第七章体液蛋白质检验

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(七)铜蓝蛋白(CER/CP)
急性时相反应蛋白
结构: MW=12-16 万, 1046个aa残基构成的单链多肽,含 糖约10%,每分子铜蓝蛋白可结合6~8个铜原子。
理化性质:肝合成,巨噬细胞和淋巴细胞合成少量;pI 值 为4.4, 具遗传基因多态性。
测定方法:免疫化学(扩散或比浊)等
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测定方法:免疫化学法(扩散,浊度),化学法(间接法), ELISA法等
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功能:与免疫防御功能有关,机制不详;抑制血小板凝集 影响胶原纤维形成;参与脂类运输。
临床意义: 升高:急性炎症,组织损伤,风湿,肿瘤,AMI ,溃结时; 降低:营养不良降低, 严重肝损伤和雌激素作用。
参考值:0.25-2.0g/L 。
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(四)甲胎蛋白(AFP)
结构:590个aa残基构成的单链多肽, MW=6.5万~7万, 含4%的糖。
理化性质:pI值4.7-4.8,在白蛋白和α1-球蛋白之间。胎 儿肝/卵黄囊合成,成人量微,升高由于肿瘤细胞合成。
测定方法:免疫化学法(扩散,火箭电泳),ELISA等
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功能:胎儿血浆主要蛋白质,调节肝细胞生长和脑细胞发 育;抑制细胞和体液的免疫反应;维持正常妊娠,防止母婴 排斥。 临床意义:胎儿产前监测(羊水或母血) 增高:原发性肝癌患者诊断和鉴别(80%原发增高), 其他 癌症也可见增高。
第七章
体液蛋白质检验
人类白蛋白分子
1
本章内容概要:
第一节 概述
第二节 体液蛋白质测定
2
本章教学要求:
1、掌握血浆蛋白质的组成、功能及分类;个别血浆蛋白质 (前白蛋白、白蛋白)的来源和生理功能;血清总蛋白和白 蛋白的测定方法和原理。 2、熟悉急性时相反应蛋白的概念和种类;血清球蛋白和纤 维蛋白原的测定方法。 3、了解其他蛋白质的来源和生理功能;尿液蛋白和脑脊液 蛋白的检测 。
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第一节 概述
一、血浆蛋白质的分类和功能
二、血清蛋白质电泳组分的临床分析
三、血浆蛋白质及其异常 四、其他体液蛋白质
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一、血浆蛋白质的分类和功能
(一)血浆蛋白质的组成、功能及分类
种类:1000种 500种 mg g 200种
组成:
含量:μg
来源:肝脏是蛋白质主要的加工厂
血浆蛋白质的功能



节炎、风湿性心脏病等 急性心肌梗死 恶性肿瘤
手术、创伤
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APR的机制

炎症损伤部位释放的细胞因子,包括白介素、肿瘤坏死 因子α和β、干扰素以及血小板活化因子等, 引发肝细 胞中上述蛋白质合成量的改变。
正向APP是机体防御机制的一个部分,如: 增加的蛋白酶抑制剂控制组织中的酶活性 触珠蛋白保护从破坏红细胞中释放的Hb C反应蛋白等可活化补体 负向APP多作为营养蛋白,此时合成减少,可为合成正向 APPs提供更多的氨基酸原料。 14
测定方法:免疫化学等
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功能:与多种分子和离子结合,影响蛋白水解酶活性(主要 的蛋白酶抑制剂具有选择性保护某些酶的作用)。
临床意义:婴幼儿及儿童比成人高; 升高:雌激素,低蛋白血症尤其是肾病综合征时,可显 著升高以维持血浆胶体渗透压; 降低:胰腺炎及前列腺癌时。
参考值:1.31-2.93g/L
临床意义: 升高:急性时相反应; 降低:血管内溶血时;雌激素作用。 参考值:0.5-2.2 g/L
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(六)α2-巨球蛋白(AMG)不属于急性时相反应蛋白
结构: MW=62~8Fra Baidu bibliotek 万,分子量最大,由四个相同的亚基组 成,含糖量约8%。
理化性质:肝细胞与单核吞噬细胞系统中合成,半寿期5 天。
①营养作用,修补组织蛋白; ②维持血浆胶体渗透压:主要是白蛋白; ③作为PH缓冲系统的一部分:酸性或碱性蛋白质; ④运输作用:作为激素、维生素、脂类、代谢产物、离子、 药物等的载体; ⑤体液免疫防御系统:作为免疫球蛋白与补体等免疫分子; ⑥催化作用:酶的本质; ⑦代谢调控作用;作为底物,酶或中间产物抑制或激活组织 蛋白酶; ⑧参与凝血与纤维蛋白溶解;:除Ⅳ因子外均可。
测定方法:色素结合法:溴甲酚绿(BCG),溴甲酚紫(BCP), 盐析等。
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功能:营养作用,载体功能(高亲和力),维持血浆渗透压 和正常pH值。 临床意义:合成受食物影响,敏感性较低。 降低:在营养不良,肝功不全,急慢性肝疾病时; 增高:少见,假性升高。 参考值:35-50 g/L
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功能:蛋白酶抑制物(具有90%的抑制蛋白酶活力)。如 糜蛋白酶,弹性蛋白酶,但此抑制作用有明显的pH依赖性。
结构: MW=54000,四个相同亚基构成的四聚体。 理化性质:pI=4.7,肝细胞合成,半寿期12 小时。 测定方法:免疫比浊法/免疫扩散技术。
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功能:营养指标,载体功能(甲状腺素/维生素A)。 临床意义: 1.作为营养不良的早期指标; 2.作为肝功能不全的指标,比Alb更灵敏; 3.负性急性时相反应蛋白,急性炎症,恶性肿瘤, 肝硬化 及肾炎等情况下,PA迅速降低。
功能:具氧化酶活性且起抗氧化剂作用,铜的无毒代谢库 临床意义: 增加—感染,创伤,肿瘤; 降低--营养不良,严重肝病及肾综;协助诊断Wilson病(肝 豆状核变性)
急性时相反应(acute phase reaction,APR): 血浆蛋 白质对急性炎症和组织损伤的非特异性反应。
此时许多蛋白质:如α 1-抗胰蛋白酶、α 1-酸性糖蛋白、结合珠蛋白、 铜蓝蛋白、 C4、C3、纤维蛋白原和C-反应蛋白等浓度显著升高或升高, 而少数蛋白质如前清蛋白、清蛋白、转铁蛋白则出现相应下降。
1.肾病综合征
2. 肝硬化
IgG 型
IgA 型
3.多发性骨髓瘤
正常图谱
(四)γ球蛋白增多与M蛋白
Ig 多克隆性增多: γ区带呈弥散性升高 区带呈弥散性升高 ♦Ig 多克隆性增多: γ
见于反复或慢性感染、自身免疫性疾病、肝细胞 见于反复或慢性感染、自身免疫性疾病、肝细胞 疾 疾病或寄生虫感染。 病或寄生虫感染。


APR的时相


C-反应蛋白:首先升高 α1-酸性糖蛋白:12小时内也升高 α1-抗胰蛋白酶、触珠蛋白、C4和纤维蛋白原然后 升高 C3和铜蓝蛋白:最后是升高 通常在2~5天内这些APPs达到最高值

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测定APP的临床意义
帮助监测炎症的发生、变化和观察治疗反应, 尤其是那些升高最早和最多的蛋白质
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二、血浆蛋白质
(一)前白蛋白(PA)
(二)白蛋白(ALB) (三)α1-酸性糖蛋白(AAG)
(四)甲胎蛋白(AFP)
(五)结合珠蛋白(Hp) (六)α2-巨球蛋白(AMG) (七)铜蓝蛋白(CER/CP) (八)转铁蛋白(TRF)
(九)β2 -微球蛋白(BMG)
(十)C-反应蛋白质(CRP)
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1. 2. 3. 4. 5. 6. 作为运载蛋白 组织蛋白酶抑制物 在血浆中起催化作用的酶 参与代谢调控作用的蛋白质和肽类激素 参与凝血与纤维蛋白溶解 组成体液免疫防御系统(Ig与补体 )
生物 化学
所有血浆蛋白质能 维持血浆胶体渗透压 组成血液pH缓冲系统
(三)影响血浆蛋白质浓度的因素
1. 急性时相反应
急性时相反应蛋白(acute phase reactive protein, APP):对急性炎症和组织损伤起非特异反应从而出现浓度变化 的血浆蛋白质。 增加的蛋白质称为正向APP
下降的蛋白质称为负向APP
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机体哪些情况会出现急性时相反应?
急性细菌性感染如急性肺炎、链球菌感染性肾炎 急性非特异性炎症如风湿性关节炎、类风湿性关
参考值: 0.18~0.45g/L 。
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急性时相反应蛋白
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(二)白蛋白(ALB) 急性时相反应蛋白
结构:585个aa残基构成的单链多肽, MW=66458,含17个二硫 键。
理化性质:pI=4-5.8,肝细胞合成但不储存,半衰期为15-19 天,占总蛋白的40%-60%,pH7.4时带负电。
参考值:20-100μg/L(成人) < 5μg/L(新生儿)
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(五)结合珠蛋白(Hp)
急性时相反应蛋白
结构: 两对肽链形成四聚体,有变异体。
理化性质:肝合成, pI 值为4.1,电泳位a2 -球蛋白区带
测定方法:电泳法,免疫化学法(扩散,浊度),化学法等
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功能: 与红细胞中释出自由Hb 结合,防止Hb 从尿中丢失保存 铁, 急性溶血后一周再生恢复。 高效的过氧化物酶。 需铁细菌的天然抑菌剂。
临床意义: 降低:血浆AAT仅见于胎儿呼吸迫综合症。 升高:炎症、术后,某些激素治疗后。 参考值: 0.83-1.99g/L
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(三)α1-酸性糖蛋白(AAG) 急性时相反应蛋白
结构:181个aa残基构成的单链多肽, MW=4万,含45%的糖, 其中唾液酸占11%-12%。
理化性质:pI值2.7-3.5,肝合成,脓毒症时粒细胞和单核 细胞及某些肿瘤组织也可合成。 位于α1-球蛋白区带。
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血浆蛋白质的分类
盐析法:白蛋白/球蛋白(pH7.0半饱和的硫酸铵溶液) 分离方法 电泳法: 醋酸纤维素薄膜电泳:6种 琼脂糖凝胶电泳:13种 聚丙烯酰胺凝胶电泳:30种 SDS聚丙烯酰胺凝胶等电双向电泳:300种 分 辨 率 增 高
醋酸纤维素薄膜
-纤维蛋白原
+7
2.电泳分类法
醋纤膜电泳或琼脂糖电泳: 5 个成 醋纤膜电泳或琼脂糖电泳: 5 个成分 分 清蛋白 清蛋白 是临床实验室常 α 1球蛋白 α 1球蛋白 α 2球蛋白 β 球蛋白 γ 球蛋 用的血浆蛋白质 α 2球蛋白 白 电泳方法 β 球蛋白 分辨率高时:可有 7个成分 有β 1和 γβ 球蛋白 2 α 2中也可有两条 分辨率高时:可有7个成分 聚丙烯酰胺凝胶电泳: 可以分出30 有β 1和β 2 多种蛋白质 α 2中也可有两条 聚丙烯酰胺凝胶电泳: 可以分出30多种蛋白质
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二、血清蛋白质电泳组分的临床分析
血浆蛋白质和血清蛋白质有何不同? 血浆蛋白质和血清蛋白质有何不同? 血浆:为生理状况 血浆:为生理状况
血清:为常用检测标本 血清:为常用检测标本
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(一)血清蛋白质电泳的正常组分及其含量
醋纤膜或琼脂糖电泳正常区带 醋纤膜电泳正常百分含量
清蛋白: 57 %~ 68 %α 球 清蛋白: 57 %~ 68 % 1 α 1.0%~ 5.7 % 1球蛋白: 蛋白: 1.0%~ 5.7% α 球蛋白:
( 4 )蛋白类激素:胰岛素、胰高血糖素、生长激素等 ( 4 )蛋白类激素:胰岛素、胰高血糖素、生长激素等 ( 5 )凝血蛋白类 ( 5 )凝血蛋白类
( 6 )免疫球蛋白类 ( 6 )免疫球蛋白类 ( 7 )补体蛋白类 ( 7 )补体蛋白类
还有许多种类的蛋白质未被认识 还有许多种类的蛋白质未被认识
(二)血浆蛋白质的功能
Ig 单克隆性增多- M 蛋白: γ区带局部有深染窄带 区带局部有深染窄 ♦Ig 单克隆性增多- M 蛋白: γ
带 浆细胞病、尤其恶性浆细胞病时, 异常浆细胞单克 浆细胞病、尤其恶性浆细胞病时, 异常浆细胞单 病 隆增殖, 产生大量单克隆Ig或轻链或重链片段, 克隆增殖, 产生大量单克隆Ig或轻链或重链片段, 人血清或尿液中可出现结构单一的 M蛋白 病人血清或尿液中可出现结构单一的M蛋白
3.功能分类法
(1)运输载体类 血浆脂蛋白:包括CM、VLDL、LDL、HDL等 前清蛋白与清蛋白 甲状腺素结合球蛋白 皮质素结合球蛋白 类固醇激素结合球蛋白 视黄醛结合蛋白 转铁蛋白 触珠蛋白 血色素结合蛋白 铜蓝蛋白
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2.功能分类法
( 2 )蛋白酶抑制物:包括 α -抗胰蛋白酶、 α -抗糜蛋 11 11 ( 2 )蛋白酶抑制物:包括 α 抗胰蛋白酶、 α 抗糜蛋 白酶、 6种以上 白酶、α 2-巨球蛋白等 α 2-巨球蛋白等 6种以上 ( 3 )血清酶类:血浆固有酶如 LCAT 等 ( 3 )血清酶类:血浆固有酶如 LCAT 等 组织细胞少量释放的细胞内酶 组织细胞少量释放的细胞内酶 细胞破裂而进入血循环 细胞破裂而进入血循环的 的细胞内酶 细胞内酶
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扫描图谱
α 4.9 11.2% 7 2球蛋白: 4.9 %~11.2 %%~ β 球蛋白: β 球蛋白: 7%~13% %~ 13% γ 球蛋白: γ 球蛋白: 9.8 9.8 %~ 18.2 %~ 18.2 % %
区带图谱
kk
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典型的异常电泳图谱及其扫描曲线
α2
典型的β -γ 桥 β 不典型β -γ 桥
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