药品微生物实验室质量管理指导原则

-结果的判断和检测报告（结果的判断）
二、微生物实验室质量管理
（一）人员要求 （二）培养基管理 （三）试剂 （四）菌种管理 （五）环境 （六）设备 （七）样品 （八）检验方法 （九）污染废弃物处理 （十）检测结果的质量保证和检测过程的质量控制 （十一）实验记录 （十二）结果的判断和检测报告 （十三）文件
培养基的定义和分类
3.按用途分类
（1）运输培养基：在取样后和实验室处理前保护和维持微生物活性
且不允许明显增殖的培养基。运输培养基中通常不允许包含使微 生物增殖的物质，但是培养基应能保护菌株。（例如：缓冲甘油氯化钠溶液） （2）保藏培养基：用于在一定期限内保护和维持微生物活力，防止 长期保存对其的不利影响，或使其在长期保存后容易复苏的培养 基。 （例如：营养琼脂斜面） （3）悬浮培养基：将测试样本的微生物分散到液相中，在整个接触 过程中不产生增值或抑制作用磷酸盐缓冲。 （例如：磷酸盐缓冲 液） （4）复苏培养基： 能够使受损或应激的微生物修复，使微生物恢复 正常生长能力，但不一定促进微生物繁殖的培养基。
培养基的质量保证—培养基的购买与接收
培养基由专人负ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ购买和接收。在收到培养基后，
应检查以下内容：培养基的名称、批号、效期、COA、 必要的安全和（或）危害数据等文件证明。 实验室应建立相关的文件和台帐，在台帐上包括以 下信息：接收日期，名称、货号、批号、外观的密封性、 有效期、储存条件等检查内容。
28
培养基的质量保证—培养基配制
培养基的质量保证—培养基配制
水
实验用水的电导率：在25℃时不应超过25μ S/cm （应该为2.5μ S/cm或者25mS/cm），相当于电阻率 ≥0.4MΩ cm。（电导率与电阻率应呈倒数关系）。 微生物污染不应超过103 CFU/mL。应按GB 4789.2，采用平板计数琼脂培养基，在36 ℃±1 ℃ 培养48 h±2 h进行定期检查微生物污染。
培养基的质量保证—培养基配制
一般要求
选择符合要求的培养基。 按照使用说明上的要求操作确保培养基的质量符合要求。 检查培养基的性质，不得使用结块或颜色发生改变的培养基。 配制培养基的天平，需要一定的精确度。
配制培养基的水符合要求。
配制培养基的容器符合要求。 配制和灭菌过程需要验证。 以上需要有详细的SOP，并严格按照SOP执行。
培养基或试剂的批量
培养基或试剂完整的可追溯单位，是指满足产品要求（内部控制） 和性能测试，产品型号和质量稳定的一定量的半成品或成品。这些产 品在特定的生产周期生产，而且编号相同。
培养基及试剂的性能
在特定条件下培养基对测试菌株的反应。
培养基的定义和分类
培养基的分类依据 1 按组成成分分类 2 按状态分类 3 按用途分类 4 按制备方法分类
（如需灭菌后调整pH值，则使用灭菌溶液）。
分装
▲将配好的培养基分装 ▲容器体积应比培养基体积最少大20%
培养基的质量保证—培养基配制
灭菌
■湿热灭菌■煮沸灭菌■过滤除菌
注意避免过度加热： 1.大容积（＞1000mL)时容易过度加热； 2.放置物品太多或灭菌后未及时冷却。
检查 ◆ pH值◆色泽◆灭菌效果◆均匀度等 琼脂培养基的融化
培养基的定义和分类
3.按用途分类
（5）增菌培养基：通常为液体培养基，能够给微生物的繁殖提供特定的 生长环境。（TSB) （6）选择性增菌培养基：能够允许特定的微生物在其中繁殖，而部分或 全部抑制其他微生物生长。（例如：TTB，SC） （7）非选择性增菌培养基：能够保证多种微生物生长的培养基。（例如：
BHI，NB）
（8）分离培养基：支持微生物生长的固体或半固态培养基。 （9）选择性分离培养基：支持特定微生物生长而抑制其它微生物生长的分 离培养基。（例如：XLD，BS） （10）非选择性培养基：对微生物没有选择性抑制的分离培养基。 （例如：
NA）
培养基的定义和分类
3.按用途分类
（11）鉴别培养基（特异性培养基）：能够进行一项或多项微生物生理和（或） 生化特性鉴定的培养基。 （例如：麦康凯琼脂） 注：能够用于分离培养的鉴别培养基被称作分离（鉴别）培养基 （12）鉴定培养基（特异性培养基）：能产生一个特定的鉴定反 应而通 常不需 要进一步确证实验的培养基。（例如：乳糖发酵管） 注：能够用于分离鉴定的培养基被称作分离（鉴定）培养基。
培养基的质量保证—培养基的购买与接收
证明文件
培养基的质量保证—贮存
一般要求：应严格按照供应商提供的贮存条件、有效期
和使用方法进行培养基的保存和使用（商品化即用型培养
基）。培养基的购买应有计划，以利于存货的周转（即掌握 先购先用的原则）。实验室应保存有效的培养基目录清单。
脱水合成培养基：——容器密闭性检查；
——记录首次开封日期； ——内容物的感官检查。 开封后的脱水合成培养基，其质量取决于贮存条件。通 过观察粉末的流动性、均匀性、结块情况和色泽变化等判断 脱水培养基的质量的变化。若发现培养基受潮或物理性状发 生明显改变则不应再使用。
培养基的质量保证—贮存
实验室自制的培养基
避光、干燥保存，必要时在5 ℃±3 ℃冰箱中保存，通常 建议平板不超过2周～4周，瓶装及试管装培养基不超过3个
ChP2010药品微 生物实验室规 范指导原则
ChP2015药品微生物实 验室质量管理指导原则 （13个要素）
（8个要素）
-人员 -培养基 -菌种 -实验室的布局 和运行 -设备 -文件 -实验记录 -结果的判断
-人员 -培养基 -试剂 -菌种 -环境 -设备 -样品 -检验方法 -污染废弃物的处理 -检测结果的质量保证和 检测过程的质量控制 -实验记录 -结果的判断和检测报告 -文件
称重和溶解
▲按称量数称量，必要时戴口罩或通风柜中操作； ▲加适量水，充分混合，再加水至所需量； ▲充分搅拌至完全溶解； ▲含琼脂培养基加热前浸泡几分钟。
培养基的质量保证—培养基配制
pH值的测定和调整
■使用pH计测定； ■灭菌后冷却至25℃时测定pH值； ■ pH值应在标准pH±0.2范围内； ■使用1mol/L的氢氧化钠或盐酸溶液调整培养基的pH值
（2）半固体培养基：在液体培养基中加入极少量固化物（如琼脂、明
胶等），加热至100℃溶解，冷却后凝固成半固体状态的培养基。 （3）液体培养基：固体培养基的对应词，是微生物或动植物细胞的液 状培养基。它具有进行通气培养、振荡培养的优点。在静止的条件下， 在菌体或培养细胞的周围，形成透过养分的壁障，养分的摄入受到阻碍。 由于在通气或在振荡的条件下，可消除这种阻碍以及增加供氧量，所以 有利于细胞生长，提高生产量。
月～6个月，除非某些标准或实验结果表明保质期比上述的更长。
建议需在培养基中添加的不稳定的添加剂应即配即用， 除非 某些标准或实验结果表明保质期更长；含有活性化学物质或不 稳定性成分的固体培养基也应即配即用，不可二次融化。 培养基的贮存应建立经验证的有效期。观察培养基是否有 颜色变化、蒸发（脱水）或微生物生长的情况，当培养基发生 这类变化时，应禁止使用。培养基使用或再次加热前，应先取 出平衡至室温
主要变化
1、名称 “药品微生物实验室规范指导原则”（2010年版） “药品微生物实验室质量管理指导原则”（2015年版） 2、增订
由8个修订为13个，增加了以下5个要素。
-试剂 -样品 -检验方法 -污染废弃物的处理 -检测结果的质量保证和检测过程的质量控制
3、修订 -每一个要素均进行了不同程度的修订 -环境（ 实验室的布局 和运行 ）
单独成分+补充物及产品编码
使用前pH值 性能测试结果的可接受标准
技术数据质量控制证书
安全/危害数据
根据实验目的，选择适宜的培养基，选择声誉好的品牌
COA上只有定性检查，无定量检查
COA 上有定性和定量的检查
more than 70 % Recovery Rate for each test strain used
标准比对
WHO药品微生物实验室良好实施规范 （12个要素，5个附录） -人员 -环境 -检验方法验证 -设备 -试剂和培养基 -标准物质和标准菌株 -抽样 -样品处理和确认 -污染废弃物的处理 -检测结果的质量保证和检测过程的质量控制 -实验步骤 -实验报告
附录 1 附录 2 附录３ 附录 4 附录 5 区域的实例 设备维护实例 不同实验室设备的校准的检验和周期实例 设备资质和监控实例 标准培养物的使用
（二）培养基
—未做修订
培养基是微生物试验的基础，直接影响微生物试 验结果。
质量至关重要
制备方法 贮藏条件
质量
质量控制试验
培养基的定义和分类
培养基
液体、半固体或固体形式的、含天然或合成成分，用于保证微生物 繁殖（含或不含某类微生物的抑菌剂）、鉴定或保持其活力的物质。
培养基的定义和分类
质量控制
为满足质量要求所采取的技术操作和活动。
（2）商品化脱水合成培养基 使用前需加水和进行处理的干燥培养基， 如：粉末、小颗粒、冻干等形式： ——完全培养基， ——不完全培养基，使用的时候需要加添加剂。 （3）自制培养基 依据完整配方的具体成份配制的培养基。
培养基的质量保证—培养基的购买与接收
审查提供的相关文件
培养基的名称
批号 储存信息及有效期
（一）人员
— 修订内容
—教育背景：应具备微生物学或相近专业知识 —培训：（1）岗位和职责培训 （2）设备操作培训 （3）微生物检验技术培训（无菌操作、培养基制备、消毒、 灭菌、注平板、菌落计数、菌种的转种、传代和保藏、微生物检查方 法及鉴定基本技术等），经考核合格后方可上岗。 （4）生物安全方面的培训 （5）继续教育计划 — 检验人员：必须熟悉相关检测方法、程序、检测目的和结果评价 —管理者：其专业技能和经验水平应与他们的职责范围相符，如： 管理技能、实验室安全、试验安排、预算、实验研究、实验结果的评 估和数据偏差的调查、技术报告书写等。 —实验室：内部质量控制、能力验证或使用标准菌株等方法客观评 估检验人员的能力 —档案： 所有人员的培训、考核内容和结果均应记录归档。
《中国药典》 2015年版
药品微生物实验室
质量管理指导原则(通则9203)
2015年10月
一、修订概况
二、微生物实验室质量管理
三、现场检查常见缺陷示例
一、修订概况
修订依据
1、World Health Organization WHO Technical Report Series, No. 961, 2011 Annex 2 WHO good practices for pharmaceutical microbiology laboratories 附录2 WHO药品微生物实验室良好实施规范 2、《中国药典》2010年版 药品微生物实验室规范指导原则
★灭菌或复溶后培养基放入47℃～50℃的恒温水浴锅中，冷却保温，直至使用； ★ 培养基只可复融一次，融化后的培养基应尽快使用，放置时间不应超过4小时， 未使用完的培养基不能重新凝固留待下次使用。
（13）计数培养基：能够对微生物定量的选择性或非选择性培养基。
（例如 ：MYP，PCA） 注：计数培养基可包含复苏和（或）增菌培养基的特性。
（14）确证培养基：在初步复苏、分离和（或）增菌阶段后对微生物进行部分或 完全鉴定或鉴别的培养基。（例如：BGLB肉汤）
培养基的定义和分类
4.按制备方法分类
（1）商品化即用型培养基
培养基的定义和分类
1.按组成成分分类 （1）纯化学培养基 ：由已知分子结构和纯度的化学 成分配制而成的培养基。 （2）未定义和部分定义的化学培养基：全部或部分
由天然物质、加工过的物质或其他不纯的化学物质构成
的培养基。
培养基的定义和分类
2.按状态分类
（1）固体培养基：在液体培养基中加入一定量固化物（如：琼脂、明 胶等），加热至100℃溶解，冷却后凝固成固体状态的培养基。倾注到平 皿内的固体培养基一般称之为“平板”；倒入试管并摆放成斜面的固体 培养基，当培养基凝固后通常称作“斜面”。
以即用形式或融化后即用形式置于容器（例如平皿、试管或其他容器） 内供应的液体、固体或半固体培养基： ——完全可即用的培养基 ——需重新融化的培养基（如用于平板倾注技术） ——使用前需重新融化并分装（如倾注到平皿）的培养基 ——使用前需重新融化，添加物质并分装的培养基
培养基的定义和分类
4.按制备方法分类