实验1大肠杆菌的培养与分离
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
利用化学或物理方法，杀死大部份 致病微生物的过程。区分为高程度消毒 （High-level Disinfection）、中程度 消毒（Intermediate-level Disinfection）、低程度消毒（Lowlevel Disinfection）三种方式。
2020/8/5
(2)消毒的方法：
2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？
答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微 生物污染培养基。
2020/8/5
3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固 后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置， 既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以 防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
2020/8/5
2.在灼烧接种环之后，为什么要等其 冷却后再进行划线？
答：以免接种环温度太高，杀死菌种。 3.在作第二次以及其后的划线操作时，
为什么总是从上一次划线的末端开始划线？
答：划线后，线条末端细菌的数目比线 条起始处要少，每次从上一次划线的末端开 始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而 逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来 的菌落。
2020/8/5
1放线菌
1、结构： ➢单细胞原核 ➢分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）
2020/8/5
2病毒
2020/8/5
SARS病毒、 禽流感病毒
2020/8/5
朊病毒（蛋白质病毒）
2020/8/5
病毒的增殖：
2020/8/5
3真菌
2020/8/5
酵母菌和霉菌
如图是酵母菌电子显微 镜下20的20/8/形5 态结构
② 方法：a 灼烧灭菌 b 干热灭菌 c 高压蒸汽灭菌
a.灼烧灭菌
注意适用范围
微生物的接种工具 (接 种环、接种针)或其 他金属用具直接在火 焰的充分燃烧层灼烧
2020/8/5
b. 干热灭菌
c. 160－170℃ ；1－ 2h
能耐高温的需要保持干 燥的物品( 玻璃器皿)
c.高压蒸汽灭菌 d.100kPa 121℃ e.15-30min
青霉
4细菌的外形与大小
细菌：单细胞不分枝的原核微生物。
细菌细胞微小而透明，通常用适当染料染 色（革兰氏染色）后显微镜观察
2020/8/5
图1-1 常见的三种细菌典型形态
A.球菌
B.杆菌
C.弧菌
细菌的构造
细胞膜 拟核
细菌细胞由外向里 依次有鞭毛、菌 （纤）毛、荚膜 、细胞壁、细胞 膜、细胞质、 拟核，细胞质中 又有液泡、储存 性颗粒、核质等 。
牛肉膏 尿素
②固氮微生物所利用的氮源是 氮气
2020/8/5
3培养基配制原则：
• 营养要协调 • 目的要明确 • PH要适宜
2020/8/5
（三）无菌技术
1.无菌技术的概念 无菌操作泛指在培养微生物的操作中， 所有防止杂菌污染的方法。
2020/8/5
从制备培养基到接种与培养等全部实 验过程要无菌操作
人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细
胞生长和繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如
血清）。 血清中含有：
①多种蛋白质（白蛋白、球蛋
白、铁蛋白等）
②多种金属离子；
③激素；
④促贴附物质，如纤粘蛋白、
冷析球蛋白、胶原等。
⑤各种生长因子
⑥转移蛋白
2020/8/5
⑦不明成分
2.不同的微生物往往需要采用不同 的培养基配方 .
2020/8/5
菌落：
• 单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖 时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定 形态结构的子细胞群体，叫做菌落。
• 菌落是鉴定菌种的重要依据。
2020/8/5
菌落
细菌的菌落特征 因种而异
2020/8/5
5细菌的营养物质
• 碳源 • 氮源 •水 • 无机盐 • 生长因子 即细菌生长必需，而自身
• （1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进 行清洁和消毒 ；
• （2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具 进行灭菌 ；
• （3）为避免周围微生物污染，实验操作应在 酒精灯火焰附近进行；
• （4）避免已灭菌处理的材料用具与周围物品 相接触。
2020/8/5
2.消毒与灭菌的概念及两者的区别
消毒 （１）消毒定义：
在数次画线后,可以分离到由一个细 胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体, 这就是菌落.
2020/8/5
2020/8/5
2020/8/5
1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前 都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需 要灼烧接种环吗？为什么？
答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接 种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线 前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种 环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的 菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线 次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少， 以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时 杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和 感染操作者。
液体培养基：
表面生长
2020/8/5
均匀混浊生长
沉淀生长
按物理状态来分
固体培养基：菌落，菌苔
2020/8/5
半固体培养基： 按物理状态来分
无动力
有动力(弥散)
2020/8/5
观察细菌的运动、厌氧菌的分离和菌种鉴定
选择培养基
按功能来分
加入青霉素的培养基:
分离酵母菌、霉菌等真菌
加入高浓度食盐的培养基:
图 细菌的结构
2020/8/5
*细胞壁
伤
• 成分：肽聚糖
寒
• 细胞壁有哪些功能？
杆 菌
• ①固定细胞外形；
细
②保护细胞免受外力的损伤；
胞
壁Biblioteka Baidu
③阻拦大分子物质进人细胞；
中
④使细胞具有致病性及对
含
噬菌体的敏感性。
毒
素
2020/8/5
有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠 体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环 境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才 死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水 分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌.
2020/8/5
第一部分 :微生物的利用
一、基础知识
1微生物 2培养基 3无菌技术
二、实验操作
1操作步骤 2微生物的接种技术
2020/8/5
一基础知识
病毒
病毒界
（一）微生物
微生物包括哪五类：
细菌和蓝细菌 原核生物界 放线菌
真菌
真菌界
原生动植物 原生生物界
特点：结构都相当简单,个体多数十分微小。 通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到， 有的甚至没有细胞结构。
1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min 2、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min 或 80 ℃ 下煮15min 如牛奶的消毒 3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁 尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源 4、紫外线消毒 ……
2020/8/5
灭菌
① 概念：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的 微生物，包括芽孢和孢子。
通常用于培养基的灭菌
2020/8/5
大肠杆菌的培养和分离
超净工件台 倒平板
灭菌
接种液体 培养
划线分离 培养
培养基的 配制
菌种保存
2020/8/5
1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物 被其他外来微生物污染外，还有什么目的？
答：无菌技术还能有效避免操作者自 身被微生物感染。
2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭 菌。如果需要，请选择合适的方法。
2020/8/5
2020/8/5
选修1需学习的实验
• 实验1 大肠杆菌的培养和分离 • 实验4 果汁中的果胶和果胶酶 • 实验5 加酶洗衣粉的使用条件很效果 • 实验6 α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测 • 实验8 果酒及果醋的制作 • 实验10 泡菜的腌制和亚硝酸盐的测定 • 实验11 植物的组织培养
2020/8/5
二、实验操作 1.制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）
2020/8/5
操作步骤
1．计算、称量 2．溶化 3．调pH： pH7．6 4．过滤：这一步可以省去。 5．分装：分装过程中注意不要使培养 基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而 引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过 三角烧瓶容积的一半为宜。 6．加塞 7．包扎
10．无菌检查： 将灭菌的培养基放入37℃的温室中培 养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。
2020/8/5
倒平板技术
2020/8/5
1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时， 才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的 温度？
答：可以用手触摸盛有培养基的锥形 瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手 时，就可以进行倒平板了。
分离金黄色葡萄球菌
不加氮源的无氮培养基:
分离固氮菌
不加含碳有机物的无碳培养基:
分离自养型微生物
加入青霉素等抗生素的培养基:
分离导入了目的基因的受体细胞
2020/8/5
按功能来分
鉴别培养基
• 伊红美蓝乳糖培养基
2020/8/5
按化学成分来分
天然培养基：
天然培养基有血清、血浆、和组 织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。 优点：营养成分丰富，培养效果好 缺点：来源受限;成分复杂，影响对某 些实验产物的提取和实验结果的分析; 易发生支原体污染;
4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅 在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来 培养微生物吗？为什么？
答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之 间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板 培养微生物。
2020/8/5
2、纯化大肠杆菌 微生物的接种技术
接种方法有： 划线分离法和涂布分离法
划线分离法:通过接种环在琼脂固体培 养基表面连续画线的操作,将聚集的菌 钟逐步稀释分散到培养基的表面.
2020/8/5
按化学成分来分
合成培养基:
根据细胞生存所需物质的种类和 数量，用人工方法模拟合成的。
合成培养基主要成分是氨基酸、 维生素、碳水化合物、无机盐和其它 一些辅助物质。
优点：标准化生产，组分和含量相 对固定;成本低
缺点： 缺少某些成分，不能完全满 足体外细胞生长需要。
2020/8/5
按化学成分来分
• 含碳无机物: 碳酸盐、碳酸氢盐、 二氧化碳
•
含碳有机物：
糖类（主要）葡萄糖 蛋白质
乳糖
脂肪酸
②不同微生物所利用的碳源不同
a.异养型微生物的碳源为 含碳有机物（有机碳） b.自养型微生物的碳源为 含碳无机物（无机碳）
2020/8/5
(3)氮源
• 可作为氮源的物质有: • 含氮无机物： 氮气 、氨气 、 氨盐 、硝酸盐 • 含氮有机物： 蛋白胨
不能合成的化合物,如维生素、某些氨 基酸、嘌呤、嘧啶
2020/8/5
6细菌的营养类型
• 根据细菌所利用的能源和碳源的不同 ，将细菌分为两大营养类型。
• 自养菌（autotroph）
• 异养菌（heterotroph）
• 腐生菌
• 寄生菌
大部分病原菌
2020/8/5
（二）培养基
培养基（培养液）是由人工方法配制而成 的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。
3.培养基内所含的基本物质
• 一般营养物质(1)水 (2)碳源 (3)氮源 (4)无机 盐
• 其他物质 pH、特殊营养物质,例如:生长因子(即细 菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、 某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗 透压等的要求。
2020/8/5
(2)碳源
• 可作为碳源的物质有:
2020/8/5
8．灭菌:
将50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中， 塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌 锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌 15～30min。将培养皿用旧报纸包裹，放入干 热灭菌箱内，在160～170 ℃下灭菌2h。
9．倒平板:
待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯附 近倒平板。2d后观察平板，无杂菌污染才可用 来接种.
1.培养基的类型和用途
（1）按物理状态来分：培养基可分为固体培 养基、半固体培养基和液体培养基。其中固 体培养基用于菌种分离、鉴定菌落等，而液 体培养基一般用于工业生产。 （2）按功能来分，可分为选择培养基和鉴别 培养基。 （3）按化学成分来分，可分为天然培养基和 合成培养基。
2020/8/5
按物理状态来分
2020/8/5
涂布分离法
纯种的菌种稀释一般采取最简单常规的稀 释涂布平板法。
将菌种用接种环蘸取，放入培养液内进行 一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液 分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养 即可。
（1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手
答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。
2020/8/5
二、实验操作
• 1制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 • 2纯化大肠杆菌 • 3将接种后的培养基和一个未接种的培
养基放入37℃恒温箱中培养12h和24h 后，观察并记录
2020/8/5
(2)消毒的方法：
2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？
答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微 生物污染培养基。
2020/8/5
3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固 后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置， 既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以 防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
2020/8/5
2.在灼烧接种环之后，为什么要等其 冷却后再进行划线？
答：以免接种环温度太高，杀死菌种。 3.在作第二次以及其后的划线操作时，
为什么总是从上一次划线的末端开始划线？
答：划线后，线条末端细菌的数目比线 条起始处要少，每次从上一次划线的末端开 始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而 逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来 的菌落。
2020/8/5
1放线菌
1、结构： ➢单细胞原核 ➢分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）
2020/8/5
2病毒
2020/8/5
SARS病毒、 禽流感病毒
2020/8/5
朊病毒（蛋白质病毒）
2020/8/5
病毒的增殖：
2020/8/5
3真菌
2020/8/5
酵母菌和霉菌
如图是酵母菌电子显微 镜下20的20/8/形5 态结构
② 方法：a 灼烧灭菌 b 干热灭菌 c 高压蒸汽灭菌
a.灼烧灭菌
注意适用范围
微生物的接种工具 (接 种环、接种针)或其 他金属用具直接在火 焰的充分燃烧层灼烧
2020/8/5
b. 干热灭菌
c. 160－170℃ ；1－ 2h
能耐高温的需要保持干 燥的物品( 玻璃器皿)
c.高压蒸汽灭菌 d.100kPa 121℃ e.15-30min
青霉
4细菌的外形与大小
细菌：单细胞不分枝的原核微生物。
细菌细胞微小而透明，通常用适当染料染 色（革兰氏染色）后显微镜观察
2020/8/5
图1-1 常见的三种细菌典型形态
A.球菌
B.杆菌
C.弧菌
细菌的构造
细胞膜 拟核
细菌细胞由外向里 依次有鞭毛、菌 （纤）毛、荚膜 、细胞壁、细胞 膜、细胞质、 拟核，细胞质中 又有液泡、储存 性颗粒、核质等 。
牛肉膏 尿素
②固氮微生物所利用的氮源是 氮气
2020/8/5
3培养基配制原则：
• 营养要协调 • 目的要明确 • PH要适宜
2020/8/5
（三）无菌技术
1.无菌技术的概念 无菌操作泛指在培养微生物的操作中， 所有防止杂菌污染的方法。
2020/8/5
从制备培养基到接种与培养等全部实 验过程要无菌操作
人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细
胞生长和繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如
血清）。 血清中含有：
①多种蛋白质（白蛋白、球蛋
白、铁蛋白等）
②多种金属离子；
③激素；
④促贴附物质，如纤粘蛋白、
冷析球蛋白、胶原等。
⑤各种生长因子
⑥转移蛋白
2020/8/5
⑦不明成分
2.不同的微生物往往需要采用不同 的培养基配方 .
2020/8/5
菌落：
• 单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖 时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定 形态结构的子细胞群体，叫做菌落。
• 菌落是鉴定菌种的重要依据。
2020/8/5
菌落
细菌的菌落特征 因种而异
2020/8/5
5细菌的营养物质
• 碳源 • 氮源 •水 • 无机盐 • 生长因子 即细菌生长必需，而自身
• （1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进 行清洁和消毒 ；
• （2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具 进行灭菌 ；
• （3）为避免周围微生物污染，实验操作应在 酒精灯火焰附近进行；
• （4）避免已灭菌处理的材料用具与周围物品 相接触。
2020/8/5
2.消毒与灭菌的概念及两者的区别
消毒 （１）消毒定义：
在数次画线后,可以分离到由一个细 胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体, 这就是菌落.
2020/8/5
2020/8/5
2020/8/5
1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前 都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需 要灼烧接种环吗？为什么？
答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接 种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线 前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种 环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的 菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线 次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少， 以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时 杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和 感染操作者。
液体培养基：
表面生长
2020/8/5
均匀混浊生长
沉淀生长
按物理状态来分
固体培养基：菌落，菌苔
2020/8/5
半固体培养基： 按物理状态来分
无动力
有动力(弥散)
2020/8/5
观察细菌的运动、厌氧菌的分离和菌种鉴定
选择培养基
按功能来分
加入青霉素的培养基:
分离酵母菌、霉菌等真菌
加入高浓度食盐的培养基:
图 细菌的结构
2020/8/5
*细胞壁
伤
• 成分：肽聚糖
寒
• 细胞壁有哪些功能？
杆 菌
• ①固定细胞外形；
细
②保护细胞免受外力的损伤；
胞
壁Biblioteka Baidu
③阻拦大分子物质进人细胞；
中
④使细胞具有致病性及对
含
噬菌体的敏感性。
毒
素
2020/8/5
有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠 体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环 境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才 死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水 分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌.
2020/8/5
第一部分 :微生物的利用
一、基础知识
1微生物 2培养基 3无菌技术
二、实验操作
1操作步骤 2微生物的接种技术
2020/8/5
一基础知识
病毒
病毒界
（一）微生物
微生物包括哪五类：
细菌和蓝细菌 原核生物界 放线菌
真菌
真菌界
原生动植物 原生生物界
特点：结构都相当简单,个体多数十分微小。 通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到， 有的甚至没有细胞结构。
1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min 2、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min 或 80 ℃ 下煮15min 如牛奶的消毒 3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁 尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源 4、紫外线消毒 ……
2020/8/5
灭菌
① 概念：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的 微生物，包括芽孢和孢子。
通常用于培养基的灭菌
2020/8/5
大肠杆菌的培养和分离
超净工件台 倒平板
灭菌
接种液体 培养
划线分离 培养
培养基的 配制
菌种保存
2020/8/5
1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物 被其他外来微生物污染外，还有什么目的？
答：无菌技术还能有效避免操作者自 身被微生物感染。
2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭 菌。如果需要，请选择合适的方法。
2020/8/5
2020/8/5
选修1需学习的实验
• 实验1 大肠杆菌的培养和分离 • 实验4 果汁中的果胶和果胶酶 • 实验5 加酶洗衣粉的使用条件很效果 • 实验6 α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测 • 实验8 果酒及果醋的制作 • 实验10 泡菜的腌制和亚硝酸盐的测定 • 实验11 植物的组织培养
2020/8/5
二、实验操作 1.制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）
2020/8/5
操作步骤
1．计算、称量 2．溶化 3．调pH： pH7．6 4．过滤：这一步可以省去。 5．分装：分装过程中注意不要使培养 基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而 引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过 三角烧瓶容积的一半为宜。 6．加塞 7．包扎
10．无菌检查： 将灭菌的培养基放入37℃的温室中培 养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。
2020/8/5
倒平板技术
2020/8/5
1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时， 才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的 温度？
答：可以用手触摸盛有培养基的锥形 瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手 时，就可以进行倒平板了。
分离金黄色葡萄球菌
不加氮源的无氮培养基:
分离固氮菌
不加含碳有机物的无碳培养基:
分离自养型微生物
加入青霉素等抗生素的培养基:
分离导入了目的基因的受体细胞
2020/8/5
按功能来分
鉴别培养基
• 伊红美蓝乳糖培养基
2020/8/5
按化学成分来分
天然培养基：
天然培养基有血清、血浆、和组 织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。 优点：营养成分丰富，培养效果好 缺点：来源受限;成分复杂，影响对某 些实验产物的提取和实验结果的分析; 易发生支原体污染;
4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅 在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来 培养微生物吗？为什么？
答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之 间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板 培养微生物。
2020/8/5
2、纯化大肠杆菌 微生物的接种技术
接种方法有： 划线分离法和涂布分离法
划线分离法:通过接种环在琼脂固体培 养基表面连续画线的操作,将聚集的菌 钟逐步稀释分散到培养基的表面.
2020/8/5
按化学成分来分
合成培养基:
根据细胞生存所需物质的种类和 数量，用人工方法模拟合成的。
合成培养基主要成分是氨基酸、 维生素、碳水化合物、无机盐和其它 一些辅助物质。
优点：标准化生产，组分和含量相 对固定;成本低
缺点： 缺少某些成分，不能完全满 足体外细胞生长需要。
2020/8/5
按化学成分来分
• 含碳无机物: 碳酸盐、碳酸氢盐、 二氧化碳
•
含碳有机物：
糖类（主要）葡萄糖 蛋白质
乳糖
脂肪酸
②不同微生物所利用的碳源不同
a.异养型微生物的碳源为 含碳有机物（有机碳） b.自养型微生物的碳源为 含碳无机物（无机碳）
2020/8/5
(3)氮源
• 可作为氮源的物质有: • 含氮无机物： 氮气 、氨气 、 氨盐 、硝酸盐 • 含氮有机物： 蛋白胨
不能合成的化合物,如维生素、某些氨 基酸、嘌呤、嘧啶
2020/8/5
6细菌的营养类型
• 根据细菌所利用的能源和碳源的不同 ，将细菌分为两大营养类型。
• 自养菌（autotroph）
• 异养菌（heterotroph）
• 腐生菌
• 寄生菌
大部分病原菌
2020/8/5
（二）培养基
培养基（培养液）是由人工方法配制而成 的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。
3.培养基内所含的基本物质
• 一般营养物质(1)水 (2)碳源 (3)氮源 (4)无机 盐
• 其他物质 pH、特殊营养物质,例如:生长因子(即细 菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、 某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗 透压等的要求。
2020/8/5
(2)碳源
• 可作为碳源的物质有:
2020/8/5
8．灭菌:
将50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中， 塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌 锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌 15～30min。将培养皿用旧报纸包裹，放入干 热灭菌箱内，在160～170 ℃下灭菌2h。
9．倒平板:
待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯附 近倒平板。2d后观察平板，无杂菌污染才可用 来接种.
1.培养基的类型和用途
（1）按物理状态来分：培养基可分为固体培 养基、半固体培养基和液体培养基。其中固 体培养基用于菌种分离、鉴定菌落等，而液 体培养基一般用于工业生产。 （2）按功能来分，可分为选择培养基和鉴别 培养基。 （3）按化学成分来分，可分为天然培养基和 合成培养基。
2020/8/5
按物理状态来分
2020/8/5
涂布分离法
纯种的菌种稀释一般采取最简单常规的稀 释涂布平板法。
将菌种用接种环蘸取，放入培养液内进行 一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液 分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养 即可。
（1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手
答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。
2020/8/5
二、实验操作
• 1制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 • 2纯化大肠杆菌 • 3将接种后的培养基和一个未接种的培
养基放入37℃恒温箱中培养12h和24h 后，观察并记录