细胞各种染色方法
常用染色方法.
7
中性杆状核粒细胞
中性分叶核粒细胞
嗜酸性粒细胞
8
嗜碱性粒细胞
单核细胞
淋巴细胞
网织红细胞染色方法
一、概述： 根据网织红细胞的形态特征和成熟程度将其分为五型： 花冠型、丝球型、网型、破网型、点粒型。网织红细胞经 体外活体染色后，显微镜下凡含有两个以上的深染颗粒或 具有线网状结构的无核红细胞，即为网织红细胞。WHO 推荐使用新亚甲蓝染色液，因其对网织红细胞染色力强且 稳定而被首推。
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革兰染色法
三、注意事项： 1、涂片：菌液涂片时，用接种环蘸取菌液直接在玻片 上涂布；若是菌落，先取生理盐水1滴，置于玻片上，用 接种针挑取菌落，在盐水中涂布。 2、干燥：制备的涂片应自然干燥。 3、固定：多采用加热固定，目的在于保持细胞原有的 形态和结构，杀死细菌，使染料易于着色，并是细菌附着 于玻片上不易脱落。自然冷却后在染色。 4、革兰氏染色成败的关键是脱色时间，如脱色过度， 革兰氏阳性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阴性菌；如 脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被误认为是革兰氏阳性 菌。因此必须严格把握脱色时间。
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Miller窥盘法
由于目测计数误差较大,用Miller 窥盘法可减低标准误,特别是 RBC较少时. 盘:厚1mm,直径19mm,圆玻片上 划出格子:大方格内Ret/(小方格 内RBCx9)X100%
网织红细胞
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革兰染色法
一、基本原理： 革兰染色是细菌最基本的染色法，可用于标本涂片或 菌落涂片。细菌的等电点较低，约在PH2-5，一般情况下 细菌带负电荷，易于被带正电荷的碱性染料（结晶紫，碱 性复红）着色。染色结果将细菌分为革兰阳性（紫色）和 革兰阴性（红色）两类。
常用的染色方法
细胞染色方法大全
欢迎阅读Hoechst染色:hoechst可以穿过活细胞膜与细胞核结合(主要为凋亡活细胞)在紫外光下将核染为蓝色.Hoechst染细胞核会影响共聚焦显微镜对该样本其他荧光的观察效果.hoechst有hoechest33342和hoechst33258两种hoechsts33258，hoechst33342二者区别不大，但是hoechst33342对细胞的毒性作用更小一些，所以一般来说hoechsts33258用于细胞固定后再染色，而hoechst33342则可以对活细胞直接进行染色！染色步骤PI用于细核染红.用PIPI单一外翻色荧光。
JC-1染色JC-1是一种阳离子染料，可以在线粒体内聚集，低浓度时主要以单体(monomer)存在，发射光以绿光(～525nm)为主；而在高浓度时则可以形成多聚体(aggregation)，发射光以红光(-590nm)为主。
线粒体本身存在一定的极性(polarization)，其外膜为负极，内膜为正极。
电位差由Ca2+、Na+和H+流调控。
当线粒体状态良好时对JC-l摄取量少，因而在线粒体内主要以单体的形式存在绿光强度/红光强度的比值较高。
在线粒体发生去极化(depolarization)时，线粒内JC-l的浓度较高，多以欢迎阅读多聚体的形式存在，绿光强度/红光强度的比值降低。
JC-1染色的绿光强度/红光强度仅取决于线粒体的膜电势(membranepotential)，而与线粒体的形态、体积和密度都无关，因而能更好地反映线粒体的功能状态。
由于凋亡发生的早期存在线粒体的去极性，因此，JC-1染色被用于检测凋亡的早期发生。
其实验方法如下。
JC-l染色非常简单。
首先可将成品JC-1以DMSO配成储存液(1～5mg/ml)，储存于-20℃，用时以10-30min收集红/490nm，发射：原理：用品：1.4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4度保存。
医学知识之细胞染色
细胞染色一).瑞特(Wright)染色法：为发观察细胞内部结构，识别各种细胞及其异常变化，血涂片必须嘲行染色。
血涂片的各种染色方法大多是罗氏染色法衍变来的。
目前常用瑞特染色法。
(1)瑞特染料是由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝组成有复合染料。
亚甲蓝为四甲基硫堇染料，有对醌型和邻醌型两种结构。
通常为氯盐，即氯化美蓝。
美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料。
市售美蓝中部分已被氧化为天青。
伊红通常为钠盐。
即伊红和伊混合后，产生一种憎液性胶体伊红美蓝中性沉淀，即瑞特染料。
(2)细胞的染色既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用，各种细胞成分化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样。
因此，用本染料液染色后，在同一血片上，可以看到各种不同的色彩，例如血红蛋白，嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结果，染粉红色，称为嗜酸性物质;细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色，称为嗜碱性物质;中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫色，称为中性物质。
(3)PH对细胞染色有影响。
细胞各种成分均不蛋白质，由于蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液PH而定，在偏酸性环境中下在电荷增多，易与伊红结合，染色偏红;在偏三性环境中负电荷增多，易与美蓝或天青结合，染色偏蓝。
因此细胞染色对氢离子浓度十分敏感，染色用正经片必须清洁，无酸碱污染。
配制顼特液必须用优质甲醇，稀释染色必须用缓冲液，冲洗用水应近中性，否则可导致各种细胞染色反应异常，以致识别困难，甚至造成错误。
新鲜配制的染料偏碱，须在室温或是37℃下贮存一定时间，待染料成熟，主要是美蓝逐渐转变为天青B后才能使用，贮存时愈久，染色效果愈好。
EAM GILLILAND等采用吸光度比值作为顼特染液的质量规格。
rA测定方法如下：取瑞特染液15-25μl(视染液浓度而定)，加甲醇10ml稀释，混匀后以甲醇为空折管，分别以波长650nm和25nm比色。
Ra=a6 50/a525.因为美蓝吸收峰小组长为650nm，伊红吸收峰波长为525nm ;天青B吸收峰也为650nm但吸光度A约为美蓝的一半。
细胞各种染色方法1
细胞各种染色方法1细胞各种染色方法1细胞是生物体的基本结构单位，研究细胞结构和功能对于理解生命活动的基本原理具有重要意义。
而在细胞研究中，染色方法是最常用的一种技术手段之一、通过染色，可以使细胞内的各种器官、蛋白质、核酸等结构或分子可视化，从而更好地研究细胞的结构与功能。
下面介绍一些常用的细胞染色方法。
1.原位杂交染色原位杂交是一种通过特异性核酸探针与目标细胞中的特定DNA或RNA 序列结合，从而实现靶分子检测和定位的方法。
通过这种方法，可以查看细胞中特定基因或RNA的表达情况，从而揭示该基因或RNA在细胞中的作用。
在原位杂交染色中，探针可以用荧光标记或放射性同位素标记，并使用显微镜观察或放射性成像等方法进行检测。
2.免疫染色免疫染色是一种利用抗体与特定抗原结合的原理，对细胞或组织进行染色分析的方法。
由于抗体可以识别并结合到蛋白质、多肽、糖、核酸等生物分子上，所以免疫染色可以用于检测特定蛋白质或分子的存在和表达水平。
免疫染色可以通过荧光染色或酶标染色来实现，进一步结合显微镜观察和图像分析等方法，可以定量或定位地研究细胞内的各种分子。
3.组织化学染色组织化学染色是一种通过化学反应将细胞或组织中特定分子染色的方法。
常用的组织化学染色方法有哈维氏酸碱性染色、格里姆萨染色、伊红-Wright染色等。
这些染色方法可以用来观察细胞内的DNA、蛋白质、核酸以及细胞器等结构，并通过显微镜观察，从而对细胞和组织的结构和组成进行研究。
4.核酸染色核酸染色是一种利用荧光染料或放射性染料对DNA或RNA进行直接染色的方法。
通过核酸染色，可以观察到细胞和细胞核的形态、数量和分布情况，进而研究细胞的分裂、DNA合成和RNA转录等过程。
核酸染色方法包括荧光染色和核酸复合物染色等，其中荧光染色可用于显微观察，核酸复合物染色则可通过放射性成像等方法进行检测。
细胞染色是细胞生物学研究中非常重要的一种手段，通过染色可以使细胞内的各种结构与分子可视化，从而更好地研究细胞的结构与功能。
常用细胞染色方法
常用细胞染色方法
常用的细胞染色方法包括：
1.吉姆萨染色法：使用吉姆萨染料染色，可用于观察细胞核和细胞质的形态结构。
2.荧光染色法：使用荧光染料，通过荧光显微镜观察细胞内的特定结构、蛋白质或核酸等。
3.伊诺金染色法：使用伊诺金染料，主要用于显微镜下观察和鉴别细菌和真菌等微生物。
4.嗜酸染色法：使用嗜酸染料，能够染色细胞内的酸性结构和胞质。
5.嗜碱染色法：使用嗜碱染料，能够染色细胞内的碱性结构和胞质。
6.免疫组化染色法：利用特异性抗体与细胞中的特定蛋白质结合，再使用染料标记抗体来观察和定位细胞内的特定蛋白质。
7.核酸染色法：使用DNA或RNA特异性的染料，能够染色细胞内的核酸，常用于细胞周期和细胞分裂等研究。
8.血液细胞染色法：包括委氏染色法、中日染色法等，用于观察和鉴定血液细胞
类型和形态变化。
以上是一些常用的细胞染色方法，根据需要和研究目的的不同，可以选择合适的方法来观察和研究细胞。
血细胞的染色方法
血细胞的染色方法
血细胞的染色方法有以下几种：
1. Wright染色法：这是最常用的一种染色方法。
首先将薄片
经过固定、脱水、清洁等处理，然后放置在含有Wright染料
的溶液中染色，之后再用清水洗去多余的染料。
这种方法可以使红细胞呈粉红色，细胞核呈紫色。
2. Giemsa染色法：这种染色方法与Wright染色法类似，但染
料的浓度和染色时间稍有不同。
这种方法可以使红细胞呈橙红色，细胞核呈紫色。
3. 苏木精-伊红染色法：首先将薄片经过固定、脱水、清洁等
处理，然后将薄片放入苏木精溶液中染色，之后再用酒精漂洗，最后用伊红染料染色。
这种方法可以使红细胞呈红色，细胞核呈蓝色。
4. 嗜酸性染色法：这种方法可以用来染色嗜酸性粒细胞。
常用的嗜酸性染料有尤伯霉素、柠檬酸镉等。
5. 免疫染色法：这是一种利用抗体与细胞特定抗原的特异性结合来标记细胞的染色方法。
它可以用来检测一些特定的细胞类型或疾病标志物。
以上是一些常用的血细胞染色方法，在实际应用中选择染色方法会根据具体需要和目的来决定。
细胞各种染色方法
细胞各种染色方法细胞培养后，需要对其生长情况、形态甚至生物学性状进行连续地观察。
由于细胞小而复杂，若不借助适当的手段，则难以观察其形态、结构，更难发现细胞内各种组分的分子组成及功能。
目前，已有多种研究细胞的技术，从光镜到电子显微镜，从一般细胞化学法到免疫化学法，本章将重点介绍一些常用的观察和检测方法。
第一节培养细胞的常规检查和观察方法细胞在体外培养过程中需要每天进行常规检查和显微镜观察，及时了解细胞生长状态、数量改变、细胞形态、细胞有无移动、有无污染、培养液pH是否变酸、变黄是否更换等。
细胞常规检查观察的内容为：一、肉眼观察一般常规检查用肉眼即可观察，主要看培养液的颜色和透明度的变化。
正常情况下，培养液pH介于7.2～7.4之间，呈桃红色清亮透明。
加入细胞在培养瓶中置一般温箱培养时，随着细胞生长时间的延长，细胞代谢产生的酸性产物会使培养液pH值下降，引起颜色变浅变黄。
在超越缓冲范围后培养液酸化变黄，如不及时调节pH，会影响细胞的生长，甚至造成细胞退变死亡。
所以，一旦发现培养液变黄，应及时换液传代。
一般更换培养液的时间，依营养物的消耗而定，正常情况生长稳定的细胞2～3天换液一次，生长缓慢的细胞3～4天换液一次。
培养液中加Hepes或用5%CO2温箱培养可使pH维持稳定，利于细胞生长。
用含磷酸盐缓冲系统培养时，可因瓶及塞子漏气，CO2溢出，也可能由于培养瓶塞洗刷不洁、残留碱性物，使培养液变碱发红，只致使细胞难以生长，甚至死亡。
细胞换液传代后，若发现培养液很快变黄，要注意是否有细菌污染或培养器皿没有洗干净。
贴壁细胞培养时若出现混浊，多为污染。
悬浮培养的细胞，应将瓶竖起静置1小时，若培养基混浊示为污染，也可在显微镜下仔细观察有无污染现象出现。
二、显微镜观察生长良好的细胞，在显微镜下可观察到细胞透明度大，折光性强，轮廓不清。
相差显微镜观察时可见细胞部分细微结构。
若细胞生长状态不良，可见细胞轮廓增强，细胞折光性变弱，细胞胞质中出现空泡、脂滴和其他颗粒状物质，细胞之间空隙增大，细胞形态不规则，甚至失去原有细胞的特点，产生圆缩脱落，有时细胞表面及周围出现丝絮状物。
细胞化学染色法
醋酸AS-D萘酚酯酶染色 染色结果 、临床意义基本同α-NAE
染色。
α -丁酸萘酚酯酶染色 临床意义同α-NAE染色，特异性低
于α-NAE染色
酸性磷酸酶染色
原理： 偶氮偶联法： Gomori硫化铅法 抗酒石酸酸性磷酸酶染色
临床评价： 诊断多毛细胞白血病
毛细胞呈阳性，阳性反应不被L-酒石 酸抑制。
ＮＡＰ积分下降：
慢性粒细胞白血病（慢性期）、阵发性 睡眠性血红蛋白尿、骨髓增生异常综合 症、恶性组织细胞病等。
疾病的鉴别
1. 类白血病反应 血病
慢性粒细胞性白
2. 细菌性感染 病毒性感染
5. 恶性组织细胞病 反应性组织细胞增 多症
6. 真性红细胞增多症 继发性红细胞增 多症
单核细胞系统 原单（可为阴性）,其他为阳性。
淋巴：大多阴性，少数阳性。 巨核及血小板：阳性
临床评价
红血病、红白血病、骨髓增生异常综合 征中幼红细胞可阳性（均匀红色或块状）
白细胞系统疾病： 急淋：（原幼淋细胞阳性率升高，呈粗 颗粒或块状） 急粒：少数原粒呈阳性 急单：可呈阳性
M5 PAS(+)
红、沙黄等 染浆：伊红、刚果红、光绿等
四、种类
过氧化物酶染色、苏丹黑染色、 中性粒细胞碱性磷酸酶染色 过碘酸-雪夫反应 α-醋酸奈酚酯酶染色 酸性磷酸酶染色 铁染色
过氧化物酶染色(POX)
过氧化物酶： 是中性粒细胞含量最多的一种酶 主要存在于线粒体和溶酶体中 主要功能是破坏生物氧化过程中有剧毒 的过氧化物，使其放出氧，参加细胞内 氧化还原过程。
参考范围：
细胞外铁： （+）～（++）
细胞内铁：铁粒幼红细胞12% ～ 44%，以Ⅰ型为主，少数为Ⅱ型。
浆细胞染色方法
浆细胞染色方法
1.苏木精伊红染色法（H&E染色法）：
这是一种常规的组织切片染色方法，对于检测浆细胞的分布
和形态特征非常有效。
步骤如下：
1）将组织标本固定并嵌入石蜡中，然后切割成薄片。
2）将薄片置于苏木精溶液中染色，可以染出细胞核为深蓝色，胞质为红色。
3）用伊红溶液处理薄片，可使核仁染成深蓝色，细胞质和胶原纤维染成粉红色。
4）最后用透明剂处理薄片，然后覆盖玻璃片，观察和分析浆细胞的形态和分布。
2.伊红/橙G染色法：
这种染色方法也可用于浆细胞的染色，它可以使细胞质染成
橙色、胞核染成淡红色。
步骤如下：
1）将组织标本固定并嵌入石蜡中，然后切割成薄片。
2）将薄片置于5%的酸性酒红溶液中，用浓盐酸处理23秒钟，使浆细胞细胞浆呈现橙色。
3）用伊红溶液处理薄片，胞核呈现淡红色。
4）最后用透明剂处理薄片，然后覆盖玻璃片，观察和分析浆细胞的形态和分布。
3.免疫组化染色法：
这种方法使用特异性抗体标记目标蛋白，可用于检测浆细胞中特定抗体的表达。
步骤如下：
1）将组织标本固定并嵌入石蜡中，然后切割成薄片。
2）将薄片进行抗原修复处理，以恢复蛋白质的免疫反应性。
3）在薄片上加上特异性的抗体，与目标抗体结合形成免疫复合物。
4）用酶标记的二抗结合免疫复合物，生成可视化信号。
5）最后用染色剂染色，观察和分析浆细胞中目标抗体的表达情况。
细胞凋亡 染色种类
细胞凋亡染色种类
细胞凋亡染色有多种方法，包括以下几种常见的染色种类：
1. HE染色：这是一种常用的细胞凋亡染色方法，使用苏木素-伊红染料对细胞进行染色。
在光学显微镜下观察，凋亡细胞会呈现圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状的现象。
2. Giemsa染色：Giemsa染色也是一种常见的细胞凋亡染色方法。
正常细胞的核色泽均一，而凋亡细胞的染色质会浓缩、边缘化，核膜裂解，染色质分割成块状和凋亡小体等。
3. AO/PI双染色法：吖啶橙(AO)是一种荧光染料，能透过细胞膜使核DNA和RNA染色。
在荧光显微镜下观察，活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。
凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。
碘化丙啶(PI)是一种DNA 结合性染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而将细胞核染红。
因此，通过AO/PI双染色法可以区分活细胞、凋亡细胞和坏死细胞。
4. Hoechst染色：Hoechst染料与DNA的结合是非嵌入式的，主要结合在DNA的A-T碱基区。
在紫外光激发下，活细胞核呈均匀淡蓝色荧光，凋亡细胞则呈现亮蓝色，或核呈分叶状、边集的荧光。
5. TUNEL染色：这是一种检测细胞凋亡中DNA断裂的方法。
在细胞凋亡过程中，会激活DNA内切酶，导致DNA断裂。
TUNEL 染色可以标记这些断裂的DNA，从而检测细胞凋亡。
以上信息仅供参考，如需了解更多关于细胞凋亡染色的信息，建
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细胞各种染色方法
细胞各种染色方法细胞染色方法是一种用于研究细胞结构和功能的重要技术。
通过对细胞进行染色，可以使细胞成分和结构可见，便于观察和研究。
下面将介绍几种常用的细胞染色方法。
1.基本染色方法-干燥染色法干燥染色法是最常见的染色方法之一，用于观察细胞的形态和结构。
在细胞表面涂上染色剂（如吉姆萨、范斯丁染料等），然后用胶片或显微镜进行观察。
这种方法方便快捷，适用于常规的细胞观察。
-神经元染色法神经元染色法主要用于研究神经系统的结构和功能。
常见的神经元染色方法包括尼氏染色法、戈登染色法和格尔染色法等。
这些方法可以染色神经元的胞体、突触和轴突等结构，以及神经元之间的连接方式。
2.核酸染色方法-核酸荧光染色法核酸荧光染色法是一种用于检测细胞核酸的方法。
常见的核酸染色剂包括达尔林紫、伊曼纽尔蓝和乳胶蓝等。
这些荧光染料可以与DNA或RNA 结合，生成荧光信号，便于观察和分析。
-原位杂交法原位杂交法是一种利用互补的单链DNA或RNA探针与目标细胞中的互补序列发生杂交反应的方法。
这种方法可以检测特定的基因表达情况或检测一些病毒的感染情况。
常见的原位杂交方法包括原位PCR、荧光原位杂交和非放射性原位杂交等。
3.蛋白质染色方法-共聚焦显微镜染色法共聚焦显微镜染色法是一种利用荧光染料标记特定蛋白质的方法。
常见的荧光染料包括荧光素、乳酸钙蓝和荧光蛋白等。
这种方法可以使用不同的荧光染料标记不同的蛋白质，通过共聚焦显微镜观察细胞中的蛋白质分布和相互作用。
-银染法银染法是一种用于检测蛋白质的方法，特别适用于低表达量的蛋白质。
该方法通过将目标蛋白质与银离子结合，形成黑色或棕色的颗粒，便于观察和分析。
银染法常用于检测蛋白质在凝胶电泳中的分子量和含量。
4.细胞器染色方法-非特异性染色法非特异性染色法是一种用于检测细胞器的方法，常用的非特异性染色剂包括宙斯金、吉姆萨和荧光素等。
这些染料可以与细胞器特有的成分结合，使其在显微镜下可见。
-特异性染色法特异性染色法是一种用于检测特定细胞器的方法，常见的特异性染色剂包括桡胞蛋白、核蛋白和线粒体染料等。
细胞染色方法
细胞染色方法细胞染色是生物学研究中常用的一种技术手段，通过染色可以使细胞的形态、结构和功能更加清晰地展现出来，为细胞学研究提供了重要的帮助。
在细胞染色的过程中，我们可以利用不同的染色剂来染色，以观察细胞的形态和结构，从而更好地了解细胞的功能和特性。
本文将介绍几种常用的细胞染色方法，希望能够为您的细胞学研究提供一些帮助。
首先，常用的细胞染色方法之一是荧光染色法。
荧光染色法利用荧光染料对细胞进行标记，然后利用荧光显微镜观察染色的细胞。
荧光染色法具有高灵敏度和高分辨率的特点，可以用来观察细胞内的微小结构和分子。
常用的荧光染料有荧光素、DAPI、FITC等，它们可以针对不同的细胞结构和分子进行选择性染色，从而实现对细胞内不同成分的观察和分析。
其次，还有常规染色法。
常规染色法是指利用常规染色剂对细胞进行染色，然后在普通光学显微镜下观察染色的细胞。
常用的常规染色剂有伊红、甲苯胺蓝、格里姆萨染料等，它们可以染色细胞的细胞核、细胞质等不同部位，从而帮助我们观察细胞的形态和结构。
另外，还有免疫组织化学染色法。
免疫组织化学染色法是利用抗体对细胞内特定蛋白进行特异性染色的方法，通过这种方法可以对细胞内的特定蛋白进行定位和分析。
免疫组织化学染色法在细胞生物学和病理学研究中有着广泛的应用，可以帮助我们了解细胞内蛋白的表达和分布情况，从而对细胞的功能和特性进行深入研究。
最后，还有原位杂交染色法。
原位杂交染色法是利用标记的核酸探针对细胞内的特定核酸序列进行染色的方法，可以用来观察细胞内特定基因的表达和分布情况。
原位杂交染色法在遗传学和发育生物学研究中有着重要的应用，可以帮助我们了解细胞内基因的表达模式和调控机制。
细胞染色方法的选择应根据具体的研究目的和样本特点来确定，不同的染色方法有着各自的优缺点和适用范围，我们需要根据实际情况进行选择。
希望本文介绍的几种常用的细胞染色方法能够为您的细胞学研究提供一些参考，同时也希望能够为您在实验中的细胞染色工作提供一些帮助。
盘点细胞组织染色方法(一)
盘点细胞组织染色方法（一）引言：细胞组织染色是生物学和医学研究中常用的一种技术方法，它可以帮助科学家们观察和研究细胞的结构、功能和代谢过程。
本文将介绍盘点细胞组织染色方法中的一些常见技术，包括荧光染色、酶标染色、核酸染色、组织切片染色和特殊细胞组织染色方法。
正文：1. 荧光染色a. 选择适当的荧光染料：荧光染料的选择应考虑到目标细胞或组织的亲和性和可视性。
b. 预处理样本：在染色前，需要对样本进行适当的固定和处理，以保持细胞的结构完整性。
c. 染色条件优化：荧光染色的条件包括染料浓度、温度和时间等因素，需要根据具体实验进行优化。
d. 利用荧光显微镜观察：使用荧光显微镜观察样本时，要根据染色结果进行正确的激发光源和滤波器的选择。
2. 酶标染色a. 选择合适的酶标标记物：常用的酶标标记物有辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）等。
b. 优化染色条件：染色条件包括酶标记物的浓度、染色时间和温度等，应根据实验目的和样本类型进行优化。
c. 反应终止：在染色反应结束后，要进行适当的反应终止步骤，以避免染色产物的进一步发展。
d. 观察和分析：利用酶标显色的样本可以通过比较色素密度来定量分析，也可以使用显微镜观察和记录。
3. 核酸染色a. 选择适当的核酸染料：核酸染料有Ethidium Bromide(EB)、DAPI等，选择染料时要考虑到染色效果和对细胞活性的影响。
b. 处理样本：对于酶消化的样本，可以使用蛋白酶K消化去除蛋白质。
c. 染色条件优化：核酸染色的条件包括染料浓度、染色时间和温度等，需要针对具体实验进行优化。
d. 利用荧光显微镜观察：使用荧光显微镜观察核酸染色的样本时，根据染色结果选择适当的激发光源和滤波器。
4. 组织切片染色a. 制备组织切片：使用组织切片技术对组织样本进行快速冷冻或固定处理，然后切片得到薄片。
b. 染色处理：对组织切片进行适当的染色处理，可以采用荧光染色或酶标染色等方法。
细胞死亡染色方法
细胞死亡染色方法细胞死亡是细胞生命周期的一个重要过程，包括程序性细胞死亡（凋亡）和非程序性细胞死亡（坏死）。
为了研究细胞死亡的机制和过程，科学家们开发了各种细胞死亡染色方法，用于检测和识别死亡细胞。
本文将介绍几种常用的细胞死亡染色方法。
1. 基于细胞膜通透性的染色方法细胞膜通透性的改变是细胞死亡的一个重要特征。
当细胞死亡时，细胞膜的完整性受到破坏，导致细胞内部的某些物质溢出到细胞外。
常用的细胞膜通透性染色方法包括乙酸酸性溴化酶（Acidic BrdU TUNEL Assay）和乙酰化酯酶（Acetoxymethyl Ester）染色。
这些方法通过染色剂与细胞内物质的相互作用，使死亡细胞呈现出明显的颜色变化。
2. 基于DNA断裂的染色方法DNA断裂是细胞凋亡的一个关键步骤。
为了检测细胞的DNA断裂情况，科学家们开发了多种DNA染色方法。
其中最常用的是术后DNA损伤标记染色法（Terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling assay，TUNEL assay）。
TUNEL法利用术后DNA损伤修复酶（TdT）的能力，在DNA断裂的末端加上一段标记物（如生物素、荧光染料等），从而实现对DNA断裂的检测。
通过观察染色结果，可以判断细胞是否发生凋亡。
3. 基于细胞蛋白酶活性的染色方法细胞凋亡过程中，半胱氨酸蛋白酶（caspase）家族蛋白酶的活性显著增加。
因此，通过检测细胞内caspase活性的变化，可以间接判断细胞是否发生凋亡。
现有的细胞蛋白酶活性染色方法主要包括荧光标记底物法、酶联免疫吸附检测法和荧光共振能量转移法。
这些方法通过特定的染色剂与caspase活性产生的产物结合，使死亡细胞产生荧光信号或颜色变化。
4. 基于细胞膜电位的染色方法细胞凋亡时，细胞膜电位的改变是一个重要的特征。
通过检测细胞膜电位的变化，可以间接判断细胞是否发生凋亡。
细胞染色方法大全
Hoechst染色：hoechst可以穿过活细胞膜与细胞核结合(主要为凋亡活细胞)在紫外光下将核染为蓝色。
Hoechst染细胞核会影响共聚焦显微镜对该样本其他荧光的观察效果.hoechst有hoechest33342和hoechst33258两种hoechsts33258，hoechst33342二者区别不大，但是hoechst33342对细胞的毒性作用更小一些，所以一般来说hoechsts33258用于细胞固定后再染色，而hoechst33342则可以对活细胞直接进行染色! 染色步骤PI (Propidium Iodide碘化丙啶）染色:是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂,常用于细胞凋亡检测。
碘化丙啶（Propidium Iodide， PI）是一种核酸染料(红色），它不能透过完整的细胞膜，但凋亡中晚期的细胞和坏死细胞由于细胞膜通透性的增加,PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红.用PI单一染色观测培养细胞,只能表示细胞的坏死情况，而不是凋亡（当然晚期凋亡PI亦可着色）。
但是如果您只是想知道细胞的死亡情况，而不是仔细区分坏死或凋亡，那么PI 单一染色也可以。
但是如果您一定要认定细胞的凋亡，那么PI单一染色显然不够!annexin-v染色细胞凋亡早期，细胞膜标志发生改变.其中,磷脂酰丝氨酸(Annexin—V,PS）外翻，Annexin—V 在Ca+存在的条件下与其高亲和力特异性结合。
这样,Annexin—v 染色阳性,表示细胞处于早期凋亡状态。
Annexin—V结合不同的荧光抗体，就可以利用流式细胞仪、荧光显微镜以及共聚焦激光扫描显微镜检测细胞凋亡的发生。
Annexin V用FITC标记发绿色荧光；如果用PE标记就发红色荧光。
JC-1染色 JC—1是一种阳离子染料，可以在线粒体内聚集,低浓度时主要以单体(monomer）存在，发射光以绿光（~525nm）为主;而在高浓度时则可以形成多聚体（aggregation)，发射光以红光（-590nm）为主.线粒体本身存在一定的极性(polarization)，其外膜为负极，内膜为正极。
细胞染色方法
一、形态学观察方法二、1、HE染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有“出芽”现象。
三、2、丫啶橙（AO)染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。
凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。
四、3、台盼蓝染色：如果细胞膜不完整、破裂，台盼蓝染料进入细胞，细胞变蓝，即为坏死。
如果细胞膜完整，细胞不为台盼蓝染色，则为正常细胞或凋亡细胞。
此方法对反映细胞膜的完整性，区别坏死细胞有一定的帮助。
五、4、透射电镜观察：可见凋亡细胞表面微绒毛消失，核染色质固缩、边集，常呈新月形，核膜皱褶，胞质紧实，细胞器集中，胞膜起泡或出“芽”及凋亡小体和凋亡小体被临近巨噬细胞吞噬现象。
六、二、DNA凝胶电泳七、（一）、检测原理八、细胞发生凋亡或坏死，其细胞DNA均发生断裂，细胞内小分子量DNA片断增加，高分子DNA减少，胞质内出现DNA片断。
但凋亡细胞DNA断裂点均有规律的发生在核小体之间，出现180－200bpDNA片断，而坏死细胞的DNA断裂点为无特征的杂乱片断，利用此特征可以确定群体细胞的死亡，并可与坏死细胞区别。
九、（二）结果判断十、正常活细胞DNA 电泳出现阶梯状（LADDER)条带；坏死细胞DNA电泳类似血抹片时的连续性条带。
十一、三、酶联免疫吸附法（ELISA)核小体测定十二、凋亡细胞的DNA断裂使细胞质内出现核小体。
核小体由组蛋白及其伴随的DNA片断组成，可由ELISA法检测。
十三、（一）检测步骤十四、1、将凋亡细胞裂解后高速离心，其上清液中含有核小体；十五、2、在微定量板上吸附组蛋白体’十六、3、加上清夜使抗组蛋白抗体与核小体上的组蛋白结合‘十七、4、加辣过氧化物酶标记的抗DNA抗体使之与核小体上的DNA结合’十八、4、加酶的底物，测光吸收制。
十九、（二）用途二十、该法敏感性高，可检测5*100/ml个凋亡细胞。
可用于人、大鼠、小鼠的凋亡检测。
多种细胞染色方法比较
磷酸钙DNA复合物吸附细胞膜被细胞内吞
稳定转染，
瞬时转染
不适用于原代细胞（所需的DNA浓度较高），操作简便但重复性差，有些细胞不适用；细胞建议用CSCL梯度离心，转染是拷贝数较多
GIBCO BRL，Promega
阳离子脂质体法
带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物，然后脂质体上剩余的电核与细胞膜上的唾液酸残基的负电核结合；另一种解释是通过细胞是内吞作用而被进入细胞。(若DNA浓度过高，中和脂质体表面电核，而降低了与细胞的结合能力)
通过病毒中膜糖蛋白和宿主细胞表面的受体相互作用而进入宿主细胞，之后反转入酶启动合成DNA并随机整合到宿主基因组中
稳定转染，
特定宿主细胞
可用于难转染的细胞、原代细胞，体内细胞等，但携带基因不能太大（<8kb），细胞需处分裂期，需考虑安全因素
中国科学院典型培养物保藏委员会
腺病毒(双链DNA)
先和细胞表面的受体结合，继而在αv整合素介导下被细胞内吞
稳定转染，
瞬时转染，
所有细胞
除了具有阳离子脂质体的转染效率高，操作简单，适用范围广，重复性好等特点外，还具有在体内，转染效率高，细胞毒性低等特点，是新一代的转染试剂。
Sunma(梭华－Sofast®)
Qbiogene（jetPEI™）
Qiagen(SuperFect，Polyfect）
病毒介导法
逆转录病毒(RNA)
稳定转染，
瞬时转染，
所有细胞
使用方法简单，可携带大片段DNA，通用于各种类型的裸露DNA或RNA，能转染各种类型的细胞，没有免疫原性。虽在体外基因转染中有很高的效率，但在体内，能被血清清除，并在肺组织内累积，诱发强烈的抗炎反应，导致高水平的毒性，这在很大程度上限制了其应用
细胞染色方法
细胞染色方法细胞染色是生物学和医学领域中常用的一种实验技术，通过染色剂将细胞或细胞器的结构染色，以便观察和研究。
细胞染色方法的选择对于细胞学研究至关重要，不同的染色方法可以突出不同的细胞结构或分子，为科研工作提供重要的信息。
本文将介绍几种常用的细胞染色方法，希望能对您的实验工作有所帮助。
首先，常见的细胞染色方法之一是荧光染色。
荧光染色是利用荧光染料对细胞或组织进行染色，然后利用荧光显微镜观察。
荧光染色可以用于观察细胞器的分布和形态，也可以用于检测蛋白质的定位和表达水平。
常用的荧光染料包括荧光素、DAPI、FITC等，它们可以选择性地与DNA、蛋白质等结合，从而在显微镜下呈现出荧光信号。
荧光染色方法对于细胞内结构的研究具有重要意义，有助于揭示细胞的生理和病理过程。
其次，还有免疫组织化学染色法。
免疫组织化学染色是利用抗体对细胞或组织中的特定分子进行染色，从而实现对这些分子的检测和定位。
免疫组织化学染色可以用于检测蛋白质、细胞因子等分子的表达，也可以用于研究细胞凋亡、增殖等生理过程。
在免疫组织化学染色中，首先需要用特定的抗体与待检测分子结合，然后再加入染色剂进行染色，最后在显微镜下观察并分析结果。
免疫组织化学染色方法对于研究细胞信号转导、肿瘤生物标志物等具有重要意义。
此外，还有原位杂交染色法。
原位杂交染色是利用标记的核酸探针对细胞或组织中的特定核酸序列进行染色，从而实现对这些核酸序列的检测和定位。
原位杂交染色可以用于研究基因的表达模式、染色体结构和功能等。
在原位杂交染色中，首先需要合成标记的核酸探针，然后与待检测的核酸序列杂交，最后用染色剂进行染色。
原位杂交染色方法对于研究基因组学、细胞遗传学等领域具有重要意义。
细胞染色方法的选择应根据研究的目的和需要进行合理的选择，不同的染色方法可以提供不同的信息。
在进行细胞染色实验时，需要严格控制实验条件，选择合适的染色剂和探针，合理设计实验方案，从而获得可靠的实验结果。
常用的五种细胞化学染色方法
常用的五种细胞化学染色方法一、细胞化学染色方法概述细胞化学染色是生物学和医学研究中常用的技术手段，通过对细胞内各种化学成分的染色，可以揭示细胞的结构、功能以及病变过程。
根据染色原理和目的的不同，细胞化学染色方法有多种分类。
本文将介绍五种常用的细胞化学染色方法，分别是：吉姆萨染色、瑞氏染色、巴氏染色、苏木素-伊红染色和福尔根染色。
二、常用的五种细胞化学染色方法1.吉姆萨染色吉姆萨染色是用于显示细胞内蛋白质和核糖体的方法。
该方法使用含有天青、伊红、酸性品红等染料的吉姆萨染液对细胞进行处理，使蛋白质和核糖体呈现紫红色或蓝紫色。
吉姆萨染色在免疫学和寄生虫学等领域有广泛应用。
2.瑞氏染色瑞氏染色是一种用于显示细胞内颗粒物质的染色方法，如细胞内酶、核酸等。
该方法使用含有伊红和天青染料的瑞氏染液对细胞进行处理，使颗粒物质呈现蓝紫色或红色。
瑞氏染色常用于病理学和血液学中的骨髓涂片检查。
3.巴氏染色巴氏染色是一种用于显示细胞内糖原的染色方法。
该方法使用含有苏丹III 或苏丹IV染料的巴氏染液对细胞进行处理，使糖原呈现红色或橙色。
巴氏染色在妇科和肿瘤学等领域有重要应用，常用于检查宫颈脱落细胞中的糖原含量。
4.苏木素-伊红染色苏木素-伊红染色是一种显示细胞核和细胞质的染色方法。
该方法使用含有苏木素和伊红染料的染液对细胞进行处理，使细胞核呈现蓝色，细胞质呈现红色或橘黄色。
苏木素-伊红染色在病理学中广泛用于组织切片的诊断。
5.福尔根染色福尔根染色是一种用于显示DNA的染色方法。
该方法使用含有品红和苦味酸的福尔根染液对细胞进行处理，使DNA呈现蓝色。
福尔根染色在遗传学和肿瘤学研究中常用作显示肿瘤细胞的DNA含量。
三、结论细胞化学染色在生物学和医学研究中具有重要价值，有助于揭示细胞的结构、功能和病变过程。
常用的五种细胞化学染色方法各有其特点和适用范围，可以根据研究目的和需求选择适合的方法。
这些常用的细胞化学染色方法在实验操作和试剂选择等方面有一定的标准和要求，熟练掌握这些方法有助于提高实验结果的可靠性和准确性。
细胞染色方法大全
Hoechst染色:hoechst可以穿过活细胞膜与细胞核结合(主要为凋亡活细胞)在紫外光下将核染为蓝色、Hoechst染细胞核会影响共聚焦显微镜对该样本其她荧光的观察效果、hoechst有hoechest33342与hoechst33258两种hoechsts33258,hoechst33342二者区别不大,但就是hoechst33342对细胞的毒性作用更小一些,所以一般来说hoechsts33258用于细胞固定后再染色,而hoechst33342则可以对活细胞直接进行染色！染色步骤PI (Propidium Iodide碘化丙啶)染色:就是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂,常用于细胞凋亡检测、碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)就是一种核酸染料(红色),它不能透过完整的细胞膜,但凋亡中晚期的细胞与坏死细胞由于细胞膜通透性的增加,PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红、用PI单一染色观测培养细胞,只能表示细胞的坏死情况,而不就是凋亡(当然晚期凋亡PI亦可着色)。
但就是如果您只就是想知道细胞的死亡情况,而不就是仔细区分坏死或凋亡,那么PI单一染色也可以。
但就是如果您一定要认定细胞的凋亡,那么PI单一染色显然不够！annexin-v染色细胞凋亡早期,细胞膜标志发生改变、其中,磷脂酰丝氨酸(Annexin-V,PS)外翻,Annexin-V 在Ca+存在的条件下与其高亲与力特异性结合、这样,Annexin-v 染色阳性,表示细胞处于早期凋亡状态、Annexin-V结合不同的荧光抗体,就可以利用流式细胞仪、荧光显微镜以及共聚焦激光扫描显微镜检测细胞凋亡的发生。
Annexin V用FITC标记发绿色荧光;如果用PE标记就发红色荧光。
JC-1染色JC-1就是一种阳离子染料,可以在线粒体内聚集,低浓度时主要以单体(monomer)存在,发射光以绿光(～525nm)为主;而在高浓度时则可以形成多聚体(aggregation),发射光以红光(-590nm)为主。
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细胞培养后，需要对其生长情况、形态甚至生物学性状进行连续地观察。
由于细胞小而复杂，若不借助适当的手段，则难以观察其形态、结构，更难发现细胞内各种组分的分子组成及功能。
目前，已有多种研究细胞的技术，从光镜到电子显微镜，从一般细胞化学法到免疫化学法，本章将重点介绍一些常用的观察和检测方法。
第一节培养细胞的常规检查和观察方法细胞在体外培养过程中需要每天进行常规检查和显微镜观察，及时了解细胞生长状态、数量改变、细胞形态、细胞有无移动、有无污染、培养液pH是否变酸、变黄是否更换等。
细胞常规检查观察的内容为：一、肉眼观察一般常规检查用肉眼即可观察，主要看培养液的颜色和透明度的变化。
正常情况下，培养液pH介于7.2〜7。
4之间，呈桃红色清亮透明。
加入细胞在培养瓶中置一般温箱培养时随着细胞生长时间的延长，细胞代谢产生的酸性产物会使培养液pH值下降，引起颜色变浅变黄。
在超越缓冲范围后培养液酸化变黄，如不及时调节pH，会影响细胞的生长甚至造成细胞退变死亡。
所以，一旦发现培养液变黄，应及时换液传代.一般更换培养液的时间，依营养物的消耗而定，正常情况生长稳定的细胞2〜3天换液一次，生长缓慢的细胞3~4天换液一次。
培养液中加Hepes或用5%CO2温箱培养可使pH维持稳定，利于细胞生长。
用含磷酸盐缓冲系统培养时,可因瓶及塞子漏气，CO2溢出，也可能由于培养瓶塞洗刷不洁、残留碱性物，使培养液变碱发红，只致使细胞难以生长甚至死亡.细胞换液传代后，若发现培养液很快变黄，要注意是否有细菌污染或培养器皿没有洗干净.贴壁细胞培养时若出现混浊,多为污染。
悬浮培养的细胞，应将瓶竖起静置1小时，若培养基混浊示为污染，也可在显微镜下仔细观察有无污染现象出现。
二、显微镜观察生长良好的细胞，在显微镜下可观察到细胞透明度大折光性强，轮廓不清。
相差显微镜观察时可见细胞部分细微结构.若细胞生长状态不良，可见细胞轮廓增强，细胞折光性变弱，细胞胞质中出现空泡、脂滴和其他颗粒状物质，细胞之间空隙增大，细胞形态不规则，甚至失去原有细胞的特点，产生圆缩脱落,有时细胞表面及周围出现丝絮状物。
若细胞营养不良状况没有得到及时纠正，进一步发展可见到部分细胞死亡，崩解漂浮在培养液中.发现这种情况应及时处理，只有生长良好的细胞才能进行传代培养和实验研究。
三、细胞的生长状态细胞培养时，经初代培养或传代培养，都有一长短不同的潜伏期，在培养过程中注意观察细胞增殖生长的状态极为重要。
各种细胞增殖的时间不尽一致.传代细胞系，胚胎组织或幼体细胞潜伏期短，一般在接种培养第二天即可见细胞生长增殖3〜4天便可连接成片。
成体组织的潜伏期长，老年组织和癌组织潜伏期更长，可达一周左右。
原代细胞培养中最先可见从组织块中边缘"长出”细胞，这种细胞是从原代组织块中游走出来的，并不是细胞增殖产生. 这种早期游出的细胞多以成纤维细胞为主，其易生长，适应性强，呈放射状或旋涡状分布，很快生长并互相连接成网状。
传代细胞在传代后，一般经过悬浮、贴壁伸展很快进入潜伏期，对数生长期，细胞大量繁殖，逐渐相连成片而长满瓶底。
一旦发现细胞长满瓶底80%就应及时传代，否则会影响细胞生长甚至脱落。
悬浮细胞当发现生长显著、密度增大、分布稠密、培养液变黄时也应及时传代。
四、微生物污染细胞接种、传代、换液加药后应经常观察，密切注意是否有微生物污染发生。
一旦发现培养液混浊、液体内漂浮着菌丝或细菌，或生长明显变缓，胞质内颗粒增多，有中毒表现等应怀疑是否有微生物污染，进一步观察检查并及时处理.第二节培养活细胞的观察方法培养活细胞可用相差显微镜直接观察，也可用缩时摄影直接记录活细胞的动态变化，还可将离体活细胞染色。
一、相差显微镜直接观察法活细胞对光线是透明的，光线通过活细胞时，波长和振幅几乎没有改变，所以用普通光镜无法看清未经染色的活细胞。
为了观察活细胞的结构,则需要通过其他途径提高结构的反差。
本世纪30年代，荷兰物理学家Zernike设计的相差显微镜（Phase contrast microscope）利用光的衍射和干涉特性，把透过标本不同区域的光波的光程差转变成振幅差，使细胞内各种结构之间呈现清晰可见的明暗对比，从而成功地解决了生物学上的大难题。
相差显微镜由相差聚光器和相差接物镜两个主要部分组成。
它与普通光镜相比多了两个部件，一个是在聚光器上增加一个环形光阑，使透过聚光器的光线形成空心光锥、聚焦到标本上.另一个是在物镜的后焦面增加一个相板，相板有一个环形区，其大小恰好通过环形光阑束的直射光，相板各区镀以不同物质，使得通过环形区的光比通过相板其他部位的光超前或滞后1/4入.相差显微镜的基本原理是：把透过标本的可见光的光程差变成振幅差，从而提高了各种结构之间的对比度,使标本的各种结构变得更清晰可见。
光线透过标本后，发生折射，偏离了未通过标本的光线的光路，这两组光线合轴后，则发生相互干涉现象。
透过生物标本发生折射的光线与未透过标本的光线之间产生了光程差。
前者被阻滞了1/4入（波长）。
如果把光程差再增加1/4入，则变为1/2入,合轴后两束光线的干涉加强，使标本周围发生晕圈，提高了可见度.用相差显微镜观察活细胞，并可在镜下连续拍摄记录体外培养细胞的活动如细胞分裂、细胞迁移运动等过程。
相差显微镜观察活细胞的步骤如下：1、调整好相差显微镜首先调好相位板，使聚光器相位板号与接物镜放大倍数（相位板）相一致。
然后抽出接目镜，再换辅助望远镜,移动辅助镜筒并调整聚光器相位板，使视影中两个大小一样的光环相互吻合.再重新换上原接目镜，即成相差图像.当更换不同倍数接物镜时，需按上述过程重新调节。
2、观察瓶皿准备准备观察的瓶、皿要平坦，质地均匀，透光度好，在观察前将培养瓶、皿面擦净,勿留任何残留污迹.3、调光主要调整照明光的照明度和光轴，令视野照明均匀。
首先用低倍镜，并把照明灯虹彩光调至最小，使光落于视野中央；如有偏斜可用聚光器的调整螺丝进行调整。
然后打开虹彩使视野内呈均匀照明强度，并使目的物图像达到最大限度反差为止。
4、调焦与摄影较高级的相差显微镜视野中间都有双线十字，调焦前先转动目镜使十字的双线清晰，然后再用调焦旋扭调节物镜，使观察物体清晰。
在照相目镜上也要采用同样步骤调焦。
摄影目镜与观察目镜焦点不一致时，也要根据需要调焦，一般照相时以摄影目镜为主，观察时以观察目镜为主。
照相时应做好记录，把细胞种类、代数、观察内容、放大倍数、时间等一一记录下来，以备后查和对比。
5、细胞观察生长在瓶底上的细胞最适宜用倒置光相差显微镜观察，而且需附有长焦距集光器，才能观察厚度较大的培养瓶（或皿）。
若用油浸镜观察细胞微细结构，需用支持物培养法，把细胞培养在长形盖片上，观察时从瓶中取出制成临时标本。
方法为：取一大型载物片，再取一块优质滤纸剪成长方窗形，置于载物片上，用吸管向纸框中滴数滴培养液，使充满框内空间和浸湿纸框;把生长有细胞的盖片含细胞面向上放在纸框中，再覆以大盖片。
观察时应不断从标本测面滴加适量营养液,以防不断蒸发。
此法只限于短时间观察细胞之用。
用相差显微镜观察细胞应注意瓶（或皿）的厚度、均匀性、清洁度、气温等。
经标准化生产的培养板、培养瓶（或皿）一般成像效果都较好，但反复刷洗过的玻璃或塑料器皿将严重影响分辨力.天气较冷时，若与显微镜观察处温差较大由于温差使培养瓶内壁形成雾滴而影响观察的清晰度，此时可轻轻将瓶倾斜使瓶内培养液浸润内壁，以得到好的相差像。
若对原代细胞培养进行相差显微照相，最好选择换液后进行，这样可以去除漂浮的组织块和死细胞，提高成像清晰度.观察细胞时要有无菌概念，动作要轻，避免猛烈振荡.观察时间不要太长，观察次数也不要太频繁,以免影响细胞生长.二、暗视野显微镜技术观察活细胞暗视野显微镜（dark field microscope）是利用特殊的聚光器，使照明光线斜射不能进入物镜，所以视野是暗的，只有经过标本散射的光线才能进入物镜被放大,在黑暗的背景中呈现明亮的像。
这种特殊的照明方式，使反差增大，分辨率提高，甚至可以观察到5nm的微小质点。
这种观察方法主要观察物体的轮廓，分辨不清内部的微细构造，只适合于观察活细胞内的细胞核、线粒体、液体介质中的细菌和霉菌等。
所以这种方法已较少应用.三、缩时显微摄影观察这是随着现代科技发展而出现的一种新的观察方法。
缩时显微摄影术（time-Lapse Cinemicrophotagraphy,TLCM）可直接记录活细胞的连续动态变化过程能非常直观地展现细胞生长过程中的动态变化，如细胞运动、细胞分裂、细胞膜变化、细胞死亡等过程。
如接上显微镜闭路电视系统或接上观察细胞变化的定格电视记录装置，则更直观地观察到细胞的变化。
但由于这套系统较昂贵，所以应用尚不普遍.四、离体活细胞染色观察1、中性红染色中性红是常用的活体染色染料，常用的浓度为1:10000，用生理盐水（或Hanks液）溶解后进行高压蒸气灭菌暗处存放，可直接浸染活体细胞显微镜下观察或用于细胞的病毒蚀斑，肉眼计数空斑数目。
因其毒性大，染色后细胞不能再培养。
2、结晶紫染色使用浓度为0.1%，可用生理盐水配制，室温保存该染料对死、活细胞均着色，故只能测出细胞总数.3、台盼蓝染色用0.5%浓度的台盼蓝（Trypan blue），用PBS配制，室温保存，该染料只对死细胞着色，可测定活细胞数和计算存活百分率。
第三节细胞固定观察法体外培养细胞除可直接观察活细胞外，还可以用固定细胞的方法将细胞制成永久标本进行观察.固定染色观察，既可显示细胞形态，也可揭示细胞的微细结构，是细胞培养中常用的观察技术.其基本技术为固定染色和观察。
一、细胞固定基本方法无论用双盖片悬浮培养、加盖片单层培养还是悬液培养,都能将细胞固定染色，其中以盖片培养最常用。
其步骤为：(1)培养时加入一清洁盖片。
(2)待盖片长满细胞或所需的适宜时期用镊子轻轻取出盖片，迅速投入37^Hanks液中漂洗两次，每次3〜5秒钟，以洗除血清防止其妨碍染色；如用悬液培养的细胞时，需离心(800rpm)，除去含血清的培养液，再向沉降细胞中加入少许温Hanks液，用吸管轻轻吹打漂洗后，留少许悬液，再做涂片，凉干后固定。
(3)固定将上述玻片浸于固定液15分钟。
常用的固定剂有甲醇/醋酸、FAA固定液、Carnoy。
甲醇/醋酸浓度为甲醇3分,冰醋酸1分，现用现配，适用于观察染色体和Giemsa 染色。
FAA固定液浓度为：80%酒精90。
0mL，冰醋酸5.0mL，中性福尔马林(40%甲醛，用时向瓶中加过量MgCO3中和)5。
0mL。
适用于盖片单层培养，固定效果好。
Carnoy是较好的非水溶性固定液，浓度为纯酒精60.0mL，氯仿30.0mL，冰醋酸10.0mL，适用于显示细胞化学成分等方法，如粘多糖等，对固定培养单层细胞效果很好。