绞股蓝总皂苷的提取分离和鉴别
绞股蓝总皂苷提取分离及鉴别方法
绞股蓝总皂苷提取分离及鉴别方法该药是从植物中提取出来的，为七叶树科植物天师栗(Aesculus Wilsonii Rehd.)的干燥成熟果实(娑罗子)提取物得到的皂苷钠盐,是天然植物药，呈白色粉末或结晶性粉末,味苦涩而辣,具引湿性,符合未来用药趋势,注射用七叶皂苷钠有什么药理作用？①抗炎作用。
七叶皂苷可消退由卵白蛋白，福尔马林和葡聚糖诱导的大鼠爪肿胀。
V ogel 等注意到七叶皂苷对正常大鼠有促进钠排泄作用，但排钾维持正常水平，注射七叶皂苷后，立即显示利尿作用。
对于七叶皂苷抗炎作用的机理，一些学者认为抗炎作用在于能使炎症刺激剂所致的炎症初期的毛细血管通透性增大变为正常。
另一些学者认为皮质甾类化合物的正常分泌是七叶皂苷抗炎作用所必要。
②消肿胀作用。
七叶皂苷对大鼠脑水肿有保护作用；Siering证实七叶皂苷的抗肿胀作用与改善细胞通透性有关。
Mussgnug认为七叶皂苷抗水肿作用机理为：（1）表面张力活性；（2）提高红细胞与水结合的能力，随着边缘血浆流量提高，产生代谢被动钠泵的依赖；（3）使细胞内、外流体交换正常；（4）在结缔组织和细胞膜上有直接作用的位点。
③抗渗出作用。
七叶皂苷对大鼠巴豆油急性渗出和磷酸组织胺引起的小鼠毛细血管通透性增大具有显著的抑制作用，其强度分别约为氢化可的松的7倍和8倍；并能对抗紫外红斑渗出及缓激肽所致家兔后肢淋巴通透性增加。
④促皮质甾酮作用。
七叶皂苷能促进肾上腺皮质分泌皮质醇，抑制组胺所致的毛细血管通透性增加，增加前列腺素F2，减少前列腺素E1的释放量，阻滞细胞的胞苷二磷酸酯的作用，并延缓Na+交换，从而具有抗炎，抗渗出活性，提高静脉张力。
⑤抗自由基作用。
提高血浆过氧化物歧化酶活性，使抗自由基活性增强。
回答者：drinkyle方法：分别采用无水乙醇回流提取、无水乙醇回流-正丁醇萃取、体积分数为70％乙醇回流提取、体积分数为70％乙醇回流提取-正丁醇萃取、水提取、超声波提取和超临界CO2提取方法，以人参皂苷Re作对照品，比色法测定提取液中山茱萸总皂苷的含量。
绞股蓝总甙标准（卫生部颁标准）
绞股蓝总甙标准中华人民共和国卫生部WS3-Z-006-93（Z）部标准绞股蓝总甙Jiaogulan Zongdai本品为从葫芦科植物绞股蓝Gynostemme pentaphylium（Thunb.）Mak.全草中提取得到的总甙经精制而成。
〔性状〕本品为浅黄色粉末；气微，味微苦、甘。
在水及甲醇中易溶；在乙醚、氯仿中几乎不溶，在石油醚中不溶。
〔鉴别〕取本品加甲醇溶解，制成每1ml含10mg的溶液，作为供试品溶液；另取绞股蓝皂甙-A对照品，加甲醇溶解，制成每1ml 含1mg的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法（中国药典1990年版一部附录57页）试验，吸取供试品溶液及对照品溶液各2Ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水（15：40：22：10）10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开12cm，取出，挥尽残存溶剂，喷以10%硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，在日光下及紫外光灯（365nm）下检视。
供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上分别显相同颜色的斑点及荧光斑点。
〔检查〕干燥失重取本品适量，在105℃干燥至恒重，减失重量不得过5%（中国药典1990年版一部附录31页）。
炽灼残渣不得过1.5%（中国药典1990年版一部附录32页）。
〔含量测定〕对照品溶液的制备精密称取于60℃，减压2.67KPa以下干燥3小时的绞股蓝皂甙-A对照品适量，加甲醇溶解，制成每1ml含2mg的溶液。
供试品溶液的制备精密称取本品50mg，加甲醇溶解，制成每1ml含2mg的溶液。
测定法精密吸取对照品溶液及供试品溶液各100ul，分别置15ml具塞试管中，精密加入新鲜配制的含5%香草醛冰醋酸溶液与高氯酸（2.8V/V）的混合液2ml，摇匀，密塞，置60℃水浴中加热15分钟，取出，立即放入冰水中冷却2分钟，精密加入冰醋酸10ml，摇匀，以试剂作空白，照分光光度法（中国药典1990年版一部附录51页）试验，于555±5nm波长处测定吸收度，计算，即得。
绞股蓝总皂甙(UV)
编号:FZD0157 绞股蓝提取物中总皂甙(Total Gypenoside)含量测定方法一、试剂
5%香草醛溶液：称取香草醛5.0g加冰醋酸溶解定容至100mL。
此溶液需临用新制。
二、溶液制备
对照品溶液：精密称取约20mg绞股蓝皂甙A对照品（自制）于50ml容量瓶中，用甲醇溶解定容。
样品溶液：精密称取约25mg绞股蓝提取物于50ml容量瓶中，加约30ml甲醇超声20min溶解，放至室温后以甲醇定容，过滤取续滤液。
三、样品测定与结果计算
分别精密吸取0.2ml、0.4ml、0.6ml对照品溶液、0.5ml样品溶液0.5ml甲醇于10ml具塞试管中，真空加热挥干溶剂，精密加入0.2ml 5%香草醛溶液，0.8ml高氯酸，混匀后于60℃水浴中加热15min，取出并立即放入冰水中冷却2min，随后加入冰醋酸溶液10ml，摇匀，待气泡消失后以试剂空白液（甲醇管）为参比，于550nm测吸光度。
以对照品管中皂甙绝对量(mg)与对应吸光度作工作曲线，由工作曲线计算样品管中皂甙绝对量(mg)。
绞股蓝总皂甙含量(%) =（C×50）/（W×0.5）×100%
式中：C为由工作曲线计算的样品管绝对量；W为样品称样量(mg)。
注：除甲醇外，其余均需平行显色两份。
绞股蓝皂苷的提取原理
绞股蓝皂苷的提取原理
绞股蓝皂苷是一种从绞股蓝根部提取出来的有效成分，具有抗炎、镇痛、抗菌等多种药理作用。
其提取原理主要包括以下几个步骤：
1. 原料准备：采集绞股蓝的根部，并鲜切、晒干等处理，使其达到适合提取的状态。
2. 研磨粉碎：将处理好的绞股蓝根部研磨成细粉，增加提取效率。
3. 固液提取：将绞股蓝根部粉末与适量的溶剂（如水、醇等）混合，并进行搅拌、浸泡等操作，使绞股蓝根部中的绞股蓝皂苷与溶剂发生充分的物质交换，使其溶解于溶剂中。
4. 滤液分离：将混合物进行过滤，分离出液相和固相。
液相中含有溶解的绞股蓝皂苷，固相中则是未溶解的植物残渣等。
5. 溶剂回收：通过蒸馏等方法将提取液中的溶剂进行回收，以减少生产成本和环境污染，并将溶剂用于后续的提取工序。
6. 结晶分离：通过控制温度、浓度等条件，使绞股蓝皂苷结晶沉淀，再通过离心、过滤等操作将结晶物与溶液分离。
7. 干燥收集：将结晶分离得到的绞股蓝皂苷进行干燥处理，使其得到固态的绞股蓝皂苷产品。
绞股蓝皂苷的提取原理基于物质的溶解性与物质之间的分配平衡，通过合理选择溶剂、控制条件等因素，使绞股蓝根部中的绞股蓝皂苷释放并溶解于溶剂中，最终得到纯净的绞股蓝皂苷产品。
绞股蓝总皂苷提取工艺分析
绞股蓝总皂苷提取工艺分析【摘要】目的研究绞股蓝总皂苷的提取工艺。
方法采用正交试验设计法，以绞股蓝总皂苷提取量为考察指标，对影响绞股蓝总皂苷提取工艺的因素进行了优选。
结果提取时间、提取次数对提取效果有显著影响，乙醇用量的影响不显著。
结论绞股蓝总皂苷的最佳提取工艺为：药材加8倍量70%的乙醇，回流提取3次，每次2 h。
【关键词】绞股蓝总皂苷；提取工艺；正交设计Abstract：Objective To study the extraction techniques of total saponin in Gynostemma. Method According to the total saponin extracting rate， the extracting techniques were optimized by orthogonal design. Results The factors that extracting time and extracting times have significant effect on total saponin extraction， and the amount of alcohol solution has insignificant effect on it. Conclusion The optimal extracting techniques were A1B3C3， refluxing extraction for 3 times with 8 fold 70% ethand， 2 hours for each time.Key words：Gynostemma total saponin；extracting techniques；orthogonal design绞股蓝(Gynostemma)为葫芦科绞股蓝属多年生蔓生草本植物，主要含有皂苷、黄酮、多糖，还含有人体必须的多种氨基酸、维生素和微量元素等成分。
中草药绞股蓝中绞股蓝皂苷分离提取的研究
中草药绞股蓝中绞股蓝皂苷分离提取的研究本论文主要对中草药绞股蓝中绞股蓝皂苷的提取、分离和纯化进行了研究,在研究中采用醇提法提取,树脂法进行初步分离纯化,再经硅胶柱层析法进一步分离纯化。
通过实验确定了醇提法的最佳提取工艺条件为:料液比为1:12,乙醇溶液浓度为70%,浸提温度为40℃,浸提次数为3次。
通过对树脂法分离纯化绞股蓝皂苷的研究表明:D-280阴离子交换树脂对绞股蓝总皂苷具有较好的脱色效果,脱色后皂苷的损失量平均为0.58mg/mL。
AB-8大孔吸附树脂对绞股蓝皂苷的吸附量在充分吸附的情况下为37.47mg/mL,吸附后经75%的乙醇洗脱,洗脱率为90.07%。
分别选用了 20%、45%、75%和90%的乙醇进行洗脱,45%的乙醇可将绞股蓝总皂苷初步分成两部分。
绞股蓝皂苷粗品经脱脂、D-280脱色、AB-8脱糖纯化后的绞股蓝总皂苷得率为5.09%,皂苷含量为88.64%。
硅胶柱层析实验表明;硅胶柱层析法可对绞股蓝皂苷实现较好的分离作用。
本实验中经硅胶柱层析共获得三种组分分别为:Gyp2、Gyp3、Gyp4。
经HPLC检测Gyp2纯度为42.68%、Gyp3纯度为67.92%、Gyp4纯度为68.29%。
并对Gyp2和Gyp3进行了二次分离纯化,纯化后的纯度分别为Gyp2-2纯度为74.38%、Gyp3-2纯度为78.72%,较初次硅胶柱分离纯化纯度分别提高了 31.70%和10.80%。
绞股蓝总苷 标准
绞股蓝总苷标准1.植物来源2.绞股蓝总苷是从绞股蓝植物中提取的有效成分，具有清热解毒、止咳祛痰、降血脂、抗疲劳等功效。
3.提取工艺4.绞股蓝总苷的提取工艺包括以下步骤：（1）原料清洗：将绞股蓝植物新鲜采摘后，用清水冲洗干净。
（2）破碎：将绞股蓝植物破碎成小块。
（3）提取：将破碎的绞股蓝植物放入乙醇中浸泡一段时间，然后进行加热回流提取。
（4）过滤：将提取液过滤，去除残渣，得到提取液。
（5）浓缩：将提取液进行浓缩，得到浓缩液。
（6）干燥：将浓缩液干燥，得到绞股蓝总苷粉末。
5.质量标准6.绞股蓝总苷的质量标准应符合以下要求：（1）性状：绞股蓝总苷为淡黄色或类白色的无定形粉末。
（2）鉴别：用紫外光谱法和薄层色谱法等方法进行鉴别。
（3）检查：应符合药典中有关各项检查的规定。
7.成分含量8.绞股蓝总苷的成分含量应符合以下要求：（1）绞股蓝总苷含量：不得少于90%。
（2）其他成分含量：不得超过规定限度。
9.药理作用10.绞股蓝总苷具有多种药理作用，包括降血脂、抗疲劳、保护肝脏、抗肿瘤、抗炎等作用。
具体药理作用可参考相关文献报道。
11.安全性评估12.绞股蓝总苷的安全性较高，长期使用对机体无明显不良影响。
但需要注意的是，孕妇和哺乳期妇女慎用，过敏体质者禁用。
在使用过程中如有不适或过敏反应，应立即停止使用并寻求专业医生的帮助。
13.包装储存14.绞股蓝总苷应密封包装，置于阴凉干燥处保存，避免阳光直射和潮湿环境。
在使用期限内，应按照规定的储存条件进行保存和使用。
过期产品应按照规定进行处理，不得再次使用。
15.使用方法16.绞股蓝总苷的使用方法如下：用法用量：口服，一次2粒，一日3次，或遵医嘱。
对于降血脂的作用，一般建议连续使用3个月以上。
绞股蓝提取
加2%无水氯化钙搅拌2h，离心去除果胶，上清液再加20%过氧化氢， 1mol/L氢氧化钠调pH8-9之间，搅拌5h,每隔0.5h调pH一次，上清液再加3 沉淀 倍95%乙醇，4℃冷藏过夜离心 蒸馏水溶解，滤过，滤液浓缩，浓缩液加3倍95%乙醇，4℃冷 藏过夜，离心，沉淀用无水乙醇和丙酮各洗涤一次，50摄氏度 干燥5h 绞股蓝多糖
乙醚液
沉淀（粗总皂苷）
3.大孔吸附树脂法
绞股蓝粗粉 水煎煮3次，每次1h 煎煮液
调pH9-10放置过滤
滤液
通过大孔吸附树脂柱0.5mol/L氢氧化钠溶液洗涤至流 出液为淡黄色，再用水洗至流出液pH中性，再用95% 乙醇解析洗脱
醇洗脱液 少量活性炭回流30min,抽滤
滤液 减压回收至干 绞股蓝总皂苷粉末状固体
2.醇提法
绞股蓝粗粉
10倍量乙醚回流脱脂3h，过滤
药渣 晾干，加75%乙醇回流提取3次，过滤，滤液减压回
收至乙醇含量为15%-20%，冰箱放48h，过滤
浓缩液
蒸去乙醇浓缩至1:1用水饱和正丁醇萃取至无皂苷
滤液
水层
正丁醇层
减压回收正丁醇并蒸干，残留物加 甲醇溶解。再加入5倍量乙醚，边 加边搅拌，放置过滤
绞股蓝450g
药渣 浓缩液
用2500ml95%乙醇回流提 取2次，每次1h过滤
挥干溶剂，取40g加10倍量水100℃提取3次， 每次0.5h，合并提取液，滤液浓缩至50ml
加3倍量95%乙醇，4℃冷藏过夜，抽滤
沉淀 依次用95%乙醇、无水乙醇、丙酮洗涤一次，50℃干燥5hபைடு நூலகம்
绞股蓝多糖 称取4g溶于200ml蒸馏水，用1mol/l盐酸调pH至7.0左右，加多糖量0.05 倍的木瓜蛋白酶，60℃恒温搅拌5h，每隔0.5h调一次pH反应5h后加热煮 沸维持10min离心去除变性蛋白质 上清液
总皂苷的测定方法
总皂苷的测定方法（分光光度法）本方法适用于功能性食品中总皂苷的测定。
本方法人参皂苷Re的最低检出量为2μg/mL。
一、方法提要样品中总皂苷经提取、PT—大孔吸附树脂柱预分离后，在酸性条件下，香草醛与人参皂苷生成有色化合物，以人参皂苷Re为对照品，于560nm处比色测定。
二、仪器1.722分光光度计。
2.PT—大孔吸附树脂柱（河北省津杨滤材厂）。
3.超声波振荡器。
三、试剂1.甲醇（分析纯）。
2.乙醇（分析纯）。
3.人参皂苷Re标准品（中国药品生物制品检定所）。
4.5％香草醛溶液：称取5g香草醛，加冰乙酸溶解并定容至l00mL。
5.高氯酸（分析纯）。
6.冰乙酸（分析纯）。
7.人参皂苷Re标准溶液：精确称取人参皂苷Re标准品20.0mg，用甲醇溶解并定容至10mL，即每1mL含人参皂苷Re2.0mg。
8.重蒸水。
四、测定步骤1.样品处理：（1）固体样品称取1.0g左右样品于100mL烧杯中，加入20～40mL 85%乙醇，超声波振荡30min，再定容至50mL，摇匀，放置，吸取上清液1.0mL挥干后以水溶解残渣，进行柱分离。
（2）液体样品含乙醇的酒类样品：准确吸取1.0mL样品放于蒸发皿中，蒸干，用水溶解残渣，用此液进行柱层析；非乙醇类液体样品：准确吸取1.0mL样品（如浓度高或颜色深，需稀释一定体积后再取1.0mL）直接进行柱分离。
2.柱层析以PT—大孔吸附树脂柱进行层析分离，准确吸取上述已处理好的样品溶液1.0mL上柱，用15mL水洗柱，以洗去糖分等水溶性杂质，弃去洗脱液，再用20mL85%乙醇洗脱总皂苷，收集洗脱液于蒸发皿中，于水浴上蒸干，以此作显色用。
3显色在上述已挥干的蒸发皿中准确加入0.2mL 5％香草醛冰乙酸溶液，转动蒸发皿，使残渣溶解，再加0.8mL高氯酸，混匀后移入l0mL比色管中，塞紧盖子于60℃以下水浴上加温15min取出，冷却后准确加入冰乙酸5.0mL，摇匀后以1.0cm 比色皿、于560nm处与人参皂苷Re标准管同时比色。
绞股蓝中有效成分皂苷的提取工艺研究综述
绞股蓝中有效成分皂苷的提取工艺研究综述一、绞股蓝皂苷提取工艺1、水提醇沉法：将绞股蓝全草切细,用水浸过料面,加热提取三次,合并提取液,浓缩成流浸膏状,冷却后加入乙醇,至不再产生沉淀,再经过滤、浓缩、干燥,即得到粗制绞股蓝总皂苷2、溶剂抽取法：绞股蓝全草的粗粉,用乙醇或甲醇抽取,废旧乙醇或甲醇后用正丁醇提炼,废旧正丁醇潮湿得总绞股蓝总皂苷3、丙酮沉淀法：绞股蓝粗粉用乙醇回流提取,减压回收醇后的浓缩液,加入丙酮,析出大量的沉淀,收集沉淀物再真空干燥即得绞股蓝总皂苷4、酶法：酶法抽取工艺主要就是利用纤维素酶及果胶酶对纤维素、果胶展开处置，从而提升绞股蓝皂苷的抽取效率5、微波提取法：微波辅助提取技术是天然产物提取的一种非常有发展潜力的新型技术，该技术可以加快反应速度，提高植物细胞破碎力度，从而提高皂苷提取率6、超声波辅助抽取：超声波抽取原理为:利用超声波碎裂细胞(空化)和加强传质((机械促进作用)，并使溶剂分子渗透到组织细胞中，能够更好地与溶质分子碰触，并使细胞中氢氧化物成分更好地转化成。
7、大孔树脂法：将绞股蓝加入水煮沸提取,过滤提取液,澄清,将上清液通入大孔树脂吸附,用碱液冲洗柱子至流出液无色,再用水冲洗至中性,然后用原料5一8倍量50%一95%乙醇洗脱,脱除乙醇经干燥处理得股蓝总皂苷制品8、超临界流体提炼技术(sfe)：超临界流体就是指少于临界温度(tc)和临界压力(pc)的非凝缩性的高密度流体,可以做为sf的物质很多,存有二氧化碳、三氟甲烷等,其中二氧化碳临界温度吻合室温且无色、无污染、无味、不易燃、化学惰性、价廉!极易做成高纯气体,因而沦为应用领域最广为的sf。
因为处在临界压力以上状态时,可以并使液体和气体沦为均相的流体,它们的粘度!密度和扩散系数均界于气体和液体之间,尤其就是与溶解能力存有密切关系的密度比气体数小百倍。
利用这些性质展开超临界流体提炼(sfe)比溶液提炼的效果必须得天独厚,特别在中药材及其制剂中更表明出来独有的优点,主要就是抽取方便快捷!快速,可以轻易进样分析;抽取具备一定的选择性,抽取的杂质较太少9、膜分离技术：膜分离技术是利用具有选择通透性的薄膜,以外界能量或化学位差为推动力,对多组分体系进行分离、分级、提纯的一门技术。
天然药物化学实验讲稿
第一章 黄柏中小檗碱的提取、分离与鉴定教学目的要求掌握黄柏中小檗碱(季胺型生物碱)的提取原理和方法。
掌握干法装柱和湿法装柱的操作方法1、 掌握鉴定小檗碱(已知化合物)的一般方法。
教学重点难点季铵型生物碱的理化性质及提取方法。
2、 渗漉法的操作过程及注意事项。
3、 结晶法的注意事项4、掌握薄层色谱鉴定的方法实验一 黄柏中盐酸小檗碱的提取（一）实验原理根据黄柏中含粘液质较多的特点，首先用石灰乳使粘液质生成难溶于水的钙盐，用碱水自黄柏中提出小檗碱，再加盐酸使其转化为盐酸小檗碱沉淀析出。
小檗碱能缓缓溶解于水中，在冷乙醇中的溶解度不大，但易溶于热水或热乙醇，难溶于苯、氯仿、丙酮。
小檗碱与酸结合脱去一分子水而成盐。
小檗碱盐酸盐在冷水中溶解度小，较易溶于沸水，几不溶于乙醇，小檗碱的硫酸盐、磷酸盐在水中溶解度较小，与大分子有机酸生成的盐在水中的溶解度很小。
黄柏中主要含有小檗碱，其结构如下OO NH O O OMe OMeCHO季铵式（红棕色） 醇式（黄色） 醛式（黄色）小檗碱的三种互变异构体川黄柏含小檗碱约1.37％～5.8％，关黄柏含小檗碱约0.60％～1.64％。
(二)实验方法实验二黄柏中盐酸小檗碱的纯化及鉴定一、纯化1.湿法装柱色谱法吸附剂：中性氧化铝(100～200目)35g置于烧杯中，加入50ml 95％乙醇，调成浆状，湿法装柱。
上样：取50～100mg自制盐酸小檗碱，溶于少量95％热乙醇中，加入色谱柱中。
洗脱：95％乙醇洗脱，收集开始流出的鲜黄色带，即为纯化的盐酸小檗碱。
2.结晶法抽率上次提取液，将得到的滤饼用少量水加热溶解，趁热抽率，滤液放冷等待析晶，再抽率得到晶体，即盐酸小檗碱纯品。
二、薄层色谱鉴定将提取分离出的盐酸小檗碱样品与盐酸小檗碱的对照品共薄层色谱，比较其Rf值是否一致。
吸附剂：硅胶G薄层板展开剂：①苯一醋酸乙酯一异丙醇一甲醇一水(6：3：1.5：l.5：0.3)，氨蒸汽饱和。
②氯仿-甲醇-氨水(15：8：1) 显色剂：改良碘化铋钾试剂1、渗漉前为什么要加入石灰乳搅拌？2. 提取时加氯化钠的作用是什么？3、在制备薄层色谱板时有哪些注意事项？第四章芦丁的提取、分离、精制和鉴定1、掌握碱溶酸沉法提取黄酮类化合物的原理及操作。
绞股蓝皂苷的提取分离及鉴定doc
实验绞股蓝总皂苷的提取和制剂鉴别07 级本科药学邓楠楠12007050601114 绞股蓝为葫芦科植物绞股蓝Gynostemma pentapHylla（Thunb．）Makjno 的根茎或全草，中药名为七叶胆〕在我国南部地区广有分布，现多有栽培。
全草有消炎解毒、止咳祛痰功能，用于治疗慢性支气管炎、病毒性肝炎、肾盂炎、胃肠炎等。
全草含甾醇、糖类、色素及皂苷等成分，皂苷含量约3％，现已分离了6O 多种皂苷，其中不少与人参皂苷骨架相同，药理实验表明绞股蓝皂苷具有类似人参的免疫增强作用，且过量服用不会引起副作用，因而引起了广泛的关注。
绞股蓝已经工业提取，广泛用于食品、饮料、药品中。
在抗衰老、抗疲劳、降低血脂、促进细胞新陈代谢、强壮补益，调理神经等方面有较好效果。
一、绞股蓝总皂苷的结构特征与物理性质绞股蓝皂苷主要为四环三萜的达玛烷型结构，其中6 种与人参皂苷相同，绞股蓝皂苷3、4、8、12 分别与人参皂苷Rb1，Rb3、Rd、Rf 在化学结构上完全相同，绞股蓝皂苷分子中通常含有多分子糖，其极性强。
有较好的水溶性。
目的要求1. 掌握D-101 大孔吸附树脂分离提纯绞股蓝总皂苷的原理和实验操作方法2. 掌握检阅文献资料的方法和思路、3. 熟悉皂苷类成分的性质及鉴别方法【仪器与试药】（一）仪器．D-101 大孔吸附树脂玻璃层析柱圆底烧瓶SHB-循环水式多用真空泵HHS 型电热恒温水浴锅玻璃仪器气流烘干器ZF-2 型三用紫外仪电热恒温干燥箱烧杯空气回流管移液管锥形瓶硅胶G 滤纸研钵球形冷凝管（二）试药绞股蓝药材乙醇蒸馏水盐酸氢氧化钠。
三、实验原理】【绞股蓝总皂苷有较好的水溶性，可用水为提取溶剂，因为绞股蓝皂苷分子中含有非极性部分三萜母核，故可使其在非极性大孔树脂上能较好地被吸附，相反，极性较大的成分如糖类则在非极性大孔树脂上难以吸附，因而选用非极性大孔吸附树脂D101 型可将绞股蓝水提物中的总皂苷与糖类等水溶性成分较好地分离，最后用活性炭脱色，从而达到纯化的目的。
绞股蓝总皂苷中单体皂苷的分离纯化
绞股蓝总皂苷中单体皂苷的分离纯化孔玉琼;金凤燮;鱼红闪【摘要】The total gypenoside was separated and purified by silica gel column. Chloroform and methanol were used as mobile phase in gradient elution, the sample was determined by TLC. 7.87 g total saponin was obtained from 5000 g Gynostemma pentaphyllum by the process of extracted with alcohol, defatted with ligarine, leached with normal butanol, desugared with AB-8 macro porous resin, decolored with D-296 anion ion exchange resin. Three kinds of gypenoside monomer were obtained from 5 g total gypenoside by the proportion in 9.5∶0.5 and 9∶1 chloroform and methanol as mobile phase. The yields were 2.6％, 3.0％, 5.2％ and the purity was up to 88. 73％, 93.11％,78.54％ respectively. The result indicated that the silica gel column is a good separation function to gypenoside.%采用硅胶柱层析法分离绞股蓝总皂苷,以氯仿-甲醇混合液为流动相进行梯度洗脱,薄层层析法跟踪检测.5 000 g绞股蓝干草经乙醇提、石油醚脱脂、正丁醇萃取、AB-8大孔吸附树脂脱糖、D-296阴离子交换树脂脱色后得到总皂苷7.87 g.5 g绞股蓝总皂苷进行硅胶柱层析分离,在体积比为9.5:0.5和9:1的氯仿-甲醇洗脱液洗脱下得到3种较纯的绞股蓝皂苷的单体组分,得率分别为2.6%、3.0%和5.2%.经高效液相色谱检测其纯度,组分A、B、C纯度分别为88.73%、93.11%和78.54%.3种皂苷较粗品纯度得到很大提高,且洗脱液比例和体积的确定为大量制备这3种绞股蓝单体皂苷提供了理论依据.【期刊名称】《大连工业大学学报》【年(卷),期】2011(030)003【总页数】4页(P173-176)【关键词】绞股蓝皂苷;硅胶柱层析;高效液相色谱【作者】孔玉琼;金凤燮;鱼红闪【作者单位】大连工业大学生物工程学院,辽宁大连,116034;大连工业大学生物工程学院,辽宁大连,116034;大连工业大学生物工程学院,辽宁大连,116034【正文语种】中文【中图分类】TS218;Q556.20 引言绞股蓝中含有绞股蓝皂苷、氨基酸、蛋白质、脂肪、黄酮类、糖类、无机元素、纤维素和维生素等多种化学成分，其中以绞股蓝皂苷为主要的药理活性成分。
提取绞股蓝皂苷实验方案
一、原位凝胶的制备：(基于壳聚糖的纳米凝胶口服药物输送载体的构建及其透黏膜机理的研究-冯超)直接购买CMCS，CS/CMCS 纳米凝胶（CS/CMCS-NGs）的制备：聚电解质凝聚法配制浓度为 3 mg/mL 的 CS 稀醋酸溶液中，其中醋酸溶液的浓度为 1 %（v/v），调节 pH 至 6.0，将一定浓度的 TPP水溶液滴加到上述溶液中，室温搅拌 30 min，将一定浓度的 CMCS 水溶液滴入到 CS-TPP 混合液中，室温搅拌30 min，得到 CS/CMCS-NGs。
（TPP：三聚磷酸钠）二、绞股蓝皂苷的提取（华南理工大学硕士学位论文《绞股蓝皂苷的提取、分离纯化及抗氧化作用的研究》洪秀云）1、绞股蓝皂苷提取※有机溶剂提取法空白对照组：常规水提法作为对照组，称取1.000g绞股蓝干叶粉末，以料液比1∶25于80℃加热浸提120min，离心取上清液，（按照2.3.2的方法）测定吸光值，计算总皂苷提取率。
试验组：在水提法的基础上，加入纤维素酶，提取绞股蓝皂苷。
2、绞股蓝皂苷含量、提取率测定的计算公式：(1)、绞股蓝总皂苷含量的测定：分别吸取100μL（V1）样液置于10 mL试管中，按上述方法测其吸光值A，代入回归方程可得所测样液绞股蓝总皂苷的含量C。
再根据公式2-1计算各部分样液的绞股蓝总皂苷含量M1。
(2)、绞股蓝皂苷提取率的测定乙醇提取的单因素实验和正交试验三、绞股蓝皂苷的分离纯化（华南理工大学硕士学位论文《绞股蓝皂苷的提取、分离纯化及抗氧化作用的研究》洪秀云）※D101大孔吸附树脂纯化绞股蓝皂苷1、树脂的预处理方法：足量的D101 大孔吸附树脂用80 %乙醇浸泡溶胀24 h 后，用80 %乙醇反复清洗数次，再用蒸馏水洗涤至无醇味，于 4 ℃冰箱中保存备用。
2、上样浓度的确定：精确称取湿态大孔树脂每份各20 g（等于干重 5.5 g）,加入适量水填柱(17 mm×200mm)后，待树脂沉底后，测柱体积（约22 mL）。
绞股蓝中几种人参皂苷的提取分离和检识的实验教学设计
教育研究绞股蓝为葫芦科植物绞股蓝Gynostemma pentapHylla（Thunb.）Makjno 的根茎或全草，中药名为七叶胆〕在怀化市及周边地区广有分布[1]。
全草有消炎解毒、止咳祛痰功能，用于治疗慢性支气管炎、病毒性肝炎、糖尿病肾病等[2-4]。
全草含甾醇、糖类、色素及皂苷等成分，皂苷含量约3％，1976年至今分离出了201种绞股蓝皂苷，其中不少与人参皂苷骨架相同，药理实验表明绞股蓝皂苷具有类似人参的增强免疫力及抗肿瘤[5]、调节血脂和降血糖[6-7]等作用，且过量服用不会引起副作用，因而引起了广泛的关注。
绞股蓝皂苷在工业上已经提取较多，广泛应用于食品、饮料、药品中。
在抗衰老、抗疲劳、促进细胞新陈代谢、强壮补益，调理神经等方面有较好效果。
绞股蓝皂苷主要为四环三萜的达玛烷型结构，其中6种与人参皂苷相同，绞股蓝皂苷3、4、8、12分别与人参皂苷Rb1、Rb3、Rd、Rf 在化学结构上完全相同，绞股蓝皂苷分子中含有糖链，其极性强，有较好的水溶性。
在我校药学本科专业天然药物化学实验教学中把其选作三萜及其苷这一章的实验教学内容具有一定的代表性。
一、实验目的与原理1.实验目的（1）掌握皂苷的提取方法。
（2）熟悉大孔吸附树脂法纯化绞股蓝皂苷的操作技术。
（3）熟悉皂苷及其制剂的鉴定方法。
2.基本原理绞股蓝总皂苷有较好的水溶性，可用水为提取溶剂，因为绞股蓝皂苷分子中含有非极性部分三萜母核，故可使其在非极性大孔树脂上能较好地被吸附，相反，极性较大的成分如糖类则在非极性大孔树脂上难以吸附，因而选用非极性大孔吸附树脂D101型，可将绞股蓝水提物中的总皂苷与糖类等水溶性成分较好地分离，最后用活性炭脱色，从而达到分离纯化的目的。
二、仪器与试剂1.仪器250ml 的圆底烧瓶和与之配套的冷凝管、层析柱、分液漏斗、两孔恒温水浴锅、旋转蒸发仪、烘箱、10*20cm 硅胶层析板（使用前于110℃烘箱中活化30min）、层析缸、点样毛细管、电吹风、紫外分析仪、滤纸等。
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绞股蓝总皂苷的提取分离和鉴别
(设计性实验)
绞股蓝为葫芦科植物Gynostemma pentaphyllum（Thunb.）干燥全草，又名七叶胆。
从绞股蓝中分得皂苷已达80余种，其中七种与人参皂苷完全相同，故绞股蓝又有“南方人参”的美誉。
绞股蓝总皂苷是绞股蓝全草中有效成分，具有降血脂、降血糖、抗肿瘤、抗衰老、保护肝脏及增强机体免疫功能等作用。
主要药理实验证明绞股蓝总皂苷对肿瘤细胞的增殖具有明显的抑制作用。
对人体有滋补、镇静、催眠、促食欲、降血脂、降胆固醇、降转氨酶、延缓衰老等作用。
一、实验目的：
1．掌握D-101大孔吸附树脂分离纯化绞股蓝总皂苷的原理和实验操作方法；
2．掌握查阅文献资料的方法和思路；
3．熟悉皂苷类成分的性质及鉴别方法。
二、仪器与试药：
（一）仪器
D-101大孔吸附树脂玻璃层析柱（2.0ⅹ50）圆底烧瓶（1000mL）
SHB-循环水式多用真空泵 HHS型电热恒温水浴锅玻璃仪器气流烘干器
ZF-2型三用紫外仪电热恒温干燥箱烧杯空气回流管移液管（10mL、5mL）锥形瓶（100mL）硅胶G（薄层层析用）滤纸研钵球形冷凝管
（二）试药
绞股蓝药材乙醇蒸馏水盐酸氢氧化钠等
三、实验原理：
大孔吸附树脂（Macfofeticulaf Resin）是六十年代末发展起来的一类有机高聚物吸附剂，它具有多孔网状结构和较好的吸附性能，为白色的球状颗粒，粒度多为20～60目，通常分为非极性、弱极性、中极性和强极性等几大类。
目前常用的为苯乙烯型和丙烯腈型，在树脂合成时根据需要引人极性基团则成为极性树脂从而增强吸附能力。
它的理化性质稳定，不溶于酸、碱及有机溶剂。
对有机物的选择性较好，不受无机盐类及强离子低分子化合物存在的影响，在天然化合物的分离和富集工作中被广泛应用。
大孔吸附树脂为吸附和筛选原理相结合的分离材料。
它的吸附性是由于范德华引力或生成氢键的结果。
分子筛原理是由于其本身多孔性结构所决定。
由于吸附和分子筛原理，有机化合物根据吸附力的不同及分子量的大小，在大孔吸附树脂上经一定的溶剂洗脱而分开。
这使得有机化合物尤其是水溶性化合物的提纯得以大大简化。
大孔吸附树脂技术简单讲就是将中药复方煎煮液通过大孔树脂，吸附其中的有效成分，再经洗脱回收，除掉杂质的一种纯化精制方法。
根据药液成分的不同，提取的物质不同，选择不同型号的树脂。
其操作的基本程
序大多是：中药提取液——通过大孔树脂——吸附上有效成分的树脂——洗脱——洗脱液——回收溶液——药液有效成分——干燥——半成品。
该技术目前已较广泛应用于中药新药的
开发和中成药的生产和抗生素的分离精制，主要用于分离和提纯过程。
四、实验内容
（一）绞股蓝总皂苷的提取分离和鉴别方法的实验设计
要求：1．查阅文献资料，综述绞股蓝提取、分离及鉴别方法；
2．设计适合于本实验室操作的提取方法（至少两种方法）；
3．设计采用D-101大孔吸附树脂分离纯化绞股蓝总皂苷的实验方法和鉴别方法（至少两种方法）。
（二）实验操作
要求：从设计的多种实验方法中选择最优的提取分离纯化及鉴别方案进行实验，确定绞股蓝总皂苷的提取分离工艺。
五、实验结果
1．详细记录实验内容。
2．详细记录定性鉴别结果，并绘制色谱图，计算R f值。
3．总结实验过程中遇到的问题和解决方法。
六、思考题
1．比较不同方法提取分离绞股蓝总皂苷的优缺点。
2．在实验过程中遇到哪些困难？并如何解决？
3．大孔吸附树脂吸附作用的影响因素有哪些？。