器官移植配型

正向杂交：提取基因组DNA
PCR扩增（共性引物）
将PCR
产物固定在固相支持载体上并进行变性处理 寡核苷酸探针变性杂交

与标记的特异性
根据杂交信号判断HLA类型；
反向杂交：将特异性寡核苷酸探针固定在固相载体上
的PCR产物（已经变性处理）杂交 型；
与标记
根据杂交信号判断HLA类

基因芯片技术是一种反向PCR-SSO方法，具有高通量、缩微化、
HLA Typing 的命名
A.抗原名（antigen names）
1. 字母HLA代表染色体上一段特 殊的遗传区域（人类白细胞 表面抗原区域）； 2. A/B/DR代表该区域某一具体 的基因座位； 3. 数字代表该基因座位编码的 特异性抗原（血清型）。 4. 括号内的数字表示前一抗原 是该抗原的“剪切产物”(存 在抗原决定簇交叉现象)。
可检出基因的多态性又可检出点突变，有利于发现新
的等位基因
PCR-sequencing

提取基因组DNA
DNA测序
PCR扩增（非特异/特异引物）


最可靠、直接、准确的HLA分型方法；
临床上应用限制了供体的来源； 在确定等位基因的多态性、发现新位点、基因定位等 研究领域应用较多；
PCR-SSO（序列特异性寡核苷酸探针杂交） /基因芯片技术
六位点配型原则：HLA-A/B/DR

2.合理选择HLA基因分型技术；
各种方法相互补充，难以相互替代，根 据不同需求选择不同方法
抗原法/基因法
方 法 识 别 位 点 分 辨 率 血清学分型/细 基因分型(SSP/SSOP/SB) 胞分型 HLA分子抗原特 DNA序列差异 异性，某些氨基 酸残基位点 低（抗原特异性） 低（抗原特异性）/中等（集团特 HLA-A01 异性）/高（等位基因特异性） HLA-A*01； HLA-A*0101/0102/0103； HLA-A*01010203
氨基酸残基配型标准分型技术

根据HLA分子346个氨基酸残基中对移植 物排斥与存活率具有重要影响的关键氨 基酸，当供受者的关键氨基酸残基相同， 尽管接受HLA抗原部分错配的供体，产生 的免疫反应性仍然是低反应性或无免疫 反应性，从而使移植物得以长期存活。
HLA分型技术临床应用评价

1.在器官移植中具有重要临床意义；
器官移植配型理论与技术
基本概念


广义的器官移植：用自身或异体的正常 器官、组织或细胞置换病变或功能缺失 的器官、组织或细胞，以维持和重建机 体的生理功能。 影响移植成功的关键因素是可能发生的 免疫排斥反应；
一.
基本概念
相关概念
自体移植
移 植
同系移植 人 人 同种异体移植 猪 异种移植
引起排斥反应的抗原
HLA抗原的生物学功能

ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
1.参与蛋白质抗原的处理与递呈； 2.调节免疫应答； 3.参与T细胞分化过程； 4.介导同种免疫应答；
HLA基因的遗传特点



1.高度多态性；HLA基因呈现多位点复等 位的特点； 2.共显性遗传：每对等位基因同时表达； 3.单倍型遗传：位于同一条染色体上的 HLA各位点的基因组合； 4.连锁不平衡：单倍型基因非随机分布的 现象；
2.传统的HLA分型技术


血清学分型:补体依赖的细胞毒实验;
待测淋巴细胞与已知抗体孵育，再加入补体， 若该抗体与淋巴细胞膜上HLA分子相匹配，则 激活补体系统导致待测细胞膜的破坏，否则细 胞膜完整不受影响。 局限性：需要活的淋巴细胞；存在交叉反应； 隐蔽抗原无法识别；人为影响因素多质控难做；



由第6号染色体短臂21.31区编码，按功 能分为HLA-I,Ⅱ,Ⅲ三个区域，其中I,Ⅱ 区编码抗原与移植关系密切。
HLA-I类抗原主要由A、B、C位点编码； HLA-Ⅱ类抗原由DR、DP、DQ位点编码；


HLA-I类抗原是由第6号染色体相应I类基因编码的α链与第15号染色 体编码的β 2微球蛋白非共价键结合的糖蛋白，主要表达在有核细 胞表面； HLA-Ⅱ类抗原由第6号染色体相应Ⅱ类基因编码的α 链和β 链非共 价键结合的糖蛋白，主要表达在抗原递呈细胞，胸腺上皮细胞表面；
2. 等位基因名(allele names)

细胞学分型：混合淋巴细胞培养技术； 受者淋巴细胞与已知类型的淋巴细胞或 者供者淋巴细胞混合培养，两种细胞HLA 分子表型如果相同则不能刺激淋巴细胞 增殖，反之则刺激淋巴细胞增殖，分为 单双向两种类型。 局限性：需要活的纯合子表型的淋巴细 胞；增殖检测方法要用到同位素；
分子生物学技术分型


自动化程度高、准确性高等优势；
流式细胞仪技术




提取基因组DNA 非特异性PCR扩增 变性处理 与包被了特异性HLA探针的微球结合 洗脱处理 通过流式细胞仪检测 利用流式细胞仪技术将反向的固相PCR－SSO技术变 为液相检测分析技术； 每种包被了不同类型HLA－DNA探针的微球对应一种 荧光染色能够被流式细胞仪识别； 具有高通量、准确快速的优势；
RFLP/PCR-RFLP/PCR-SSP/
基因组DNA 提取 酶切 电泳分析（RFLP）
DNA 扩增（共性引物/特异性引物）
(限制性内切酶酶切)
电泳检测(PCR-RFLP/PCR-SSP)
PCR-SSCP（单链构象多态性）

提取基因组DNA
链 单链)
PCR扩增（特异引物） 变性(双
聚丙烯酰胺凝胶电泳 根据带型


ABO血型抗原； 组织特异性抗原； 主要组织相容性抗原(MHA, major histocompatibility antigen )，又称人类 白细胞抗原（HLA）; 次要组织相容性抗原（mHA, minor histocompatibility antigen ）H-Y抗原;
HLA的基因结构、抗原结构及特点
HLA抗原蛋白分子的多态性取决于相应编码基 因的多态性； RFLP/PCR-RFLP/PCR-SSP; PCR-SSCP; PCR-Sequencing； PCR-SSO/基因芯片技术； 流式细胞仪技术； 氨基酸残基配型标准分析技术；
聚合酶链反应 （PCR） 在多聚合酶， 引物，底物和模 板的参与下通过 变性，退火，延 伸三个循环步骤 在短时间内达到 对目的片断的大 量扩增，是基因 分型的基础。