捻转血矛线虫NADH：泛醌氧化还原酶结构域包含蛋白基因的克隆表达及功能分析
捻转血矛线虫ZJ株15kD分泌排泄蛋白基因的克隆及在大肠杆菌中的表达
捻转血矛线虫ZJ株15kD分泌排泄蛋白基因的克隆及在大肠杆菌中的表达杜爱芳;李孝军;侯玉慧【期刊名称】《农业生物技术学报》【年(卷),期】2005(13)5【摘要】捻转血矛线虫主要寄生于反刍动物尤其是绵羊的胃内，可引起宿主贫血，抵抗力下降甚至死亡，周期性服药和粪检是当今主要控制方法。
但耐药株的出现影响了这种策略的效果，因此人们正致力于疫苗的研究（Knox and Smith，2001）。
捻转血矛线虫ES抗原具有双重免疫学功能，一方面，ES抗原与宿主免疫系统直接接触，是最容易刺激机体产生免疫反应的抗原，因而是制备免疫原的理想材料（Bakker et a1．，2004）。
另一方面ES抗原是灵敏度特异性强的检测抗原，可测出自然感染1～2条以上捻转血矛线虫的抗体且不与其它虫的抗体发生反应。
【总页数】2页(P688-689)【作者】杜爱芳;李孝军;侯玉慧【作者单位】浙江大学动物预防医学研究所,杭州,310029;浙江大学动物预防医学研究所,杭州,310029;浙江大学动物预防医学研究所,杭州,310029【正文语种】中文【中图分类】S8【相关文献】1.两株大蒜病毒外壳蛋白基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 [J], 马筠;杨恭;徐绍华;魏军亚;邱并生2.番鸭呼肠孤病毒ZJ99株σC基因的序列分析及其在大肠杆菌中的表达 [J], 余旭平;何世成;朱军莉;金俊杰;郑新添3.捻转血矛线虫(H.contortus)ZJ株H11蛋白基因的克隆及序列分析 [J], 杜爱芳;李孝军;侯玉慧;王素华4.结核分支杆菌MPT83蛋白基因在大肠杆菌表达载体中的克隆、表达与鉴定 [J], 尤敏;邓小波;崔尚金5.捻转血矛线虫ZJ株24000分泌排泄(ES)蛋白基因的克隆和序列分析 [J], 杜爱芳;李孝军;王素华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
捻转血矛线虫免疫调节型DNA疫苗的构建及在山羊体内表达研究
捻转血矛线虫免疫调节型DNA疫苗的构建及在山羊体内表达研究严若峰;赵光伟;徐立新;孙延鸣;李祥瑞【期刊名称】《畜牧兽医学报》【年(卷),期】2007(38)9【摘要】为构建免疫调节型DNA疫苗,将山羊IL-2基因分别与捻转血矛线虫H11-1、H11-2和H11-3基因串联构建融合表达载体pcDNA/IL-2-H11-1、pcDNA/IL-2-H11-2和pcDNA/IL-2-H11-3.为检测疫苗在山羊体内的表达情况,将纯化的疫苗质粒肌肉注射山羊后取注射部位肌肉组织,于首次免疫7 d后和二次免疫10 d后分别用RT-PCR和Western Blot等方法检测H11抗原的转录和翻译情况.结果发现H11基因和IL-2基因均能在注射部位肌肉获得转录和翻译.【总页数】5页(P954-958)【作者】严若峰;赵光伟;徐立新;孙延鸣;李祥瑞【作者单位】南京农业大学动物医学院,南京,210095;南京农业大学动物医学院,南京,210095;南京农业大学动物医学院,南京,210095;南京农业大学动物医学院,南京,210095;南京农业大学动物医学院,南京,210095【正文语种】中文【中图分类】S852.731【相关文献】1.捻转血矛线虫DNA疫苗的构建及山羊免疫保护性试验 [J], 严若峰;徐立新;孙延鸣;赵光伟;李祥瑞2.体内电穿孔对载体表达效率和人类免疫缺陷病毒1型DNA 疫苗免疫反应效果的研究 [J], 刘强;王文波;黄维金;邵荣光;王佑春3.杜氏利什曼原虫热休克蛋白70的DNA疫苗表达载体构建及体内应答研究 [J], 成军;斯崇文;王勤环4.可复制型抗肿瘤DNA疫苗PSCK-2PFcGB的构建及体内外表达 [J], 张亮;阎瑾琦;王越;肖毅;高昆;董金凯;王博;于继云5.捻转血矛线虫肌动蛋白基因的克隆与表达及其DNA疫苗的构建 [J], 严若峰;闫峰宾;王晶晶;徐立新;宋小凯;李祥瑞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
捻转血矛线虫过氧化物酶基因的克隆和5种蛋白的抗原特性分析的开题报告
捻转血矛线虫过氧化物酶基因的克隆和5种蛋白的抗原特性分析的开题报告一、研究背景和意义血矛线虫病是由血矛线虫（Haemonchus contortus）引起的一种寄生虫病，是世界范围内绵羊、山羊和牛等重要畜牧业动物的主要寄生虫病之一，对畜牧业造成了重大经济负担。
目前，农业部已将其列为重点监测寄生虫。
传统的血吸虫病疫苗防治方法的局限性逐渐显现，因此发展新型的疫苗防治手段成为解决血矛线虫病防治现状的重要途径之一。
过氧化物酶（peroxidase）在多种生物体中存在，具有多种生物学功能。
已有研究表明，血矛线虫过氧化物酶可以作为疫苗候选抗原，并在动物体内有一定的免疫保护作用。
因此，深入探究血矛线虫过氧化物酶的分子特性及其抗原性有助于寻找更有效的防治血矛线虫病新途径。
二、研究内容1. 捻转血矛线虫过氧化物酶基因的克隆：通过PCR方法，获取血矛线虫的总RNA，进一步从RNA中克隆目标基因，并进行测序及生物信息学分析，确定其基因组序列。
2. 血矛线虫过氧化物酶基因的表达及纯化：将基因克隆至表达载体中，在大肠杆菌中进行表达，并进行线性梯度盐析纯化方法进行纯化。
3. 抗原特性分析：通过Western blot和ELISA等方法，检测不同浓度的纯化过的过氧化物酶及其多种蛋白与雌性马和绵羊血清之间的反应，分析其抗原特性。
4. 蛋白生物活性测定：通过荧光素一二磷酸比色法测定过氧化物酶的活性，评估其生物学功能。
三、研究方法1. PCR方法：利用yPCR技术，通过一对特异性引物对血矛过氧化物酶基因进行PCR扩增，针对扩增产物进行生物信息学分析。
2. 表达载体的构建和转化：将扩增后的基因片段插入至表达载体中，转化至大肠杆菌中进行表达。
3. 大肠杆菌菌液的处理：利用超声破碎法及尿素淋洗法等方法进行大肠杆菌菌液的处理。
4. 过氧化物酶的纯化：利用线性梯度盐析纯化方法进行过氧化物酶的纯化。
5. Western blot分析：根据蛋白电泳原理，利用Western blot进行血清样品的检测分析。
捻转血矛线虫脂肪酶基因表达与生物学特性分析
捻转血矛线虫脂肪酶基因表达与生物学特性分析周丽娜;胡孟娟;孙伟;李祥瑞;徐立新;宋小凯;严若峰【期刊名称】《畜牧兽医学报》【年(卷),期】2018(049)003【摘要】To study the biological character of Lipase from Haemonchus contortus,the lipase gene of H.contortus preserved in our laboratory was cloned by PCR,and then expressed in procaryotic expression system.The expression vector was constructed to obtain the fusion protein.The antigenicity of the protein was analyzed by Western blot.The Lipase activity of the fusion protein was detected by esterase reaction.The location of the protein was tested by the indirect immunofluorescence.The transcription of lipase in different stages of H.contortus was detected by real-time quantification PCR.The results showed that the gene fragment encoding Lipase (without signal peptide region) sized as 864 bp.The recombinant protein weighted as 50 kD was fusion expressed.The fusion protein had highest lipase enzyme activity under 37 ℃ and pH7.Hc-Lipase was localized at outer and inter membrane as well as the intestinal tracts of adult worms.The expression of Hc-Lipase was higher in the male than other stages.It is indicated that Lipase from H.contortus could play important roles in worm development and modulation of the host immunity.Therefore,it is expected that Hc-Lipase could be a new target in prevention and therapy of Haemonchosis.%选取捻转血矛线虫脂肪酶(Lipase)进行基因克隆、表达并对其生物学特性进行探究.PCR克隆捻转血矛线虫lipase基因,构建表达载体,获得融合蛋白质,采用Western blot检测该蛋白质的抗原特性;酯类酶解反应检测该融合蛋白质脂肪酶活性;实时定量PCR检测该基因在捻转血矛线虫不同发育阶段的转录情况;间接免疫荧光试验检验该抗原蛋白质在虫体组织的定位情况.结果表明,去除lipase基因信号肽序列后,基因片段长864 bp,融合蛋白质大小50 ku;该融合蛋白质在37℃左右、pH为7的条件下酶活力最高;雄性成虫lipase转录量相对虫体其他阶段最高;该抗原蛋白质主要表达于虫体表皮和肠腔.Lipase具有较好的抗原性,可能与捻转血矛线虫发育和宿主免疫调节有关,深入研究捻转血矛线虫Lipase的特性对寻找新的免疫保护性抗原和药物靶标具有意义.【总页数】8页(P580-587)【作者】周丽娜;胡孟娟;孙伟;李祥瑞;徐立新;宋小凯;严若峰【作者单位】南京农业大学动物医学院,南京210095;南京农业大学动物医学院,南京210095;南京农业大学动物医学院,南京210095;南京农业大学动物医学院,南京210095;南京农业大学动物医学院,南京210095;南京农业大学动物医学院,南京210095;南京农业大学动物医学院,南京210095【正文语种】中文【中图分类】S852.731【相关文献】1.捻转血矛线虫保护性抗原H11 cDNA克隆及特性分析 [J], 严若峰;李祥瑞2.泛酸干预脂肪甘油三酯脂肪酶和长链脂酰辅酶 A合成酶1基因表达对鹅生长和脂类代谢的反向调控 [J], 孔敏;王宝维;葛文华;张名爱;马传兴;张肖3.鹅脂肪甘油三酯脂肪酶和长链脂酰辅酶 A合成酶1基因表达差异及其对脂肪沉积和血清脂类代谢的调控 [J], 王宝维;孔敏;葛文华;张名爱;马传兴;张肖4.牦牛肉品质相关的去饱和脂肪酶1基因表达\r差异分析 [J], 谢凤莲;孙万成;罗毅皓5.捻转血矛线虫新基因Hcher-1的克隆与特性分析 [J], 张志凯;徐立新;宋小凯;李祥瑞;严若峰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
多重PCR检测捻转血矛线虫苯并咪唑类药物抗性等位基因
多重PCR检测捻转血矛线虫苯并咪唑类药物抗性等位基因薄新文;李祥瑞【期刊名称】《中国农业科学》【年(卷),期】2005(038)004【摘要】利用GenBank发表的捻转血矛线虫β微管蛋白基因组DNA序列设计2对引物,建立检测捻转血矛线虫苯并咪唑类药物抗性的多重PCR方法,利用该方法检测我国不同地区捻转血矛线虫对苯并咪唑类药物的抗性,并用生物学检测验证.结果表明,建立的多重PCR方法在抗性检测上具有很强的特异性,澳大利亚抗性虫株只有F1和F3条带,上海敏感虫株只有F2和F3片段;序列分析证实抗性虫株编码β微管蛋白第200位氨基酸的密码子为TAC,敏感虫株为TTC.并且该法具有很高的灵敏性,检测基因组DNA的最低量为50 ng.生物学检测,澳大利亚抗性虫株丙硫苯咪唑LD50达0.54 μg·ml-1,上海敏感虫株的LD50为0.0023 μg·ml-1,与多重PCR结果相符,说明多重PCR可以用于捻转血矛线虫苯并咪唑类药物抗性的检测.利用该技术检测源于新疆石河子、伊宁,安徽五河,江苏南京、徐州等地的虫株发现,这些地理株均表现为敏感型,丙硫苯咪唑LD50在0.0023～0.0032 μg·ml-1之间,提示我国捻转血矛线虫苯并咪唑类药物抗性尚不严重.【总页数】5页(P826-830)【作者】薄新文;李祥瑞【作者单位】南京农业大学动物医学院,南京,210095;南京农业大学动物医学院,南京,210095【正文语种】中文【中图分类】S852.731【相关文献】1.等位基因特异多重PCR快速检测结核分枝杆菌异烟肼耐药性研究 [J], 焦伟伟;孙琳;李兆娜;顾艺;孙桂芝;申阿东2.等位基因特异性多重PCR快速检测结核分枝杆菌喹诺酮耐药性的初步研究 [J], 夏强;赵丽丽;刘志广;刘劼;万康林3.应用等位基因特异性PCR和多重差别检测肺癌患者CYP1A1和GSTM1 … [J], 陈森清;许林4.特异性等位基因PCR扩增技术检测家蝇击倒抗性相关钠通道的基因突变 [J], 李春晓;张晓龙;曹晓梅;董言德;赵彤言5.绵羊捻转血矛线虫苯并咪唑类药物抗药性等位基因的PCR-RFLP分析 [J], 蔡葵蒸;柏家林因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
捻转血矛线虫耐药相关基因P450原核表达及其生物信息学分析
中国预防兽医学报Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine第42卷第11期2020年11月V ol.42No.11Nov.2020doi ：10.3969/j.issn.1008-0589.202002039捻转血矛线虫耐药相关基因P450原核表达及其生物信息学分析王文龙，苏倩，赵学亮，孙柯，翟帅，王腾宇，呼和巴特尔*（内蒙古农业大学兽医学院/农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室，内蒙古呼和浩特010018）摘要：为表达捻转血矛线虫P450蛋白并分析其生物信息学特性，本研究利用RT-PCR 扩增捻转血矛线虫P450基因，构建重组质粒pET-P450，经双酶切鉴定，将其转化大肠杆菌后，采用SDS-PAGE 检测P450蛋白的表达；利用生物信息学软件对P450蛋白的理化性质、结构特点进行分析。
结果显示，正确构建了重组质粒pET-P450且P450蛋白以包涵体的形式表达。
生物信息学分析结果显示，P450蛋白分子式为C 1154H 1812N 314O 330S 15，为不稳定蛋白、无跨膜区、无信号肽，是一种含较多抗原表位的亲水性蛋白，有7个B 细胞抗原表位和11个T 细胞抗原表位，有望用作捻转血矛线虫耐药性的诊断抗原。
本研究获得了P450重组蛋白，为捻转血矛线虫耐药性快速检测方法和新药开发奠定物质基础。
关键词：捻转血矛线虫；P450基因；原核表达；生物信息学分析中图分类号：S884.6文献标识码：A文章编号：1008-0589（2020）11-1181-04Bioinformation analysis and prokaryotic expression ofHaemonchus contortus of P450gene related to drug resistanceWANG Wen-long,SU Qian,ZHAO Xue-liang,SUN Ke,ZHAI Shuai,WANG Teng-yu,HUHE Bateer *(Key Laboratory of Clinical Diagnosis and Treatment Technology in Animal Disease,Ministry of Agriculture and Rural Affairs,College ofVeterinary Medicine,Inner Mongolia Agricultural University,Hohhot 010018,China)Abstract :To analyze the bioinformatics characteristics of the P450gene of Haemonchus contortus and obtain the P450recombinant protein,RT-PCR technology was used to amplify the P450gene of Haemonchus contortus.A pET-P450recombinant expression vector was constructed and identified by double enzyme digestion,and later transformed into E.coli and induced for protein expression.The results showed that the recombinant plasmid pET-P450was correctly constructed and P450protein is expressed as inclusion body.The physicochemical properties and structural characteristics of P450protein were analyzed by bioinformatics software.Bioinformatics analysis results showed that the molecular formula of P450protein is C 1154H 1812N 314O 330S 15.The P450protein is an unstable protein with no transmembrane region and no signal peptide region.P450protein is a kind of hydrophilic protein with 7B-cell epitopes and 11T-cell epitopes,thus it is expected to be used as a diagnostic antigen for resistance to Haemonchus contortus .The recombinant P450protein was successfully purified in this study,providing a theoretical basis for the rapid detection of resistance to Haemonchus contortus and the development of new drugs.Key words :Haemonchus contortus ;P450gene;prokaryotic expression;rescue收稿日期：2020-02-26基金项目：内蒙古自治区科技计划项目（201702074）；国家自然科学基金项目（31760731）作者简介：王文龙（1976-），男，内蒙古赤峰人，副教授，主要从事寄生虫学和分子生物学研究.*通信作者：E-mail ：***************Corresponding author中国预防兽医学报2020年捻转血矛线虫（Haemonchus contortus）属于毛圆科血矛属，其主要以吸食宿主血液为生，会导致宿主出现贫血、消瘦、皱胃粘膜损伤等症状[1]，严重者可致宿主，特别是幼龄宿主死亡。
黄嘌呤氧化还原酶的结构、功能和作用
黄嘌呤氧化还原酶的结构、功能和作用李丽书;陈献华;邵叶波;刘璇;徐平【期刊名称】《细胞生物学杂志》【年(卷),期】2004(26)4【摘要】黄嘌呤氧化还原酶(XOR)参与人体内的嘌呤代谢,并且是这一代谢过程的限速酶。
其终产物是活性氧(包括OH·、H2O2和O2-)和尿酸。
这两种产物参与体内多种生理活动。
从XOR基因的结构、XOR蛋白的分子结构和基本功能、控制XOR活性的多个环节以及XOR的两种催化产物活性氧和尿酸在生理和病理情况下的功能及机制进行了总结,以期对XOR的发现、研究历史及现状和有待解决的问题有一个系统的了解。
【总页数】4页(P381-384)【关键词】黄嘌呤氧化还原酶;尿酸;生理;嘌呤代谢;活性氧【作者】李丽书;陈献华;邵叶波;刘璇;徐平【作者单位】复旦大学生命科学学院基因生理学实验室脑研究中心;复旦大学上海医学院【正文语种】中文【中图分类】Q554【相关文献】1.黄嘌呤氧化还原酶钼中心与配体的相互作用 [J], 王传铭;张旭东;王栋;谢昆2.1,3-丙二醇氧化还原酶结构与功能关系的探讨 [J], 林锦霞;张光亚;方柏山3.精索静脉曲张病人血中一氧化氮合成酶及黄嘌呤氧化酶的活性:氧化氮及过氧化氮对精子功能不良所起的作用 [J],4.捻转血矛线虫NADH:泛醌氧化还原酶结构域包含蛋白基因的克隆表达及功能分析 [J], 吴玲燕;王玉俭;温玉玲;严若峰;徐立新;宋小凯;李祥瑞5.含有WW结构域的氧化还原酶的基因在骨肉瘤组织中表达的临床意义及其对骨肉瘤的调控作用 [J], 许峰;王帝;李哲;元耀博;李隆卿;张卫红;闻嘉;谢祎;李家平;李甲振;张岩;卢新昌;张翼;刘永奎因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
捻转血矛线虫BLAODA蛋白单克隆抗体的制备及在诊断中的初步应用
捻转血矛线虫BLAODA蛋白单克隆抗体的制备及在诊断中的初步应用卡力比夏提·艾木拉江;文兆海;陆明敏;徐立新;宋小凯;李祥瑞;严若峰【期刊名称】《中国兽医科学》【年(卷),期】2022(52)6【摘要】为了研究捻转血矛线虫排泄分泌蛋白生物素脂酰结合和2-氧酸脱氢酶酰基转移酶(BLAODA)在捻转血矛线虫病诊断中的应用,以重组捻转血矛线虫BLAODA为免疫原,通过杂交瘤细胞技术,筛出4株稳定分泌抗BLAODA单克隆抗体细胞株,分别命名为1B2、1G4、2E3和5B4。
将这4株杂交瘤细胞分别接种小鼠腹腔,制备腹水,用层析柱纯化抗体并建立双抗体夹心ELISA方法。
结果显示:筛选出的1B2、1G4、2E3和5B4细胞株产生的抗体效价高、特异性强,其抗体亚型均为Ig G1型,轻链均为kappa型,纯化的小鼠腹水的效价均可达1∶2^(22);基于抗捻转血矛线虫BLAODA的单抗1B2、5B4建立了双抗体夹心ELISA检测方法,其敏感性为90.6%,特异性为90.6%。
本研究获得了捻转血矛线虫抗BLAODA单克隆抗体并建立了双抗体夹心ELISA方法,为捻转血矛线虫诊断试剂盒的开发奠定了基础。
【总页数】8页(P753-760)【作者】卡力比夏提·艾木拉江;文兆海;陆明敏;徐立新;宋小凯;李祥瑞;严若峰【作者单位】新疆医科大学中亚高发病成因与防治国家重点实验室;南京农业大学动物医学院【正文语种】中文【中图分类】S852.731【相关文献】1.猪圆环病毒3型Cap蛋白单克隆抗体的制备及其在免疫组化试验中的初步应用2.抗肺炎衣原体蛋白酶样活性因子单克隆抗体在冠状动脉硬化患者肺炎衣原体感染诊断中的初步应用3.桥斑蛋白DPⅠ／Ⅱ单克隆抗体在肿瘤诊断中的初步应用4.大口黑鲈免疫球蛋白单克隆抗体的制备及初步应用5.血清Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒VP3蛋白单克隆抗体的制备与初步应用因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)氨基肽酶基因克隆、表达及重组蛋白活性分析
捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)氨基肽酶基因克隆、表达及重组蛋白活性分析严若峰;李祥瑞【期刊名称】《中国兽医学报》【年(卷),期】2006(26)2【摘要】通过RT-PCR扩增出捻转血矛线虫(H aem onchus contortus)氨基肽酶基因,并对该基因进行克隆、鉴定及序列测定。
捻转血矛线虫氨基肽酶ORF由2 919个碱基(972个氨基酸)构成,和G enB ank中的捻转血矛线虫氨基肽酶(H 11抗原)同源性高达98%,与秀丽新杆线虫(C aenorhabd itis eleg ans)肽酶M 1家族同源性为61%,且具有氨基肽酶特征性基序HEXXH和GAM EN。
将该基因亚克隆到原核表达载体并进行了表达,通过测定重组蛋白分解氨基肽酶底物的能力以及对酶抑制剂敏感性试验,进一步证实了H 11抗原具有一定的酶活性。
【总页数】4页(P151-154)【关键词】捻转血矛线虫;氨基肽酶;H11;基因克隆;表达【作者】严若峰;李祥瑞【作者单位】南京农业大学动物医学院【正文语种】中文【中图分类】S852.731;Q78【相关文献】1.捻转血矛线虫Hc-daf-22基因的原核表达及重组蛋白酶活性测定 [J], 郑秀平;丁豪杰;郭筱璐;杨怡;黄艳;陈学秋;周前进;杜爱芳2.人AITRL胞外区基因克隆表达及重组蛋白生物活性分析 [J], 毛朝明;王胜军;仝佳;马洁;杨敏;许小朋;邱谷风;唐莉;邵启祥;李龙;许化溪3.捻转血矛线虫(H.contortus)ZJ株H11蛋白基因的克隆及序列分析 [J], 杜爱芳;李孝军;侯玉慧;王素华4.3种蓝细菌藻蓝蛋白β亚基脱辅基蛋白基因的克隆、表达及重组蛋白的抗氧化活性 [J], 伍贤军;杨红;盛怡;冷倩男;李萍萍5.捻转血矛线虫精氨酸激酶基因的克隆与表达及酶活性分析 [J], 马春晓;张振超;李祥瑞;徐立新;宋小凯;严若峰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
捻转血矛线虫Hc-FAR-4蛋白的表达特性及其与配体结合能力分析
WEI HaiDian, CHEN XueQiu, HUANG Yan, SHI HengZhi, ZHOU JingRu, WU Fei, DU AiFang, YANG Yi
3060
中国农业科学
52 卷
(College of Animal Science, Zhejiang University/Key Laboratory of Animal Preventive Medicine of Zhejiang Province, Hangzhou 310058)
Abstract:【Objective】Haemonchus contortus is a parasite mainly settled in the abomasum mucosa of small ruminants. The disease caused by H. contortus is a national epidemic in China. In this paper, the expression pattern and ligand binding ability of Hc-FAR-4 were studied to understand its role in the growth, development and reproduction of H. contortus.【Method】The prokaryotic expression vector pET-30a-Hc-far-4 was constructed, which was id
捻转血矛线虫酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定
捻转血矛线虫酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定张惠;黄艳;周静茹;吴飞;童丹妮;陈学秋;杨怡;马光旭;杜爱芳【期刊名称】《浙江大学学报:农业与生命科学版》【年(卷),期】2022(48)2【摘要】为构建捻转血矛线虫cDNA文库,进一步研究捻转血矛线虫蛋白互作机制以及为筛选捻转血矛线虫互作蛋白提供依据,本研究以捻转血矛线虫L3期幼虫为材料,利用TriZol法提取捻转血矛线虫总RNA;使用试剂盒构建捻转血矛线虫的cDNA文库,并对cDNA进行均一化处理,再将纯化后的cDNA与线性化的pGADT7-Rec重组构建的文库质粒转化至Y187酵母中,构建出酵母转录激活结构域(activationdomain,AD)文库。
结果表明:本研究构建了重组率为100%,插入片段平均长度为1000 bp,工作液细胞密度大于3.5×10^(7)CFU/mL的捻转血矛线虫均一化酵母AD文库;所构建的表达文库各项指标均达标,符合酵母双杂交筛选要求。
本文库为捻转血矛线虫的分子机制研究以及疫苗的开发奠定了基础。
【总页数】7页(P247-253)【作者】张惠;黄艳;周静茹;吴飞;童丹妮;陈学秋;杨怡;马光旭;杜爱芳【作者单位】浙江大学动物科学学院动物预防医学研究所【正文语种】中文【中图分类】S855.9【相关文献】1.牙鲆酵母双杂交cDNA文库的构建及文库质量鉴定2.干旱胁迫下"Micro-Tom"番茄酵母双杂交cDNA文库构建和鉴定3.Cf-19介导的抗番茄叶霉病(Cladosporium fulvum)免疫应答酵母双杂交cDNA文库构建和鉴定4.冬瓜均一化酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定5.羔羊睾丸细胞酵母双杂交cDNA文库构建及鉴定因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
捻转血矛线虫H11部分功能域基因的原核表达与分析
ＨＰ Ｓ基 因在 大肠 杆 菌 中 成 功 表 达 ， 合 蛋 白 的 分 子 量 约 为 ３ ．４ｋ ａ 诱 导 ６ｈ的 蛋 白 表 达 量 可 达 到 融 ７ ３ 矛 线 虫 ；Ｈ１ 表 达 捻 １；
文献标识码 ： Ａ
中 图分 类 号 ： ８ ￥ ５ ． ３ Ｑ７ ； ８ ２ ７ １
部 分 基 因进 行 克 隆 和 表 达 ． 照 本 实验 室在 Ｇｅ Ｂ ｎ 参 ｎ ａ ｋ上 登 录 的捻 转 血 矛 线 虫 ｚ Ｊ株 的 Ｈ１ ｊ基 因序 列设 计 引 物 ， 增 Ｈ¨ 开放 阅 读 框 ６ ｏ １ １ ｐ的 部 分 基 因序 列 ， 名 为 ＨＰ （ ｊ ｐｒｉ ｅｕ ｎｅ ． 扩 ７ ～ ７０ｂ 命 Ｓ Ｈｊ ａｔ ｌ ｑ ｅｃ ）基 ａｓ 因 片段 与表 达 载 体 ｐ Ｔ ２ ｂ分 别 以 Ｎｄ Ｘ ｏＩ酶 切 后 构 建 重 组 表 达 载 体 ｐ Ｔ ２ ｂＨＰ ， 将 其 转 Ｅ 一８ ｅ Ｉ、 ｈ Ｅ ８ Ｓ 并 入 大肠 杆 菌 Ｂ ｌ中 ， 取 质粒 经 Ｐ Ｒ 和酶 切 鉴 定 获得 阳 性 质 粒 并 对 其 进 行 测 序 ． 果 表 明 ， 增 得 到 Ｉ ２ 提 Ｃ 结 扩 的 目的基 因片段 为 １ ４ ｐ 与 已发 表 的 ｚ 株 和 国 外 株 参 考 序 列 比 较 ， 苷 酸 同 源 性 分 别 为 １０ 和 ０ １ｂ ， Ｊ 核 ０ ９ ． 将 重 组 表 达 载 体 用 ＩＴＧ 诱 导 表 达 ， 达 产 物 利 用 Ｓ － ＡＧ 和 Ｗ ｅｔｒ－ｌｔｉ ８８ Ｐ 表 ＤＳＰ Ｅ ｓｅｎｂｏｔ ｇ检 测 表 明 ， ｎ
摘 要 ： 物 信 息 学软 件 分 析 表 明 ， 转 血 矛 线 虫（ ｅ ｎｈ ｓ ｏｔｒｕ ） Ｊ 的 Ｈ１ 生 捻 Ｈａｍｏ ｃｕ ｎｏｔｓＺ 株 ｃ ｊ抗 原 基 因含 有 ４
捻转血矛线虫ES24抗原基因的原核表达及其免疫诊断的应用
捻转血矛线虫ES24抗原基因的原核表达及其免疫诊断的应用杜爱芳;李孝军;侯玉慧
【期刊名称】《中国兽医学报》
【年(卷),期】2008()8
【摘要】将ES24基因从pUC18-ES24重组质粒中亚克隆到pET-30a原核表达载体上,构建重组表达质粒pET-30a-ES24,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,经SDS-PAGE电泳和Western-blot分析表明,表达蛋白相对分子质量约为30 000,可被6×His抗体和捻转血矛线虫阳性血清所识别。
纯化后的重组表达蛋白作为诊断抗原具有良好的免疫反应性和特异性,可用作免疫诊断试剂。
【总页数】4页(P917-920)
【关键词】捻转血矛纯虫;分泌排泄;原核表达;免疫诊断
【作者】杜爱芳;李孝军;侯玉慧
【作者单位】浙江大学动物预防医学研究所
【正文语种】中文
【中图分类】S854.43
【相关文献】
1.弓形虫膜表面抗原SAG1基因的原核表达及重组蛋白的免疫诊断价值 [J], 王朝兰;汤冬生;姚湧;汪学龙;王业梅
2.捻转血矛线虫HLJ株15 ES抗原基因的原核表达 [J], 王倩囡;宋铭忻;韩彩霞;路义鑫
3.捻转血矛线虫ABC转运蛋白的基因克隆、原核表达及纯化 [J], 赵学亮;王姝懿;孙柯;呼和巴特尔;王文龙;刘春霞
4.捻转血矛线虫耐药相关基因P450原核表达及其生物信息学分析 [J], 王文龙;苏倩;赵学亮;孙柯;翟帅;王腾宇;呼和巴特尔
5.日本血吸虫SjE16基因的原核表达及其免疫诊断应用潜能 [J], 王兆军;胡薇;沈大康;武小文;王聚君;韩泽广;薛纯良
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捻转血矛线虫精氨酸激酶基因的克隆与表达及酶活性分析
捻转血矛线虫精氨酸激酶基因的克隆与表达及酶活性分析马春晓;张振超;李祥瑞;徐立新;宋小凯;严若峰【期刊名称】《南京农业大学学报》【年(卷),期】2014(37)3【摘要】根据捻转血矛线虫精氨酸激酶(arginine kinase,AK)基因序列设计1对特异性引物进行RT-PCR,将得到的片段克隆到pMD19-T载体后进行序列测定和分析;将该基因的开放阅读框克隆到pET-32a(+)载体中,获得原核表达质粒pET32/AK并转化大肠杆菌BL21;重组子用IPTG诱导后用SDS-PAGE分析其表达情况;对重组蛋白变性、纯化后用梯度尿素对其进行连续透析复性,对复性后的重组蛋白用定磷法进行精氨酸激酶活性分析。
结果表明从捻转血矛线虫总RNA中扩增出大小约为1 104 bp的DNA片段。
该基因与GenBank中捻转血矛线虫AK基因的相似性为89%。
SDS-PAGE电泳结果表明该基因获得了表达,重组融合蛋白相对分子质量大小约为60.3×103,主要以包涵体形式存在。
Western blot分析显示该重组蛋白可被人工感染捻转血矛线虫山羊的血清所识别。
重组蛋白具有一定的酶活性,其最佳反应温度和pH值分别为30℃和7.5。
结论:该重组蛋白表达成功并具有一定的抗原性和激酶活性。
【总页数】7页(P100-106)【关键词】捻转血矛线虫;精氨酸激酶;基因克隆;酶活性【作者】马春晓;张振超;李祥瑞;徐立新;宋小凯;严若峰【作者单位】南京农业大学动物医学院【正文语种】中文【中图分类】S895.31【相关文献】1.家蚕精氨酸激酶基因的克隆、基因结构与表达分析 [J], 王华兵;徐豫松2.黑尾叶蝉精氨酸激酶和一个谷胱甘肽-S-转移酶基因的克隆和发育表达特性研究[J], 侯吉祥;孟盼盼;马伟华;周菲;林拥军3.嗜热芽孢杆菌丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶的基因克隆、蛋白表达纯化及活性分析[J], 王文珍;王慧慧;陈美雯;徐如飞;蒋培蓉;蒲首丞;巩菊芳;孙梅好4.美洲大蠊精氨酸激酶基因的克隆、表达及变应原活性测定 [J], 陈家杰;夏立新;刘志刚;刘雯;吉坤美5.德国小蠊精氨酸激酶基因的克隆、表达及免疫活性测定 [J], 闫浩;夏立新;陈家杰;刘娇;邓志琼;易海涛;刘小平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
捻转血矛线虫HLJ株H11基因克隆及部分胞外域表达
Ｃｌ ｏ ｎ ｉ ｎ ｇ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ Ｈ１ １ ｇ ｅ ｎ ｅ ａ ｎ ｄ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｅ ｄ ｏ ｆ ｐ ａ ｒ ｔ ｉ ａ ｌ ＥＣＤ ｏ ｆ Ｈａ ｅ ｍｏ － ｎ ｃ ｈ ｕ ｓ ｃ ｏ ｎ ｔ ｏ ｒ ｔ ｕ ｓ ＨＬ Ｊ ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎ ／ Ｌ ｕ Ｙ ｉ ｘ ｉ ｎ Ｉ ， Ｌ Ｉ Ｎ ｙ ｕ Ｉ 一 ， Ｌ ｉ Ｄ ｉ ｒ ｕ Ｐ ， ＷＡ Ｎ Ｇ Ｍｉ ｎ ｇ ３ （ １ ． Ｓ ｃ ｈ ｏ ｏ ｌ ｏ ｆ Ｖ ｅ ｔ ｅ ｒ ｉ ．
Ｈ１ １ 与Ｘ ９ ４ １ ８ ７ 、Ａ Ｙ ２ ４ ７ ７ １ ４ 、Ａ Ｙ８ １ ９ ６ ５ ０ 同源性分别为９ ９ ． １ ４ ％、９ ８ ． ４ ９ ％和 ９ ９ ． ５ ９ ％；Ｈ １ １ 基因合有 ４ 个糖基化位点和 １
个Ｚ ｎ 结 合 功 能 域 ；４个糖 基 化 位 点 分 别位 于 ９ ９ ～ １ ０ ２ ａ ａ 、２ ２ ７ ～ ２ ３ ０ ａ ａ 、５ ４ ９ — ５ ５ ２ ａ ａ 和８ ５ ８ ～ ８ ６ １ ａ ａ 处 ；Ｚ ｎ 结 合 功 能 域
新疆伊犁地区捻转血矛线虫种群Ⅰ型β微管蛋白基因苯并咪唑抗药性相关单核苷酸多态性调查
新疆伊犁地区捻转血矛线虫种群Ⅰ型β微管蛋白基因苯并咪唑抗药性相关单核苷酸多态性调查杨新;胡敏;雷卫强;邸文达;王春群;周彩显;张宗泽;方瑞;周艳琴;赵俊龙【期刊名称】《中国兽医杂志》【年(卷),期】2018(054)009【摘要】为了了解新疆伊犁地区捻转血矛线虫对苯并咪唑类药物的抗药性情况,本课题组对该地区某绵羊场捻转血矛线虫种群Ⅰ型β微管蛋白基因苯并咪唑抗药性相关单核苷酸多态性进行了调查.在通过捻转血矛线虫ITS-2种特异性PCR鉴定为捻转血矛线虫的基础上,分别扩增了27条捻转血矛线虫雄虫的Ⅰ型β微管蛋白基因,测序后对抗药性相关的167,198位点和200位点的单核苷酸多态性进行了调查研究.结果表明,该羊场的捻转血矛线虫种群的抗药性突变只发生在198位点和200位点,以198位点的抗药性突变为主,没有在167位点发现抗药性突变.共发现了4种基因型,198纯合敏感型及200位点纯合敏感型(20;74.07％)、198杂合抗药型及200位点纯合敏感型(3;11.11％)、198纯合敏感型及200位点杂合抗药型(2;7.41％)和198纯合抗药型及200位点纯合敏感型(2;7.41％).该羊场捻转血矛线虫种群中存在.198位点的纯合抗药型突变,说明有抗药性的风险,需要引起注意.本研究首次从分子水平报道了新疆伊犁地区捻转血矛线虫种群Ⅰ型β微管蛋白基因存在苯并咪唑抗药性突变,这对该地区以及其他类似地区的捻转血矛线虫病的防控以及抗药性的管理具有一定的指导意义.【总页数】5页(P8-11,中插2)【作者】杨新;胡敏;雷卫强;邸文达;王春群;周彩显;张宗泽;方瑞;周艳琴;赵俊龙【作者单位】华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室,湖北武汉430070;华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室,湖北武汉430070;华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室,湖北武汉430070;华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室,湖北武汉430070;华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室,湖北武汉430070;华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室,湖北武汉430070;华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室,湖北武汉430070;华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室,湖北武汉430070;华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室,湖北武汉430070;华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室,湖北武汉430070【正文语种】中文【中图分类】S852.7【相关文献】1.水稻纹枯病病菌β-微管蛋白基因克隆及其与多菌灵抗药性的关系 [J], 陈洪娜;李建文;孙文秀2.油菜菌核病菌β-微管蛋白基因与多菌灵抗药性相关突变的研究 [J], 李红霞;陆悦健;周明国;王晓峰3.内蒙古地区捻转血矛线虫阿苯达唑耐药种群Ⅰ型β微管蛋白基因单核苷酸多态性调查 [J], 苏倩;翟帅;孙柯;林洋;王腾宇;呼和巴特尔;王文龙4.禾谷镰孢菌微管相关蛋白基因(map)克隆及其与多菌灵抗药性关系分析 [J], 陈长军;李俊;于俊杰;王建新;周明国5.绵羊捻转血矛线虫苯并咪唑类药物抗药性等位基因的PCR-RFLP分析 [J], 蔡葵蒸;柏家林因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
捻转血矛线虫胃蛋白酶原在秀丽隐杆线虫体内的表达
视， 其保护性有赖于抗原决定簇 的构象、 糖基 化和／ 或酶活性 。因此要得到合适的重组蛋 白的翻译后修饰， 很可能要求这些潜 在的疫
苗抗 原 必须 在真核 生 物系统 中表 达 。
巳知捻转血矛线虫 胃蛋 白酶原是完整的 膜蛋白复合体 Ｈ ｇＬ Ｐ的一种成份 ， ＿ Ｇ 且 对宿主
有 高度保 护性 ， 一种 潜在 的候 选 疫苗 抗原 。 是 选择 秀 丽 隐杆 线 虫 （ 而ｎ ｅｇｎ） ＆ ａ ｓ
（ 言 慧摘 陈晓光校 ）
Байду номын сангаас
周围的编码序列设计一对引物， 中各 自包 其 含 Ｆ ｇＩ和 Ｅ ａ ∞Ｒｖ 限制性 酶 的识 别 位点 ， 经 Ｐ Ｒ从捻转血矛线虫 的基 因组 Ｄ Ａ中扩增 Ｃ Ｎ 出 一 条 ３ ８ ｂ 片 段 ，包 含 ８ 个 ９ ６ ｐ
５ —１４５ｂ 的内含 子 。第二 步应 用 另 一对 ４ ７ ｐ
拷 贝基 因编码 ， 秀丽 隐杆 线虫 中无 同 源基 在
因。
因虫的肠中检测到了捻转血矛线虫 胃蛋 白酶
原基 因 的 表 达 。除 虫 卵 外 ， 期 都 有 表 达 各 这 与秀丽隐杆线虫半胱氨酸蛋 白酶 ｃｒ ｐ ５启 一 动子 的非永 久 表 达模 式相 关 ， 现 为其 含 量 表
化 。在转化 的 秀 丽 隐杆 线 虫 系 中 ， 对 应 捻 用 转血 矛线虫 胃蛋 白酶 原基 因内部 的引 物进行 Ｐ Ｉ分 析 证 实 了 洼入 重 组 结 构 的存 在 。对 ｃ
种硫醇凝胶结合蛋 白片段。在正常 自 然感
染过 程 中 ， 些 抗 原不 被 宿主 免 疫 系 统 所 监 这
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国 匡堂壹生虫瘟娃跹
高度特异性的并殖吸虫病免疫诊断物 。表达 产 物沉积 于大 肠杆 菌 的细 胞 质 中 ， 溶 解 于 仅 强变性剂如尿素， 因此未能确定其具体功能 推测该产物与虫体的入侵和移行无关 ， 而可
捻转血矛线虫阿苯达唑敏感株和耐药株比较转录组学分析
摘 要：为探明捻转血矛线虫阿苯达哩敏感株和耐药株在转录组水平的差异，挖掘耐药相关基因，本研究采用Illu
mina HiSeq 4000对敏感虫株和耐药虫株进行转录组测序，构建cDNA，通过质控后，对其进行生物信息学分
析。结果显示：敏感和耐药虫株相比较共获得218个显著(PC0.05)差异表达基因，对显著差异表达基因进行GO
功能富集，有121、82和102个基因分别注释到生物学过程、细胞组分和分子功能三大类的206个GO terms上)
KEGG数据库分析显示，有42个显著差异表达基因参与31条KEGG信号通路，显著富集在药物代谢-细胞色素
P450、药物代谢-其他酶等通路)在敏感株和耐药株中，筛选出GST、CYPs和UGT等9个耐药相关基因，这些基因
在捻转血矛线虫耐药中发挥重要的作用。本研究利用RNA-Seq预测出敏感虫株和耐药虫株差异表达基因在功能
Agriculture, College of Veterinary Medicine , Inner Mongolia Agricultural University , Hohhot
010018!China；2.Inn&rMongoliaC&nt&rforDis&as&Controland Pr&v&ntion!Hohhot010018!China；
畜牧兽医学报 2019,50(9):1940-1944
ActaV&t&rinaria&tZoot&chnicaSinica
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收 稿 日 期 ：2016-11-02
基金项目：国家重点基础发展研究计划（973计划 江 ）（2015CB150300）； 苏高校优势学科资助项目（PAPD）
作者简介：吴玲燕 女 （1992-）， ，江苏南京人，硕士研究生，主要从事寄生虫分子与免疫方面研究，E-mail：2014107055@
Abstract：ThegeneofNADH：ubiquinoneoxidoreductasedomaincontainingprotein （NDUDC）of Haemonchuscontortuswasselectedtoclone，express，andthefunctionsofthisproteinwerestudiedinthispaper.ThegeneofNDUDC wasclonedbyRT-PCR，thenexpressionvectorwasconstructedtoobtaintherecombinantprotein.Theantigenicityoftheproteinwasanalyzedby Westernblot.Peripheralblood mononuclearcells （PBMCs）wereseparatedfrom goatandculturedin vitro withtherecombinantNDUDCtocheckthebindingoftheproteintoPBMCsbyindirectimmunofluorescenceassay.Differentconcentrations （0，10，20，40μg·mL-1）oftherecombinant proteinwereusedtostimulatePBMCs，andtheeffectsofcellproliferation，cellmigrationand NOsecretionweretested.TheresultsshowedthattherecombinantproteinNDUDCcouldstimulatecellproliferationeffectively，alsosignificantlyenhancecellmigrationandincreasethesecretionofNO.TheseresultsindicatethatNDUDCproteinhasstrongantigenicity，andcanstimulate cellstoexertimmunefunction. Keywords：Haemonchuscontortus；goat；NADH：ubiquinoneoxidoreductasedomaincontaining protein；peripheralblood mononuclearcells
（Haemonchus），
牛、羊等反刍动物一种常见的胃肠道寄生性线虫，主
要寄 生 于 皱 胃，偶 见 于 小 肠，以 吸 食 宿 主 血 液 为
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生 可， [1] 引起宿主皱胃黏膜的出血、损伤、发炎，影响
宿主物质代谢，进而导致患畜贫血、腹泻、消瘦，严重
者甚至可致患畜死亡 给， [2] 我国畜牧业的发展带来
（南京农业大学动物医学院，南京 210095）
摘 要：选取捻转血矛线虫 泛 NADH： 醌氧化还原酶结构域包含蛋白 基 （NDUDC） 因进行克隆表达，并对其功能进
行研究。采用 RT-PCR方法对 NDUDC 基因进行克隆，构建表达载体得到重组蛋白质，Westernblot分析蛋白质
的抗原特性；采血分离山羊外周血单个核细胞 与 （PBMCs） 重组蛋白质共培养，利用间接免疫荧光试验检验重组蛋
巨大经济损失。
排泄分 泌 抗 原 （excretoryandsecretoryprod-
是 ucts，ESPs） 虫体的代谢分泌产物 包， [3] 括多种蛋
WU Ling-yan，WANG Yu-jian，WEN Yu-ling，YAN Ruo-feng， XU Li-xin，SONG Xiao-kai，LIXiang-rui*
（CollegeofVeterinary Medicine，NanjingAgriculturalUniversity，Nanjing210095，China）
关键词：捻转血矛线虫；山羊 泛 ；NADH： 醌氧化还原酶结构域包含蛋白；外周血单个核细胞
中图分类号：S852.731
文献标志码：A
文 章 编 号 ：0366-6964（2017）04-0722-09
Cloning，ExpressionandFunctionAnalysisofNADH：Ubiquinone OxidoreductaseDomainContainingProteininHaemonchuscontortus
畜牧兽医学报 2017，48（4）：722-730
ActaVeterinariaetZootechnicaSinica
doi：10.11843/j.issn.0366-6964.2017.04.016
捻转包血含矛蛋线白虫基N因AD的H克：泛隆醌表氧达化及还功原能酶分结析构域
吴玲燕，王玉俭，温玉玲，严若峰，徐立新，宋小凯，李祥瑞*
白 质 与 细 胞 的 结 合 情 况 ；以 不 同 质 量 浓 度 （0、10、20、40μg·mL-1）重 组 蛋 白 质 刺 激 细 胞 ，测 定 其 对 细 胞 增 殖 、细 胞
迁移和 NO分泌的影响。结果表明，重组蛋白质能够有效刺激细胞增殖，显著提高细胞迁移能力以及增加 NO 的
分泌。可见 NDUDC蛋白具有较强的抗原性，可刺激细胞发挥免疫功能。
通信作者 李祥瑞 教授 *
：
（1958-）， ，E-mail：lixiangrui@
4期 吴玲燕等：捻转血矛线虫 泛 NADH： 醌氧化还原酶结构域包含蛋白基因的克隆表达及功能分析 723
捻转血矛线虫 隶属毛 （Haemonchuscontortus）
圆科 血矛属 是 （Trichostrongylidae）