内标对比法定量的优缺点
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➢ 色谱柱：ODS柱（150×4.6mm, 5µm）；
➢ 流动相：甲醇-水（60:40) ； ➢ 流速：0.6 ml/min ； ➢ 检测波长： 257 nm ；
5
➢ 柱温：室温；
3. 实验内容
➢ 内标溶液的配制：
称取非那西丁约0.25g
50ml量瓶 （甲醇定容）
➢ 对照品溶液的配制：
精密称取对乙酰氨基
Contents
1. 实验目的 2. 实验原理 3. 实验内容 4. 思考题
1
1. 实验目的
Hot Tip
➢熟悉高效液相色谱仪的使用方法; ➢掌握用内标对比法的实验步骤、结果
和计算方法。
2
2. 实验原理
内标对比法
（A i
（A i
/ Ais）试样 / Ais）对照
ci 试样 ci 对照
ci 试样
（ （AAi i
/ /
Ais）试样 Ais）对照
ci 对照
对乙酰氨基酚稀碱溶 液在（257±1）nm 波长处有最大吸收， 可以用于定量测定
3
3. 实验内容-色谱条件
➢ 仪器：日立L-7100输液泵，L-7400紫 外检测器；
管等
ODS色谱柱，容量瓶，移液
➢ 试剂：对乙酰氨基酚对照品，非那西
丁（内标
4
3. 实验内容-色谱条件
酚对照品约50mg 精密量取内标
100ml量瓶（甲醇定容）
溶液10ml
50ml量瓶（流动相定容）
1ml
➢ 试精样密称溶取对液乙的酰氨配基酚制样品：约50mg，其余步骤同上。 6
3. 实验内容
➢ 进样分析：
对乙酰氨基酚对照品溶液经0.45µm 滤膜滤过。用微量注射器吸 取续滤液，进样20µl。记录色谱图，重复3次。以同样方法分析 试样溶液。按下表记录峰面积。
1
比较外标法与 内标法、内标 对比法定量的 优缺点。
2
如何选择内标 物质以及内标 物的加入量。
Fra Baidu bibliotek
3
实验中试样溶 液和对照品溶 液中的内标物 浓度是否必须 相同？为什么？
9
1 2 3 平均值
对照品溶液 Ai Ais Ai /Ais
试样溶液 Ai Ais Ai/Ais
7
3. 实验内容
➢ 结果计算：
按下试计算对乙酰氨基酚的百分含量。
w(% ) （ （AAii
/ /
Ais）试 样 Ais）对 照
mi对 照 m试 样
100%
式中mi对照是对照溶液中组分i的量。
8
4. 思考题
➢ 流动相：甲醇-水（60:40) ； ➢ 流速：0.6 ml/min ； ➢ 检测波长： 257 nm ；
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➢ 柱温：室温；
3. 实验内容
➢ 内标溶液的配制：
称取非那西丁约0.25g
50ml量瓶 （甲醇定容）
➢ 对照品溶液的配制：
精密称取对乙酰氨基
Contents
1. 实验目的 2. 实验原理 3. 实验内容 4. 思考题
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1. 实验目的
Hot Tip
➢熟悉高效液相色谱仪的使用方法; ➢掌握用内标对比法的实验步骤、结果
和计算方法。
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2. 实验原理
内标对比法
（A i
（A i
/ Ais）试样 / Ais）对照
ci 试样 ci 对照
ci 试样
（ （AAi i
/ /
Ais）试样 Ais）对照
ci 对照
对乙酰氨基酚稀碱溶 液在（257±1）nm 波长处有最大吸收， 可以用于定量测定
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3. 实验内容-色谱条件
➢ 仪器：日立L-7100输液泵，L-7400紫 外检测器；
管等
ODS色谱柱，容量瓶，移液
➢ 试剂：对乙酰氨基酚对照品，非那西
丁（内标
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3. 实验内容-色谱条件
酚对照品约50mg 精密量取内标
100ml量瓶（甲醇定容）
溶液10ml
50ml量瓶（流动相定容）
1ml
➢ 试精样密称溶取对液乙的酰氨配基酚制样品：约50mg，其余步骤同上。 6
3. 实验内容
➢ 进样分析：
对乙酰氨基酚对照品溶液经0.45µm 滤膜滤过。用微量注射器吸 取续滤液，进样20µl。记录色谱图，重复3次。以同样方法分析 试样溶液。按下表记录峰面积。
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比较外标法与 内标法、内标 对比法定量的 优缺点。
2
如何选择内标 物质以及内标 物的加入量。
Fra Baidu bibliotek
3
实验中试样溶 液和对照品溶 液中的内标物 浓度是否必须 相同？为什么？
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1 2 3 平均值
对照品溶液 Ai Ais Ai /Ais
试样溶液 Ai Ais Ai/Ais
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3. 实验内容
➢ 结果计算：
按下试计算对乙酰氨基酚的百分含量。
w(% ) （ （AAii
/ /
Ais）试 样 Ais）对 照
mi对 照 m试 样
100%
式中mi对照是对照溶液中组分i的量。
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4. 思考题