基因工程实验报告 4 1 最终版
基因工程转化实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 理解基因工程转化实验的基本原理和方法。
2. 掌握基因工程转化实验的操作步骤和技巧。
3. 通过实验，验证基因转化效果，为后续研究提供基础数据。
二、实验原理基因工程转化实验是将目的基因导入受体细胞的过程。
根据受体细胞的不同，转化方法也有所区别。
本实验采用农杆菌介导转化法，将目的基因导入植物细胞。
三、实验材料1. 受体植物：小麦植株2. 转化质粒：含目的基因的质粒3. 农杆菌：具有转化能力的农杆菌菌株4. 实验试剂：氯化钙、CaCl2溶液、IPTG（异丙基-β-D-硫代半乳糖苷）、抗菌素等5. 实验仪器：超净工作台、无菌操作箱、移液器、离心机、培养箱、显微镜等四、实验步骤1. 农杆菌活化与扩大培养（1）将冻存的农杆菌菌株复苏，在含有抗菌素的LB培养基中扩大培养。
（2）将培养好的农杆菌转移到无菌条件下，用移液器吸取适量菌液，加入含有转化质粒的LB培养基中。
（3）将菌液在摇床上振荡培养过夜。
2. 农杆菌转化（1）将小麦叶片进行表面消毒，用无菌移液器吸取适量菌液，滴在叶片表面。
（2）将叶片放入无菌培养皿中，在黑暗条件下共培养3-5天。
3. 农杆菌侵染与再生（1）将共培养后的叶片转移到含有抗菌素的培养基上，进行再生培养。
（2）待再生植株长出后，进行筛选，去除未转化植株。
4. 转化植株PCR检测（1）提取转化植株的总DNA。
（2）设计目的基因的引物，进行PCR扩增。
（3）观察PCR产物，判断转化效果。
五、实验结果与分析1. 农杆菌活化与扩大培养实验中，农杆菌菌株在LB培养基中生长良好，菌液呈均匀浑浊状。
2. 农杆菌转化共培养后，小麦叶片出现明显的不定芽，表明农杆菌已成功侵染植物细胞。
3. 农杆菌侵染与再生再生培养过程中，部分植株长出不定芽，表明农杆菌已成功转化植物细胞。
4. 转化植株PCR检测PCR检测结果显示，部分转化植株扩增出目的基因片段，表明基因转化成功。
六、实验结论本实验采用农杆菌介导转化法，成功将目的基因导入小麦植株。
基因工程实验报告
基因工程实验报告一、实验目的：本实验旨在掌握基因工程的基本操作技能，了解DNA的提取、PCR扩增和基因克隆等基本实验过程，并通过实际操作检测转基因植物的存在。
二、实验原理：1.DNA提取：采用传统的CTAB法提取植物基因组DNA，目的是获得待测植物样品中的基因组DNA。
2.PCR扩增：选用合适的引物，利用PCR技术将待测基因扩增出来。
PCR反应中需要设置阳性对照、阴性对照和试验样品，以确定PCR扩增结果的可靠性。
3.基因克隆：将PCR扩增得到的目标基因与质粒载体进行连接，再将重组质粒导入大肠杆菌进行转化培养，最后通过酶切和测序等方法验证目标基因的克隆成功与否。
三、实验步骤：1.DNA提取：将待测植物样品加入CTAB提取缓冲液中，酶解并脱脂植物细胞，通过乙酰酚/氯仿法提取总DNA。
2. PCR扩增：设计合适的引物，进行PCR反应。
反应条件通常为94℃预变性5min，然后循环20-35次，每次循环包括94℃变性30s、56-68℃退火30s、72℃延伸1-2min，最后72℃延伸10min。
3.基因克隆：将PCR扩增得到的目标基因进行酶切，并与质粒载体进行连接，然后转化大肠杆菌进行培养。
通过PCR重放大和酶切验证目标基因是否成功克隆。
4.验证目标基因：通过测序等方法对目标基因进行验证，判断基因克隆是否成功。
四、实验结果与分析：1.DNA提取：从待测植物样品中成功提取到总DNA，并进行酶切分析，可见DNA带状条带。
2.PCR扩增：通过PCR扩增，得到了目标基因的特异性条带，并且也验证了阳性对照和阴性对照的准确性。
3.基因克隆：通过酶切和重放大等方法验证了目标基因的成功克隆。
4.验证目标基因：通过测序结果，确认目标基因与已知序列一致，说明基因克隆成功。
五、实验结论：通过本实验，我们掌握了基因工程的基本操作技能，成功进行了DNA提取、PCR扩增和基因克隆等实验过程，并通过测序等方法验证了目标基因的克隆成功。
基因工程实验报告
基因工程实验报告姓名：杜琳颖学号：2017051141 学院：生命科学院专业：生化与分子一、实验目的学习并掌握从目的基因克隆到蛋白质表达的实验流程及原理。
二、实验流程实验一、质粒提取载体DNA提取及酶切鉴定一、实验目的学习质粒的酶切及电泳分析。
二、实验原理质粒是一种染色体外的稳定遗传因子，具有双链闭环结构的DNA 分子。
它具有自主复制能力，能使子代细胞保持它们恒定的拷贝数，可表达它携带的遗传信息。
目前，经人工改造的质粒已广泛用作基因工程中目的基因的运载工具——载体。
质粒DNA 的提取是依据质粒DNA 分子较染色体DNA 分子小，且具有超螺旋共价闭合环状的特点，从而将质粒DNA 与大肠杆菌染色体DNA 分离。
现在常用的方法有：碱裂解法、密度梯度离心法、煮沸裂解法等。
实验室普遍采用的碱裂解法具有操作简便、快速、得率高的优点。
其主要原理：利用染色体DNA 与质粒DNA 的变性与复性的差异而达到分离的目的。
在碱变性条件下，染色体DNA 的氢键断裂，双螺旋解开而变性，质粒DNA 氢键也大部分断裂，双螺旋也有部分解开，但共价闭合环状结构的两条互补链不会完全分离，当pH=4.8 的乙酸钠将其pH 调到中性时，变性的质粒DNA 又恢复到原来的构型，而染色体DNA 不能复性，形成缠绕的致密网状结构，离心后，由于浮力密度不同，染色体DNA 与大分子RNA、蛋白质-SDS 复合物等一起沉淀下来而被除去。
限制性内切酶可以识别双链DNA 特定位点，并产生特异的切割，形成粘性末端或平末端，这样有利于DNA 片段再连接。
限制性内切酶对环状质粒DNA 有多少切点，酶切后就能产生多少个片段。
因此，鉴定酶切后的片段在电泳凝胶的区带数，就可以推断切点的数目；从片段迁移率的大小可以判断酶切片段大小的差别。
用已知相对分子量DNA 为对照，通过电泳迁移率的比较，可以粗略地测出分子形状相同的未知DNA 的相对分子质量。
三、实验材料、仪器及试剂（一）实验材料含载体质粒pET28a的大肠杆菌（二）试剂1、LB 液体培养基2、质粒提取试剂盒(天根生物科技)3、TBE 缓冲液4、点样缓冲液Loading buffer（10×）5、琼脂糖6、NcoⅠ酶，XhoⅠ酶(Takara)7、DNA回收纯化试剂盒（天根生物科技）（三）仪器1、Eppendorf 管、离心管架2、10，50，200，1000 μL 微量加样器3、Eppendorf台式高速离心机4、电泳仪系统5、恒温水浴箱6、凝胶成像仪7、摇床等四、实验步骤（一）质粒提取1、柱平衡步骤：向吸附柱CP3 中（吸附柱放入收集管中）加入500μL 的平衡液BL，12,000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
基因工程实验报告(程庆佳,生物技术,20091070004)
大肠杆菌核糖核苷酸HII基因的克隆及其检测（基因工程实验报告）程庆佳（云南大学，生命科学学院，生物技术，20091070004）（班级：周二下午实验班; 组号:第八组; 老师：赖建华；同组员：顾聚）摘要：此次实验的目的是对大肠杆菌核糖核苷酸HII基因的克隆及其检测，其中的关键步骤包括了大肠杆菌基因DNA的提取，PCR扩增，DNA体外重组，感受态细胞的制备，重组DNA的转化，重组转化的检测等多种具有紧密连接性的实验，使学生可以掌握一套具有连贯性的实验过程，帮助学生塑造连贯试验的观念，从而得到更好地成长与进步。
关键词：提取、扩增、重组、感受态细胞、转化、检测正文：此次实验的最终目的是要使学生连贯性的掌握本学期的实验，所以要求我们要熟悉每个实验的原理过程，以及实验结果的准确分析，只有这样才能保证实验最终结果的准确性，才能真正地掌握此次实验。
1、大肠杆菌基因组DNA的提取原理： DNA是一个环形的大分子DNA,真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内。
不同种属的生物，以及不同形式的细胞（如菌类、培养细胞、植物组织，动物组织）基因组提取的方法是不同的，但其基本原则是类似的，即既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持DNA分子的完整。
提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含十二烷基硫酸钠（SDS）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。
SDS的作用机理是由于其能结合蛋白，中和蛋白的电性，使蛋白质的非共价键受到破坏，失去二级结构，从而变形失活，蛋白酶K 的重要特性是能在SDS和EDTA（乙二胺四乙酸二钠）存在的情况下保持很高的活性。
在匀浆后提取DNA的反应体系中，SDS可通过失活蛋白破坏细胞膜、核膜，并使组织蛋白与DNA 分离；而蛋白酶K可将蛋白质降解成小肽或氨基酸，使DNA分子完整地分离出来。
CTAB(十六烷基三乙基溴化铵)是一种去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（（0.7 mol/L NaCl）是可溶的，当降低溶液盐浓度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时，从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB-核酸的复合物与蛋白，多糖类物质分开。
基因工程实验报告
基因工程实验报告摘要：提取小麦的总的RNA通过RT—PCR扩增出GAPDH截短体基因ｃDNA，ＰＣＲ扩增ｃDNA获得大量目的基因，对目的基因和表达载体p ＧＥＸ４Ｔ－１进行双酶切，通过电泳分离条带胶回收酶切的目的基因和载体，然后载体和目的基因连接构建表达载体，重组载体转入大肠杆菌top10中大量复制目的基因；提取质粒，转入大肠杆菌bl21，通过ＩＰＴＧ诱导目的基因的表达；通过ＳＤＳ染色和Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交检验目的蛋白是否表达。
实验流程：小麦幼苗总ＲＮＡ提取ＲＴ＿ＰＣＲ扩增目的基因表达载体构建表达菌株转化（ｔｏｐ１０）从ｔｏｐ１０转入ＢＬ２１诱导表达Ｗｅｓｅｒｎ杂交一．目的基因的获得１．小麦总ｒｎａ的提取（Ｔｒｉｚｏｌ法）１在研钵中加入液氮，再将小麦剪成小片段在液氮中磨成粉末，用液氮预冷的钥匙取１００ｕｌ粉末于已加入１ｍｌ的ｔｒｉｚｏｌ的ＥＰ管中，充分混匀。
２室温放置５ｍｉｎ，然后加入２ｏｏｕｌ的氯仿，剧烈震荡。
３１２０００ｒｐｍ离心１０分钟，取上清于新的ＥＰ管，加入500ul异丙醇，温和颠倒，室温放置10分钟，12000rpm离心10分钟。
4小心弃上清，加入75%乙醇，混匀，4度12000rpm离心5分钟。
5重复46弃上清，室温干燥5-10分钟，用30uldepc溶解rna。
2.rna电泳检测是否提取出rna（10ulrna+1ul buffer）图中出现明显的亮的条带的即表示提取出rna，其中我们提取的rna比较少条带不明显，可能是操作过程中被污染，所以在提取rna是一定要注意防止rna降解，因为空气中随处都是rna酶，所以要带上手套，快速操作，尽量不要暴露在空气中，使用处理过的试管，器材。
3.RT-PCR扩增目的基因cDNA3.1 rna反转录Total RNA 6ulOligo dt primer 1ulH2o 5ul65℃5min,补加下列试剂5×reaction buffer 4ulRibolock rnase inhibitor 1ul10mM dntp mix 2ulRevertaid m-mulv reverse transcripase 1ul42℃ 60min70℃ 5min3.2 PCR扩增目的基因（表达引物扩增 25ul)2×pcr mix 12.5ul 95℃1mincDNA 1ul 95℃10s引物GAPDH1-1 1ul 58℃ 20s 35cycle引物GAPDH1-2 1ul 72℃45sH2O 9.5ul 72℃10min通过图片的条带可以看出pcr扩增的产物；通过RT-PCR获得的目的片段，为连续表达的基因片段，去除了真核基因中的内含子序列，通过重组质粒载体的构建可以直接在宿主大肠杆菌中克隆和表达。
生物基因工程实习报告
随着科学技术的不断发展，生物基因工程作为一门新兴的综合性学科，在我国得到了广泛的应用和发展。
为了更好地了解生物基因工程的理论和实践，提高自己的专业素养，我于2022年7月1日至2022年7月31日在XX生物科技有限公司进行了为期一个月的生物基因工程实习。
二、实习目的1. 深入了解生物基因工程的基本原理和操作技术；2. 掌握实验室基本操作技能，提高实验操作水平；3. 培养团队合作精神和创新能力；4. 为今后从事生物基因工程相关领域的研究和工作打下坚实基础。
三、实习内容1. 实习单位介绍XX生物科技有限公司是一家专注于生物基因工程领域的高新技术企业，主要从事基因测序、基因编辑、基因治疗等方面的研发和应用。
公司拥有先进的实验室设备和技术团队，为我国生物基因工程领域的发展做出了重要贡献。
2. 实习项目（1）基因测序：学习并掌握DNA提取、PCR扩增、Sanger测序等基因测序技术，对样本进行基因测序，分析基因序列信息。
（2）基因编辑：学习CRISPR/Cas9等基因编辑技术，对目标基因进行定点修改，验证基因编辑效果。
（3）基因治疗：了解基因治疗的基本原理和操作流程，参与基因治疗项目的实施。
3. 实习过程（1）第一阶段：学习生物基因工程基本原理和操作技术，熟悉实验室设备。
（2）第二阶段：参与基因测序、基因编辑、基因治疗等项目的具体实施，提高实验操作水平。
（3）第三阶段：总结实习过程中的经验教训，撰写实习报告。
1. 理论知识方面：通过实习，我对生物基因工程的基本原理和操作技术有了更深入的了解，为今后从事相关领域的研究和工作打下了坚实基础。
2. 实践技能方面：在实习过程中，我熟练掌握了DNA提取、PCR扩增、Sanger测序、CRISPR/Cas9等实验操作技能，提高了自己的实验操作水平。
3. 团队合作方面：在实习过程中，我与团队成员共同完成了多个项目，培养了良好的团队合作精神。
4. 创新能力方面：在实习过程中，我积极思考，勇于尝试，提出了一些创新性的想法，为项目的实施提供了有益的建议。
基因工程实验报告
基因工程实验报告引言基因工程是现代生物技术的一个重要分支，通过对生物体基因的修改和重组，可以创造出具有特定功能的生物体。
本次实验旨在探究基因工程在农业、医学等领域的应用，以及可能带来的潜在风险和争议。
实验方法1. 筛选目标基因：首先，我们在实验中选择了对叶绿体功能有重要影响的一个基因作为目标基因。
2. 基因克隆：通过PCR技术，将目标基因从细菌DNA中放大，然后将其插入载体DNA中。
3. 转化目标生物体：将重组的载体DNA转入植物叶片细胞中，借助几丁质体、热激冲击等方法促使基因转化成功。
4. 筛选阳性转化率：通过筛选培养基中的抗性选择制剂，筛选出转化成功的阳性细胞。
5. 验证目标基因的表达：通过PCR扩增和基因芯片技术验证目标基因在转化植物中的表达情况。
实验结果1. 实验结果显示：我们成功将目标基因插入到植物叶片细胞的染色体中，并且获得了一定比率的阳性转化植株。
2. 鉴定转化植株：对转化植株进行证实鉴定，确保目标基因已经整合到植株基因组中，且稳定表达。
3. 表达验证：通过PCR扩增和基因芯片分析，确定目标基因在转化植物中得到了表达，并且表达量较高。
4. 性状鉴定：对转化植物进行生长发育、形态结构、生理生化等方面的综合性状鉴定，结果显示转化植物与野生型无显著差异。
讨论基因工程技术的应用：本次实验展示了基因工程技术在农业生产中的应用前景，通过将具有耐逆性、抗病虫害等功能基因导入植物，可以提高植物的产量和抗逆性。
潜在风险和争议：但是，基因工程也伴随着一系列争议和风险，如转基因植物可能对环境造成影响，转基因食品可能对人体健康产生潜在影响，因此需要严格的监管和评估。
结论通过本次实验，我们成功地验证了基因工程技术的可行性，展示了其在农业和生命科学领域的广阔应用前景。
然而，我们也要看到基因工程技术所带来的潜在风险和争议，需要谨慎评估和监管。
基因工程是一把双刃剑，只有正确使用才能实现其最大的利益。
愿基因工程技术为人类带来更多福祉。
基因工程实训总结
《基因工程实训》总结报告实习总结第一天，我们是进行实验试剂的配置，以备实验过程中大家共同使用。
每组都有自己的任务，我们组是配置最后检测重组蛋白的制备SDS-PAGE电泳胶的试剂。
以及酵母划板培养。
试剂的配置是很关键的一步，如果没有依据要求配制试剂的话，可能会导致实验失败。
比如，最后一天在电泳时，样品一直都没有沉到点样孔底部，而marker却能沉下去，可能是因为sample buffer 的配置出了问题。
最终我们用了老师的buffer，效果有所改善。
却还是有上浮的迹象，也有可能是缓冲液的密度太大。
第二天，我们进行了PCR扩增产物、琼脂糖凝胶电泳检测产物、HindⅢ和Xba I双酶切、含载体的DH5α扩大培养等操作。
从中我学到了PCR仪器程序设置的方法。
以及对其它现有操作技术进行巩固和提升。
第三天，我们从大肠杆菌中提取了质粒载体，并且对其进行双酶切，与同样双酶切的目的基因进行连接，以及挑单克隆酵母过夜培养。
双酶切可以极大的避免载体与目的基因自身环化，提高了连接的效率。
通过实验，我能够更好的理解书本上的理论知识。
第四天，连接产物转化大肠杆菌。
通过热激的方法使带有目的基因的载体进入大肠杆菌细胞中，因为DNA是吸附在细胞表面的，因此在热激过程中避免晃动过大。
同样的在实验过程中，我们会注意到平时书本上不会注明的小点，但这往往也是实验成败的关键因素之一。
第五天，酵母感受态的制备与转化细胞应该处于对数生长期，是感受态细胞制备与成功转化的关键。
我们在实验过程中，OD600一直都无法达到0.4~0.6的范围。
可能是培养基的配置出了问题，也有可能是分光光度计本身的仪器问题。
我们为了达到一定的细胞数量取了两倍体积的菌液。
第六天、第七天，提取重组质粒酶切鉴定与酵母单克隆过夜培养。
真核表达系统有蛋白质的加工修饰系统，可以得到有生物活性的蛋白质。
且酵母是分泌型的表达系统，不仅不易被细胞内蛋白酶降解还可以免去破碎细胞提取蛋白的麻烦。
基因工程实验报告
基因工程实验报告基因工程实验报告引言：基因工程是一门前沿的科学领域，通过对生物体的基因进行编辑和改造，已经在医学、农业、环境保护等领域取得了重大突破。
本实验旨在探索基因工程的原理和应用，并通过实验验证其可行性。
实验目的：本实验旨在通过基因工程技术将一种植物的抗虫基因转移到另一种植物中，以增强其抗虫能力。
通过此实验，我们希望验证基因工程在农业领域的潜力，为农作物的抗虫育种提供新的思路和方法。
实验方法：1. 选择目标基因：通过文献调研，我们选择了一种来源于大豆的抗虫基因。
2. 提取基因：使用PCR技术从大豆中提取目标基因的DNA序列。
3. 载体构建：将目标基因插入一个植物表达载体中，以便在目标植物中进行转基因。
4. 转基因：将植物表达载体导入目标植物细胞中，通过生物转化技术将目标基因导入目标植物的基因组中。
5. 筛选转基因植物：通过对转基因植物进行筛选和鉴定，确认是否成功将目标基因转移到目标植物中。
6. 抗虫性测试：将转基因植物和野生型植物分别暴露在虫害环境中，观察并比较它们的抗虫能力。
实验结果：经过实验，我们成功将大豆的抗虫基因转移到了目标植物中。
通过PCR技术和基因测序，我们确认了目标基因已经整合到目标植物的基因组中。
在抗虫性测试中，转基因植物表现出明显的抗虫能力，相比野生型植物，其受虫害程度明显降低。
讨论与分析：本实验结果表明，基因工程技术可以成功地将抗虫基因转移到目标植物中，从而提升其抗虫能力。
这为农作物的抗虫育种提供了新的思路和方法。
通过基因工程，我们可以将不同物种的有益基因导入到目标植物中，从而增强其抗虫性、抗病性等特性。
这对于农业生产的可持续发展和环境保护具有重要意义。
然而，基因工程也面临一些挑战和争议。
一方面，基因工程技术的应用需要谨慎，确保对环境和生态系统的影响可控。
另一方面，基因工程的伦理和道德问题也需要认真思考和讨论。
因此，在推动基因工程技术的发展和应用时，我们需要综合考虑科学、环境和社会的各种因素。
基因工程实验报告
一、实验目的1. 学习并掌握基因工程的基本原理和操作技术；2. 熟悉基因克隆、表达、检测等实验操作；3. 培养实验操作技能和科学思维能力。
二、实验原理基因工程是利用分子生物学和生物化学原理，通过人工手段对生物的遗传物质进行改造，以达到改变生物特性、提高生物产量、生产新生物制品等目的的技术。
实验中主要涉及以下原理：1. 限制性核酸内切酶（Restriction endonuclease）：能够识别特定的核苷酸序列，并在该序列的特定位置切割DNA链；2. DNA连接酶（DNA ligase）：能够将两个DNA片段连接起来；3. 转化：将外源DNA片段导入受体细胞；4. 转录和翻译：将目的基因转录成mRNA，再翻译成蛋白质。
三、实验材料1. 质粒载体：pET-28a、pUC19等；2. 限制性核酸内切酶：EcoRI、HindIII等；3. DNA连接酶：T4 DNA连接酶；4. 转化试剂：钙离子、转染试剂等；5. 实验试剂：Tris-HCl缓冲液、NaCl、KCl、MgCl2、DNA模板、引物、dNTPs、PCR试剂等；6. 实验仪器：PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统、离心机、移液器、超净工作台等。
四、实验步骤1. 设计实验方案：根据实验目的，设计实验步骤，包括目的基因的克隆、表达、检测等。
2. DNA提取：采用CTAB法提取质粒DNA。
3. 限制性核酸内切酶酶切：将质粒DNA和目的基因片段分别进行EcoRI、HindIII酶切，酶切产物进行电泳鉴定。
4. DNA连接：将酶切后的质粒DNA和目的基因片段进行连接，连接产物进行电泳鉴定。
5. 转化：将连接产物转化到大肠杆菌感受态细胞中，筛选阳性克隆。
6. 阳性克隆的鉴定：通过PCR、测序等方法对阳性克隆进行鉴定。
7. 重组质粒的提取：提取重组质粒，进行电泳鉴定。
8. 重组质粒的表达：将重组质粒转化到大肠杆菌表达系统中，进行诱导表达。
9. 目的蛋白的纯化：采用离子交换层析、亲和层析等方法对目的蛋白进行纯化。
基因工程寒假基因工程实践报告
基因工程寒假基因工程实践报告在寒假期间，我参与了一项关于基因工程的实践项目。
本报告旨在总结和分享我的实践经验，介绍我所进行的实验和所取得的结果。
通过这个实践项目，我对基因工程的概念和技术有了更深入的理解，并且学到了许多实验技巧和科学研究的方法。
一、实验目的在开始实验之前，我们首先明确了我们的实验目的。
我们的目标是探索基因工程在农业领域的应用，特别是通过基因编辑技术改良植物的性状。
我们希望通过实验验证基因编辑技术对于调控植物抗病能力的效果，并且测试不同基因编辑方法的可行性。
二、实验步骤1. 材料准备我们首先准备了实验所需的材料和设备，包括细菌培养基、基因编辑工具、目标基因片段等。
这些材料的选取和准备非常重要，必须确保其质量和纯度。
2. 基因编辑处理接下来，我们使用CRISPR-Cas9系统进行基因编辑处理。
首先设计和合成了特定的基因编辑RNA，然后将其与Cas9载体导入植物细胞中。
通过这种方式，我们实现了特定基因片段的剪接和修复。
3. 细菌培养和筛选为了验证基因编辑的效果，我们接种了含有目标基因片段的细菌，并进行了培养和筛选。
通过筛选过程，我们得到了经过基因编辑的细菌群体。
4. 植物转化和生长观察为了将基因编辑应用到植物中，我们进行了植物转化实验。
我们导入了经过基因编辑的细菌群体到植物体内，并观察了转化植株的生长情况和表型特征。
三、实验结果1. 细菌培养和筛选结果通过细菌培养和筛选，我们成功得到了经过基因编辑的细菌群体。
这些细菌在抗生素培养基上形成了明显的菌落，并且对抗生素具有抗性。
2. 植物转化和生长观察结果经过植物转化实验，我们成功导入了经过基因编辑的细菌群体到植物体内。
转化植株在生长过程中表现出了与野生型植株相比的不同性状，例如更高的抗病能力和更快的生长速度。
四、实验分析通过实验结果的分析，我们可以得出以下结论：1. 基因编辑技术可以成功应用于植物中，实现对目标基因片段的修改和修复。
2. 经过基因编辑的细菌和转化植株具有更高的抗病能力和更快的生长速度，这表明基因编辑可以用于改良植物的性状。
基因工程实验报告 4 1 最终版
《基因工程》实验报告一、实验目的1.学习并掌握基因工程操作技术中最常用的载体质粒DNA的提取方法。
2.学习琼脂糖凝胶电泳分离DNA的原理和方法，检测质粒DNA的浓度与分子量。
3.了解PCR的基本原理，掌握PCR的基本操作技术。
4.学习利用限制性内切酶切割DNA的方法，并通过电泳检测酶切的效果。
5.学习DNA重组技术中的核心步骤，DNA片段之间的体外连接方法。
6.学习制备感受态细胞并将体外重组DNA引入受体细胞的技术。
7.掌握利用蓝白斑筛选出转化子的方法。
二、实验原理（1）质粒DNA的小量制备在碱性溶液中，双链DNA氢键断裂，DNA双螺旋结构遭破坏而发生变性，但由于质粒DNA分子量相对较小，且呈环状超螺旋结构，即使在高碱性pH条件下，两条互补链也不会充分分离，当加入中和缓冲液调时，变性质粒DNA又恢复到原来的构型；而线性的大分子量的细菌染色体DNA则不能复性，与细胞碎片、蛋白质、SDS等形成不溶性复合物。
通过离心沉淀，细胞碎片、染色体DNA 及大部分蛋白质等可被除去，而质粒DNA及小分子量的RNA则留在上清液中。
混杂的RNA可用RNA酶(RNaseA)消除。
再用酚/氯仿处理，可去除残留蛋白质。
（2）琼脂糖凝胶电泳与凝胶中DNA的检测琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，沸水中溶解，45℃开始形成多孔性刚性滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度。
DNA分子在碱性环境中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动。
DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。
不同DNA，其分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带。
琼脂糖凝胶电泳法分离DNA，主要是利用分子筛效应，迁移速度与分子量的对数值成反比关系。
SYBR GoLd 是一种极敏感的染料。
其可与DNA分子形成SYBR GoLd -DNA 复合物，在紫外光照射下发射荧光，且荧光强度与DNA的含量成正比。
用肉眼观察，可检测到20pg以上的DNA。
分子生物学基因工程分子生物学与基因工程实验报告
分子生物学基因工程分子生物学与基因工程实验报告分子生物学与基因工程实验报告绿色荧光蛋白(GFP)基因的克隆和表达背景知识绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）是一类存在于包括水母、水螅和珊瑚等腔肠动物体内的生物发光蛋白。
当受到紫外或蓝光激发时，GFP发射绿色荧光。
它产生荧光无需底物或辅因子发色团是其蛋白质一级序列固有的。
GFP由3 个外显子组成，长2.6kb；GFP 是由238 个氨基酸所组成的单体蛋白,相对分子质量为27.0kMr，其蛋白性质十分稳定，能耐受60℃处理。
1996 年GFP 的晶体结构被解出，蛋白质中央是一个圆柱形水桶样结构，长420 nm，宽240 nm，由11 个围绕中心α螺旋的反平行β折叠组成，荧光基团的形成就是从这个螺旋开始的，桶的顶部由3 个短的垂直片段覆盖，底部由一个短的垂直片段覆盖，对荧光活性很重要的生色团则位于大空腔内。
发色团是由其蛋白质内部第65-67位的Ser-Tyr-Gly自身环化和氧化形成.1996 年GFP 的晶体结构被解出，蛋白质中央是一个圆柱形水桶样结构，长420 nm，宽240 nm，由11 个围绕中心α螺旋的反平行β折叠组成，荧光基团的形成就是从这个螺旋开始的,桶的顶部由3 个短的垂直片段覆盖，底部由一个短的垂直片段覆盖，对荧光活性很重要的生色团则位于大空腔内。
绿色荧光蛋白(GFP)基因的克隆和表达一、实验目的学习掌握一种最常用的质粒DNA提取方法：碱裂解法。
该法用于从小量培养物中抽提质粒DNA，比较方便、省时，提取的质粒DNA质量较高，可用于DNA的酶切、PCR甚至测序。
学习利用核酸蛋白测定仪测算核酸的浓度和纯度。
掌握一种最常用的分离、鉴定、纯化DNA片段的比较方便、省时的技术：琼脂糖凝胶电泳的基本原理和操作方法。
学习使用限制型内切酶进行DNA酶切的原理和方法。
了解和掌握大肠杆菌感受态细胞的制备方法的原理和操作要点，以及质粒DNA转化大肠杆菌细胞的原理和方法。
基因工程实习报告书
一、实习背景随着生物技术的飞速发展，基因工程已成为现代生物科技的核心领域之一。
为了更好地了解基因工程的相关知识，提高自身的实践能力，我于2021年暑假期间在XX 大学基因工程实验室进行了为期一个月的实习。
在此期间，我参与了实验室的多个科研项目，对基因工程的基本原理、实验操作以及科研流程有了更深入的了解。
二、实习目的1. 熟悉基因工程的基本原理和实验技术；2. 掌握基因工程实验操作，提高实验技能；3. 了解科研项目的开展过程，培养科研素养；4. 提高团队合作能力，增强沟通协调能力。
三、实习内容1. 实验室环境及设备介绍实习期间，我首先了解了实验室的基本环境，包括实验室布局、设备配置、安全操作规程等。
实验室配备了PCR仪、电泳仪、离心机、超纯水系统、生物安全柜等实验设备，为基因工程实验提供了良好的条件。
2. 基因工程基本原理在实习过程中，我学习了基因工程的基本原理，包括基因的克隆、表达、调控、突变等。
通过学习，我对基因的结构、功能以及基因与生物体之间的关系有了更深入的认识。
3. 基因克隆实验在导师的指导下，我参与了基因克隆实验。
实验步骤如下：（1）设计引物：根据目的基因序列，设计合适的引物，以便在PCR反应中扩增目的基因。
（2）PCR扩增：将目的基因的DNA模板、引物、dNTPs、Taq酶等试剂混合，进行PCR扩增。
（3）琼脂糖凝胶电泳：将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，检测目的基因的扩增情况。
（4）DNA回收：将电泳检测到的目的基因片段进行回收。
（5）连接：将回收的目的基因片段与载体进行连接。
（6）转化：将连接产物转化到感受态细胞中。
（7）筛选：通过抗生素筛选，得到含有目的基因的阳性克隆。
4. 基因表达实验在导师的指导下，我参与了基因表达实验。
实验步骤如下：（1）构建表达载体：将目的基因克隆到表达载体中。
（2）转化：将表达载体转化到表达系统中。
（3）诱导表达：在适宜的诱导条件下，使目的基因在表达系统中得到表达。
基因工程实验报告资料
实验报告实验项目名称：基因工程综合实验所属课程名称：基因工程原理班级：12生物工程3班学号：201230620312姓名：李杰锋指导老师：徐学锋目录0.摘要 (1)1.前言 (1)2.实验材料和仪器 (2)2.1 实验材料 (2)2.2 实验仪器 (2)3.实验试剂 (2)3.1DNA提取所需试剂 (2)3.2 PCR实验所需试剂 (2)3.3 双酶切实验所需试剂 (2)4.实验步骤 (3)4.1 质粒DNA提取 (3)4.2 聚合酶链式反应（PCR） (3)4.3 质粒DNA的双酶切分析 (4)4.4 琼脂糖凝胶制备 (4)5.实验结果与分析 (5)5.1质粒DNA提取所得凝胶电泳结果 (5)5.2 PCR扩增实验结果 (5)5.3质粒DNA的双酶切分析结果 (6)摘要：本实验包括质粒DNA的提取、DNA的凝胶电泳、质粒DNA中靶基因的酶切分析及质粒DNA中重组进的靶DNA序列的PCR扩增。
通过本综合实验，进一步理解质粒DNA的提取原理、凝胶电泳中DNA分离的机理、限制性内切酶的工作原理及PCR是如何实现DNA扩增的，也掌握了DNA的提取技术、凝胶电泳技术、DNA酶切分析技术及靶基因的体外快速扩增技术，进而了解实验中出现的现象并学会分析与解决实验中出现的有关问题。
聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，简称PCR）是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，由高温变性、低温退火（复性）及适温延伸等几步反应组成一个周期，循环进行，使目的DNA得以迅速扩增，具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。
不仅可用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究，还可用于疾病的诊断或任何有DNA或RNA的地方。
关键词：凝胶电泳限制线内切酶DNA质粒1 前言本次实验对象为含有重组了1kb DNA片段的PET32.a表达质粒。
该表达质粒中长度约6kb。
首先采用离心破碎法破碎细胞，再使用碱裂解法提取质粒DNA。
基因工程实验报告(终)华南理工大学
分子生物学实验报告(2011 -2012 学年第一学期)实验内容：基因工程综合实验实验时间：2012.10.28-2012.11.2 提交日期：2012 年11 月 5 日实验目的大肠杆菌表达包涵体蛋白的基因工程实验以一个目的基因片段的获得，表达和纯化和活性分析为主线，抓住蛋白和核酸两大主题，建立一个综合型和研究性的大实验教学体系，重视各项技术的衔接。
综合性实验旨在启迪严谨的科学思维和创新意识，提高对实验方法和实验技术的综合运用能力。
具体到每个实验的实验目的如下：1．掌握SDS碱裂解法小量制备质粒的原理和方法。
2．掌握高速离心机、微量移液器等常规仪器的正确使用。
3. 掌握分光光度法估算样品中DNA的浓度和纯度。
4. 熟悉紫外分光光度计的使用方法。
5．学习掌握DNA的琼脂糖凝胶电泳的原理和方法及其运用。
6.掌握用CTAB法小量制备大肠杆菌基因组DNA7.了解基因组DNA的其它提取方法8.了解酶切原理。
9.掌握酶切体系的建立原则。
10. 熟悉基因工程所用限制性内切酶的特点。
11.学习掌握外源DNA与质粒载体的重组连接技术12.掌握大肠杆菌感受态细胞的制备及转化的方法及技术。
13.熟练掌握用重组DNA转化感受态细胞的技术，为基因克隆打好基础14.学习掌握PCR技术的原理及基本操作15.学习考马斯亮蓝（Coomassie Brilliant Blue）法测定蛋白质浓度的原理和方法。
16.掌握蛋白质的SDS-PAGE电泳原理和操作技术及应用。
实验流程具体每日实验流程1、 10月28日，利用双酶切，DNA 琼脂糖凝胶电泳，胶回收，双酶切目的基因和载体连接过夜。
2、10月29日下午，大肠杆菌感受态细胞的制备与转化，涂平板和培养，先正放置半小时，再倒置培养过夜。
3、10月30日下午，挑阳性（含抗性基因）菌落，菌落PCR ，转板和液体培养菌体。
4、10月31日上午，转接培养，诱导表达，晚上，离心菌体，去上清，冰箱放置保存。
基因工程实验报告
基因工程实验技术实验报告百度ID：龍吟EX炫1 材料和方法1.1 实验材料1.1.1 实验对象实验室提供的小鼠；含pGEX 4T-1质粒的大肠杆菌BL21 (DE3)，大肠杆菌Top10。
1.1.2 试剂LB液体培养基，LB固体培养基，0.1% DEPC水，无水乙醇，氯仿，异丙醇，Trizol，Olig(dT)18，反转录缓冲液，dNTP，M-MULV反转录酶，RNA抑制剂，2×PCR Mix，Olig(dT)18引物，表达引物EB3、EB4，5×TBE缓冲液，10×Loading buffer，核酸染料Super Gel Red，琼脂糖，Bam H I，Sal I，Bam H I buffer，10×ligation缓冲液，T4 DNA连接酶，ddH2O，氨苄青霉素，IPTG，30%丙烯酰胺，1.5mol/L和0.5mol/L Tris-HCl，10% SDS，10%过硫酸铵溶液，染色液，脱色液，TEMED，Tween-20，DAB工作液、显色液，TIANGEN胶回收试剂盒，TIANGEN质粒提取试剂盒。
1.1.3 仪器高速冷冻离心机，核酸电泳设备，PCR扩增仪，恒温水浴锅，凝胶成像系统，蓝光切胶仪，无菌操作台，恒温摇床，蛋白电泳设备，电转移设备，移液枪1.2 方法1.2.1 实验材料的处理对小鼠进行处死，解剖并取出肝脏组织，备用。
1.2.2 Trizol法提取总RNA将组织剪成小块在液氮中磨成粉末，取50～100mg加入已盛有1ml Trizol离心管中，轻轻混合以排除气体，再充分混匀；室温放置5min，然后加入200μl氯仿，盖紧离心管，并剧烈摇荡15秒钟；12,000rpm离心10min，取上层水相到新的离心管中，加入500μl异丙醇，温和颠倒混匀。
室温放置10min后12,000rpm离心10min；小心地弃去上清液，加入1ml DEPC水配制的75%乙醇，颠倒混匀，12,000rpm离心5min，再重复一次上述操作；弃去上清液，室温或真空干燥3～5min，后用30μl DEPC水溶解RNA。
基因工程实验报告
基因工程实验报告指导老师：* * *学号：2007083*****姓名：* * *班级：07生物技术班海南师范大学生命科学学院07级2010-10-25实验一植物总DNA的提取、纯化实验目的：掌握从植物的组织（细胞）中提取DNA的方法实验原理：十六烷基三乙基溴化铵（CTAB）是一种去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物。
在高盐浓度条件下，核酸以稳定形式与去污剂CTAB络合于溶液中，当降低溶液浓度到一定程度时，CTAB与核酸的复合物从溶液中沉淀下来，通过离心就可将该复合物同蛋白质、多糖类物质分开，然后将CTAB溶于高盐溶液，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB溶于乙醇中。
仪器、材料与试剂主要仪器：水浴锅、离心机、研钵、涡旋仪主要试剂和材料：CTAB（十六烷基三乙基溴化铵）裂解液：2%CTAB（W/V）、20 mmol EDTA(pH8.0)、100 mmol Tris-HCl (pH8.0)、1.4 mol NaCl氯仿：异戊醇（24：1）。
异丙醇，无水乙醇。
TE缓冲液：10mmol/L Tris-HCl(pH8.0)、1mmol/L EDTA实验步骤1. 取2g左右的嫩叶子放入预冷的研磨中，第一次加入较多的液氮，开始先慢慢磨开后研磨中待液氮量较少时快速磨动，如发现液氮挥发完迅速加入液氮（加入时动作要轻，防止粉末溅起），重复两次。
2. 将粉末加入预冷1.5mlEP管中（约1/3）后，加入事先700ul65℃水浴的2%CTAB和30ul室温β-巯基乙醇（剧毒），轻轻摇动混匀。
放入65℃水中水浴40min，每10min取出震荡使沉淀散开。
3. 取出后冷却至室温，加入氯仿/异戊醇（24：1，V/V）至满管（加药品千万注意别让药品污染桌面及手上，有必要可带面罩），剧烈震荡后12000rpm离心10min，取上清加入500µl 氯仿/异戊醇12000rpm 离心10min。
4. 取上清至预冷600µl 异丙醇和20µl 3M KAc中置于-20℃冰箱中15-20min。
基因工程实验报告模板
《基因工程实验》报告姓名学号分院(系)生物与化学工程分院专业班级生物技术08级1班指导教师王进波一、实验项目名称：质粒载体DNA的提取二、实验时间：2011年9月日三、实验目的：用小四号字，汉字用宋体，英文字母及阿拉伯数字用Times New Roman字体，行间距1.5倍；段前0.5行，段后0行。
（注：格式要求在正式报告中删除）四、实验步骤：用小四号字，汉字用宋体，英文字母及阿拉伯数字用Times New Roman字体，行间距1.5倍；段前0.5行，段后0行。
（注：格式要求在正式报告中删除）五、实验结果与讨论：用小四号字，汉字用宋体，英文字母及阿拉伯数字用Times New Roman字体，行间距1.5倍；段前0.5行，段后0行。
本部分内容应当是报告的重点，各位同学在写报告时，一定要将结果写清楚，无论成功还是失败，都必须展开讨论；同组的同学实验结果可以相同，但讨论是绝不可以雷同的！！！（注：格式要求在正式报告中删除）提醒各位同学（正式报告中应当删除该部分提醒内容）：（1）报告必须严格按照格式要求，打印完成。
（2）请各位同学于9月15日前完成报告，由课代表或班长将报告交到NE206办公室。
（3）严禁抄袭，每个人的讨论部分是绝不允许雷同的！一、实验项目名称：目的基因的PCR扩增二、实验时间：2011年9月日三、实验目的：用小四号字，汉字用宋体，英文字母及阿拉伯数字用Times New Roman字体，行间距1.5倍；段前0.5行，段后0行。
（注：格式要求在正式报告中删除）四、实验步骤：用小四号字，汉字用宋体，英文字母及阿拉伯数字用Times New Roman字体，行间距1.5倍；段前0.5行，段后0行。
（注：格式要求在正式报告中删除）五、实验结果与讨论：用小四号字，汉字用宋体，英文字母及阿拉伯数字用Times New Roman字体，行间距1.5倍；段前0.5行，段后0行。
本部分内容应当是报告的重点，各位同学在写报告时，一定要将结果写清楚，无论成功还是失败，都必须展开讨论；同组的同学实验结果可以相同，但讨论是绝不可以雷同的！！！（注：格式要求在正式报告中删除）提醒各位同学（正式报告中应当删除该部分提醒内容）：（1）报告必须严格按照格式要求，打印完成。
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《基因工程》实验报告一、实验目的1.学习并掌握基因工程操作技术中最常用的载体质粒DNA的提取方法。
2.学习琼脂糖凝胶电泳分离DNA的原理和方法，检测质粒DNA的浓度与分子量。
3.了解PCR的基本原理，掌握PCR的基本操作技术。
4.学习利用限制性内切酶切割DNA的方法，并通过电泳检测酶切的效果。
5.学习DNA重组技术中的核心步骤，DNA片段之间的体外连接方法。
6.学习制备感受态细胞并将体外重组DNA引入受体细胞的技术。
7.掌握利用蓝白斑筛选出转化子的方法。
二、实验原理（1）质粒DNA的小量制备在碱性溶液中，双链DNA氢键断裂，DNA双螺旋结构遭破坏而发生变性，但由于质粒DNA分子量相对较小，且呈环状超螺旋结构，即使在高碱性pH条件下，两条互补链也不会充分分离，当加入中和缓冲液调时，变性质粒DNA又恢复到原来的构型；而线性的大分子量的细菌染色体DNA则不能复性，与细胞碎片、蛋白质、SDS等形成不溶性复合物。
通过离心沉淀，细胞碎片、染色体DNA 及大部分蛋白质等可被除去，而质粒DNA及小分子量的RNA则留在上清液中。
混杂的RNA可用RNA酶(RNaseA)消除。
再用酚/氯仿处理，可去除残留蛋白质。
（2）琼脂糖凝胶电泳与凝胶中DNA的检测琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，沸水中溶解，45℃开始形成多孔性刚性滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度。
DNA分子在碱性环境中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动。
DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。
不同DNA，其分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带。
琼脂糖凝胶电泳法分离DNA，主要是利用分子筛效应，迁移速度与分子量的对数值成反比关系。
SYBR GoLd 是一种极敏感的染料。
其可与DNA分子形成SYBR GoLd -DNA 复合物，在紫外光照射下发射荧光，且荧光强度与DNA的含量成正比。
用肉眼观察，可检测到20pg以上的DNA。
（3）PCR扩增功能基因PCR(聚合酶链反应)是一种选择性体外扩增DNA或RNA的方法.它包括三个基本步骤: (1) 变性：目的双链DNA片段在94℃下解链; (2) 退火：两种寡核苷酸引物在适当温度(50℃左右)下与模板上的目的序列通过氢键配对；(3) 延伸：DNA 模板—引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，目的基因序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链。
重复循环变性-退火-延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。
每完成一个循环需2-4分钟，2-3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
（4）限制性酶切PCR产物及质粒利用限制性内切酶特异的识别DNA特异的核苷酸序列，并切割DNA，从而产生一定长度的DNA片段。
（5）重组质粒的制备外源DNA分子是在DNA连接酶的作用下，在接缓冲液系统中，其可以和经酶切的载体分子进行连接。
（6）氯化钙制备和转化大肠杆菌将细菌置于0O C的CaCl2 低渗溶液中，使细胞膨胀，同时Ca2+使细胞膜磷脂层形成液晶结构，使得位于外膜的与内膜间隙中的部分核酸酶离开所在区域，这就构成了大肠杆菌人工诱导的感受态。
此时加入DNA，Ca2+又和DNA结合形成抗脱氧核糖核酸酶的羟基-磷酸钙复合物，并黏附在细菌细胞膜的外表面上。
经短暂的42O C热脉冲处理后，细菌细胞膜的液晶结构发生剧烈扰动，随之出现许多间隙，导致通透性增加，DNA分子便乘机进入细胞内。
（7）蓝白斑筛选重组质粒pUC18 上带有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和β-半乳糖苷酶N端146个氨基酸的编码序列，在这个编码区中插有一个多克隆位点，且不影响正常功能，感受态菌株带有β-半乳糖苷酶C 端部分序列的编码信息，当puc18载体在正常情况下同感受态菌株融合后，互补表达具有酶活性的蛋白质，可将X-gal水解成蓝色产物，称为α-互补现象。
当有外源片段插入多克隆位点后，互补现象消失，无法将X-gal水解成蓝色产物（菌株呈白色），故可通过菌株颜色的差异来鉴别重组质粒。
三、仪器设备台式离心机、旋涡振荡器、恒温水浴锅、微波炉、电泳仪、电泳槽、凝胶成像检测仪、超净工作台、冰箱、恒温摇床四、实验用具离心管、移液枪、枪头、冰盒、加样板、量筒100 ml、三角瓶500 ml 、培养皿、锥形瓶150 ml、烧杯五、试剂无菌水、溶液II(现配现用)、溶液III(预冷)、水饱和酚、氯仿、异丙醇、70%乙醇、RNase A、1%的琼脂糖溶液、加样缓冲液、DNA marker、SYBR Gold、电泳缓冲液、loading buffer、DNA聚合酶、PCR缓冲液、Kbuffer、限制性核酸内切酶EcoRI 和BamHI、LB培养基、氨苄青霉素(Amp)、0.1 mol/L CaCl2、X-gal、IPTG 六、实验步骤第一大组中，我们小组比其他小组少了对PCR产物的酚仿抽提纯化，PCR之后直接进行PCR产物的酶切，我们小组整个实验是流程是：质粒DNA的小量制备对所提质粒进行琼脂糖凝胶电泳电泳检测，PCR扩增功能基因对PCR产物进行电泳检测限制性酶切PCR产物对酶切产物进行酚仿抽提纯化对纯化后的酶切产物进行电泳检测重组质粒的制备，进行感受态细胞的制备重组质粒导入感受态细胞蓝白斑筛选重组质粒（1）质粒DNA的小量制备吸取1.5 ml菌液至1.5 ml离心管中。
离心(12000pm, 2分钟)，弃上清液。
为了提取多一点DNA，再吸取1.5 ml菌液至同一离心管中，离心，弃上清液。
用移液器尽可能除去上清液。
加入200μl无菌水，用涡振荡器充分悬浮菌体。
加入400μl溶液II ，缓慢地上下翻转离心管，温和混匀。
加入300μl预冷的溶液III ，上下轻轻翻转离心管，温和混匀，在冰上放置3-5min。
离心(12000 rpm，15分钟)，将上清液转至另一个离心管中。
向上清液中加入10μl的RNase A，37O C水浴90分钟。
向上清夜加入等体积水饱和酚，反复混匀，离心(12000 rpm，10分钟)，小心将上清液转至另一个离心管中。
向上清夜中加入等体积的氯仿，反复混匀，离心(12000 rpm，10分钟)，小心将上清液转至另一个离心管中。
向上清夜中加入等体积的异丙醇，混匀，冰上放置10分钟。
离心(12000 rpm，10分钟)，弃掉上清液。
将管口敞开倒置于卫生纸上使所有液体流出并吸干液体。
用1ml70%乙醇洗涤沉淀1次，置于冰水中20分钟，离心(12000 rpm，2分钟)，弃掉上清液，将沉淀在室温下彻底晾干。
向离心管中加入20μl的ddH2O，得到质粒DNA。
（2）琼脂糖凝胶电泳与凝胶中DNA的检测称取1.0 g琼脂糖加入盛有100 ml电泳缓冲液的500 ml三角瓶中，摇匀，在微波炉上加热至琼脂糖完全溶解。
冷却到约60℃后，加入5 μl的SYBR Gold。
将胶框和梳子配置好，将溶解的琼脂糖(约50℃)倒入其中，直至厚度为4~6 mm。
在室温下放置，冷却凝固。
充分凝固后小心垂直向上拔出梳子，以保证点样孔完好。
将凝胶置入电泳槽中，加电泳缓冲液至液面覆盖凝胶1~2 mm。
用移液枪吸取实验一的DNA样品5 μl于点样板小孔中，再加入0.5 μl的加样缓冲液，混匀后，小心加入点样孔，蓝色样品混合物将沉入点样孔下部。
同时点5μl marker。
打开电源开关，调节电压至50V，进行电泳。
电泳1h后，将凝胶置于凝胶成像检测仪上观察并记录实验结果。
(3) PCR扩增功能基因1.PCR反应体系：我们所做的PCR使用的是50μl体系，依次加入下列物质：33.5μl双蒸水5.0 μl反应缓冲液4.0 μl dNTPs (10mol/L)1.0 μl上游引物1.0 μl下游引物1.0μl模板DNA0.5μlDNA聚合酶2. PCR反应过程：94℃，5分钟(预变性)94℃，30秒58℃，1分钟35个循环72℃，45秒72℃，10分钟3. PCR产物的检测：取10 μl PCR产物在琼脂糖凝胶中电泳，然后放在凝胶成像检测仪下观察，记录结果。
（4）限制性酶切PCR产物及质粒酶切的反应体系如下：组分加样量PCR产物样品40μlKbuffer 5μlEcoRI 2.5μlBamHI 2.5μl37℃水浴过夜对酶切产物进行氯仿抽提纯化。
（5）重组质粒的制备第一大组其他小组做的是20μl的反应体系，因为我们酶切后的产物凝胶检测的条带要亮一点，所以我们小组使用10μl的反应体系，按下述组分和加样量加入各物质：组分加样量外源片段7μlBuffer 1μl质粒1μl酶1μl再将连接反应混合物置于16℃水浴1h，然后在4℃冰箱上放置1h，得到连接产物。
（6）氯化钙制备和转化大肠杆菌1.感受态细胞的制备吸取1ml培养好的细菌转入一个无菌、预冷的1.5ml离心管中,在冰上放置10分钟，使菌液冷却至0℃。
13000 rpm离心10分钟收集菌体。
弃上清液，将管倒置1min以使培养液流尽。
加1 ml预冷的0.1 mol/L CaCl2，悬浮菌体并离心洗涤两次。
加入2.0ml 预冷的0.1 mol/L CaCl2，小心悬浮细胞沉淀。
2.转化在1.5 ml无菌离心管中加入100μl上一步制得的感受态细胞，并加入10μl重组质粒，轻轻旋转以混合，在冰上放置30min。
将管子放在42℃水浴中，静置90秒（注意不要摇动管子）。
快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却1-2分钟。
加入800 μl LB液体培养基，水浴将培养基加温至37℃。
然后将管转移到摇床中，温45-60min，使细菌复苏并表达质粒编码的抗生素抗性标记基因。
（7）蓝白斑筛选重组质粒往45℃左右的100m l的LB培养基中加入200μl的X-gal、100μl IPTG(24mg/ml)、100 μlAmp(100mg/ml)，倒平板。
待培养基凝固后，将200 L已经转化的感受态细胞涂布于上述LB-Amp平板上。
将平板置于室温至液体被吸收。
倒置平板，置于37℃培养箱中培养12-16h。
观察转化结果(白色为阳性，蓝色为阴性)七、实验结果一、质粒DNA的小量制备的凝胶成像结果如下：这是我单独对我们小组提取的质粒进行的一次跑胶，凝胶成像检测，第一大组其他小组并无此图。
二：PCR扩增功能基因的凝胶成像结果如下：三：限制性酶切PCR产物的凝胶成像结果：当时为了和其他小组做对照，看看不经过酚仿抽提纯化的PCR产物对最后的转化效果有没有明显的差别。
因此我们组省去PCR扩增功能基因后面的酚仿抽提纯化，直接利用限制性核酸内切酶EcoRI 和BamHI对PCR产物进行双酶切，再进行酚仿抽提纯化经过酶切后的产物，然后跑电泳并进行凝胶成像观察酶切效果。