植物细胞悬浮培养技术

机械法(研或刮） 酶解法
机械法和酶解法比较 机械法
1. 细胞不受到酶的伤害； 2. 不用质壁分离； 3. 细胞产量低； 4. 细胞易破。 1. 细胞受到酶的伤害； 2. 要质壁分离； 3. 细胞产量高； 4. 细胞不易破。
酶解法
2
由培养组织（愈伤组织）分离单细胞
材料：胡萝卜肉质根
步骤：
1 诱导产生愈伤组织 2 愈伤组织反复继代，使组织 不断增殖，提高愈伤组织的松 散性；
• 细胞次级代谢产物： • 植物生长到一定时期，由次 级代谢产生的一类细胞生命活动 或生长发育正常进行的非必需的 不分子有机物。
切取 形成层 移栽
无菌 接种
脱分化
诱导愈伤组织 的形成
培养室
再分化 试管苗的形成
植 物 组 织 培 养
6 5
再分化
(愈伤组织) 4 脱分化
1
3
2
脱分化
就是让已经分化的细胞，经过诱导后，失去 其特有的结构和功能而转变成未分化细胞的 过程。
脱分化的实质和结果分别是什么？ 实质是恢复细胞的全能性过程。 结果是形成愈伤组织。
愈伤组织
原指植物体受伤时产生 于伤口周围的组织。现 多指切取植物体的一部 分，置于含有生长素和 细胞分裂素的培养液中 培养，诱导产生的无定 形的组织团块。
菠萝的愈伤组织
愈伤组织的特点 排列疏松、高度液泡化的无定形状态薄壁细胞团 再分化： 脱分化产生的愈伤组织在培养过程中重新分 化成根或芽等器官的过程。
5、继代培养最佳继代时期：
选择指数生长期和直线生长期。
细胞生长曲线：呈S形曲线 1 2
培 养 细 胞 数 目
滞后期 （微生物又叫适应期）
5
4 3
1 2
指数生长期 （百度文库生物又叫对数期）
3 直线生长期 4 5
培养时间
减慢期
静止期 （微生物又叫稳定期）
• 6、植物细胞培养的意义：
• 1）不受地理、季节和气候条件的限制； • 2）节省土地，降低成本，生产周期短，可大大提 高经济效益；不污染环境 • 3）可代替整体植株在工厂内连续生产所需产物； • 4）可通过添加抑制剂等使生物合成按照人的意志 进行； • 5）可通过诱变筛选，获得高产细胞株，并且可以 进行特定的生物转化获得新的有用物质。
当细胞分裂素和生长 素共同使用时，能刺激 愈伤组织的形成，而通 过调节二者的浓度比， 就可以调控植物细胞培 养过程中芽和根的形成， 称为“激素杠杆”。
生 长 素
根 芽
细胞分裂素
在组织培养实验中，为什么要强调所用器械的灭菌和 实验人员的无菌操作？
植物组织培养中用到的培养基含有丰富的营养成 分，有利于培养物的生长，然而各种杂菌同样也可以 在上面迅速生长，所以植物组织培养过程中污染现象 经常发生。培养基一旦被污染，迅速生长的各种杂菌 不但会和培养物争夺营养，而且这些杂菌生长的过程 中会生成大量对培养物有害的物质，导致培养物迅速 死亡。
继代
悬浮
摇床用于振荡
3 悬浮培养：将愈伤组织 在液体培养基中培养，建立 优点：细胞团成小 细胞团或单细胞； 悬浮培养物 在培养基中均匀分 布；有空气交流。
愈伤组织
悬浮培养
4、悬浮继代培养
分批培养 连续培养
分批培养
继代
连续培养 加入培养基
二者体积相等
排出培养基及其培养物
分：开放式连续培养 封闭式连续培养
植 物 细 胞
培
养
技
术
植物细胞培养的过程：
愈伤组织 或其它分散细胞 继代培养 细胞群体 扩大培养 发酵技术
单个 悬浮培养 细胞 悬浮细胞
筛选 优良的 无性繁殖系 细胞代谢产物 分离提纯
1、单细胞的分离
由完整的植物器官分离单细胞
由培养组织（如愈伤组织） 中分离单细胞
叶片是分离单细胞的最好材料