捻转血矛线虫NADH：泛醌氧化还原酶结构域包含蛋白基因的克隆表达及功能分析
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畜牧兽医学报 2017，48（4）：722-730
ActaVeterinariaetZootechnicaSinica
doi：10.11843/j.issn.0366-6964.2017.04.016
捻转包血含矛蛋线白虫基N因AD的H克：泛隆醌表氧达化及还功原能酶分结析构域
吴玲燕，王玉俭，温玉玲，严若峰，徐立新，宋小凯，李祥瑞*
关键词：捻转血矛线虫；山羊 泛 ；NADH： 醌氧化还原酶结构域包含蛋白；外周血单个核细胞
中图分类号：S852.731
文献标志码：A
文 章 编 号 ：0366-6964（2017）04-0722-09
Cloning，ExpressionandFunctionAnalysisofNADH：Ubiquinone OxidoreductaseDomainContainingProteininHaemonchuscontortus
白 质 与 细 胞 的 结 合 情 况 ；以 不 同 质 量 浓 度 （0、10、20、40μg·mL-1）重 组 蛋 白 质 刺 激 细 胞 ，测 定 其 对 细 胞 增 殖 、细 胞
迁移和 NO分泌的影响。结果表明，重组蛋白质能够有效刺激细胞增殖，显著提高细胞迁移能力以及增加 NO 的
分泌。可见 NDUDC蛋白具有较强的抗原性，可刺激细胞发挥免疫功能。
（南京农业大学动物医学院，南京 210095）
摘 要：选取捻转血矛线虫 泛 NADH： 醌氧化还原酶结构域包含蛋白 基 （NDUDC） 因进行克隆表达，并对其功能进
行研究。采用 RT-PCR方法对 NDUDC 基因进行克隆，构建表达载体得到重组蛋白质，Westernblot分析蛋白质
的抗原特性；采血分离山羊外周血单个核细胞 与 （PBMCs） 重组蛋白质共培养，利用间接免疫荧光试验检验重组蛋
收 稿 日 期 ：2016-11-02
基金项目：国家重点基础发展研究计划（973计划 江 ）（2015CB150300）； 苏高校优势学科资助项目（PAPD）
作者简介：吴玲燕 女 （1992-）， ，江苏南京人，硕士研究生，主要从事寄生虫分子与免疫方面研究，E-mail：2014107055@njau.edu.cn
（Haemonchus），
牛、羊等反刍动物一种常见的胃肠道寄生性线虫，主
要寄 生 于 皱 胃，偶 见 于 小 肠，以 吸 食 宿 主 血 液 为
生 可， [1] 引起宿主皱胃黏膜的出血、损伤、发炎，影响
宿主物质代谢，进而导致患畜贫血、腹泻、消瘦，严重
者甚至可致患畜死亡 给， [2] 我国畜牧业的发展带来
Abstract：ThegeneofNADH：ubiquinoneoxidoreductasedomaincontainingprotein （NDUDC）of Haemonchuscontortuswasselectedtoclone，express，andthefunctionsofthisproteinwerestudiedinthispaper.ThegeneofNDUDC wasclonedbyRT-PCR，thenexpressionvectorwasconstructedtoobtaintherecombinantprotein.Theantigenicityoftheproteinwasanalyzedby Westernblot.Peripheralblood mononuclearcells （PBMCs）wereseparatedfrom goatandculturedin vitro withtherecombinantNDUDCtocheckthebindingoftheproteintoPBMCsbyindirectimmunofluorescenceassay.Differentconcentrations （0，10，20，40μg·mL-1）oftherecombinant proteinwereusedtostimulatePBMCs，andtheeffectsofcellproliferation，cellmigrationand NOsecretionweretested.TheresultsshowedthattherecombinantproteinNDUDCcouldstimulatecellproliferationeffectively，alsosignificantlyenhancecellmigrationandincreasethesecretionofNO.TheseresultsindicatethatNDUDCproteinhasstrongantigenicity，andcanstimulate cellstoexertimmunefunction. Keywords：Haemonchuscontortus；goat；NADH：ubiquinoneoxidoreductasedomaincontaining protein；peripheralblood mononuclearcells
WU Ling-yan，WANG Yu-jian，WEN Yu-ling，YAN Ruo-feng， XU Li-xin，SONG Xiao-kai，LIXiang-rui*
（CollegeofVeterinary Medicine，NanjingAgriculturalUniversity，Nanjing210095，China）
巨大经济损失。
排泄分 泌 抗 原 （excretoryandsecretoryprod-
ห้องสมุดไป่ตู้
是 ucts，ESPs） 虫体的代谢分泌产物 包， [3] 括多种蛋
通信作者 李祥瑞 教授 *
：
（1958-）， ，E-mail：lixiangrui@njau.edu.cn
4期 吴玲燕等：捻转血矛线虫 泛 NADH： 醌氧化还原酶结构域包含蛋白基因的克隆表达及功能分析 723
捻转血矛线虫 隶属毛 （Haemonchuscontortus）
圆科 血矛属 是 （Trichostrongylidae）
ActaVeterinariaetZootechnicaSinica
doi：10.11843/j.issn.0366-6964.2017.04.016
捻转包血含矛蛋线白虫基N因AD的H克：泛隆醌表氧达化及还功原能酶分结析构域
吴玲燕，王玉俭，温玉玲，严若峰，徐立新，宋小凯，李祥瑞*
关键词：捻转血矛线虫；山羊 泛 ；NADH： 醌氧化还原酶结构域包含蛋白；外周血单个核细胞
中图分类号：S852.731
文献标志码：A
文 章 编 号 ：0366-6964（2017）04-0722-09
Cloning，ExpressionandFunctionAnalysisofNADH：Ubiquinone OxidoreductaseDomainContainingProteininHaemonchuscontortus
白 质 与 细 胞 的 结 合 情 况 ；以 不 同 质 量 浓 度 （0、10、20、40μg·mL-1）重 组 蛋 白 质 刺 激 细 胞 ，测 定 其 对 细 胞 增 殖 、细 胞
迁移和 NO分泌的影响。结果表明，重组蛋白质能够有效刺激细胞增殖，显著提高细胞迁移能力以及增加 NO 的
分泌。可见 NDUDC蛋白具有较强的抗原性，可刺激细胞发挥免疫功能。
（南京农业大学动物医学院，南京 210095）
摘 要：选取捻转血矛线虫 泛 NADH： 醌氧化还原酶结构域包含蛋白 基 （NDUDC） 因进行克隆表达，并对其功能进
行研究。采用 RT-PCR方法对 NDUDC 基因进行克隆，构建表达载体得到重组蛋白质，Westernblot分析蛋白质
的抗原特性；采血分离山羊外周血单个核细胞 与 （PBMCs） 重组蛋白质共培养，利用间接免疫荧光试验检验重组蛋
收 稿 日 期 ：2016-11-02
基金项目：国家重点基础发展研究计划（973计划 江 ）（2015CB150300）； 苏高校优势学科资助项目（PAPD）
作者简介：吴玲燕 女 （1992-）， ，江苏南京人，硕士研究生，主要从事寄生虫分子与免疫方面研究，E-mail：2014107055@njau.edu.cn
（Haemonchus），
牛、羊等反刍动物一种常见的胃肠道寄生性线虫，主
要寄 生 于 皱 胃，偶 见 于 小 肠，以 吸 食 宿 主 血 液 为
生 可， [1] 引起宿主皱胃黏膜的出血、损伤、发炎，影响
宿主物质代谢，进而导致患畜贫血、腹泻、消瘦，严重
者甚至可致患畜死亡 给， [2] 我国畜牧业的发展带来
Abstract：ThegeneofNADH：ubiquinoneoxidoreductasedomaincontainingprotein （NDUDC）of Haemonchuscontortuswasselectedtoclone，express，andthefunctionsofthisproteinwerestudiedinthispaper.ThegeneofNDUDC wasclonedbyRT-PCR，thenexpressionvectorwasconstructedtoobtaintherecombinantprotein.Theantigenicityoftheproteinwasanalyzedby Westernblot.Peripheralblood mononuclearcells （PBMCs）wereseparatedfrom goatandculturedin vitro withtherecombinantNDUDCtocheckthebindingoftheproteintoPBMCsbyindirectimmunofluorescenceassay.Differentconcentrations （0，10，20，40μg·mL-1）oftherecombinant proteinwereusedtostimulatePBMCs，andtheeffectsofcellproliferation，cellmigrationand NOsecretionweretested.TheresultsshowedthattherecombinantproteinNDUDCcouldstimulatecellproliferationeffectively，alsosignificantlyenhancecellmigrationandincreasethesecretionofNO.TheseresultsindicatethatNDUDCproteinhasstrongantigenicity，andcanstimulate cellstoexertimmunefunction. Keywords：Haemonchuscontortus；goat；NADH：ubiquinoneoxidoreductasedomaincontaining protein；peripheralblood mononuclearcells
WU Ling-yan，WANG Yu-jian，WEN Yu-ling，YAN Ruo-feng， XU Li-xin，SONG Xiao-kai，LIXiang-rui*
（CollegeofVeterinary Medicine，NanjingAgriculturalUniversity，Nanjing210095，China）
巨大经济损失。
排泄分 泌 抗 原 （excretoryandsecretoryprod-
ห้องสมุดไป่ตู้
是 ucts，ESPs） 虫体的代谢分泌产物 包， [3] 括多种蛋
通信作者 李祥瑞 教授 *
：
（1958-）， ，E-mail：lixiangrui@njau.edu.cn
4期 吴玲燕等：捻转血矛线虫 泛 NADH： 醌氧化还原酶结构域包含蛋白基因的克隆表达及功能分析 723
捻转血矛线虫 隶属毛 （Haemonchuscontortus）
圆科 血矛属 是 （Trichostrongylidae）