五、鸡胚的壳外培养

• 第三天：由孵化的第一天开始，蛋白
中的水分通过半透性卵黄膜向卵黄中
移动，使卵黄中水分含量大增，新进 来的水分并不与卵黄液全融合而主要
存在于胚区。胚胎与伸展的卵黄囊血
管形似蚊子，白壳种蛋通过照视可见 蚊状的血管区，俗称“蚊虫珠”。 • 第四天： 卵黄体积继续增大，颜色 变淡，卵黄囊血管包围卵黄近1/3，
5. 在培养过程中，若发现有卵黄流出的鸡胚，或发生污染的鸡胚， 将其取出弃之。
6. 在培养过程中注意给大培养皿内添蒸馏水，小培养皿中添加消 毒过的生理盐水，以免水份蒸发影响湿度。
作 业
• 1. 从培养日起，便可逐日观察。注意观察并记录鸡胚
的脑、眼睛、血管、肢芽、啄、胚胎外膜（包括羊膜、 浆膜和尿囊）、羽毛等的形成和发育，血液循环方式， 鸡胚运动等，绘制三个不同鸡胚发育时期图。 • 2. 鸡胚若不能粗略运动，血液停止流动，即为死亡， 记录死亡时间。
10日龄鸡胚的结构图
胚龄解剖图
• 第一天： 经过24小时的孵育，
胚盘变大变厚，明区和暗区同时 增大，在卵黄上可见到椭圆形的 盾称为胚盾，是未来的胚区。
• 第二天：胚盘已扩展一倍并被红
色的血管围成樱桃形或椭圆形， 这些血管即胚胎的卵黄囊循环的 边缘血管----缘窦。胚盘中心有 一变曲的透明体----胚胎，透明 体中可见一搏动着的小红点，即 原始心脏。
• 第十天：尿囊在胚胎的背面迅 速向下端发展，将蛋白逐渐包 围起来。当孵化的第10天结束 时，皮肤的羽毛原基遍及全身， 翼和腿部羽毛的尖端已微露。 胎儿的位置靠近气室。
• 第十一天：由于尿囊完全包围了 卵黄、胚体和蛋白、尿囊血管已 在小端吻合，从第8天到第11天 是尿囊发育的第二阶段。尿囊的 合拢与否意义重大，只有合拢完 善，才能保证胎儿吞食蛋白。 • 第十二天：图中尿囊在蛋白端尚 有一小孔未合拢，对于12天的胚 胎发育似乎嫌慢。由于个体差异， 这种情形并不罕见，鸡胚短羽已 遍与爪已角质化。蛋白呈淡黄褐 色，粘稠，浆羊膜道形成。
实验五 鸡胚的壳外培养
一、实验目的及意义
• 鸡胚作为生物学的实验材料，其历史已经相当悠久。鸡蛋 取材方便，孵育条件简单，且一年四季都有新鲜材料可取，
是胚胎学、发育生物学教学、科研的良好材料。
• 近代，鸡胚已被大量地用于发育的研究。但鸡胚在壳内发 育，观察、实验又有其不便之处，鸡胚的壳外培养可以克 服这些困难。
由于卵黄液化膨胀的压力，使卵黄囊
血管紧贴于内壳膜，可与外界进行气 体交换。尿囊是一个很小的水泡，眼
睛开始沉积黑色素。
• 第五天：胚胎被包围在一个透明
的水泡（羊膜）中，羊膜内充满 羊水，胚体弯曲，眼睛黑色素大
量沉积。卵黄囊已包围1/2的卵
黄，肉眼已可见到尿囊，直径6 毫米左右。 • 第六天：尿囊增长迅速，一天之 内增长了约4倍，尿囊血管系统
• 第十三天：胎儿开始大量吞食蛋白 羊水（将羊膜道是输送蛋白至浆羊 膜腔的细长通道。粘稠的蛋白由于 尿囊的包围和收缩，像挤牙膏一样 不断进入将羊膜腔，与羊水混合， 这种含有蛋白的羊水，称为蛋白羊 水）。 • 第十四天：尿囊血管充分发育并紧 贴壳膜，通过内外壳膜、蛋壳排出 二氧化碳和水蒸气，吸进氧气；尿 囊液增加，主要集中于羊膜周围， 新陈代谢旺盛，胎儿增重迅速。
迅速发育，已经覆盖羊膜与部分
卵黄，但较卵黄囊血管细；卵黄 囊血管分布在卵黄面积达2/3以
上。胚体已初具翼和腿的外型，
已眼睛黑色素更多。
• 第七天：卵黄体积达到最大程度， 以后将逐渐缩小，卵黄囊虽然也 增大，仍有1/4卵黄未被覆盖；尿 囊比第6天增长约两倍；胎儿的外 形已具备禽类的特点，头和眼所 占的比例相当大，前后肢分化明 显。
和制霉菌素。
三、Hale Waihona Puke Baidu验步骤
1、将鸡蛋置于蛋座（小培养皿内放一些棉花）上，先用小挫刀或 刀片沿蛋的横轴挫出和割出五分之四的小裂缝，在无裂缝处沿 蛋的纵轴贴上一块宽1-2cm，长3-4cm的胶布，在其对面，裂缝 的两旁各沿纵轴贴上一块宽1-2cm，长6-7cm的胶布（胶布的一 端与裂缝边缘齐，另一端留下一段），将无裂缝处朝上，静置 数分钟，待胚盘转向上方。 2、用大姆指按住无裂缝处，两手的食指和中指各夹一边的一段胶 布，平移至盛有生理盐水的培养皿上方，轻轻把胶布往两旁一 拉，蛋的内容物即可完整地流入培养皿中。 3、将盛有鸡胚的培养皿放入大培养皿内，在大培养皿内加入一层 薄薄的蒸馏水，以保持湿度。盖上大培养皿的盖子，置于3739℃恒温箱中培养。如果有二氧化碳培养箱则更好（二氧化碳 浓度调到5%左右），鸡胚存活率会更高，存活时间更长。
雏鸡蓄积力量，准备出壳。
• 第二十一天： 蛋壳被啄破，雏鸡可直
接由外界呼吸，此时尿囊膜开始枯萎， 但仍有血管在工作。卵黄大部分收入 腹腔，只有少部分露在腹外。
二、实验材料及准备工作
1、实验材料： 受精鸡蛋。 2、实验仪器： 恒温箱、单面刀片、1.5×9.5cm培养皿、2.5×12cm小 培养皿、胶布、棉花、剪刀。 3、实验药品： 75%酒精、庆大霉素、制霉菌素、蒸馏水 Haward Ringer氏液： NaCl 7.3g CaCl(2H2O)2 0.17g KCl 0.37g 蒸馏水 1000ml
• 第十五天：尿囊所包围的蛋白减少， 胚体与卵黄的黑影部分增多。
胎儿的羽毛生长迅速，颈部羽毛 长度达12毫米，身体各部羽毛生 长整齐，胫、趾鳞片开始形成。
• 第十六天：尿囊所包围的蛋白进一 小减少，尿囊液颜色变混，有少量 尿酸盐积由于吞食白、胚胎代谢产 物增多，排泄的尿酸盐贮存在尿囊 中。 胎儿体重继续增大，羽毛加 长变丰，颈部羽毛长度达15毫米。
4、准备工作：
（1）取新鲜的受精鸡蛋，置于温度为37-39℃，相对湿度
为60-70%的孵育箱中孵育。 （2）取孵育3天（72小时）的鸡蛋，用浸有75%酒精的棉 花擦拭鸡蛋外壳，晾干备用。 （3）取消毒过的1.5×9.5cm培养皿及2.5×12cm培养皿 （带盖）数付，在小的培养皿内加10ml的Haward氏生理盐 水。为了防止污染，也可同时加入100单位/ml的庆大霉素
四、注意事项
1. 生理盐水最好先置于温箱中，使其温度与鸡胚孵育的温度相同， 有利于鸡胚的存活。 2. 每次观察和实验时间不宜太长，亦不能使温度下降过多，并要 防止污染。 3. 经孵育3天的鸡胚，卵黄囊已经开始液化，破壳时需注意，不 能用力过大，否则极易损伤卵黄囊。卵黄囊一旦受损，则无法继 续存活。 4. 实验时若卵黄流出鸡胚，弃之不用，在培养皿中若胚胎朝下， 也不能存活。
绒毛膜壁对钙离子的吸收和转运，以及Ca2+对鸡胚各器官
发育的影响等研究。
鸡胚模式图解
1、卵壳：上有细孔，进行气体交换。
2、卵壳膜：使气体分子和液体分子在内外两方面进 行气体交换。
3、气室：呼吸和调节压力。
4、绒毛尿囊膜：起胚胎呼吸器官的功能，氧气的交 换是在膜的血管内通过卵壳空而进行的。
• 5、尿囊腔：胚胎的排泄器官，内含尿囊液，初为透 明液体，是单纯生理盐溶液，以后尿囊液中尿酸盐 迅速增加，胚胎发育到12-13天后尿囊液开始变得混 浊。
• 第十七天：蛋白基本上向羊膜腔输 送完毕，胎儿仍被蛋白的羊水包围。 胎儿由于从蛋白和卵黄中摄取了全 价蛋白体重增加，外形和羽毛的发 育，与出壳的雏鸡差异不大。从孵 化的第12天至17天是尿囊发育的第 三阶段，尿囊的合拢导致胎儿可以 完全吞食蛋白。
• 第十八天： 残存的蛋白羊水被吞 食完毕，尿囊液减少，气室增大， 尿囊增厚并收缩。 由于蛋白利用 较好，胎儿的羽毛像缎子一样覆盖 在鸡体表面。此后胎儿的营养来源 只有一种----卵黄。
• 第八天： 从第4天到第8天是尿囊 发育的第一阶段，胚胎由卵黄囊 呼吸转化为尿囊呼吸。胎儿外形 发育趋于完善，胸腹腔尚未封闭， 心、肝、胃都暴露于体腔外。羊 水与尿囊液迅速增多。
• 第九天：尿囊沿内膜迅速向下 端发展，包围了胎儿和卵黄， 并包围部分蛋白。胎儿皮肤透 明度下降，皮肤表面出现排列 整齐的小点，即羽毛原基。胸 腹腔已封闭，心、肝、胃等器 官已包入体腔。
• 通过壳外培养，可以直接观察鸡胚发育过程，观察胚胎与
胎膜的关系、胚胎的行为及循环模式等。 • 另一方面，易于进行各种鸡胚的外科手术，如切除肢芽， 破坏神经管及尿囊绒毛膜移植等。对于发育的行为学、畸 胎学、生理学研究，也是一种良好方法。 • 近年也有学者将鸡胚壳外培养方法应用于肿瘤诱导的血管 形成，中枢神经系统的培养，哺乳类早期胚胎培养、尿囊
• 第十九天：气室继续扩大，尿囊液与
羊水继续减少，尿囊血管鲜红，表明
尿囊仍司呼吸器官的职能。孵化第19 天在气室中可见展翅，少数雏鸡的喙
已穿破内壳膜而达于气室。可听到雏
鸡的鸣叫声。 部分卵黄已收入腹腔， 一旦雏鸡的喙的喙进入气入气室，即 开始肺的呼吸，此时雏鸡尿囊和肺的 呼吸并存，并逐渐由前者过渡到后者。 呼吸量大，代谢热产量大增，通常在 这一天“落盘”。 • 第二十天：剩余部分卵黄收入腹腔，