蛋白质定量的五种方法
定量测定蛋白质含量的方法及原理
定量测定蛋白质含量的方法及原理下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
文档下载后可定制修改，请根据实际需要进行调整和使用，谢谢！本店铺为大家提供各种类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，想了解不同资料格式和写法，敬请关注！Download tips: This document is carefully compiled by this editor. I hope that after you download it, it can help you solve practical problems. The document can be customized and modified after downloading, please adjust and use it according to actual needs, thank you! In addition, this shop provides you with various types of practical materials, such as educational essays, diary appreciation, sentence excerpts, ancient poems, classic articles, topic composition, work summary, word parsing, copy excerpts, other materials and so on, want to know different data formats and writing methods, please pay attention!定量测定蛋白质含量的方法及原理在生物化学和分子生物学研究中，准确测定样品中蛋白质的含量至关重要。
蛋白质定量分析了解生物体内蛋白质表达的方法
蛋白质定量分析了解生物体内蛋白质表达的方法蛋白质是生物体内重要的组成成分，它们在维持生命活动以及调节生理功能等方面起着关键作用。
了解生物体内蛋白质的表达水平对于研究生物体的功能与疾病机制具有重要意义。
在实验室中，科学家们常常需要进行蛋白质定量分析来准确测量生物体内蛋白质的表达水平。
本文将介绍几种常见的蛋白质定量方法。
一、BCA（巴氏反应）法BCA法是一种常用的蛋白质定量方法，它基于巴氏反应原理，通过将被测蛋白质样本与BCA试剂反应生成可着色的络合物，然后利用分光光度计测定络合物的吸光度来确定蛋白质浓度。
BCA法具有操作简单、反应时间短、灵敏度高的特点，被广泛应用于生物科学研究领域。
二、Lowry法Lowry法是另一种常用的蛋白质定量方法，它利用蛋白质在碱性条件下与铜离子和碱式碳酸铜反应生成可测量的蓝色复合物，再利用比色法测定复合物的吸光度来确定蛋白质浓度。
Lowry法具有较高的敏感性和较宽的线性范围，在分析蛋白质样品时非常可靠。
三、Bradford法Bradford法是一种相对快速且便于操作的蛋白质定量方法。
该方法利用考马斯亮蓝G250（Coomassie Brilliant Blue G-250）与蛋白质之间的非共价相互作用形成蓝色复合物，再通过比色法来测定蛋白质样品的吸光度。
Bradford法具有灵敏度高、线性范围广等优点，常被用于较快速的蛋白质定量。
四、荧光定量法荧光定量法是一种常用于测定蛋白质浓度的灵敏度高的方法。
该方法利用特定的荧光染料与蛋白质发生非共价相互作用，生成荧光染料-蛋白质复合物，进而通过测量荧光信号的强度来确定蛋白质浓度。
相比于上述几种方法，荧光定量法的线性范围更广，并且对于小样本量也能获得可靠结果。
五、质谱分析法质谱分析法是一种利用质谱技术对蛋白质进行定量分析的方法。
此方法通常结合先进的液相色谱技术与质谱仪器，通过将样品中的蛋白质分离和离子化，进而测量离子化蛋白质的质量-电荷比（m/z），最终得到蛋白质的浓度。
蛋白质的定量分析方法
蛋白质的定量分析方法1．蛋白质的常规检测方法1.1 凯氏定氮法一种最经典的蛋白质检测方法。
原理：样品中含氮有机化合物与浓硫酸在催化剂作用下共热消化，含氮有机物分解产生氨，氨又与硫酸作用变成硫酸铵。
然后加碱蒸馏放出氨，氨用过量的硼酸吸收，再用盐酸标准溶液滴定求出总氮量换算为蛋白质含量。
优点：范围广泛、测定结果准确、重现性好。
缺点：操作复杂费时、试剂消耗量大。
1.2 双缩脲法常用于需要快速但并不需要十分精确的蛋白质检测。
原理：双缩脲是三分子的脲经180C左右加热，放出一份子氨后得到的产物，在强碱性溶液中，双缩脲与硫酸铜形成紫色络合物（肽链中的氮原子和铜离子配价结合），称为双缩脲反应。
紫色络合物颜色的深浅和蛋白质浓度成正比，因此可用来测定蛋白质含量。
优点：较快速、干扰物质少、不同蛋白质产生的颜色深浅相近。
缺点：灵敏度差、三羟甲基氨基甲烷、一些氨基酸和EDTA 等会干扰该反应。
1.3 Folin 酚试剂法原理：与双缩法大体相同，利用蛋白质中的肽键和铜离子结合产生双缩脲反应。
同时也由于Folin 酚试剂中的磷钼酸-磷钨酸试剂被蛋白质的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原，产生深蓝色的钼蓝和钨蓝的混合物。
在一定条件下，蓝色深度与蛋白的量成正比，由此可测定蛋白质的含量。
优点：灵敏度高、对水溶性的蛋白质含量的测定很有效。
缺点：费时，要精确控制操作时间；Folin 酚试剂的配制比较繁琐，且酚类和柠檬酸、硫酸铵、Tris缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油、还原剂（二硫代苏糖醇、巯基乙醇）、EDTA 和尿素均会干扰反应。
1.4 紫外吸收法原理：蛋白质中的酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基使其在280nm 处具有紫外吸收，其吸光度与蛋白质含量成正比。
此外，蛋白质溶液在280nm 处的吸光值与肽键含量成正比。
利用一定波长下蛋白质溶液的吸光值与蛋白质含量的正比关系可以测定蛋白质含量。
优点：简便、灵敏、快速、不消耗样品，测定后能回收。
缺点：测定蛋白质含量的精确度差、专一性差；干扰物质多，若样品中含有嘌呤、嘧啶等能吸收紫外光的物质会出现较大的干扰。
蛋白质分子的定量分析方法
蛋白质分子的定量分析方法蛋白质是生命活动中不可或缺的分子，广泛参与到生命的各个方面。
蛋白质分子的定量分析是研究生命活动机制的重要手段之一。
本文将介绍蛋白质分子的定量分析方法及其特点。
一、光谱法光谱法是一种常用的蛋白质分子定量分析方法。
蛋白质分子可以通过其吸收特定波长的光线来进行定量分析。
常用的技术包括紫外吸收光谱法（UV）、荧光光谱法和圆二色光谱法。
紫外吸收光谱法是通过测量蛋白质分子在紫外光区域（190-280纳米）的光吸收来定量分析蛋白质。
这种方法可以用于蛋白质含量的测量和结构的表征。
但是，紫外吸收光谱法对于一些蛋白质分子无法提供准确的定量结果。
荧光光谱法是一种敏感的定量方法，它利用蛋白质分子的荧光特性进行定量分析。
这种方法在生物学中的应用越来越广泛，特别是在蛋白质相互作用和药物筛选方面。
圆二色光谱法是一种检测蛋白质分子中手性结构（旋光性）的技术。
蛋白质分子的手性结构对它的功能起着重要作用。
圆二色光谱法可以对不同构象的蛋白质分子进行区分和定量分析。
二、生物传感器法生物传感器法是一种新型的蛋白质分子定量分析方法。
它是将某种特定的生物分子放置在一个传感器表面，当蛋白质分子与生物分子发生相互作用时，传感器中的信号将发生变化。
根据信号的变化可以定量测量蛋白质分子的含量。
常用的生物分子包括抗体、酶、DNA和RNA。
它们可以通过化学修饰或基因工程技术进行改造，以提高传感器的特异性和敏感性。
生物传感器法可以被用于药物筛选、生物安全检测、生命科学和临床诊断等领域。
三、质谱法质谱法是一种高分辨率、高精度的蛋白质分子定量分析方法。
它是利用蛋白质分子的质量和电荷量进行定量分析。
蛋白质分子可以通过质谱仪进行离子化，并用一个或多个检测器进行检测。
蛋白质质谱法包括某些形式的基质辅助激光解析/电离质谱法（MALDI-TOF）和液相色谱/串联质谱法（LC-MS/MS）。
质谱法可检测低至纳摩尔级别的蛋白质含量，因此常用于生物样本的高通量分析。
蛋白质定量测定的方法
蛋白质定量测定的方法蛋白质定量测定是生物学研究中十分重要的方法。
常用的蛋白质定量测定的方法主要有以下几种：一、比浊法比浊法是一种最常用的定量法，它是通过适当改变溶液的浓度，以产生一种特定的“荧光效应”强度来实现的，其原理是以产生的特定的荧光强度和溶液中已知的蛋白质含量来反映所测溶液中蛋白质定量。
比浊法步骤：1.将样本放置在一定量光源下，调节所需的条件，获得荧光发光比较；2.使用比浊仪计算不同浓度样本的荧光强度；3.按照事先确定的标准线，实现折线法法中的拟合，获得最终定量结果。
二、放射免疫分析法放射免疫分析法应用于蛋白质定量测定，即根据反映物质的放射吸收，通过放射免疫分析试验确定溶液中蛋白质的含量。
它是借助化学反应获得放射吸收信息，再结合生物学实验，显示溶液中简单分子及复杂分子的放射衰减，最后计算蛋白质的定量结果。
放射免疫分析法步骤：1.将样本放置在放射量计中，记录和统计其放射吸收情况；2.生成受体蛋白，和未知物质特定结合，生成结合能力；3.检测特异性信号，计算放射吸收率；4.根据已知信号和放射吸收率，计算蛋白质的定量结果。
三、衍生免疫定量衍生免疫定量是一种新的蛋白质定量测定方法，它采取基因表达系统来合成蛋白质的介质，从而获取定量结果。
基于衍生免疫定量，使用适当的催化剂可以产生出特定的化学衍生物，以测量活体细胞内的蛋白质含量。
衍生免疫定量步骤：1.研究者首先调查待测样本，以确定具体的衍生物；2.通过基因工程，合成衍生物和特定的反应媒介；3.添加衍生物到待测样本中，形成一种特定的反应媒介，并用特定的定量仪器测量；4.通过收集的数据，计算蛋白质的定量结果。
总结：1.比浊法：利用产生的特定荧光强度和溶液中已知的蛋白质含量来定量蛋白质；2.放射免疫分析法：借助化学反应获得放射吸收信息，检测特异性信号，计算放射吸收率；3.衍生免疫定量：借助基因表达系统合成蛋白质介质，调查待测样本，添加衍生物，通过定量仪器测量，实现衍生免疫定量。
列举几种常用的蛋白质定量测定的方法
列举几种常用的蛋白质定量测定的方法常用的蛋白质定量测定方法如下：
1. Bradford法
Bradford法是一种基于蛋白质与染料之间的化学反应进行测定的方法。
该方法操作简单，灵敏度高，可用于各种类型的蛋白质含量测定。
2. BCA法
BCA法是一种基于铜离子与蛋白质产生化学反应，从而生成紫色物质
的方法。
该方法适用于各种类型的蛋白质测定，具有灵敏度高、稳定
性好等特点。
3. Lowry法
Lowry法是一种基于蛋白质与染料之间的氧化还原反应进行测定的方法。
该方法操作简单，灵敏度高、稳定性好，适用于不同类型的蛋白
质含量测定。
4. UV吸光度法
UV吸光度法是一种基于蛋白质带有吸收紫外线的物理性质进行测定的
方法。
该方法操作简单、快速，并且适用于大多数类型的蛋白质测定。
5. 酰荧光素改良法
酰荧光素改良法是一种基于蛋白质分解后产生的荧光物质进行测定的
方法。
该方法灵敏度高、稳定性好，且能够测定低浓度的蛋白质。
以上是常用的蛋白质定量测定方法，不同的方法适用于不同类型的蛋
白质及其含量测定。
选择合适的方法能够提高测定的灵敏度和准确性，为后续的研究提供可靠的数据。
蛋白质定量的五种方法
蛋白质定量的五种方法方法一双缩脲法测定蛋白质浓度[目的]掌握双缩脲法测定蛋白质浓度的原理和标准曲线的绘制。
[原理]双缩脲(NH2CONHCONH2)在碱性溶液中与硫酸铜反应生成紫红色化合物，称为双缩脲反应，蛋白质分子中含有许多肽键(-CONH-)在碱性溶液中也能与Cu2+反应产生紫红色化合物。
在一定范围内，其颜色的深浅与蛋白质浓度成正比。
因此，可以利用比色法测定蛋白质浓度。
双缩脲法是测定蛋白质浓度的常用方法之一。
操作简便、迅速、受蛋白质种类性质的影响较小，但灵敏度较差，而且特异性不高。
除-CONH-有此反应外，-CONH2、-CH2NH2、-CS-NH2等基团也有此反应。
[操作]取中试管7支，按下表操作。
各管混匀、放置37℃水浴中保温20分钟。
用540nm比色，以空白管调零点，读取各管光密度值。
[计算](一)在座标纸上以光密度为纵座标，以蛋白质浓度为横座标绘制标准曲线。
(二)从标准曲线中查出待测血清样本的蛋白质浓度(g／L)，并求出人血清样本的蛋白质浓度。
(三)再从标准管中选择一管与测定管光密度相接近者，求出人血清样本的蛋白质浓度(g／L)。
[器材]中试管7支，l毫升刻度吸管3支，10毫升刻度吸管1支，水浴箱，721型分光光度计、坐标纸。
[试剂](—)6N NaOH：称取240g氢氧化钠溶于1000ml水中。
(二)双缩脲试剂：称取CuS04·5H2O 3.0克，酒石酸钾9.0 克和碘化钾5.0克，分别溶解后混匀，加6N NaOH l00ml，最后加水至1000ml，贮于棕色瓶中，避光，可长期保存。
如有暗红色沉淀出现，即不能使用。
(三)0.9％NaCl。
(四)蛋白质标准液(10mg／m1)，称取干燥的牛血清蛋白100.0mg，以少量生理盐水溶解后倒入l0ml容量瓶中，淋洗称量瓶数次，一并倒入容量瓶中，最后加生理盐水至刻度线，或用凯氏定氮法测定血清蛋白质含量，然后稀释成l0mg ／m1作为蛋白质标准液。
蛋白定量方法
蛋白定量方法蛋白定量是生物学实验中常见的一项重要技术，准确的蛋白定量对于许多实验都至关重要。
在科研实验中，我们常常需要知道样品中蛋白的浓度，以便进行后续的实验操作。
因此，选择合适的蛋白定量方法对于实验结果的准确性和可靠性有着重要的影响。
目前常用的蛋白定量方法包括比色法、BCA法、Lowry法和荧光法等。
每种方法都有其特点和适用范围，下面将对这些方法进行简要介绍。
比色法是一种常用的蛋白定量方法，其原理是利用蛋白质与某些化学试剂作用后产生颜色反应，通过测量反应产生的颜色强度来确定蛋白质的浓度。
比色法操作简单，灵敏度高，适用于常规的蛋白质浓度测定。
BCA法是另一种常用的蛋白定量方法，其原理是利用蛋白质与BCA试剂在碱性条件下发生蓝色化合物的形成，通过测量产生的蓝色溶液的吸光度来确定蛋白质的浓度。
BCA法对于含有干扰物质的样品有较好的耐受性，适用于复杂样品的蛋白定量。
Lowry法是一种经典的蛋白定量方法，其原理是利用蛋白质与碱性铜离子和碱性蛋白质共存时产生的蓝色络合物来测定蛋白质的浓度。
Lowry法对于蛋白质浓度较高的样品有较好的灵敏度和稳定性。
荧光法是一种高灵敏度的蛋白定量方法，其原理是利用蛋白质与荧光染料结合后产生荧光信号来测定蛋白质的浓度。
荧光法对于蛋白质浓度较低的样品有较好的检测能力，适用于高灵敏度的蛋白定量。
在选择蛋白定量方法时，需要根据样品的特点以及实验的要求来进行选择。
在进行蛋白定量实验时，还需要注意操作的规范性和准确性，避免因操作不当而导致的误差。
另外，不同的蛋白定量方法在操作上也有一些细微的差别，需要根据具体的实验要求来进行选择。
总的来说，蛋白定量是生物学实验中非常重要的一项技术，选择合适的蛋白定量方法对于实验结果的准确性和可靠性至关重要。
希望本文对您在蛋白定量方法的选择和实验操作上能够提供一些帮助。
蛋白质定量的方法
蛋白质定量的方法蛋白质是构成生物体的重要组成部分，对于理解生物体的结构和功能具有重要意义。
因此，准确测定蛋白质的含量是许多生物科学领域研究的基础。
目前，人们已经发展出了多种方法来定量蛋白质的含量。
本文将介绍几种常用的蛋白质定量方法及其原理、优缺点和应用范围。
1. 高效液相色谱法（High-performance liquid chromatography, HPLC）HPLC是一种常用的蛋白质分离和定量方法。
它利用样品中蛋白质与流动相在分离柱中的相互作用来实现分离和定量。
HPLC方法的优点是分离效果好、重复性好、能够同时检测多个样品。
但是，该方法需要相对较高的设备要求和操作技巧，对样品预处理也较为复杂，且比较耗时。
2. 比色法比色法是一种常用的定量蛋白质的方法。
其中，低里氏试剂法和双硫键试剂法是比较常用的比色法。
低里氏试剂法是通过蛋白质与龙氏试剂（碱性铜硫脲）之间的比色反应来定量蛋白质含量。
双硫键试剂法则是通过蛋白质与2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）之间的比色反应来定量蛋白质含量。
比色法具有操作简单、设备要求低等优点，但是对于不同类型的蛋白质，比色反应的敏感度和选择性可能不同。
3. 显微波特光度法（Bradford法）Bradford法是一种常用的蛋白质定量方法，基于酒红素（Coomassie BrilliantBlue G-250）与蛋白质之间的相互作用产生的颜色变化。
蛋白质与酒红素结合后，溶液的吸收光谱发生变化，可测量溶液的吸光度来定量蛋白质含量。
该方法操作简单快捷，而且灵敏度较高，适用于常规蛋白质定量。
4. 聚丙烯酰胺凝胶电泳法（Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis, SDS-PAGE）SDS-PAGE是一种常用的蛋白质定量方法，可以通过电泳分离蛋白质并定量。
该方法通过将样品中的蛋白质在电场中进行分离，然后通过比色或者近红外成像等方法来定量。
蛋白质的定量和定性分析方法
蛋白质的定量和定性分析方法蛋白质是生物体内最重要的功能分子之一，对于研究生物体的结构和功能具有重要意义。
为了准确地了解蛋白质的含量和性质，在科学研究和实际应用中，我们需要使用定量和定性分析的方法来研究蛋白质。
一、定量分析方法1. 低里德伯法（Lowry method）低里德伯法是一种经典而广泛应用的蛋白质定量方法。
该方法利用蛋白质与碱式铜络合物在碱性条件下反应生成蓝色产物，通过比色法测定溶液的吸光度来计算蛋白质含量。
这是一种灵敏且相对简单的方法，适用于大多数蛋白质样品的定量分析。
2. 比色法（Colorimetric assay）比色法是一种常用的蛋白质定量方法，通过蛋白质与染料的结合来测定蛋白质浓度。
常用的染料有布拉德福蓝（Bradford）、库吉铃蓝（Coomassie Brilliant Blue）、BCA法（Bicinchoninic Acid assay）等。
这些染料与蛋白质结合后形成一种复色物，通过比色法测定溶液的吸光度可以定量分析蛋白质。
比色法具有操作简便、灵敏度高等特点，被广泛应用于蛋白质定量领域。
3. 分子标记法（Molecular tagging method）分子标记法是一种新兴的蛋白质定量方法，利用特定的分子标记物（如荧光染料、放射性示踪剂等）标记蛋白质，然后通过测定标记物的荧光强度或放射性信号来计算蛋白质浓度。
分子标记法具有高灵敏度、高特异性等优点，适用于微量蛋白质的定量测定。
二、定性分析方法1. SDS-PAGE（Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis）SDS-PAGE是一种常用的蛋白质定性分析方法，通过电泳将蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中分离出来。
在电泳过程中，蛋白质在SDS（十二烷基硫酸钠）的作用下具有相同的电荷密度，只受到大小的限制而移动。
蛋白质在凝胶中的分离程度取决于其分子量大小，可以通过对比标准品的迁移距离来估计样品中蛋白质的相对分子量。
蛋白质的定量方法
蛋白质的定量方法
以下是 7 条关于“蛋白质的定量方法”的内容：
1. 哇塞，有一种蛋白质的定量方法叫凯氏定氮法！就像测金子的纯度一样去测蛋白质含量。
你想想，把样本放在那里，通过一系列反应，就能得出蛋白质有多少呢！比如检测牛奶中的蛋白质含量，这办法可厉害啦！
2. 嘿，还有双缩脲法呢！这不就像我们找东西，有个特定的标记能让我们一下子就找到目标嘛！像检测蛋清里的蛋白质含量，用双缩脲法多方便呀，一测就知道有多少啦，神奇吧！
3. 哇哦，福林-酚试剂法呀，就好比是个超级侦探，能精准地把蛋白质
给“揪”出来并知道它的量。
比如在检测肉类中的蛋白质时，它就能大显身手啦！你说妙不妙！
4. 呀，考马斯亮蓝法也很不错呀！就好像在一堆色彩中，能准确找出蓝色一样。
在检测豆浆中的蛋白质时，用它可准啦，是不是很有意思呀！
5. 啊哈，紫外吸收法就像是有一双特殊的眼睛，能通过紫外线看到蛋白质的量呢！拿检测蛋白粉来说，这个方法就能轻松搞定，是不是超厉害！
6. 哟呵，BCA 法也值得一提呀！它就像是个智能的小助手，专门帮我
们搞定蛋白质的定量。
当检测奶酪中的蛋白质时，它可好用啦，你能感受到这种神奇吗！
7. 哼，还有一种蛋白质定量方法叫 Bradford 法呢！那可是相当可靠呀，就像有个坚强的后盾在那。
比如在研究某些生物样本时，它就是得力干将呀！总之，这些方法各有各的厉害之处，真的是让我们对蛋白质的了解更深了一步呀！
我的观点结论：这些蛋白质的定量方法都有各自的特点和适用场景，我们可以根据具体需求选择合适的方法来准确地知道蛋白质的含量。
测定蛋白质含量的方法
测定蛋白质含量的方法蛋白质是构成生物体细胞的重要组成部分，对于研究生物体的功能和特性具有重要意义。
测定蛋白质含量的方法有多种，包括经典的定性和定量分析方法以及现代的生物技术方法。
本文将介绍常用的测定蛋白质含量的几种方法。
1. 布里奥涅法（Biuret法）布里奥涅法是一种常用的蛋白质定量方法，基于天冬氨酸和脯氨酸等含有两个或多个肽键的氨基酸能与铜离子络合生成深蓝色的配合物。
在该方法中，首先将待测的蛋白质样品与碱性溶液反应形成紫色复合物，然后通过分光光度计测定样品的吸光度，根据吸光度与样品中蛋白质浓度之间的线性关系，计算出样品中的蛋白质含量。
2. Lowry法Lowry法是另一种经典的蛋白质定量方法。
该方法基于蛋白质与碱性铜离子和碱式离子交互作用而引起的氧化反应。
在测定中，蛋白质样品与碱性铜离子发生氧化反应生成蓝色离子复合物，然后加入离子交换剂将复合物转化为悬浮物，在酸性条件下生成含酚酞的产物。
最后通过分光光度计测定样品的吸光度，根据吸光度与样品中蛋白质浓度之间的线性关系，计算出样品中的蛋白质含量。
3. BCA法（双硫腙法）BCA法是一种具有较高灵敏度的蛋白质定量方法，基于蛋白质与双硫腙反应生成紫色络合物。
在该方法中，蛋白质样品与BCA试剂（含有双硫腙和铜盐）发生化学反应生成紫色络合物，然后通过分光光度计测定样品的吸光度，根据吸光度与样品中蛋白质浓度之间的线性关系，计算出样品中的蛋白质含量。
4. Bradford法Bradford法是一种常用的蛋白质定量方法，根据蛋白质与染料结合产生吸光度变化的原理。
在该方法中，蛋白质样品与Coomassie Brillant Blue染料结合生成蓝色复合物，然后通过分光光度计测定样品的吸光度，根据吸光度与样品中蛋白质浓度之间的线性关系，计算出样品中的蛋白质含量。
以上所述的方法都具有一定的优缺点，根据需要选择适合的测定方法。
另外，近年来，随着生物技术的发展，一些新的方法也被广泛应用于蛋白质定量，例如免疫分析方法（如ELISA）、质谱分析方法等。
蛋白质定量的五种方法
蛋白质定量得五种方法方法一双缩脲法测定蛋白质浓度[目得］掌握双缩脲法测定蛋白质浓度得原理与标准曲线得绘制。
[原理]双缩脲（NH2CＯNHCOＮH2)在碱性溶液中与硫酸铜反应生成紫红色化合物,称为双缩脲反应，蛋白质分子中含有许多肽键（—ＣＯＮH—)在碱性溶液中也能与Cu２＋反应产生紫红色化合物。
在一定范围内,其颜色得深浅与蛋白质浓度成正比。
因此,可以利用比色法测定蛋白质浓度。
双缩脲法就是测定蛋白质浓度得常用方法之一.操作简便、迅速、受蛋白质种类性质得影响较小,但灵敏度较差，而且特异性不高.除—CONH—有此反应外，—CＯNＨ2、—CＨ2ＮＨ2、-CS－NＨ2等基团也有此反应。
[操作］取中试管7支，按下表操作．各管混匀、放置37℃水浴中保温20分钟.用5４0nｍ比色,以空白管调零点,读取各管光密度值。
[计算］（一）在座标纸上以光密度为纵座标,以蛋白质浓度为横座标绘制标准曲线。
(二)从标准曲线中查出待测血清样本得蛋白质浓度(ｇ／L),并求出人血清样本得蛋白质浓度.（三）再从标准管中选择一管与测定管光密度相接近者，求出人血清样本得蛋白质浓度(ｇ／L)。
[器材]中试管7支,l毫升刻度吸管3支,10毫升刻度吸管１支，水浴箱，７21型分光光度计、坐标纸。
[试剂］(—)6Ｎ NaOH:称取240ｇ氢氧化钠溶于1000mｌ水中。
(二）双缩脲试剂:称取CuS04·5H２O 3。
0克,酒石酸钾9.0 克与碘化钾５.０克,分别溶解后混匀,加6ＮNaＯH l00mｌ，最后加水至1000mｌ,贮于棕色瓶中，避光，可长期保存.如有暗红色沉淀出现,即不能使用.（三)０、９%NａCl．(四）蛋白质标准液(１0ｍg／ｍ1),称取干燥得牛血清蛋白100、０mｇ，以少量生理盐水溶解后倒入ｌ0ml容量瓶中，淋洗称量瓶数次,一并倒入容量瓶中，最后加生理盐水至刻度线,或用凯氏定氮法测定血清蛋白质含量,然后稀释成ｌ0mg/ｍ1作为蛋白质标准液。
蛋白质定量方法对比
蛋白质定量方法对比全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：蛋白质是生物体内重要的有机分子，负责着细胞结构的建立和维持以及体内新陈代谢的进行。
因此，研究蛋白质的定量方法对于生命科学领域具有重要意义。
本文将比较几种常见的蛋白质定量方法，包括BCA法、Lowry法、Bradford法和Spectrophotometric method，分析它们各自的优缺点和适用场景。
首先，BCA法是一种基于铜蛋白络合物比色反应的蛋白质定量方法。
该方法具有高灵敏度和广泛线性范围，适用于多种类型的蛋白质样本。
然而，BCA法也存在一些缺点，包括受到干扰物质的影响、反应条件较为复杂等。
与BCA法相比，Lowry法是一种较为经典的蛋白质定量方法。
该方法利用费里酚蓝与蛋白质中的酚类物质在碱性条件下形成的复合物来定量蛋白质含量。
Lowry法具有较高的准确性和稳定性，但需要较长的反应时间和较大的标准曲线范围。
另一种常见的蛋白质定量方法是Bradford法，该方法利用共价结合蛋白质中的氨基酸残基与染料之间的相互作用来定量蛋白质。
与前两种方法相比，Bradford法具有操作简便、灵敏度高的特点，但对于具有不同氨基酸组成的蛋白质可能存在测定误差。
最后，Spectrophotometric method是一种利用紫外可见分光光度计进行蛋白质定量的方法。
通过测定蛋白质溶液在特定波长下的吸光度来计算蛋白质的浓度。
这种方法操作简单、速度快，但对于含有其他物质的样品可能存在测定误差。
综上所述，不同的蛋白质定量方法各有优劣，研究人员在选择适合的方法时应该根据具体需求和样品特性来进行选择。
在进行蛋白质定量时，应根据实验要求和条件选择最适合的方法，以确保结果的准确性和可靠性。
希望本文的比较能够帮助读者更好地理解各种蛋白质定量方法的特点和适用范围，提高实验的效率和准确性。
第二篇示例：蛋白质是生物体内重要的基本组成部分，具有多种生理功能。
准确测定蛋白质的含量对于生物学研究和临床诊断具有重要意义。
蛋白质组学定量研究常见方法
蛋白质组学定量研究常见方法蛋白质组学定量研究是通过测定蛋白质样本中蛋白质的相对或绝对含量来了解生物系统中蛋白质表达的变化。
在蛋白质组学定量研究中，有很多常见的方法，包括质谱法、免疫学法、色谱法和光谱法等。
以下将对其中几种常见方法进行介绍。
1.质谱法质谱法是蛋白质组学定量研究中应用最广泛的方法之一、质谱法可以利用质量比较准确测定蛋白质的绝对或相对含量。
常见的质谱方法包括二维凝胶电泳质谱法（2D-DIGE）、液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）和同位素标记质谱法（SILAC），通过这些方法，可以高效准确地测定蛋白质的绝对或相对表达水平。
2.免疫学法免疫学法是一种广泛使用的定量蛋白质组学方法，其基本原理是利用特异性抗体与目标蛋白质结合，并通过与荧光或酶标记结合进行测定。
常见的免疫学方法包括Western blot、ELISA、流式细胞术和蛋白质芯片技术等。
这些方法具有高灵敏度和高特异性，可以快速准确地测定蛋白质的表达水平。
3.色谱法色谱法是一种常见的蛋白质组学定量方法，通过色谱柱的分离和去除杂质，从而获得纯净的蛋白质。
色谱法可以分为离子交换色谱、逆向相色谱、尺寸排除色谱和亲和层析等。
通过这些技术，可以高效准确地测定蛋白质的含量和纯度。
4.光谱法光谱法是一种快速准确测定蛋白质含量的方法。
在紫外-可见吸收光谱法中，通过测定蛋白质在特定波长下的吸光度，可以间接测定其含量。
此外，还有荧光光谱法和圆二色光谱法等。
这些光谱法可以快速定量蛋白质的含量，并了解蛋白质的构型和结构。
除了上述方法外，还有一些辅助分析方法，如蛋白质互作法（如蛋白质关联网分析）、功能学法（如蛋白质酶活测定）和结构分析法（如X射线晶体学）等，可以进一步了解蛋白质的功能和结构。
总结起来，蛋白质组学定量研究常见方法包括质谱法、免疫学法、色谱法和光谱法等。
这些方法在蛋白质组学研究中发挥重要作用，可以用于研究蛋白质的表达变化、功能与结构。
随着技术的不断发展，蛋白质组学定量研究方法也在不断更新和完善。
蛋白质的定量测定实验报告
蛋白质的定量测定实验报告一、实验目的掌握几种常见的蛋白质定量测定方法，如凯氏定氮法、双缩脲法、Folin酚试剂法（Lowry 法）和考马斯亮蓝法，并比较它们的优缺点和适用范围。
通过实验操作，提高实验技能和数据处理能力，培养严谨的科学态度。
二、实验原理1、凯氏定氮法蛋白质是含氮的有机化合物。
食品与浓硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。
然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。
2、双缩脲法双缩脲（NH₂CONHCONH₂）在碱性溶液中能与 Cu²⁺作用形成紫红色的络合物。
蛋白质分子中含有多个肽键，其结构与双缩脲相似，也能与 Cu²⁺发生双缩脲反应。
在一定条件下，其颜色深浅与蛋白质浓度成正比，可用比色法进行测定。
3、 Folin酚试剂法（Lowry 法）蛋白质中的肽键在碱性条件下与铜离子反应生成复合物，然后该复合物还原 Folin酚试剂中的磷钼酸和磷钨酸，产生蓝色化合物。
蓝色的深浅与蛋白质含量成正比，可用比色法进行测定。
4、考马斯亮蓝法考马斯亮蓝 G-250 在游离状态下呈红色，当它与蛋白质结合后变为蓝色。
在一定范围内，其颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，可用比色法进行测定。
三、实验材料与仪器1、实验材料标准蛋白质溶液（如牛血清白蛋白）、待测蛋白质溶液、各种试剂（如硫酸铜、氢氧化钠、硫酸、硼酸等）。
2、实验仪器凯氏定氮蒸馏装置、分光光度计、离心机、移液器、容量瓶、试管等。
四、实验步骤1、凯氏定氮法（1）消化：准确称取一定量的样品（如 05g）放入干燥的凯氏烧瓶中，加入硫酸铜、硫酸钾和浓硫酸，摇匀后在通风橱中加热消化，直至溶液呈透明的蓝绿色。
（2）蒸馏：消化液冷却后，加入适量水，转移至蒸馏装置中，加入氢氧化钠溶液进行蒸馏，使氨逸出。
（3）吸收与滴定：用硼酸溶液吸收蒸馏出的氨，然后用盐酸标准溶液滴定，直至溶液由蓝色变为微红色，记录盐酸的用量。
蛋白质的定量分析方法
蛋白质的定量分析方法1．蛋白质的常规检测方法1.1凯氏定氮法一种最经典的蛋白质检测方法。
原理：样品中含氮有机化合物与浓硫酸在催化剂作用下共热消化，含氮有机物分解产生氨，氨又与硫酸作用变成硫酸铵。
然后加碱蒸馏放出氨，氨用过量的硼酸吸收，再用盐酸标准溶液滴定求出总氮量换算为蛋白质含量。
优点：范围广泛、测定结果准确、重现性好。
缺点：操作复杂费时、试剂消耗量大。
1.2双缩脲法常用于需要快速但并不需要十分精确的蛋白质检测。
原理：双缩脲是三分子的脲经180℃左右加热，放出一份子氨后得到的产物，在强碱性溶液中，双缩脲与硫酸铜形成紫色络合物（肽链中的氮原子和铜离子配价结合），称为双缩脲反应。
紫色络合物颜色的深浅和蛋白质浓度成正比，因此可用来测定蛋白质含量。
优点：较快速、干扰物质少、不同蛋白质产生的颜色深浅相近。
缺点：灵敏度差、三羟甲基氨基甲烷、一些氨基酸和EDTA等会干扰该反应。
1.3Folin酚试剂法原理：与双缩法大体相同，利用蛋白质中的肽键和铜离子结合产生双缩脲反应。
同时也由于Folin酚试剂中的磷钼酸-磷钨酸试剂被蛋白质的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原，产生深蓝色的钼蓝和钨蓝的混合物。
在一定条件下，蓝色深度与蛋白的量成正比，由此可测定蛋白质的含量。
优点：灵敏度高、对水溶性的蛋白质含量的测定很有效。
缺点：费时，要精确控制操作时间；Folin酚试剂的配制比较繁琐，且酚类和柠檬酸、硫酸铵、Tris缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油、还原剂（二硫代苏糖醇、巯基乙醇）、EDTA和尿素均会干扰反应。
1.4紫外吸收法原理：蛋白质中的酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基使其在280nm处具有紫外吸收，其吸光度与蛋白质含量成正比。
此外，蛋白质溶液在280nm处的吸光值与肽键含量成正比。
利用一定波长下蛋白质溶液的吸光值与蛋白质含量的正比关系可以测定蛋白质含量。
优点：简便、灵敏、快速、不消耗样品，测定后能回收。
缺点：测定蛋白质含量的精确度差、专一性差；干扰物质多，若样品中含有嘌呤、嘧啶等能吸收紫外光的物质会出现较大的干扰。
蛋白质的定量分析方法
蛋白质的定量分析方法
检测蛋白质含量的方法有多种，常见的包括凯氏定氮法、生物素标记法、吸光光度法等。
1.凯氏定氮法（Kjeldahlmethod）：这是一种经典的蛋白质定量方法，主要通过测定样品中氮元素的含量来计算蛋白质含量。
凯氏定氮法包括消解、蒸馏和滴定三个步骤，其原理是将样品中的氮元素转化为氨氮，然后通过滴定测定氨氮的含量，进而计算蛋白质含量。
2.生物素标记法（Biotin-labelingmethod）：这是一种利用生物素（Biotin）与蛋白质特异性结合的方法来检测蛋白质含量。
首先将生物素标记到目标蛋白质上，然后利用亲和层析法（如生物素-亲和素系统）进行定量分析。
3.吸光光度法（Absorbancemethod）：这是一种基于蛋白质在紫外光区域的吸收特性进行定量分析的方法。
蛋白质中的芳香族氨基酸（如酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸）具有在紫外光区域（如
280nm）的吸收特性，通过测量样品在这一波长处的吸光值，可以计算蛋白质含量。
各种方法适用于不同的实验条件和要求，选择合适的方法需要根据实际情况来判断。
在实际操作过程中，还需注意遵循实验规程，确保实验结果的准确性。
蛋白质定量的方法
蛋白质定量的方法
蛋白质定量是确定样品中蛋白质含量的一种方法，以下是常用的蛋白质定量方法：
1. 布拉德福法（Bradford assay）：该方法利用凝胶染料布拉德福亮蓝G-250
与蛋白质间的相互作用，形成可测量的吸光峰，进而定量蛋白质含量。
2. 低里斯法（Lowry assay）：该方法基于酚-硫酸反应原理，通过添加酚试剂和硫酸溶液，测量产生的蓝色产物吸光度来定量蛋白质含量。
3. BCA法（bicinchoninic acid assay）：该方法利用双咪唑化合物与蛋白质中的蛋白质结合产生紫色络合物，测定该络合物的吸光度以定量蛋白质含量。
4. 还原二硫化钠法（DTT assay）或磷酸肌酸法（Phosphocreatine assay）：这些方法基于氧化还原反应作用于某些特定的分子，可使某些化合物产生颜色变化或生成反应物，从而定量蛋白质含量。
5. 紫外吸收光谱法（UV spectroscopy）：通过检测在蛋白质中特定波长处吸收的紫外光强度，从而根据已知蛋白质浓度与光强度之间的关系，计算出未知样品中的蛋白质含量。
以上是常用的蛋白质定量方法，选择合适的方法取决于实验需求和样本特性。
蛋白质定量测定的方法有哪些
蛋白质定量测定的方法有哪些
蛋白质定量测定的常见方法有以下几种：
1. Bradford方法：基于蛋白质和Bradford试剂反应产生吸光度的变化，利用标准曲线来测定样品中蛋白质的浓度。
2. BCA方法：基于蛋白质和BCA试剂的反应产生的复合物的紫外吸收光谱变化来测定蛋白质浓度。
3. Lowry方法：基于蛋白质与染料（如Folin-Ciocalteu试剂）反应生成的蓝色化合物的峰值吸收度变化来测定蛋白质浓度。
4. UV吸光度法：利用蛋白质在特定波长下的紫外吸收光谱来测定浓度，如在280nm测量腺苷酸蛋白质的含量。
5. 比色法：利用蛋白质与染料或金属离子反应生成的复合物的颜色变化来测定蛋白质浓度，如利用Coomassie蓝染色法或浊度法。
6. 尿素-酸性PAGE测定：通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和二次洗脱凝胶电泳（acid-urea-Triton X-100-PAGE）相结合的方法，通过与已知浓度的标准蛋白进行定量。
7. 精氨酸测定法：利用精氨酸与二恶安脱水酶反应生成吲哚染料，测定蛋白质的含量。
需要根据具体实验目的和条件选择合适的测定方法。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
蛋白质定量的五种方法方法一双缩脲法测定蛋白质浓度[目的]掌握双缩脲法测定蛋白质浓度的原理和标准曲线的绘制。
[原理]双缩脲(NH2CONHCONH2)在碱性溶液中与硫酸铜反应生成紫红色化合物，称为双缩脲反应，蛋白质分子中含有许多肽键(-CONH-)在碱性溶液中也能与Cu2+反应产生紫红色化合物。
在一定范围内，其颜色的深浅与蛋白质浓度成正比。
因此，可以利用比色法测定蛋白质浓度。
双缩脲法是测定蛋白质浓度的常用方法之一。
操作简便、迅速、受蛋白质种类性质的影响较小，但灵敏度较差，而且特异性不高。
除-CONH-有此反应外，-CONH2、-CH2NH2、-CS-NH2等基团也有此反应。
[操作]取中试管7支，按下表操作。
各管混匀、放置37℃水浴中保温20分钟。
用540nm比色，以空白管调零点，读取各管光密度值。
[计算](一)在座标纸上以光密度为纵座标，以蛋白质浓度为横座标绘制标准曲线。
(二)从标准曲线中查出待测血清样本的蛋白质浓度(g／L)，并求出人血清样本的蛋白质浓度。
(三)再从标准管中选择一管与测定管光密度相接近者，求出人血清样本的蛋白质浓度(g／L)。
[器材]中试管7支，l毫升刻度吸管3支，10毫升刻度吸管1支，水浴箱，721型分光光度计、坐标纸。
[试剂](—)6N NaOH：称取240g氢氧化钠溶于1000ml水中。
(二)双缩脲试剂：称取CuS04·5H2O 3.0克，酒石酸钾9.0 克和碘化钾5.0克，分别溶解后混匀，加6N NaOH l00ml，最后加水至1000ml，贮于棕色瓶中，避光，可长期保存。
如有暗红色沉淀出现，即不能使用。
(三)0.9％NaCl。
(四)蛋白质标准液(10mg／m1)，称取干燥的牛血清蛋白100.0mg，以少量生理盐水溶解后倒入l0ml容量瓶中，淋洗称量瓶数次，一并倒入容量瓶中，最后加生理盐水至刻度线，或用凯氏定氮法测定血清蛋白质含量，然后稀释成l0mg ／m1作为蛋白质标准液。
(五)待测血清样本：将人血清或动物血清用生理盐水稀释10倍后再测定。
方案二 Folin-酚试剂法(Lowry法)测定蛋白质浓度[目的]掌握Lowry法测定蛋白质浓度的原理。
[原理]蛋白质在碱性溶液中其肽键与Cu2+螯合，形成蛋白质一铜复合物，此复合物使酚试剂的磷钼酸还原，产生蓝色化合物，在一定条件下，利用蓝色深浅与蛋白质浓度的线性关系作标准曲线并测定样品中蛋白质的浓度。
[操作]取试管7支、编号、按下表操作：生理盐水生理盐水立即混匀，在20℃～25℃水浴保温30分钟。
用660nm比色，测定光密度值。
操作注意事项：1．按顺序添加试剂2．试剂乙在酸性条件下稳定，碱性条件下（试剂甲）易被破坏，因此加试剂乙后要立即混匀，加一管混匀一管，使试剂乙（磷目酸）在破坏前即被还原。
[计算](一)绘制标准曲线。
以浓度为横坐标，光密度值为纵坐标绘制标准曲线。
(二)以测定管光密度值，查找标准曲线，求出待测血清中蛋白质浓度(g／L)。
(三)再从标准管中选择—管与测定管光密度相接近者，求出待测血清中蛋白质浓度(g／L)。
[器材](一)721型分光光度计(--)恒温水浴箱(三)中试管7支(四)刻度吸管：1. 0ml二支；0.5ml一支；5.0ml一支。
[试剂](一)试剂甲(1)4％碳酸钠(Na2CO3)溶液(2)0.2N氢氧化钠溶液(3)1％硫酸铜溶液(CuSO4·5H2O)(4)2％酒石酸钾钠溶液(或酒石酸钾或钠)在使用前(1)与(2)、(3)与(4)等体积混合，再将两混合液按50：1比例混合，即为试剂甲。
该试剂只能用一天，过期失效。
(一)试剂乙：(1)市售酚试剂在使用前用NaOH滴定，以酚肽为指标剂，根据试剂酸度将其稀释，使最后酸度为1N。
(2)或取Na2WoO42H2O l00g和Na2MOO325g。
溶于蒸馏水700ml中，再加85％H 3PO450ml和HCl(浓)100ml，将上物混合后，置1000ml圆底烧瓶中温和地回流十小时，再加硫酸锂(Li2SO4H2O)150g，水50ml及溴水数滴。
继续沸腾15分钟后以除去剩余的溴，冷却后稀释至1000ml然后过滤，溶液应呈黄色或金黄色(如带绿色者不能用)，置于棕色瓶中保存，使用时用标准NaOH滴定，以酚酞为指示剂，而后稀释约一倍，使最后酸度为1N。
(三)标准蛋白质溶液用结晶牛血清白蛋白，根据其纯度用蒸馏水配制成0.25mg／ml的蛋白质溶液。
(纯度可经凯氏定氮法测定蛋白质含量而确定)。
(四)待测样品：准确取血清0.1ml，置于50ml容量瓶中，再加0.9％NaCl 溶液至刻度，充分混匀，也可以用尿液为样品。
方案三紫外分光光度法测定蛋白质浓度[目的]：掌握紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理，熟悉紫外分光光度计的使用。
[原理]蛋白质分子中含有共轭双键的酪氨酸、色氨酸等芳香族氨基酸。
它们具有吸收紫外光的性质，其吸收高峰在280nm波长处，且在此波长内吸收峰的光密度值与其浓度成正比关系，故可作为蛋白质定量测定的依据，但由于各种蛋白质的酪氨酸和色氨酸的含量不同，故要准确定量，必需要有待测蛋白质的纯品作为标准来比较，或且已经知道其消光系数作为参考。
另外，不少杂质在280nm波长下也有—定吸收能力，可能发生干扰。
其中尤以核酸(嘌呤和嘧啶碱)的影响更为严重。
然而核酸的最大吸收峰是在260nm。
因此溶液中同时存在核酸时，必须同时测定OD260nm ，与OD280nm。
，然后根据两种波长的吸收度的比值，通过经验公式校正，以消除核酸的影响而推算出蛋白质的真实含量。
本法操作简便迅速，且不消耗样品(可以回收)，多用于纯化之蛋白质的微量测定。
主要缺点：当待测的蛋白质与标准蛋白质中的酪氨酸和色氨酸含量差异较大时，则产生—定误差，混有核酸时必须分别测定280nm和260nm两处的OD值，再按公式推算蛋白质含量。
[操作]取试管7支，按下表操作：0.43.6各管混匀，盛于石英杯中，用紫外分光光度计，以空白管调节零点，分别于280nm、260nm波长下测定各管光密度，[计算](一)直接根据标准液与待测液的光密度值(OD280nm)，或从标准曲线，求得样本蛋白质含量。
以标准管各管光密度值为纵坐标，以蛋白质浓度为横坐标绘制标准曲线，然后根据测定管光密度值，直接查标准曲线求得样本中蛋白质的含量。
1．选一种与待测样本蛋白质氨基酸组成相近似的蛋白质纯品，用生理盐水稀释至浓度为 lmg／m1，作为稀释标准蛋白质溶液。
2．用生理盐水稀释待测样本蛋白质至浓度约为lmg／m1，即为稀释样本蛋白质溶液。
(二)利用经验公式直接计算样本蛋白质含量，准确吸取血清样本0.1ml，置于50ml容量瓶中，用生理盐水稀释至刻度，即500倍稀释，在280nm和260nm两处波长分别测得光密度值、再按下列公式计算。
1、OD280／0D260＜1.5时，用Lowry-Kalokar公式：样本蛋白质含量(mg／m1)＝1.45OD280一0.74OD2602、OD280／OD260﹥1.5时，用Lamber-Beer定律计算：样本蛋白质含量(mg／m1) = OD280／K×L＝（OD280／6.3×1）×10g／L本实验样品：牛血清白蛋白E1%cm＝6.3（100ml／cm.g）K：克分子消光系数；E1%cm：百分比吸光度的吸光系数；注：不同蛋白质中的酪氨酸和色氨酸含量有差异，故标准管与测定管的蛋白质氨基酸组成应相似，以减小误差。
[器材](一)UV-9200紫外分光光度计(二)50ml容量瓶[试剂](一)生理盐水(二)清蛋白(人或牛)纯晶(三)待测样本蛋白质：用双缩脲法测定蛋白质的样品用生理盐水稀释而成。
方案四考马斯（Comessie)亮兰结合法测定蛋白质浓度考马斯亮兰结合法是近年来发展起来的蛋白质定量测定法。
本方法具有操作方便、快速、干扰因素少的特点。
【原理】考马斯亮兰能与蛋白质的疏水微区相结合，这种结合具有高敏感性，考马斯亮兰G-250 的最大光吸收峰在465nm，当它与蛋白质结合形成复合物时，其最大吸收峰改变为595nm。
考马斯亮兰G250-蛋白质定量测定的高敏性度。
在一定范围内，考马斯亮兰G250-蛋白质复合物呈青色。
在595nm下，光密度与蛋白质含量呈线性关系。
故可以用于蛋白质含量的测定。
【操作】(常量法)(一)标准曲线制备：配制lmg／ml的标准蛋白溶液。
制备系列稀释液，其浓度分别为1000μg／ml，500μg／ml， 250μg／ml，125μg／ml ，62.5μg／ml和31.25μg／ml。
按下表操作：摇匀，室温静置3分钟。
在第一管为对照管，在721型分光光度计于波长595nm处比色-读取光密度。
以各管光密度为纵座标，各标准样品浓度(μg／ml)作为横座标作图得标准曲线。
(二)未知样品测定：取血清0.25ml直接置于50ml容量瓶中，加生理盐水至刻度，摇匀。
(此法样品稀释200倍)。
取试管二只，按下表操作：摇匀，静置3分钟，在721型分光光度计亡波长595nm比色，读取光密度，查标准曲线，求得稀释样品蛋白质浓度。
【计算】未知样品蛋白质浓度μg／ml＝稀释样品浓度×稀释倍数【优缺点】(—)操作简便、快速；检测灵敏；重复性好。
(二)显色迅速。
约于2分钟内完成染料与蛋白质的结合。
所现颜色至少在l 小时内是稳定的。
(三)与改良Lowry氏法相比，干扰物质较少。
(四)当样品中存在较大量的十二烷磺酸钠(SDS)、TritonX-100等去垢剂时，显色反应会受到干扰。
如样品缓冲液呈强碱性时也会影响显色，故必须预先处理样品。
(五)考马斯亮兰G250染液不宜久存，以1-2月为宜。
(六)微量法测定蛋白含量范围为1-10μg；常量法测以检测范围10-100／μg为宜。
【器材】(一)试管l0支(二)吸管10ml、l5ml、lml、O.1ml各1支。
（三）721分光光度法，普通比色杯4只。
【试剂】(一)O.9％NaCl(二)待测血清(三)标准血清(四)染液：考马斯亮兰G250 0.1克溶于0.5 m1 95%乙醇。
再加入100m1 85％(W／V)磷酸。
然后加蒸馏水定容到1000ml。
[此时溶液为0.0l％考马斯亮兰G250／4.7％(W／V)／乙醇／8.5%(W／V)磷酸]。
方案五 BCA法测定蛋白质浓度【目的】：掌握BCA法测定蛋白质浓度的原理。
【原理】：BCA(bicinchonininc acid)与二价铜离子的硫酸铜等其他试剂组成的试剂，混合一起即成为苹果绿，即BCA工作试剂。
在碱性条件下，BCA与蛋白质结合时，蛋白质将Cu2+还原为Cu+，一个Cu+螯合二个BCA分子，工作试剂由原来的苹果绿形成紫色复合物，最大光吸收强度与蛋白质浓度成正比。