M），PVS（马铃薯病毒S），PVV （马铃薯病毒V），CMV（黄瓜马赛克病毒）等其他马铃薯病毒进行特异性试验;并对11份疑似疑似疑似采集病了了了了了了了检测。
[结果]了了检测。
[结果]了了检测。
100COPIES /2μL，TMV为1000倍/2μL，与PVX，PVM，PVV，PVS，CMV等其他马铃薯无交叉反应，具有诸如好的特价; 11份疑似发布病毒病的马铃薯块茎中7种制品检出3种病毒阳阳性。
马铃薯卷叶病毒(PLRV)检测及系统进化关系的研究进展
马铃薯卷叶病毒(PLRV)检测及系统进化关系的研究进展
郑世玲;刘作易
【期刊名称】《种子》
【年(卷),期】2007(26)2
【摘要】马铃薯卷叶病毒(PLRV)是导致马铃薯严重减产的世界性病毒病害,本文介绍了PLRV的研究状况,检测方法,不同分离物CP序列同源性进行了系统进化树比较并对这些研究进行了总结.
【总页数】3页(P49-51)
【作者】郑世玲;刘作易
【作者单位】贵州大学生命科学学院,贵阳,550025;贵州省农业生物技术重点实验室,贵阳,550006;贵州省农业生物技术重点实验室,贵阳,550006
【正文语种】中文
【中图分类】S532;S432.4+1;Q111
【相关文献】
1.马铃薯卷叶病毒(PLRV)内蒙古分离物基因间隔区(IS)的克隆与序列分析 [J], 郭志华;孙毅;张效梅;张健;白云凤
2.马铃薯卷叶病毒（PLRV）基因组研究进展 [J], 张鹤龄
3.马铃薯卷叶病毒PLRV RT-LAMP检测方法优化 [J], 高彦萍; 张武; 王国祥; 席春艳; 吴雁斌; 梁宏杰; 吕和平
4.马铃薯早熟品种与晚熟品种对马铃薯Y病毒(PVY)和马铃薯卷叶病毒(PLRV)的生理反应 [J], 张武; 吴雁斌; 高彦萍; 梁宏杰; 吕和平
5.用^（32）P标记cDNA探针进行核酸斑点杂交检测马铃薯卷叶病毒（PLRV）[J], 扈惠平;哈斯阿古拉;张鹤龄
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一种选育广谱抗马铃薯Y病毒属病毒的烟草植物的方法[发明专利]
![一种选育广谱抗马铃薯Y病毒属病毒的烟草植物的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/3cd749219ec3d5bbfc0a74bf.png)
专利名称：一种选育广谱抗马铃薯Y病毒属病毒的烟草植物的方法
专利类型：发明专利
发明人：刘勇,黄昌军,于海芹,曾建敏
申请号：CN201811077936.9
申请日：20180916
公开号：CN109371055A
公开日：
20190222
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种选育广谱抗马铃薯Y病毒属病毒(Potyviruses)的烟草植物的方法，在烟草植物中聚合eIFiso4E‑S基因突变体、eIFiso4E‑T基因突变体和eIF14E1基因突变体，可获得烟草对至少4种Potyviruses的抗性，包括马铃薯Y病毒(PVY)、辣椒脉斑驳病毒(ChiVMV)和烟草脉带花叶病毒(TVBMV)。
本发明所述方法对于培育抗Potyviruses烟草具有重大应用前景。
申请人：云南省烟草农业科学研究院
地址：650000 云南省昆明市五华区圆通街33号
国籍：CN
代理机构：昆明今威专利商标代理有限公司
代理人：赛晓刚
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一种苜蓿花叶病毒的侵染性克隆、重组农杆菌及构建方法[发明专利]
![一种苜蓿花叶病毒的侵染性克隆、重组农杆菌及构建方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/41bd96ea7e192279168884868762caaedd33ba8b.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010461785.8(22)申请日 2020.05.27(71)申请人 东北农业大学地址 150030 黑龙江省哈尔滨市香坊区长江路600号(72)发明人 程晓非 武晓云 车欣洋 刘佳慧 (74)专利代理机构 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211代理人 王志新(51)Int.Cl.C12N 15/82(2006.01)C12N 15/40(2006.01)C12N 1/21(2006.01)C12N 15/81(2006.01)C12R 1/01(2006.01)(54)发明名称一种苜蓿花叶病毒的侵染性克隆、重组农杆菌及构建方法(57)摘要一种苜蓿花叶病毒的侵染性克隆、重组农杆菌及构建方法，属于植物基因工程技术领域。
为了提高侵染性克隆侵染效率，本发明提供了一种苜蓿花叶病毒的侵染性克隆，所述侵染性克隆载体由苜蓿花叶病毒全基因组与含有CaMV 35S启动子和HDV核酶Rz的植物表达载体pCB301-2μ-HDV重组后获得的。
所述侵染性克隆由下述三个载体组成：携带苜蓿花叶病毒基因组RNA1的重组载体pCB301-AMVRNA1、携带苜蓿花叶病毒基因组RNA2的重组载体pCB301-AMVRNA2和携带苜蓿花叶病毒基因组RNA3的重组载体pCB301-AMVRNA3。
本发明能够节省病毒侵染时间，提高的侵染的成功率。
权利要求书1页 说明书6页序列表6页 附图5页CN 111705075 A 2020.09.25C N 111705075A1.一种苜蓿花叶病毒的侵染性克隆，其特征在于，所述侵染性克隆由苜蓿花叶病毒全基因组与含有CaMV 35S启动子和HDV核酶Rz的植物表达载体pCB301-2μ-HDV重组后获得的；所述苜蓿花叶病毒全基因组由RNA1、RNA2和RNA3组成，所述RNA1的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述RNA2的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述RNA3的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示；所述侵染性克隆由下述三个载体组成：携带苜蓿花叶病毒基因组RNA1的重组载体pCB301-AMVRNA1、携带苜蓿花叶病毒基因组RNA2的重组载体pCB301-AMVRNA2和携带苜蓿花叶病毒基因组RNA3的重组载体pCB301-AMVRNA3。
一种检测马铃薯卷叶病毒的荧光定量PCR方法[发明专利]
![一种检测马铃薯卷叶病毒的荧光定量PCR方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/659228ddf111f18582d05a10.png)
专利名称：一种检测马铃薯卷叶病毒的荧光定量PCR方法专利类型：发明专利
发明人：陈兆贵,叶新友,侯红因,邢澍祺,毛露甜,黄雁
申请号：CN201810903536.2
申请日：20180809
公开号：CN109097492A
公开日：
20181228
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种检测马铃薯卷叶病毒的荧光定量PCR方法，包括如下步骤：（1）RNA提取：提取马铃薯的总RNA；（2）反转录：将提取的总RNA反转录成cDNA；（3）引物设计：分别设计用于扩增内参基因和PLRV基因的两对引物；（4）荧光定量PCR：将反转录的cDNA和设计好的引物配制成PCR反应体系，进行实时荧光定量PCR反应。
本发明的检测方法能在分子水平上检测出马铃薯植株中存在的马铃薯卷叶病毒，并能对病毒基因的表达情况进行定量分析，具有高效、特异性强，准确性和重复性好，灵敏度高，检测速度快，材料消耗少，成本低以及能够定量检测等优点。
申请人：惠州学院
地址：516000 广东省惠州市河南岸马庄冷水坑
国籍：CN
代理机构：惠州市超越知识产权代理事务所(普通合伙)
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一种克隆植物病毒基因组特定序列的方法[发明专利]
![一种克隆植物病毒基因组特定序列的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/1406156e680203d8cf2f24cd.png)
专利名称：一种克隆植物病毒基因组特定序列的方法专利类型：发明专利
发明人：邱又彬,陶刚,李奇科,刘作易,黄永会,朱英,郑世玲申请号：CN200810306720.5
申请日：20081231
公开号：CN101457221A
公开日：
20090617
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种克隆马铃薯病毒基因组特定序列的方法：(1)设计马铃薯病毒特定序列引物；(2)利用特定研磨缓冲液研磨马铃薯叶片；(3)包被；(4)反转录；(5)目的片段的PCR扩增；(6)电泳检测，与现有技术相比，该方法分为离心管与病毒颗粒的非特异性结合和反转录PCR两个部分，既避开了RNA的提取和抗体制备过程，降低了成本，又继承了现有方法简单、快速、灵敏度高等优点，试验证明本发明的灵敏度高，重复性好，可行性强，有很好的应用前景。
申请人：贵州省植物保护研究所
地址：550006 贵州省贵阳市小河区金农社区
国籍：CN
代理机构：贵阳中新专利商标事务所
代理人：程新敏
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植物细胞质弹状病毒侵染性克隆、表达载体及其构建方法与应用[发明专利]
![植物细胞质弹状病毒侵染性克隆、表达载体及其构建方法与应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/cf6bc8cae2bd960591c6776a.png)
专利名称：植物细胞质弹状病毒侵染性克隆、表达载体及其构建方法与应用
专利类型：发明专利
发明人：王献兵,高强,许文雅,邸垫平,严滕,曹青,于嘉林,张爱红,苗红芹,韩成贵,王颖,李大伟,张永亮
申请号：CN201810488090.1
申请日：20180521
公开号：CN110511955A
公开日：
20191129
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明属于基因工程技术领域，具体公开了一种植物细胞质弹状病毒侵染性克隆、表达载体及其构建方法与应用。
本发明所提供的植物细胞质弹状病毒表达载体为含有大麦黄条点花叶病毒(BYSMV)全基因组反向互补链的载体。
本发明首次提供一种构建虫传植物病毒侵染性克隆的策略，即通过将前述表达载体与表达BYSMV的核衣壳(N)、磷蛋白(P)、大聚合酶蛋白(L)等病毒元件的载体经农杆菌介导在本生烟建立侵染性病毒，再利用本生烟发病汁液通过飞虱类昆虫接种单子叶植物并建立系统性侵染。
不仅如此，本发明还进一步提供了所述植物细胞质弹状病毒表达载体在单子叶植物或飞虱类昆虫体内进行蛋白高效表达或者基因编辑等方面的广泛应用。
申请人：中国农业大学
地址：100193 北京市海淀区圆明园西路2号
国籍：CN
代理机构：北京路浩知识产权代理有限公司
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三种马铃薯病毒多重RT-PCR检测体系建立
三种马铃薯病毒多重RT-PCR检测体系建立张威;白艳菊;罗丽环;范国权;高艳玲;申宇;张抒;孟宪欣【期刊名称】《东北农业大学学报》【年(卷),期】2014(000)005【摘要】马铃薯卷叶病毒（PLRV）、马铃薯Y病毒（PVY）和马铃薯S病毒（PVS）是马铃薯生产田中发生率较高、危害较严重的病毒，通常复合侵染。
研究通过综合评价和筛选，确定每种病毒的特异性引物，对PCR部分各试剂用量和反应程序进行优化，在同一体系中对三种病毒复合侵染的马铃薯材料进行多重RT-PCR扩增，得到长度分别为336、447、729 bp的3条特异性条带，建立能同时检测PLRV、PVY和PVS病毒的多重RT-PCR检测体系。
应用该体系对田间样品进行检测，检测结果特异性强、灵敏度高，表明该多重RT-PCR体系能够同时检测三种马铃薯病毒。
【总页数】6页(P13-18)【作者】张威;白艳菊;罗丽环;范国权;高艳玲;申宇;张抒;孟宪欣【作者单位】黑龙江省农业科学院植物脱毒苗木研究所，哈尔滨 150086;黑龙江省农业科学院植物脱毒苗木研究所，哈尔滨 150086;黑龙江省农业科学院作物育种研究所，哈尔滨 150086;黑龙江省农业科学院植物脱毒苗木研究所，哈尔滨150086;黑龙江省农业科学院植物脱毒苗木研究所，哈尔滨 150086;黑龙江省农业科学院植物脱毒苗木研究所，哈尔滨 150086;黑龙江省农业科学院植物脱毒苗木研究所，哈尔滨 150086;黑龙江省农业科学院作物育种研究所，哈尔滨 150086【正文语种】中文【中图分类】S532;Q944.57【相关文献】1.马铃薯病毒PVY,PVS和PLRV多重RT-PCR检测 [J], 黄丹;余琨;陈建斌;蔡红;朱有勇2.多重RT-PCR法对马铃薯S病毒的检测效果 [J], 邓宽平;丁海兵;雷尊国3.三种甘薯病毒多重 RT-PCR 检测技术的建立 [J], 蒋素华;程喜梅;宋彩霞;许申平;梁芳;崔波4.单管多重RT-PCR同时检测大豆种子中三种检疫性植物病毒 [J], 易汪雪;宋绍祎;吴东妮;代欢欢;杨翠云;于翠5.马铃薯种苗复合感染病毒多重RT-PCR同步快速检测 [J], 王中康;夏玉先;袁青;谭万忠;殷幼平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
马铃薯帚顶病毒基因组克隆与侵染性克隆构建
马铃薯帚顶病毒基因组克隆与侵染性克隆构建
刘野;高艳玲;刘佳慧;方月;马廷帅;毛彦芝;张丽莉;白艳菊;程晓非
【期刊名称】《中国马铃薯》
【年(卷),期】2022(36)4
【摘要】马铃薯帚顶病毒(Potato mop-top virus,PMTV)能严重影响马铃薯(Solanum tuberosum)的产量和品质,是中国进境植物一类检疫性有害生物。
中国广东、云南、四川等地马铃薯上曾零星检测到该病毒的存在。
文中报道了一株采自河北省PMTV马铃薯分离物的全基因组序列,分析了该分离物与其他PMTV分离物的遗传进化关系。
通过酵母同源重组法构建了该分离物的侵染性克隆,并在本氏烟(Nicotiana benthamiana)和马铃薯上验证了该分离物的侵染性。
研究丰富了对侵入中国的PMTV的了解,为进一步开展PMTV的致病机理、马铃薯抗病机制以及粉痂菌(Spongospora subterranea)传毒机制奠定了基础。
【总页数】10页(P322-331)
【作者】刘野;高艳玲;刘佳慧;方月;马廷帅;毛彦芝;张丽莉;白艳菊;程晓非
【作者单位】寒地粮食作物种质创新与生理生态教育部重点实验室/东北农业大学农学院;黑龙江省农业科学院经济作物研究所
【正文语种】中文
【中图分类】S532
【相关文献】
1.马铃薯纺锤块茎类病毒山西分离物侵染性克隆的构建
2.乙肝病毒基因组克隆及其线性分子侵染力研究
3.海南番木瓜环斑病毒全长cDNA克隆及其侵染性克隆构建
4.侵染海南雪茄烟的中国黄花稔曲叶病毒侵染性克隆的构建
5.柑橘脉突病毒基因组全长cDNA克隆及其侵染性鉴定
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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910131475.7
(22)申请日 2019.02.22
(71)申请人 山东农业大学
地址 271018 山东省泰安市岱宗大街61号
(72)发明人 田延平 王健 李向东 耿超
(74)专利代理机构 济南誉丰专利代理事务所
(普通合伙企业) 37240
代理人 薛鹏喜
(51)Int.Cl.
C12N 15/63(2006.01)
C12N 1/21(2006.01)
C12R 1/01(2006.01)
(54)发明名称
马铃薯卷叶病毒侵染性克隆及其构建方法
(57)摘要
本发明公开了一种马铃薯卷叶病毒侵染性
克隆及其构建方法，是将马铃薯卷叶病毒全基因
组通过同源重组的方式克隆到含有花椰菜花叶
病毒双35S启动子的pCB301双元载体中构建得
到。
本发明首次制备得到了能通过农杆菌浸润方
法接种并稳定高效侵染本氏烟、马铃薯等寄主植
物的马铃薯卷叶病毒侵染性克隆，对于马铃薯卷
叶病毒病的防治具有重要的意义。
权利要求书1页 说明书6页序列表6页 附图1页CN 109797162 A 2019.05.24
C N 109797162
A
权 利 要 求 书1/1页CN 109797162 A
1.一种马铃薯卷叶病毒侵染性克隆的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)从马铃薯卷叶病毒侵染的发病株中提取植物总RNA，对获得的总RNA进行反转录合成cDNA；
(2)以步骤(1)合成的cDNA为模板，以SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.4所述的核苷酸序列作为特异性引物进行PCR扩增，获得PLRV全基因组序列；
(3)将花椰菜花叶病毒的35S启动子克隆到pCB301载体上，获得含有双35S启动子的pCB301载体；
(4)利用同源重组的方法将PLRV全基因组序列克隆到pCB301载体35S启动子的下游，即得到马铃薯卷叶病毒侵染性克隆。
2.权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)中，利用随机引物和SEQ ID NO.4所示的引物对获得的总RNA进行反转录；
优选的，所述随机引物的序列为：5'-NNNNNN-3'，N＝G、A、T or C。
3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)中，反转录的程序为：将模板RNA、随机引物、SEQ ID NO.4所示的引物和RNase free dH2O混合，65℃保温5min，迅速置于冰上冷却2min，瞬间离心；再加入HiScript Ⅱ Buffer、dNTP、Hiscript II Reverse Transcriptase和RNA酶抑制剂；25℃，5min；50℃，45min；85℃，5min；终止反应。
4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)中，利用SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的引物进行PCR扩增，获得PLRV1-3161nt片段；利用SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的引物进行PCR扩增，获得PLRV3162-5882nt片段。
5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)中，PCR扩增的反应程序为：
1)98℃，预变性，30s；
2)98℃，变性，10s；62℃，退火，30s；72℃，延伸，2min；共32个循环；
3)72℃，后延伸，10min。
6.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(3)中，利用同源重组的方法分两次将PLRV全基因组序列克隆到pCB301载体35S启动子的下游，即：第一次连接PLRV1-3161nt 片段，得到质粒pCB-PLRV3161；第二次将PLRV3162-5882nt片段连接到质粒pCB-PLRV3161上，获得含有PLRV全基因组的侵染性克隆。
7.利用权利要求1-6任一项所述的方法构建的马铃薯卷叶病毒侵染性克隆。
8.根据权利要求7所述的马铃薯卷叶病毒侵染性克隆，其特征在于，所述马铃薯卷叶病毒侵染性克隆的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示。
9.权利要求8或9所述的马铃薯卷叶病毒侵染性克隆在使植株获得交叉保护中的应用。
10.一种重组农杆菌菌株，其特征在于，由权利要求8或9所述的马铃薯卷叶病毒侵染性克隆导入到农杆菌中获得。
2。