琼脂糖凝胶电泳原理步骤详细
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Percent agarose and resolution limits
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讲课内容
1
概述
2
琼脂糖凝胶的特点
3
琼脂糖凝胶电泳的应用
4
影响迁移率的因素
5
琼脂糖凝胶电泳分离血浆脂蛋白
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琼脂糖凝胶电泳分离血浆脂蛋白Leabharlann Baidu
❖原理（ Principle） 血清脂蛋白经饱和苏丹黑B预染后，以琼脂
3. 为不同类型的高脂蛋白血症、冠心病等提供生 化指标
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The gel with UV illumination, the ethidium bromide stained DNA glows orange
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Digital image of 3 plasmid restriction digests run on a 1% w/v agarose gel, 3 Volts/cm, stained with ethidium bromide. The DNA size marker is a commercial 1 kbp ladder. The position of the wells and direction of DNA migration is noted.
Acid sulfate Carboxylic acid groups
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D-半乳糖
3，6-脱水-L-半乳糖
琼脂糖（Agarose） 半乳糖及其衍生物构成的中性物质
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讲课内容
1
概述
2
琼脂糖凝胶的特点
3
琼脂糖凝胶电泳的应用
4
影响迁移率的因素
5
琼脂糖凝胶电泳分离血浆脂蛋白
2. 按超速离心法分
乳糜微粒(chylomicron,CM) ( < 0.94 ) 极低密度脂蛋白 (0.941.006) (very low density lipoprotein, VLDL) 中间密度脂蛋白 (1.0061.019) (intermediate density lipoprotein, IDL) 低密度脂蛋白LDL(1.0191.063) (low density lipoprotein, LDL) 高密度脂蛋白HDL(1.0631.21) (high density lipoprotein, HDL)
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（二）缺点(disadvantage) 1.机械强度差，易破碎，浓度不能太低 2.易被细菌污染，不易保存，临用前配制 3.琼脂糖支持层上的区带易于扩散，电泳后必须立
即固定染色 4.与PAGE相比，分子筛(molecular sieve)作用小，
区带少
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讲课内容
1
琼脂糖凝胶电泳 Agarose Gel Electrophoresis
李莉
http://www.shsmu.edu.cn/
讲课内容
1
概述
2
琼脂糖凝胶的特点
3
琼脂糖凝胶电泳的应用
4
影响迁移率的因素
5
琼脂糖凝胶电泳分离血浆脂蛋白
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概述 Introduction
❖Gel Electrophoresis ：由琼脂、琼脂糖、淀粉 胶及聚丙烯酰胺等物质作支持体的电泳。
糖凝胶为支持介质，在pH8.6巴比妥缓冲液中 电泳，根据各脂蛋白的组成、大小、形状分离 成不同区带。
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(一)血清脂蛋白(lipoprotein)的组成 ApoA ApoB
protein：Apoprotein ApoC ApoD ApoE
脂类 少量糖
甘油三酯 （TG） 磷脂 （PL）
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讲课内容
1
概述
2
琼脂糖凝胶的特点
3
琼脂糖凝胶电泳的应用
4
影响迁移率的因素
5
琼脂糖凝胶电泳分离血浆脂蛋白
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影响迁移率的因素 Factors affecting migration
❖the size of the molecule ❖conformation of the molecule ❖the agarose concentration of a gel ❖ Voltage
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琼脂糖凝胶的特点
（一）优点（advantage)
1.因不含硫酸根和羧基，几乎消除了琼脂的电渗 2.对蛋白质吸附极微，故无拖尾现象 3.凝胶结构均匀，孔径较大，可用来分离酶的复合物、核酸、
病毒 等大分子物质 4.透明度较好，可直接或干燥成薄膜后进行染色 5.不吸收紫外光，可直接利用紫外光吸收法作定量测定 6.有热可逆性
游离胆固醇 （FC） 胆固醇酯 （CE）
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（二）分类 1. 按电泳法分
乳糜微粒（chylomicron,CM） -脂蛋白 （ - lipoprotein） 前-脂蛋白（pre - lipoprotein ） -脂蛋白 （ - lipoprotein ）
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（三）结 构 特 征
CM
甘油三脂
多
胆固醇
多
蛋白质
少
带电量（Q）pH8.6为例
少
颗粒大小（mm）
大
密度
低
电泳速度
慢
形态
VLDL 规则
LDL 不规则
HDL
少 少 多 多 小 高 快
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❖ pH 8.6 > pI ，各种脂蛋白均带负电，电泳时 由负极到正极；VLDL为圆形，受阻力小，LDL 形态不规则，受阻力大，所以VLDL跑在前
概述
2
琼脂糖凝胶的特点
3
琼脂糖凝胶电泳的应用
4
影响迁移率的因素
5
琼脂糖凝胶电泳分离血浆脂蛋白
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琼脂糖凝胶电泳的应用 Applications of Agarose Gel Electrophoresis
1. 适用于大分子的核酸、核蛋白等的分离、鉴定 及纯化
2. 临床生化检验中常用于LDH、CK等同工酶的分 离与检测
❖ 特点（characteristic）： 1.可以制成非常均匀的凝胶，带电质点在凝胶的孔
中泳动 2. 电泳操作方法简便，电泳速度快 3. 分辨率高，重复性好，电泳图谱清晰 4. 适用于生化，免疫等定性定量测定
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琼脂糖凝胶（Agarose Gel ）
天然琼脂（agar）:又名琼胶、菜燕、冻粉 从 石花菜及其它红藻类植物提取出来的一种线状高 聚物。 琼脂糖（agarose） 琼脂果胶（agaropectin）
Percent agarose and resolution limits
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4
影响迁移率的因素
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琼脂糖凝胶电泳分离血浆脂蛋白
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琼脂糖凝胶电泳分离血浆脂蛋白Leabharlann Baidu
❖原理（ Principle） 血清脂蛋白经饱和苏丹黑B预染后，以琼脂
3. 为不同类型的高脂蛋白血症、冠心病等提供生 化指标
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The gel with UV illumination, the ethidium bromide stained DNA glows orange
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Digital image of 3 plasmid restriction digests run on a 1% w/v agarose gel, 3 Volts/cm, stained with ethidium bromide. The DNA size marker is a commercial 1 kbp ladder. The position of the wells and direction of DNA migration is noted.
Acid sulfate Carboxylic acid groups
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D-半乳糖
3，6-脱水-L-半乳糖
琼脂糖（Agarose） 半乳糖及其衍生物构成的中性物质
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琼脂糖凝胶的特点
3
琼脂糖凝胶电泳的应用
4
影响迁移率的因素
5
琼脂糖凝胶电泳分离血浆脂蛋白
2. 按超速离心法分
乳糜微粒(chylomicron,CM) ( < 0.94 ) 极低密度脂蛋白 (0.941.006) (very low density lipoprotein, VLDL) 中间密度脂蛋白 (1.0061.019) (intermediate density lipoprotein, IDL) 低密度脂蛋白LDL(1.0191.063) (low density lipoprotein, LDL) 高密度脂蛋白HDL(1.0631.21) (high density lipoprotein, HDL)
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（二）缺点(disadvantage) 1.机械强度差，易破碎，浓度不能太低 2.易被细菌污染，不易保存，临用前配制 3.琼脂糖支持层上的区带易于扩散，电泳后必须立
即固定染色 4.与PAGE相比，分子筛(molecular sieve)作用小，
区带少
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琼脂糖凝胶电泳 Agarose Gel Electrophoresis
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概述
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3
琼脂糖凝胶电泳的应用
4
影响迁移率的因素
5
琼脂糖凝胶电泳分离血浆脂蛋白
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概述 Introduction
❖Gel Electrophoresis ：由琼脂、琼脂糖、淀粉 胶及聚丙烯酰胺等物质作支持体的电泳。
糖凝胶为支持介质，在pH8.6巴比妥缓冲液中 电泳，根据各脂蛋白的组成、大小、形状分离 成不同区带。
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(一)血清脂蛋白(lipoprotein)的组成 ApoA ApoB
protein：Apoprotein ApoC ApoD ApoE
脂类 少量糖
甘油三酯 （TG） 磷脂 （PL）
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概述
2
琼脂糖凝胶的特点
3
琼脂糖凝胶电泳的应用
4
影响迁移率的因素
5
琼脂糖凝胶电泳分离血浆脂蛋白
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影响迁移率的因素 Factors affecting migration
❖the size of the molecule ❖conformation of the molecule ❖the agarose concentration of a gel ❖ Voltage
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琼脂糖凝胶的特点
（一）优点（advantage)
1.因不含硫酸根和羧基，几乎消除了琼脂的电渗 2.对蛋白质吸附极微，故无拖尾现象 3.凝胶结构均匀，孔径较大，可用来分离酶的复合物、核酸、
病毒 等大分子物质 4.透明度较好，可直接或干燥成薄膜后进行染色 5.不吸收紫外光，可直接利用紫外光吸收法作定量测定 6.有热可逆性
游离胆固醇 （FC） 胆固醇酯 （CE）
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（二）分类 1. 按电泳法分
乳糜微粒（chylomicron,CM） -脂蛋白 （ - lipoprotein） 前-脂蛋白（pre - lipoprotein ） -脂蛋白 （ - lipoprotein ）
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（三）结 构 特 征
CM
甘油三脂
多
胆固醇
多
蛋白质
少
带电量（Q）pH8.6为例
少
颗粒大小（mm）
大
密度
低
电泳速度
慢
形态
VLDL 规则
LDL 不规则
HDL
少 少 多 多 小 高 快
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❖ pH 8.6 > pI ，各种脂蛋白均带负电，电泳时 由负极到正极；VLDL为圆形，受阻力小，LDL 形态不规则，受阻力大，所以VLDL跑在前
概述
2
琼脂糖凝胶的特点
3
琼脂糖凝胶电泳的应用
4
影响迁移率的因素
5
琼脂糖凝胶电泳分离血浆脂蛋白
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琼脂糖凝胶电泳的应用 Applications of Agarose Gel Electrophoresis
1. 适用于大分子的核酸、核蛋白等的分离、鉴定 及纯化
2. 临床生化检验中常用于LDH、CK等同工酶的分 离与检测
❖ 特点（characteristic）： 1.可以制成非常均匀的凝胶，带电质点在凝胶的孔
中泳动 2. 电泳操作方法简便，电泳速度快 3. 分辨率高，重复性好，电泳图谱清晰 4. 适用于生化，免疫等定性定量测定
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琼脂糖凝胶（Agarose Gel ）
天然琼脂（agar）:又名琼胶、菜燕、冻粉 从 石花菜及其它红藻类植物提取出来的一种线状高 聚物。 琼脂糖（agarose） 琼脂果胶（agaropectin）