常用培养基的配方修订稿

常用培养基的配方 WEIHUA system office room 【WEIHUA 16H-WEIHUA WEIHUA8Q8-伊红美蓝培养基原理一般用来鉴定大肠杆菌。

伊红为酸性染料，美蓝为碱性染料。

当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色，再与美蓝结合形成紫黑色菌落，并带有绿色金属光泽。

在碱性环境中不分解乳糖产酸的细菌不着色，伊红和美蓝不能结合，故沙门氏菌等为无色或琥珀色半透明菌落。

金葡菌在此培养基上不生长。

常用的伊红美蓝乳糖培养基，可用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌。

如果有大肠杆菌，因其强烈分解乳糖而产生大量的混合酸，菌体带H+，故菌落被染成深紫色，从菌落表面的反射光中还可以看到金属光泽。

用伊红美蓝培养基鉴定水中大肠杆菌步骤如下：①制作伊红美蓝培养基，趁热注入培养皿中，凝成平板，待用。

②用灭过菌的锥形瓶盛取河水或沟水，按1：10稀释。

③取毫升稀释液接种于伊红美蓝培养基上。

用平板划线分离法进行分离。

④将划线后的培养皿倒置37℃温箱中培养18～24小时。

培养基中会出现大肠杆菌菌落，菌落中心呈暗蓝黑色，发金属光泽。

⑤将菌落接种于斜面培养基上（由营养琼脂培养基制成）。

蛋白胨 10g乳糖 10g磷酸氢二钾 2g琼脂 20~30g蒸馏水 1000ml2%伊红水溶液 20ml%美蓝水溶液 13ml储备培养基的制备先将琼脂加至900ml蒸馏水，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾及蛋白胨，混匀使之溶解，再以蒸馏水补足至1000ml，调整PH为~。

趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加入乳糖，混匀后定量分装于烧瓶内，置高压蒸汽灭菌器内以115℃灭菌20min，贮存于冷暗处备用。

制法将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正PH，分装于烧瓶内，121℃高压灭菌15min备用。

临用时加入乳糖并加热溶化琼脂，冷至50～55℃，加入伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板。

麦康凯培养基原理1.全称麦康凯琼脂或是麦康凯2.一种用于分离鉴定的培养基，杆菌在其上呈红色或，有的菌落只是中间红色。

配置方法蛋白胨17g脙胨3g猪胆盐(或牛、羊胆盐) 5g氯化钠5g琼脂17g蒸馏水1000mL乳糖10g%结晶紫水溶液 10mL%中性红水5mL麦康凯-制法1 将蛋白胨、胨、胆盐和氯化钠溶解于400mL中，校正。

将琼脂加入600mL加热溶解。

将两液合并，分装于烧瓶内，121℃灭菌15min备用。

2 临用时加热溶化琼脂，趁热加入乳糖，冷至50～55℃时，加入结晶紫和中性红水溶液，摇匀后倾注平板。

注：结晶紫及中性红水溶液配好后须经高压灭菌。

吲哚试验吲哚（indol）试验有些细菌如大肠埃希菌、变形杆菌、霍乱弧菌等能分解培养基中的色氨酸生成吲哚（靛基质），经与试剂中的对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而呈红色，是为吲哚试验阳性。

LB培养基配方1g提取物0.5g1g-2g 100mlLB培养基-LB培养基条件LB培养基-固态培养基LB固体培养基1L和液体一样，加15g琼脂粉，一定要在温度降下之前加好抗生素，并且倒好板。

LB固体培养基倒板1.配制：100mlLB培养基加入1.5g琼脂粉2.抗生素的加入：高压灭菌后，将融化的LB固体培养基置与55℃的水浴中，待培养基温度降到55℃时（手可触摸）加入抗生素，以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀。

3.倒板：一般10ml倒1个板子。

培养基倒入培养皿后，打开盖子，在紫外下照10-15分钟。

4.保存：用封口胶封边，并倒置放于4℃保存，一个月内使用。

牛肉膏蛋白胨培养基（营养琼脂）配方10g；3g ；5g；15～20g；1000mL；制法将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内，加入15%氢氧化钠溶液约2mL，校正pH至～。

加入琼脂，加热煮沸，使琼脂溶化。

分装烧瓶，121℃高压灭菌15min。

注：此培养基可供一般细菌培养之用，可倾注平板或制成斜面。

如用于菌落计数，琼脂量为%；如作成平板或斜面，则应为2%。

甲基红试验甲基红试验-化学属性甲基红（Methyl Red）试验肠杆菌科各菌属都能发酵，在分解葡萄糖过程中产生，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基PH 值下降至以下，使甲基红变红。

甲基红试验-试验方法挑取新的待试纯培养物少许，接种于通用培养基，培养于36±1°C或30°C（以30°C较好）3~5天，从第二天起，每日取培养液1ml，加甲基红指示剂1~2滴，阳性呈鲜红色，弱阳性呈淡红色，阴性为黄色。

迄至发现阳性或至第5天仍为阴性、即可判定。

甲基红为酸性指示剂，pH范围为~，其pK值为。

故在以下，随酸度而增强黄色，在以上，则随碱度而增强黄色，在或上下接近时，可能变色不够明显，此时应延长培养，重复。

尿素酶某些能产生尿素酶，分解尿素产生大量的氨，使培养基变碱。

将待检菌接种于含有尿素的培养基中，35℃孵育18~24h，观察结果。

红色为阳性，不变为阴性。

主要用于肠杆菌科变形、普罗威登菌属、克雷伯菌属及假单胞菌属的鉴定。

明胶液化gelaune liquefaction指把的现象。

明胶液化-它的特征这种能力可因细菌种类不同而有显着差异，因此很早以来就被用来作为、的一种特征。

明胶液化-适应范围、、属均具有能力，而大肠杆菌就无这种液化能力。

由于明胶是在热水中溶解胶原（collagen）而成的，因此，它是由产生于体外的蛋白酶进行分解的。

用血清或蛋清清蛋白代替明胶也可看到大致相同的现象。

VP试验VP试验-试验简介[英] VP test检验中常用的之一。

某些在蛋白胨水中能分解葡萄糖产生，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在环境下，被空气中氧氧化为，二乙酰与蛋白胨中的生成红色化合物，称V－P（+）反应。

VP试验-试验方法1）O’Meara氏法：将试验菌接种于通用培养基，于36±1°C培养48h，培养液1ml加O’Meara试剂（加有%肌酸Creatine或肌酸酐Creatinine的40%氢氧化钠水溶液）1ml，摇动试管1~2min，静置于室温或36±1°C恒温箱，若4h内不呈现伊红、即判定为阴性。

亦有主张在48~50°C水浴放置2h后判定结果者。

2）Barritt氏法：将试验菌接种于通用培养基，于36±1°C培养4天、培养液先加入5°Cα萘酚（2-na-phthol）纯酒精溶液,再加40%氢氧化钾水溶液，摇动2~5min，阳性菌常立即呈现红色，若无红色出现，静置于室温或36±1°C恒温箱，如2h内仍不显现红色、可判定为阴性。

3）快速法：将%肌酸溶液2滴放于小试管中、挑取产酸反应的三糖铁琼脂斜面培养物一接种环，乳化接种于其中，加入5%α-萘酚3滴，40%氢氧化钠水溶液2滴，振动后放置5min，判定结果。

不产酸的培养物不能使用。

本试验一般用于肠杆菌科各菌属的鉴别。

在用于芽胞杆菌和葡萄球菌等其它细菌时，通用培养基中的磷酸盐可阻碍乙酰甲基醇的产生，故应省去或以氯化钠代替。

生理盐水生理盐水就是%的氯化钠水溶液,因为它的渗透压值和正常人的、组织液都是大致一样的，所以可以用作补液（不会降低和增加正常人体内钠离子浓度）以及其他医疗用途，也常用作体外培养活组织、细胞。

氯化钠：俗称盐、食盐。

菌注射用水一般使用来溶解难溶于药物使用的，生理盐水就是我们静脉点滴常用的％的氯化钠注射液，外用具有一定的杀菌消毒作用。

所以它们不是一样的概念. 。

人体生活中所处环境的配方：需用生理盐水浓度是%。

称取0.9克氯化钠，溶解在少量水中，稀释到100毫升。

血琼脂平板制法：取营养琼脂（PH7．6），加热使其溶解待冷至45-50℃，以灭菌操作于每100毫升加或血5-10毫升,轻轻摇匀，立即倾注于或分装，制成斜面备用。

血琼脂平板-用途用途：1．一般棉拭子均接种此培养基。

2．尿液，脓液3．分离标本用。

胰蛋白胨胰蛋白胨水成分胰蛋白胨10g；蒸馏水1000mL；制法将上述成分溶解，校正pH。

分装试管，121℃高压灭菌15min。

Baird－Parker氏培养基成分胰蛋白胨10g ；牛肉膏5g ；酵母膏1g ；丙酮酸钠10g ；甘氨酸12g ；氯化锂(LiCl·6H2O)5g ；琼脂20g ；蒸馏水950mL ；。

增菌剂的配法30%卵黄盐水50mL与除菌过滤的1%亚蹄酸钾溶液10mL混合，保存于冰箱内。

制法将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解。

冷至25℃，校正pH。

分装每瓶95mL，121℃高压灭菌15min。

临用时加热溶化琼脂，冷至50℃，每95mL加入预热至50℃的卵黄亚蹄酸钾增菌剂5mL，摇匀后倾注平板。

培养基应是致密不透明的。

使用前在冰箱储存不得超过48h。

血浆凝固酶血浆凝固酶-血浆凝固酶:是能使含有肝素等的人或兔血浆发生凝固的物质,致病株大多数能产生,是鉴别有无的重要.。