凝血分子标志物检测在DIC早期临床诊断中的意义

・７９２・
・检验与临床・
凝血分子标志物检测在ＤＩＣ早期临床诊断中的意义
宋长广
柳爱英
贾玉东
王源自文库英
刘永会
【摘要】目的探讨凝血分子标志物（ＴＭ、Ｆ１＋２、ｐＴＧ、Ｄ－－＂聚体）含量变化在ＤＩＣ早期诊断中 的临床价值。方法采用双抗体夹心酶联免疫法测定。结果 可疑ＤＩＣ病例组血清ＴＭ、Ｆ１＋２、ｐ－ ＴＧ、Ｄ二聚体含量显著高于健康对照组，差异具有统计学意义（Ｐ＜ｏ．０１），并随着ＤＩＣ的发展而逐步 升高。结论凝血分子标志物的含量变化，不但可以作为ＤＩＣ早期预测、诊断的重要指标，而且其动 态测定结果还可以作为监测ＤＩＣ病情发展情况、评价疗效、判断疾病严重程度和估计预后的重要实 验参数。 【关键词】血液凝固因子；
文 献
当血液中存在巨大血小板、血小板凝集、冷凝球蛋白、有核 红细胞、难溶红细胞等非白细胞颗粒时，由于颗粒大小在白细 胞计数区域，所以在许多计数仪中被误认为白细胞而计数在 内，直方图显示与ｙ轴有个很高的截距，提示在３５ ｆＩ。左右计 数受到干扰【３］。对此，Ｃｏｕｌｔｅｒ ＬＨ７５０血液分析仪在白细胞计 数３５ ｆＬ起始处设有阈值监控，若白细胞在３５ ｆＬ处的数量超 过该阈值，则会触发报警。仪器采用智能微数技术，通过复杂 的算法自动纠正计数值，并报告纠正值。不管白细胞结果是否 被纠正，在血细胞参数栏患者结果中，每份标本均可看到白细 胞结果与对应的未纠正值。若白细胞结果与未纠正值一致，说 观结果不需纠正；若白细胞结果低于未纠正值，则说明结果已 被纠正。仪器对所有纠正过的白细胞结果均在其右侧提示框 中显示“Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ”怀疑性旗标。 本组评价结果显示，仪器自动纠正后的计数结果与手工法 的检测结果具有良好的相关性，且两者差异无统计学意义。然 而未纠正的计数值以及ＨｍＸ血液分析仪的测定值均与手工 计数结果的差异有统计学意义，可见纠正计数有效地减少了非 白细胞颗粒的影响。这与Ｉｇｏｕｔ等ｎ１采用流式细胞仪进行白 细胞计数报道一致。精密度试验显示，纠正计数值的ＣＶ值较 小，而纠正幅度较大的未纠正计数值的ｃｖ值较大，说明某些 （上接第７９２页） 活化的指标之一［４］。ＴＭ是由５５４个氨基酸残基（ＡＡ）组成的 单链糖蛋白，相对分子质量为７５ ｋｄ，作为血管内皮细胞的抗血 栓主要活性物质，当血管内皮细胞受到破坏时释放出来，与凝 血酶以ｌ：１的比例结合成复合物，在钙离子作用下，复合物与 蛋白ｃ结合而使蛋白Ｃ活化，并使活化速度增快２ ０００倍。结 合后，把起凝血作用的酶转变成抗凝血作用的酶，特异地作用 于血小板、纤维蛋白原、第Ｖ因子、第Ⅷ因子，提高蛋白Ｃ的活 性，发挥抗凝作用。研究证实，在ＤＩＣ前期患者血清ＴＭ即增 高，并随着ＤＩＣ的发展而逐步升高，其程度与内皮细胞损伤呈 正比。ＴＭ已被用来作为某些疾病微廊管（ＤＩＣ等）损伤的独 立标记物，以及判断ＤＩＣ严重程度的重要指标【５］。 ＴＭ、ＴＡＴ、争ＴＧ、Ｄ二聚体等凝血分子标志物，可以反映 ＤＩＣ发生早期血栓形成所涉及到的凝血与抗凝血系统、纤溶与 抗纤溶系统、血小板系统、血管内皮系统等各个环节的病理生 理变化状况。上述血清分子标志物的含量变化，不但可以作为 ＤＩＣ早期预测、诊断的重要实验指标，而且其动态测定结果还
表３不同放置时间下重复测定的结果
干扰因素的存在导致未纠正的原始计数值重复性较差。在使
用ＨｍＸ血液分析仪的时候观察到，提示手工复枪的标本，白
细胞计数值的霞复性往往亦较差。分析其原因可能是血液中 若存在微凝丝、微凝块、血小板聚集及不定形物凝集等干扰物 时比较易受标本混匀程度的影响，造成原始计数的不均一性。 稳定性试验显示标本放在室温条件下８ ｈ内白细胞计数的纠 正值变化不大。首次计数纠正幅度不大的部分标本，再次计数 时有些未报计数干扰，但其测定值与首次计数的纠正值相近。 此种现象町能是首次计数时，标本的混匀程度不够所致。８～
表１
病例组和健康对照组血清ＴＭ、Ｆ１＋２、１３－ＴＧ、胁二聚体水 平测定结果显示，ＤＩＣ患者在发病早期血清ＴＭ、Ｆ１＋２、１３－ＴＧ、 ｎ二聚体水平就已高于健康对照组，差异有统计学意义（Ｐ＜
０．０１）。
病例组和健康对照组血清ＴＭ、Ｆ１＋２、［３－ＴＧ、Ｄ－－－聚体水平（－士ｓ）测定结果
注：健康对照组比较，Ｐ＜０．０１。
讨
论
蛋白原及其降解产物ＦＤＰ的抗凝作用减弱，最终导致严重出 血。血栓形成的前奏是凝血系统的激活和抗凝物质的消耗，而 凝血系统启动的最直接的物质是凝血酶的生成。Ｆｌ＋２是在 活性Ｘ因子作用于凝血酶原而生成凝血酶的过程中裂解释放 出来的断片活性多肽。反映ｊ，体内凝血酶生成的亢进，是反映 凝血酶生成的最敏锐指标［１－３］，其含量或活性变化是ＤＩＣ等血 管内血栓形成的前奏。Ｄ－Ｚ．聚体作为纤维蛋白区别于纤维蛋 白原分解过程的降解产物，是鉴别原发性纤溶和继发性纤溶， 以及确诊和证实血栓形成（ＤＩＣ等）的关键性试验指标，准确率 达９３．８％。０－ＴＧ为血小板特异蛋白，存在于血小板的ｎ一颗粒 内，在血小板受某种因素的刺激而被激活时从血小板中释放出 来，参与血栓的形成，０－ＴＧ町作为判断血小板（下转第７９４页）
结 果
１．研究对象
１）病例组：为近５年来在本院住院治疗中
临床上怀疑有出血倾向，且根据病情进展证实存在ＤＩＣ的各 类疾病患者８２例。其中产妇１６例、创伤１４例、癌症１８例、各 类感染７例、白血病７例、肝硬化７例、心梗和心衰４例、肺栓 塞２例、其他患者７例；男２９例，女５３例，年龄３～８０岁，平均 ４６．２岁。有５例患者抢救无效死亡。（２）健康对照组：为同期 住院的产妇、手术等患者，排除有出、凝血性疾病或有出血倾向
Ｅ６］孙冶，黄萃，刘胜勇，等．标本静置时间对血细胞分析仪测定结果 的影响［Ｊ］．临床检验杂志。２００２，２０（３）；１９０—１９０． （收稿几期：２００８—０９—０３）
可以作为监测ＤＩＣ病情发展情况、评价疗效、判断疾病严重程 度和估计预后的重要实验参数。
参考 文 献
［１］彭作辉．ＤＩＣ诊断的进展［Ｊ］．临床血液学杂志．１９９９ｔ１２（６）：２８５． ［２３万楚成，夏云金，章正华，等．止凝ｍ分子标志物在急性白血病合 并Ｉ）ＩＣ巾的意义［Ｊ］．临床内科杂志。２００７，２４（８）：１８． ［３３李君君，陈方平。颜家运，等．弥散性血管内凝血早期诊断的实验 研究［Ｊ］．临床血液学杂志，２００３，１６（２）：１６． ［４］郑萍。徐恩英．血栓调节蛋白、凝血酶一抗凝血酶复合物和Ｄ－－聚 体在弥散性ｍ管内凝血诊断中的应用［Ｊ］．中国基层医药，２００６，
［１］叶应妩，工毓三．全国临床检验操作规程［Ｍ］．第２版．南京：东南 大学出版社，１９９７．４－５． ［２］余松林，向惠云．重复测量资料分析方法与ＳＡＳ程序［Ｍ］．北京： 科学出版社，２００４．２０—２２． ［３］丛书隆．当代血液分析技术与临床［Ｍ］．北京：人民卫生出版社，
１ ９９７．９３—９５．
［４］Ｉｇｏｕｔ Ｊ，Ｆｒｅｔｉｇｎｙ Ｍ，Ｖａｓｓｅ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ
Ｄ（）ｌ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３－４１３０．２００９．０８．０３０ 作者单位：２５２８００ ＩｌＪ东省高唐县人民医院（宋长广、贾玉东、王兰 英、刘永会）；２５２８００山东省高唐县妇幼保健院检验科（柳爱英）
万方数据
・７９４・
垦匿垫堕匡堂塑查垫塑生！旦箜翌鲞箜！塑丛』！苎！丛盟！垒迥堡垫塑！型：盟！堂！
资料与方法
者５０例。其中男１９例，女３１例，年龄１６～６５岁，平均４４．５
岁。
２．试验方法
１）对有出血倾向或症状的可疑ＤＩＣ患
者，按实验要求抽取血液样本，室温放置２ ｈ或４℃过夜后于
１
０００×ｇ离心２０ ｍｉｎ，分离血清放于一２０℃或一８０℃保存备
用，避免反复冻融。２）使用北京北方伟业发展有限公司（上海 办事处）提供的酶联免疫测定试剂盒与德国产全自动酶免仪， 采用酶联免疫吸附（Ｅｌ。ＩＳＡ）法测定。 ３．统计学方法所测数据均采用ｉ土ｓ表示，均数间差异 采用“检验，以Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。
１３（２）：１８９．
［５３王志新，李艳萍．弥散性皿管内凝血患者分子标志物的临床价值 ［Ｊ］．医药论坛杂志，２００６，２７（６）：５１． （收稿几期：２００８—１１－０４）
万方数据
正常人体血液中存在凝血、抗凝血和纤维蛋白溶解系统， 生理情况下，凝血与抗凝血、纤溶与抗纤溶之间互相制约，保持 动态平衡，以保证血液的流体状态和可凝固性。而由于血管内 广泛凝血，使大量的血小板及凝血因子（如Ⅶ、Ｘ、Ｖ、Ⅱ、Ｉ因 子等）被消耗，使血液迅速进入低凝状态，引起凝血障碍，同时 纤溶系统被激活，功能亢进而使纤维蛋白原大量溶解，使纤维
生物学标记；
弥漫性血管内凝血；早期诊断
文章编号：１６７３—４１３０（２００９）０８—０７９２—０２
中图分类号：Ｒ４４６．６１；Ｒ５５４．８
文献标识码：Ｂ
弥漫性血管内凝血（ＤＩＣ）的发生是一个复杂的病理、生理 过程，一旦出现明显的临床症状则治疗效果差，死亡率高。因 此，早期诊断具有莺要的临床意义。为给临床提供具有早期诊 断价值的实验指标，现对血栓调节蛋白（ｔｈｒｏｍｂｏｍｏｄｕｌｉｎ， ＴＭ）、凝血酶原片段１＋２（ｐｒｏｔｈｒｏｍｂｉｎ ｆｒａｇｍｅｎｔ １＋２，Ｆ１＋ ２、）、血小板血栓球蛋白（［３－Ｔｈｒｏｍｂｏｇｌｏｂｕｌｉｎ，ｐＴＧ）和ｎ二聚 体（Ｄ－Ｄｉｍｅｒ，Ｄ－Ｄ）等分子标志物进行测定，为临床早期诊断 ＤＩＣ提供有价值的实验依据。
ＬＨ７５０ ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ ａｎａｌｙｚｅｒ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ａｎｄ
ｏｆ
ｔｈｅ
Ｃｏｕｌｔｅｒ
ａｓ
ｆｌｏｗ
ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ
ｔｈｅ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｍｅｔｈｏｄ
ｆｏｒ
ＷＢＣ，ｐｌａｔｅｌｅｔ
ｎｕｃｌｅａｔｅｄ ＲＢＣ
ｃｏｕｎｔ
口］．Ｃｌｉｎ
Ｌａｂ
Ｈａｍａｔｏｌ，２００４，２６（１）：１—７．
２４
ｈ后纠正结果呈下降趋势，叮能久置后白细胞体积缩小［５］，
白细胞分布在３５ ｆＬ左右的数量增加，导致纠正幅度增大，纠
正值减小。 讨
论
总之，本组评价结果表明，ＬＨ７５０血液分析仪提供的白细 胞计数纠正功能提高＿ｒ仪器计数的抗干扰能力，使计数结果更 加可靠，降低了复检标本的数＿最，提高了工作效率。有意思的 是，检测室问质评标本时，偶『『Ｉｉ也发现白细胞计数被纠正的情 况，可能与这些质控晶中细胞颗粒分布异常有关。而目前大部 份仪器没有纠正功能，故此时如报纠正计数值，可能反而导致 不满意的室间质评结果。 参考