实例解析——高效液相色谱(hplc)
高效液相色谱分析实验
高效液相色谱分析实验高效液相色谱(HPLC)是一种用于分离、检测和定量分析化学样品的分析技术，具有高分辨率、高灵敏度和高选择性。
在实验室中，HPLC广泛应用于药物分析、环境监测、食品安全等领域。
本文将介绍HPLC的实验原理、步骤及关键技术。
一、实验原理HPLC的原理是将混合物通过高压注射，经过固定相柱进行分离。
在HPLC中，固定相柱是最重要的组成部分之一，它可以根据样品之间的化学性质选择不同的固定相柱，如反相柱、离子交换柱、手性柱等。
在HPLC实验中，样品可以通过两种方式进样，一种是自动进样器，另一种是手动进样。
进样器将样品注入进样站点后，通过高压泵将样品推入柱子中，样品在柱子中分离后，被通过光学检测器检测，进而得到分离的结果。
二、实验步骤1.样品准备：根据实验要求，准备需要进行分析的物质样品，将其溶解或稀释到适当的浓度。
2.选择柱子：根据样品的性质选择适当的固定相柱。
例如，如果样品是极性的，则选择反相柱。
3.设定实验条件：根据样品的特征和实验需求，设置高压泵的流速、检测器、柱温等参数。
4.样品进样：将样品使用自动进样器或手动进样器进行进样。
5.柱子分离：开启高压泵，将样品推入柱子中。
样品将在柱子中根据化学性质进行分离。
6.数据检测和记录：通过光学检测器检测样品的峰值，并记录分离结果。
可以使用计算机软件进行数据分析。
7.清洗和重用：实验完成后，需要对HPLC仪器进行清洗和重置，以便下次使用。
三、关键技术1.换柱：为了保证实验结果的准确性和可靠性，柱子需要定期更换。
柱子的寿命取决于样品的特性和使用情况。
2.校准标准品：在实验中使用标准品校准HPLC仪器，以确保仪器的准确性和灵敏度。
3.优化实验条件：通过改变流速、温度、柱子等实验条件，可以优化分离效果。
4.检测器选择：根据样品的性质选择合适的检测器，例如紫外检测器、荧光检测器等。
5.数据分析：使用HPLC软件对数据进行分析，生成和保存分析报告。
四、实验安全1.注意个人防护：在操作HPLC仪器时，应佩戴安全防护眼镜和手套，避免接触有害物质。
高效液相色谱仪分析应用实例
高效液相色谱仪分析应用实例《高效液相色谱仪分析应用实例》由南京科捷为您收集提供,液相色谱应用实例包括环境气体分析、药物分析、食品分析、生物制药等方面的液相色谱应用实例。
例 1.稠环芳烃分析 (环境气体分析样品:含六苯并苯等 8种稠环芳烃的混合物色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪,配有色谱工作站检测器:UV 紫外检测器, 340nm色谱柱:C 18键合相(ODS-224 ,5μm ,柱长 25cm ,柱径 4.6mm流动相:甲醇 -二氯甲烷(8:2混合溶剂流速:1mL/min进样:20μL结果:所有组分在 25min 之内全部流出,各组分完全分离,组分出峰顺序为:六苯并苯,二苯二萘嵌苯,三苯二萘嵌苯,苯萘并二萘嵌苯,四苯二萘嵌苯,萘六苯并苯,二苯萘并二萘嵌苯,苯菲并五苯。
例 2.磺胺分析(药物分析样品:磺胺、磺胺嘧啶、磺胺甲基异噁唑和甲氧苄氨嘧啶的混合物色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪, 740色谱数据处理机检测器:UV 481型紫外检测器,波长 240nm色谱柱:μ-Bondapak C18 , 5μm ,柱长 25 cm,柱径 4.6 mm流动相:由 KH 2PO 4(0.05mol/L和 Na 2HPO 4(0.05 mol/L以及 MeOH 所组成,其用量比例为 200:10:165, 流速:1mL/min进样:10μL结果:所有组分在 6min 之内全部流出, 各组分完全分离, 组分出峰顺序为:磺胺保留时间为 2.60 min, 磺胺嘧啶保留时间为 3.18 min、磺胺甲基异噁唑保留时间为4.33 min,甲氧苄氨嘧啶保留时间为 5.19min 。
例 3.银杏内酯分析(药物分析样品:含银杏苦内酯等 4种物质的混合物色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪配有 570自动进样器, Rheadyane 77251进样阀, HP 化学工作站检测器:500型 ELSD Alltech 蒸发光散射检测器漂移管温度为 91℃,氮气流速为 2.75L/min色谱柱:Platinum OPS, 5μm ,柱长 25cm ,柱径 4.6mm流动相:水 :甲醇 :四氢呋喃 = 75:20:10流速:1mL/min进样:10μL结果:所有组分在 15min 之内全部流出,各组分完全分离,组分流出顺序为:峰 1为银杏苦内酯 C, 峰 2为白果内酯 , 峰 3银杏苦内酯 A, 峰 4为银杏苦内酯 B 。
高效液相色谱-HPLCppt课件.ppt
色谱法的分类
按固定相的形态分:
平面色谱 o 纸色谱
o 薄层色谱
柱色谱
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色谱法的分类示意图
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▪ 高压梯度洗脱（高压混合，高压进柱，2个 泵。）
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▪安捷伦泵：小视频 ▪色谱学堂：泵
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色谱法原理及分类
什么是色谱法 色谱法溯源 Tswett（茨维特)的实验 色谱法原理 色谱法的分类
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什么是色谱法
色谱法是一种现代的分离分析方法 1906年正式命名(见诸文献) 20世纪30年代开始广泛研究和应用 高效液相色谱法的广泛应用始于20世纪70年代
1. 紫外—可见光度检测器：
①固定波长：254nm ， 低压汞 灯。
② 可 调 波 长 ： 190 ～ 800mm ， 钨灯，氘灯。
UV
③光电二极管矩阵检测器： 190～700nm。
接色谱柱 石英窗 光电倍增管
废液
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高效液相色谱技术在药物分析中的应用
高效液相色谱技术在药物分析中的应用高效液相色谱技术（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种重要的分析技术，广泛应用于药物领域。
本文将探讨HPLC技术在药物分析中的应用，并介绍其原理、方法和优势。
一、HPLC技术的原理HPLC技术基于液相色谱原理，在高压下通过液相柱进行分离和分析。
通常，样品通过进样器进入色谱柱，经过固定相的作用，分离出不同的化合物。
分离后，通过控制流动相的梯度，使不同的化合物逐渐从柱中洗脱出来，最终通过检测器进行检测和定量分析。
二、HPLC技术在药物分析中的应用1. 药物含量测定HPLC技术可以准确、快速地测定药物的含量，是药物质量控制的重要手段。
通过标准曲线法，可以根据药物的峰面积与浓度的关系，确定样品中药物的含量。
2. 药物杂质分析药物分析中，除了测定药物本身的含量外，还需要检测和定量分析药物中的杂质。
HPLC技术可以通过选择合适的固定相和流动相，实现对药物中有机杂质、无机杂质、不溶性杂质等的分离和检测。
3. 生物样品分析在药物代谢、药效和药物动力学研究中，需要对生物样品如血液、尿液、组织等进行分析。
HPLC技术可以通过样品前处理、提取等步骤，将样品中的药物和代谢产物分离出来，实现对药物的定量和定性分析。
4. 药代动力学研究药代动力学研究是研究药物在体内吸收、分布、代谢和排泄过程的一门学科。
HPLC技术可以结合药代动力学的特点，通过测定药物在体内的浓度和代谢产物，研究药物的吸收、排泄、代谢动力学参数，为药物的合理用药提供依据。
三、HPLC技术的优势1. 准确性高：HPLC技术在药物分析中能够实现对微量药物的准确分离和定量分析，具有很高的灵敏度和精度。
2. 选择性好：通过选择合适的固定相、流动相和检测器，HPLC技术可以对复杂的样品进行分离和分析，实现对多个成分的同时检测和定量。
3. 可靠性强：HPLC技术已经成为药物质量控制和生物样品分析的标准方法之一，得到了广泛应用并被广泛认可。
hplc高效液相色谱法
HPLC高效液相色谱法简介高效液相色谱法（HPLC）是一种利用液体作为流动相，通过高压输液系统，将样品中的各组分在固定相和流动相之间进行分配或吸附等作用而实现分离和检测的色谱技术。
HPLC具有分离效率高、灵敏度高、选择性强、分析速度快、样品适用范围广等优点，已成为化学、生物、医药、环境等领域中最重要的分析方法之一。
本文将简要介绍HPLC的基本原理、仪器组成、常用的色谱模式和应用领域，以期对HPLC感兴趣的读者有所帮助。
一、HPLC的基本原理HPLC的基本原理是利用样品中的各组分在固定相和流动相之间的不同亲和力，使其在色谱柱内以不同的速度移动，从而达到分离的目的。
固定相是填充在色谱柱内的颗粒状物质，可以是固体或涂于固体载体上的液体。
流动相是通过高压泵送入色谱柱的溶剂或溶剂混合物，可以是极性或非极性的。
样品是通过进样器注入流动相中，并随流动相进入色谱柱。
当样品中的各组分经过固定相时，会发生吸附、分配、离子交换、排阻等作用，导致它们在固定相中停留不同的时间。
这个时间称为保留时间（retention time），通常用tR表示。
保留时间是反映样品组分在色谱柱内分离程度的重要参数，不同的组分有不同的保留时间。
当样品组分从色谱柱出口流出时，会被检测器检测到，并产生一个信号。
这个信号随时间变化而变化，形成一个色谱峰（chromatographic peak）。
色谱峰的位置反映了样品组分的保留时间，色谱峰的面积或高度反映了样品组分的含量或浓度。
将检测器信号随时间变化而绘制出来，就得到了一条色谱图（chromatogram）。
色谱图上可以看到不同的色谱峰，每个峰对应一个样品组分。
通过比较保留时间和色谱峰面积或高度，就可以对样品进行定性和定量分析。
二、HPLC仪器组成HPLC仪器主要由以下几个部分组成：溶剂供给系统（solvent delivery system）：负责提供恒定压力和流速的流动相，并将溶剂混合成所需比例。
高效液相色谱法实验报告
高效液相色谱法实验报告高效液相色谱法实验报告导言：高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）是一种重要的分析技术，广泛应用于化学、生物、医药等领域。
本实验旨在通过HPLC技术对某种药物样品进行分析，并探讨其应用的可行性和优势。
实验方法：1. 仪器设备：HPLC仪、色谱柱、样品溶液、流动相、检测器等。
2. 实验步骤：a. 样品制备：将药物样品粉末溶解于适当的溶剂中，制备成一定浓度的样品溶液。
b. 色谱柱准备：根据样品特性选择合适的色谱柱，并进行柱平衡处理。
c. 流动相制备：根据样品特性选择合适的流动相组成，并进行气泡排除和气体除湿处理。
d. 参数设置：根据样品特性和实验要求，设置适当的流速、温度、检测波长等参数。
e. 样品注射：使用自动进样器或手动注射器将样品溶液注入色谱柱。
f. 数据采集：通过检测器采集样品在色谱柱中的峰值信号，并记录相关数据。
g. 数据处理：利用计算机软件对采集的数据进行峰面积计算、峰高度计算等处理。
实验结果：通过HPLC技术对药物样品进行分析，得到了以下结果：1. 样品在色谱柱中产生了明确的峰值信号，峰形对称且峰高度适中。
2. 根据峰面积计算，得到了样品的浓度为X mg/mL。
3. 通过与标准品的比对，确认了样品的成分和含量。
讨论：1. HPLC技术在药物分析中的应用优势：a. 高灵敏度：HPLC技术能够检测到极低浓度的物质，对于药物分析中微量成分的检测非常重要。
b. 高选择性：通过调整流动相的组成和色谱柱的特性，可以实现对复杂样品中不同成分的分离和检测。
c. 高分辨率：HPLC技术能够有效地分离样品中的各个成分，提供准确的分析结果。
d. 自动化程度高：HPLC仪器配备了自动进样器和数据采集系统，能够实现实验过程的自动化操作和数据处理，提高了实验效率和准确性。
2. 实验中可能存在的误差和改进方法：a. 样品制备过程中的误差：药物样品的溶解度、稳定性等因素可能会对实验结果产生影响。
实例解析——高效液相色谱(HPLC)
实例解一一高效液相色谱(HPLC)一、原理利用不同物质在两相中(液液、液固、离子交换、尺寸排阻)具有不同的分配系数，当二者相对运动时候，物质在两相中反复多次分配，从而使得物质得到完全分离二、适用范围高沸点、热不稳定的天然产物、生物大分子、高分子化合物、离子型样品、生化样品三、特点高压、高效、高灵敏度四、仪器组成流动液贮存提供脱气，输液系统、进样系统、分离系统、检测系统，控制记录系统贮液瓶、高压泵、进样器、分离柱、检测器、记录仪五、仪器选择由实验条件确定是选用二元高压还是四元低压、一般来说，二元高压的准确度较高。
四元低压是先将样品按比例混合再泵入，而二元高压是先泵入不同比例的溶剂再混合。
确定采用的脱气系统，一般采用在线脱气。
确定进样方式，人工手动六通阀进样，还是进样针自动进样，一个适用于少量样品，一个适用于大量样品。
选择检测器，如果是有较强的紫外吸收的可用紫外可见检测器(二极管阵列检测器)，如果是芳香族化合物，可选用荧光检测器，对于离子可采用电导检测器。
六、实验条件优化配置待测物质的标准溶液1、色谱柱的确定分析样本确定是采用何种类型的色谱柱(1)分配色谱，两项间分配系数流动相选用极性的物质(甲醇、乙腈、水)则固定相选择非极性物质。
一般用C18 ODS 柱。
(2)吸附色谱，(3)离子交换色谱各种离子与树脂上交换集团的交换能力不同。
固定相：离子交换树脂，流动相为无机酸、无机碱。
常用于分离离子或者可解离的化合物(4)排阻色谱法配置含待测物质的标准品溶液，采用不同C18柱分离，检测，对照不同色谱图像，可得到分离效能最高的色谱柱2、最佳流动相梯度洗脱程序的确定梯度洗脱：按照一定的程度，不断改变流动相中个溶剂组成的比例以改变流动相的极性。
将色谱柱上不同的组分洗脱出来。
配置不同的梯度洗脱方案，用标准溶液进行试验，并选取能达到最高分离效能的梯度洗过方案作为最佳流动相梯度洗脱程序3、流动相的确定在分离效能相似条件下选择更经济、毒性小的流动相4、流速确定流速太大，待分离组分来不及与固定相充分作用，故其中的组分较易被洗脱下来，出峰时间变短，而且柱压比较高，会引起泵负荷的增加，进而导致色谱柱的使用命的缩短，色谱峰的分离度变差。
高效液相色谱实验报告
高效液相色谱实验报告一、实验目的。
本实验旨在通过高效液相色谱技术，对给定的混合物进行分离和分析，掌握高效液相色谱仪的操作方法，以及对不同成分的定量分析。
二、实验原理。
高效液相色谱（HPLC）是一种高效、灵敏、准确的分析技术，它利用高压泵将样品溶液以高压送入色谱柱，通过与填料相互作用而进行分离。
在色谱柱中，不同成分将因其在填料中的亲和力不同而被分离开来。
通过检测器检测各个组分的峰面积或峰高，从而进行定量分析。
三、实验步骤。
1. 样品制备，将待分析的混合物溶解于适当的溶剂中，并进行过滤处理。
2. 色谱柱准备，连接色谱柱，并进行平衡处理。
3. 仪器调试，将色谱仪的流动相、检测器等参数进行调试。
4. 样品进样，将处理好的样品通过自动进样器送入色谱柱。
5. 数据采集，通过色谱仪软件进行数据采集和记录。
6. 数据分析，根据色谱图进行各组分的峰识别和定量分析。
四、实验结果。
通过本次实验，我们成功地对给定的混合物进行了分离和定量分析。
得到了混合物中各组分的峰面积和峰高，并通过标准曲线进行了定量分析。
实验结果表明，本实验的色谱分离效果良好，各组分分离度高，定量分析结果准确可靠。
五、实验总结。
通过本次实验，我们掌握了高效液相色谱技木的基本操作方法，了解了色谱柱的选择和调试、样品的制备和进样、数据采集和分析等基本步骤。
同时，我们也认识到了高效液相色谱技术在化学分析中的重要性和广泛应用性。
希望通过今后的实验操作，能够进一步提高我们的操作技术和分析能力。
六、参考文献。
1. Skoog, D. A., Holler, F. J., & Crouch, S. R. (2017). Principles of instrumental analysis. Cengage Learning.2. Snyder, L. R., Kirkland, J. J., & Glajch, J. L. (2011). Practical HPLC method development. John Wiley & Sons.以上就是本次高效液相色谱实验的全部内容，希望对大家有所帮助。
高效液相色谱实验报告
高效液相色谱实验报告引言：高效液相色谱(HPLC)是一种基于溶液动力学的分析方法，广泛应用于药学、化学、生物学等领域。
本实验旨在通过HPLC技术，分离和鉴定复杂混合物中的化合物，并探究其分离机制。
实验方法：1. 样品制备：取一定比例的复杂混合物样品，将其溶解于合适的溶剂中，得到均匀的样品溶液。
2. 色谱柱选择：根据样品性质和分离目标，选择合适的色谱柱和填料。
3. 流动相选择：根据样品溶解度和分离效果，选择合适的流动相组成和pH值。
4. 色谱条件设置：设置适当的进样量、流速和温度等参数，优化分析条件。
5. 样品进样：通过自动进样器将样品溶液注入色谱柱。
6. 梯度洗脱：通过调节流动相组成或浓度梯度，实现目标化合物的分离。
7. 检测器选择：根据样品性质和目标化合物的特征，选择合适的检测器。
8. 数据分析：利用色谱软件分析检测到的信号，得到峰面积和保留时间等参数。
实验结果：本实验以植物提取物为样品，以色谱柱A为分离柱，以甲醇-水（70:30）为流动相，在室温下进行HPLC分析。
优化的分析条件为：进样量为10 μL、流速为1 mL/min、检测波长为254 nm。
在色谱图中，观察到多个峰出现，对比标准品峰的保留时间和UV-Vis吸收谱与该峰相似度，结合质谱分析，成功鉴定了4种化合物：峰1为黄酮类化合物，峰2为苯丙素类化合物，峰3为生物碱类化合物，峰4为酚类化合物。
讨论：通过本实验，我们可以看到HPLC技术的优势和应用价值。
首先，HPLC可以对复杂混合物进行高效、准确的分离和定量分析，为后续鉴定提供了重要数据。
其次，HPLC操作简便，结果可靠，且可适用于不同种类的样品。
此外，优化实验条件对提高分析效果至关重要，需要通过不断试验和调整，找到最佳条件。
然而，HPLC仍存在一些局限性。
首先，HPLC分析所需的仪器设备和耗材相对昂贵，需要较高的投资成本。
其次，样品制备和前处理过程可能引入误差，影响分析结果的准确性。
高效液相色谱(HPLC)
6、HPLC分析中的动力学因素
在HPLC中, 液体的扩散系数仅为气体的万分之一，则速率方 程中的分子扩散项B/u较小，可以忽略不计，即： H=A+Cu 故液相色谱H-u曲线与气相色谱的形状不同
五、高效液相色谱的分析的操作
1、准备流动相： 过滤，脱气 2、试样处理： 过滤，除去不溶于流动相的无机物 3、进样：
2.2 高效液相色谱与气相色谱的区别
相同之处：兼具分离和分析功能，均可以在线检测 主要差别：分析对象的差别和流动相的差别
1
分析对象差别
HPLC
GC
能气化、热稳定性好、且沸点较低 的样品 高沸点、挥发性差、热稳定性差、 离子型及高聚物的样品不可检测 占有机物的20%
溶解后能制成溶液的样品 不受样品挥发性和热稳定性的限制 分子量大、难气化、热稳定性差及 高分子和离子型样品均可检测 用途广泛，占有机物的80%
可对80%的有机化合物进行分离和分析。
2.4 高效液相色谱法的局限性
1
在高效液相色谱法中，使用多种溶剂作为流动相，当进 行分析时所需成本高于气相色谱法，且易引起环境污染。 高效液相色谱法中缺少如气相色谱法中使用的通用型检测 器（如TCD和FID）。 高效液相色谱法不能替代气相色谱法，去完成要求柱效高 达10万块理论塔板以上，必须用毛细管气相色谱法分析组 成复杂的具有多种沸程的石油产品。 高效液相色谱法也不能代替中、低压柱色谱法，在200 kPa至1MPa柱压下去分析受压易分解、变形的具有生物活 性的生化样品。
2
高压、高速
由于高压输液泵的使用，相对于经典液相（柱）色谱，其分析时间大大缩短。完 成一个样品的分析仅需几分钟到几十分钟。
3
检测灵敏度高
在高效液相色谱法中使用的检测器大多数都具有较高的灵敏度。如紫外吸收检测器 最小检出量可达10-9g；用于痕量分析的荧光检测器，最小检出量可达10-12g。
高效液相色谱分析法HPLC
高效液相色谱法与经典液相色谱法比较
高效液相色谱法比起经典液相色谱法的最大优点在于： 高速、高效、高灵敏度、高自动化
高效液相色谱法与气相色谱法比较
分析对象
GC：只限于分析气体和沸点较低的化合物（占有机物总数的20％） HPLC：可分析高沸点、热稳定性差、摩尔质量大的物质（占有机物
总数近80％）
液相色谱法分类
类型 吸附色谱 分配色谱 凝胶色谱 离子交换色谱 离子排斥色谱 离子对色谱 疏水作用色谱 手性色谱 亲和色谱
主要分离机理
主要分析对象或应用领域
吸附能，氢键 异构体分离、族分离，制备
疏水分配作用 各种有机化合物的分离、分析与制备
溶质分子大小 高分子分离，分子量及其分布的测定
库仑力
无机离子、有机离子分析
脱气方法：
真空泵抽滤脱气：单一溶剂 低溶性惰性气体导入替换:氦气 超声脱气 在线真空脱气 （On-line degasser）
实现流动相在进入高压泵前的连续在线脱气和过滤
2. 高压泵和梯度洗脱装置
(1) 高压输液泵
压力：150～350×105 Pa 作用：将流动相以稳定的流速或压力输送到色谱系统 对输液泵的基本要求
–要求填充速度快(防凝聚、沉降或结块)、且无空气进入(影响 填充均匀性)
5. 液相色谱检测器
• 溶质性检测器 (Solute Property Detectors )：只检测
色谱柱后流出液中组分的物理、化学性质的变化 • 紫外检测器 (UV Absorbance Detector ) • 荧光检测器 (Fluorescence Detector )
(2) 梯度洗脱装置
梯度洗脱(Gradient Elution or Solvent Programming):
高效液相色谱分析HPLC
高效液相色谱
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第7讲
高效液相色谱
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§3-4 液相色谱法固定相
色谱柱是色谱法的心脏，固定相及装柱技术是关键。 一、液-液色谱法及离子对色谱法固定相 1.全多孔型担体：直径小于10µm（75/-4） 2.表面多孔型担体，目前不用。 3.化学键合固定相（P76及P69） a.成相：用化学的方法通过化学键把有机分子结合 到担体表面。常用18碳柱 b.特点76/-5：4点. 4.分离机制77/2：既不是全部吸附过程，亦不是典型 的液-液分配过程，而是双重机制兼而有之，只是 按键合量的多少而各有侧重.
第7讲
高效液相色谱
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离子对色谱分离过程示意图
第7讲
高效液相色谱
第17页
五、离子色谱法 1.固定相:离子交换树脂 流动相:电解质溶液 检测器:电导检测器 主配件：抑制柱 2. 流程图：fig3-2 3.分离机制 （阴离子为例） a.双柱型：化学抑制型离子色谱法； b.单柱型：非抑制型，用低电导的洗脱液； 4.应用：从无机和有机阴离子到金属阳离子，从 有机阳离子到糖类、氨基酸等均可用该法分析.
高效液相色谱
第1页
第三章
高效液相色谱分析（HPLC）
§3-1高效液相色谱的特点 一、定义：液相色谱法是指流动相为液体的色谱 技术。 二、特点 1.高压: 可达150～350×105 Pa 2.高速: 例，分离20种氨基酸，经典色谱法要20 多小时，用HPLC只需1小时。 3.高效：3万塔板/米（GC2000塔板/米） 4.高灵敏度： 紫外检测器10-9 g 荧光检测器10-11g
高效液相色谱
第Байду номын сангаас页
第7讲
高效液相色谱
第7页
高效液相色谱HPLC简介.ppt
种连续多次交换过程。它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不
同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分离。
2
操作过程图示
3
色谱分离的机理
分离是一个 物理的过程。
固定相(Stationary Phase) 流动相(Mobile Phase) 样品 (溶解于流动相中的溶质)
4
项目 进样方式 流动相 分离原理 检测器
14
液-液分配色谱
固定相与流动相均为液体（互不相溶）； 基本原理：组分在固定相和流动相上的分配； 流动相：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定 液的极性（正相 normal phase），反之，流动相的极性大于固定液的极性 （反相 reverse phase）。正相与反相的出峰顺序相反； 固定相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用； 化学键合固定相：将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的 游离羟基上。反相键合相色谱柱最常用的就是ODS柱，也就是C18柱。
15
液相色谱类型
• 正相色谱：固定相为极性，流动相为非极性。 • 反相色谱：固定相为非极性，流动相为极性。用的最多，约占60～70％。
16
色谱柱简介
• 正相柱------固定相通常为硅胶以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2） 和氰基团（CN）的键合相填料。 由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他极性基团极性较强，因此，分离 的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色 谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如正已烷，氯仿，二氯 甲烷等。
9
检测器简介（二）
◆ 电导检测器（ECD） 原理：监测溶液的电导率变化的检测器。 特点：选择性检测器、测量时要求恒温、对流动相的组成变化有明显响应、 灵敏度低（10-3g）。适用于离子型化合物。
高效液相色谱技术分析
高效液相色谱技术分析一、概述高效液相色谱技术是目前分析化学中非常重要的一种分离、检测方法，其应用范围广泛，可以用于药物研究、食品安全、环境污染、生物化学等多个领域。
本文将对高效液相色谱技术进行详细解析，包括其基本原理、仪器设备、应用实例等方面的内容。
二、高效液相色谱技术的基本原理高效液相色谱技术本质上是一种液相色谱技术，其最大的特点是加入了固定化液相。
在传统的液相色谱技术中，液相是直接涂覆在固定相上的，但在高效液相色谱技术中，为了提高色谱分析的效率，常常采用小粒径、高孔径的固相材料作为载体，然后用一定的方法将液相固定在上面。
这种固相材料具有很好的化学稳定性、较大的表面积，可以大大提高分离的精度和速度。
高效液相色谱技术的基本原理是：将样品（物质混合物）经过预处理后，加入到经过固定化液相的柱子中，然后进行溶剂梯度洗脱。
不同成分会根据吸附力、分配系数等量而移动到固相柱某个位置处，从而完成分离和检测的过程。
三、高效液相色谱技术的主要仪器设备1. 高效液相色谱柱高效液相色谱柱是高效液相色谱仪的核心器件，其主要作用是分离洗脱样品中的组分。
市面上常见的柱子材料主要有C18、C8、C4等不同类型，根据分析需要选择不同类型的柱子可以获得更好的分离效果。
同时，考虑柱子长度、直径等因素也是仪器的主要参数。
2. 色谱系统高效液相色谱系统由进样器、泵、检测器、色谱柱等多个部分组成，其中，泵的作用是将流动相压力输送到柱子中，进样器用于自动或手动进样，检测器用于检测分离的组分及其浓度。
同时，为了避免进样到色谱柱之前的样品混合和体积效应，需加滤器、混合器等附件。
3. 检测器高效液相色谱检测器常见的有UV-Vis分光光度计、荧光检测器、光散射检测器等多种类型，这些检测器可以用于分析化学、生物化学等领域。
四、高效液相色谱技术的应用实例1. 分析药物高效液相色谱技术可以用于药物分析，如对丙磺舒钠等药物分析可采用该技术，可获得极好的分离效果和灵敏度。
高效液相色谱法测定艾司唑仑的物质
高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的分析方法，可以用于测定艾司唑仑的物质。
以下是测定步骤：
1. 准备试剂：流动相（乙腈：水，50：50），艾司唑仑标准品，色谱纯有机溶剂（如甲醇或乙腈），去离子水，色谱柱（C18柱）。
2. 配置标准溶液：将艾司唑仑标准品用流动相溶解，制备成一定浓度的标准溶液。
3. 进行色谱分析：将标准溶液注入液相色谱仪，以一定流速通过色谱柱，分离出艾司唑仑。
4. 检测：使用紫外检测器（UV detector）对艾司唑仑进行检测。
检测波长通常为229nm。
5. 记录色谱图：记录艾司唑仑的色谱峰及峰面积。
6. 进行定量分析：将标准溶液的浓度与对应的峰面积绘制成标准曲线。
通过待测样品中艾司唑仑的峰面积，根据标准曲线计算其浓度。
7. 进行定性分析：根据艾司唑仑的保留时间进行定性分析。
在相同条件下，待测样品中艾司唑仑的保留时间应与标准品的保留时间一致。
需要注意的是，在实验过程中要注意实验室环境的控制，避免交叉污染。
此外，实验过程中应严格遵守实验室安全规范，确保人员和设备的安全。
高效液相色谱实验报告
高效液相色谱实验报告高效液相色谱实验报告引言：高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的分析技术，广泛应用于药物分析、环境监测、食品安全等领域。
本实验旨在通过HPLC技术分析某种药物中的有效成分，并探讨其分析方法的可行性和准确性。
实验方法：1. 仪器及试剂准备：本实验采用Agilent 1200系列高效液相色谱仪，色谱柱为C18反相色谱柱。
试剂准备包括纯化水、甲醇、乙腈等有机溶剂，以及待测药物样品。
2. 样品制备：取待测药物样品10mg，加入10ml甲醇中，超声处理10分钟，离心沉淀，取上清液备用。
3. 色谱条件设置：流动相采用甲醇-水（60:40）的混合溶液，流速为1.0ml/min，柱温设定为25℃，检测波长为254nm。
4. 样品注射及分析：将样品注入进样器，设定注射体积为10μL，进行分析。
结果与讨论：通过HPLC分析，我们得到了待测药物中的有效成分的峰图，并计算出了其相对峰面积。
根据标准曲线的结果，可以进一步计算出待测药物中有效成分的浓度。
在本实验中，我们发现HPLC技术对于药物分析具有较高的准确性和灵敏度。
通过优化色谱条件，我们可以获得清晰的峰形和较低的噪音，从而提高分析结果的可靠性。
此外，我们还对样品的稳定性进行了研究。
将样品在不同温度下保存一段时间后，再进行HPLC分析，结果显示样品在低温下保存稳定性较好，而高温和阳光暴晒会导致有效成分的降解。
在实际应用中，HPLC技术可用于药物质量控制、环境监测和食品安全等领域。
例如，通过HPLC分析药物中的杂质含量，可以确保药物的质量符合标准；通过HPLC分析环境中的有害物质，可以及时发现和监测环境污染情况；通过HPLC分析食品中的添加剂和残留物，可以保障食品的安全性。
然而，HPLC技术也存在一些局限性。
首先，分析过程中需要一定的操作技巧和经验，对于初学者来说可能存在一定的困难。
高效液相色谱法实验报告
高效液相色谱法实验报告高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的分离和检测技术，被广泛应用于化学、生物和医药等领域。
以下是高效液相色谱法实验报告的示例：实验名称：高效液相色谱法分离和检测混合物一、实验目的1.学习高效液相色谱法的基本原理和实验操作；2.利用高效液相色谱法分离和检测混合物中的组分；3.分析实验数据，得出结论。
二、实验原理高效液相色谱法是一种基于色谱分离原理的检测技术。
样品中的组分在流动相和固定相之间的分配平衡，通过不同性质的固定相实现组分的分离。
在分离过程中，组分在色谱柱上的保留时间和洗脱顺序可用于定性分析，而组分的浓度或含量可通过检测器进行定量分析。
三、实验步骤1.准备试剂和仪器：选择合适的流动相、固定相、检测器等，确保仪器正常运行；2.配置样品：将待测混合物溶解于适当的溶剂中，制备成适当浓度的样品溶液；3.连接仪器：将流动相泵、色谱柱、检测器和数据采集系统连接起来，确保密封良好；4.平衡色谱柱：在开始进样之前，让色谱柱通过流动相进行平衡，使固定相达到稳定状态；5.进样分析：将样品溶液注入进样器中，由流动相带入色谱柱进行分离。
记录各个组分的保留时间和洗脱顺序；6.清洗色谱柱：实验结束后，用适量的流动相清洗色谱柱，以除去残留的样品组分；7.数据处理：对实验数据进行处理和分析，包括峰识别、定量和定性分析等。
四、实验结果与数据分析1.记录各个组分的保留时间和洗脱顺序；2.根据实验数据绘制色谱图，标注各个峰对应的组分；3.根据峰面积或峰高计算各个组分的浓度或含量；4.分析实验结果，与标准品进行比较，确定组分的性质。
五、结论根据实验结果和数据分析，得出以下结论：1.利用高效液相色谱法成功分离和检测了混合物中的各个组分；2.通过与标准品比较，确定了各个组分的性质；3.本实验表明高效液相色谱法是一种有效的分离和检测方法，可应用于实际生产和科研中。
分析化学高效液相色谱HPLC
5. 梯度洗脱
分配比 k 相差很大的复杂混合物用一种溶剂很难完全分开 可采用两种或两种以上极性不同但可以相互溶解的溶剂，随 时间按一定比例混合，连续改变洗脱剂的极性,离子强度或pH， 以便改变被测组分的相对保留值，达到提高分离效果，缩短分析 时间的目的
分析化学高效液相色谱HPLC
梯度洗脱装置分为两类：
手性试剂等，可分离非电离、弱电离、金属离子、手性异构 体
分析化学高效液相色谱HPLC
多环芳香烃的分析: 反相分配色谱法
固定相： 十八烷基SiO2, 薄壳型 流动相：20%CH3OH/H2O—
→100% CH3OH, 2%/min 流速：1mL/min 柱温：50℃ 紫外光度检测器（λ=254nm）
分析化学高效液相色谱HPLC
分析化学高效液相色谱HPLC
镇痛剂的分析—阴离子交换色谱法
固定相：强阴离子交换剂 流动相：pH 9.2+0.005mol/L NaNO3水溶液 流速：1.2mL/min 紫外光度检测器
分析化学高效液相色谱HPLC
§8.4 进展 ➢ 柱微型化 ➢ 高柱效 ➢ 高分辨率 ➢ 高选择性 ➢ 快速分离
分析化学高效液相色谱HPLC
分析化学高效液相色谱HPLC
流动相: 应 用:
GPC 水、四氢呋喃 聚合物的分级 生物聚合体（蛋白质，核酸，低聚糖, 多肽）的分离
分析化学高效液相色谱HPLC
§8.3 色谱分离方法的选择
了解样品的有关性质
样品的相对分子质量的大小 在水中和有机溶剂中的溶解度、极性和稳定程度 化学结构
✓ 应用 分离极性不同的化学物,同分异构体
不适用同系物的分离
分析化学高效液相色谱HPLC
3. 离子交换色谱
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实例解析——高效液相色谱(HPLC)
一、原理
利用不同物质在两相中（液液、液固、离子交换、尺寸排阻）具有不同的分配系数，当二者相对运动时候，物质在两相中反复多次分配，从而使得物质得到完全分离
二、适用范围
高沸点、热不稳定的天然产物、生物大分子、高分子化合物、离子型样品、生化样品三、特点
高压、高效、高灵敏度
四、仪器组成
流动液贮存提供脱气，输液系统、进样系统、分离系统、检测系统，控制记录系统贮液瓶、高压泵、进样器、分离柱、检测器、记录仪
五、仪器选择
由实验条件确定是选用二元高压还是四元低压、一般来说，二元高压的准确度较高。
四元低压是先将样品按比例混合再泵入，而二元高压是先泵入不同比例的溶剂再混合。
确定采用的脱气系统，一般采用在线脱气。
确定进样方式，人工手动六通阀进样，还是进样针自动进样，一个适用于少量样品，一个适用于大量样品。
选择检测器，如果是有较强的紫外吸收的可用紫外可见检测器(二极管阵列检测器)，如果是芳香族化合物，可选用荧光检测器，对于离子可采用电导检测器。
六、实验条件优化
配置待测物质的标准溶液
1、色谱柱的确定
分析样本确定是采用何种类型的色谱柱
(1)分配色谱，两项间分配系数
流动相选用极性的物质（甲醇、乙腈、水）则固定相选择非极性物质。
一般用
C18 ODS柱。
(2)吸附色谱，
(3)离子交换色谱
各种离子与树脂上交换集团的交换能力不同。
固定相：离子交换树脂，流动相
为无机酸、无机碱。
常用于分离离子或者可解离的化合物
(4)排阻色谱法
配置含待测物质的标准品溶液，采用不同C18柱分离，检测，对照不同色谱图像，可得到分离效能最高的色谱柱
2、最佳流动相梯度洗脱程序的确定
梯度洗脱：按照一定的程度，不断改变流动相中个溶剂组成的比例以改变流动相的
极性。
将色谱柱上不同的组分洗脱出来。
配置不同的梯度洗脱方案，用标准溶液进行试验，并选取能达到最高分离效能的梯
度洗过方案作为最佳流动相梯度洗脱程序
3、流动相的确定
在分离效能相似条件下选择更经济、毒性小的流动相
4、流速确定
流速太大，待分离组分来不及与固定相充分作用，故其中的组分较易被洗脱下来，出峰时间变短，而且柱压比较高，会引起泵负荷的增加，进而导致色谱柱的使用命
的缩短，色谱峰的分离度变差。
流动相流速太低时，会导致
色谱柱柱效降低，使得待测物质难洗脱，各个组分保留时间延长，容易引起色谱
峰变形或者导致色谱峰拖尾严重。
用不同梯度的流速实验确定最佳流速
5、柱温确定
柱温太低会导致色谱组分在两相中的扩散速度大为减小，分配不能迅速平衡，峰变
宽，柱效下降，延长分析时间。
但温度过高，出峰过快，可能会导致峰重叠。
设置
温度梯度进行试验，确定最佳温度
6、对于二极管阵列检测器确定最佳检测波长
测定在不同待测物质最大吸收波长下标准样的出峰情况，选择能使大部分标准样品
出峰的波长作为最佳波长
七、方法评定
(1)确定色谱条件后的色谱
(2)测定分离度R是否符合要求，测定拖尾因子T是否符合要求
(3)侧定不同待测物质的标准曲线
(4)验证该方法的精密度RSD是否在2%以内
八、定性分析
九、定性分析
在最优条件下测定试样中待测组分的谱线情况
1、和和文献相比较，比较保留时间初步确定是否含有待测物质
2、在相同测定条件下，在待测样品中加入可能含有的待测物质的标准样品，测定谱线，
如果在向应保留时间处的峰增高，则可证明该物质的存在
3、和具有定性分析的仪器相连用，例如傅立叶变换红外（FTIR）、质谱(MS)进行检测。
十、定量分析
测量不同质量的标准物的谱线，用公式f=m/s得到待测物质的绝对校正因子
在确定待测物质之后，选择采用的定量分析方法：标准曲线法，内标法，标准加入法
1、标准曲线法（外标法）
用对照物质配制一系列浓度的对照品溶液确定工作曲线，求出斜率、截距。
在完全
相同的条件下，准确进样与对照品溶液相同体积的样品溶液，根据待测组分的信号，从标准曲线上查出其浓度，或用回归方程计算，工作曲线法也可以用外标二点法代
替。
特点：操作和计算简便，不必用校正因子，但要求色谱操作条件稳定，进样重现
性好。
2、归一化法
测定不同纯标准样品的相对质量校正因子Fi，Xi%=FiAi/∑FiAi×100%，可以不需要
知道进样量。
但是需要：1、各组分都应流出，且检测器有信号2、与进样量无关3、
不用标样4、简单
3、内标法
在用内标法做色谱定量分析时，先配制不同重量比的被测组分和内标样品的混合物
做色谱分析，测量峰面积，做重量比和面积比的关系曲线，此曲线即为标准曲线。
在实际样品分析时所采用的色谱条件应尽可能与制作标准曲线时所用的一致。
内标物的选择：
（1）试样中不含有该物质；
（2）与被测组分性质比较接近；
（3）不与试样发生化学反应
（4）出峰位置应位于被测组分附近。
十一、质量控制和保证
1、检出限
最小检出限(Detection Limit或Limit of Detection)一般是指特定分析方法在给定的置信度区间内可以从样品中检出待测物质的最小浓度或最小含量，通常规定为信号值是噪音的3倍(S/N=3)。
2、回收率
加入一定已知量的标准物质测定其回收率对方法的准确度进行评价。
看是否符合要求。