肝糖原的提取、鉴定与定量-第七实验室
肝糖原的提取和鉴定
肝糖原的提取和鉴定一、实验目的1、学会和掌握肝糖原提取和鉴定的原理和方法。
2、正确掌握使用离心机的方法步骤。
二、实验原理三、实验步骤（一）、肝糖原提取1、用脱臼法处死白鼠，立即取出肝脏，迅速以滤纸吸取附着的血液。
称取肝组织约2g，置研钵中，加入10%三氯乙酸2ml，用剪刀把肝组织剪碎，再加石英砂少许，研磨5min。
2、再加5%三氯乙酸4ml，继续研磨1min，至肝脏组织已充分磨成糜状为止，转入离心管，然后以2000r/min离心10min。
3、小心将离心管上清液转入另一个离心管中，加入同体积的95%乙醇，混匀后，此时糖原成絮状沉淀析出。
4、溶液以2000r/min离心10min。
弃去上清液，并将离心管倒置于滤纸上1~2min。
5、在沉淀内加入蒸馏水2ml，用细玻璃棒搅拌沉淀至溶解，即成糖原溶液。
（二）、鉴定1、取2支小试管A、B，一支A加糖原溶液10滴，另一支B加蒸馏水10滴，然后在两管中各加碘-碘化钾溶液1滴，混匀，比较两管溶液颜色有何不同。
2、再取2支小试管，将剩余的糖原溶液平分倒入两试管，试管甲加浓盐酸3滴，试管乙加蒸馏水3滴，将两管在沸水浴中加热10min以上。
取出冷却，试管甲中逐滴加入20%NaOH溶液，并且PH试纸检验，直至溶液成中性。
试管乙中加入同等滴数的蒸馏水。
3、向甲、乙两试管各加入班氏试剂2ml，再置沸水浴中加热5min，取出冷却。
观察有无沉淀生成。
注意事项：1、实验小白鼠在实验前必须饱食。
2、脱臼法处死小白鼠：手提着小白鼠将其小白鼠尾巴将其从笼子里取出，使其四脚着地，另一支手按着小白鼠耳后，尾巴向外拉，使其脊柱断节，背部脊髓断裂，致使四肢瘫痪。
3、肝脏离体后，所得肝脏必须迅速以三氯乙酸处理。
4、研磨应充分，这是实验成败的关键。
5、离心时与另一组同学的离心管平衡，对称放入离心机。
6、鉴定的第（2）步，试管甲中溶液必须调至中性或偏碱性。
四、实验结果试管A 试管B棕红色黄色试管甲试管乙砖红色沉淀无沉淀分析：1、实验小白鼠在实验前必须饱食，因为空腹时，血糖含量降低，肝糖原分解来提高血糖含量，肝糖原含量易于减少或耗尽。
肝糖原的提取鉴定
肝糖原的提取鉴定
肝糖原是一种由多个葡萄糖分子组成的多聚物，主要储存在肝脏
细胞中，是机体维持血糖平衡的重要物质之一。
以下是肝糖原的提取
和鉴定方法：
提取肝糖原方法：
1. 取新鲜肝脏切成细小的碎片，放入0.5 mol/L HClO4（冰醋酸也可）中。
2. 在4°C下振荡24小时，然后离心提取上清液。
3. 上清液的pH值调节至中性，加入4倍体积的85%乙醇，混合
均匀并放置于-20°C冷藏过夜。
4. 离心沉淀，用冷酒精洗涤沉淀，干燥后即为纯净的肝糖原。
鉴定肝糖原方法：
1. 在一定pH条件下用碘化钾溶液反应：将一定量的肝糖原溶液
和一定量的碘化钾溶液混合静置片刻，待溶液变为淡黄色时即可鉴定。
如果混合产生的沉淀呈现棕色，则肝糖原的存在得到证明。
2. 用酚-硫酸法鉴定：将一定量的肝糖原加入稀硫酸中，加入冷
的浓酚溶液，混合均匀后加入冷水，混合均匀后加入棕红色的浓硫酸，最后出现紫色圈即可证明肝糖原存在。
肝糖原的提取、鉴定与定量-第七实验室
生物化学实验报告姓名：学号：专业年级:组别:生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称Folin—酚试剂法测定蛋白质含量实验日期实验地点合作者指导老师评分教师签名批改日期格式要求：正文请统一用：小四号，宋体，1.5倍行距；数字、英文用Times New Roman；标题用：四号，黑体，加粗。
需强调的地方请用蓝颜色标出。
不得出现多行、多页空白现象。
一、实验目的1、学习并掌握肝糖原提取和鉴定原理和方法；2、学习并掌握蒽酮比色测定糖原含量的原理、注意事项和操作方法;3、学习并掌握刻度吸管和微量加样枪的使用方式；4、正确掌握使用离心机的方法步骤；5、熟练运用溶液混匀的各种方法；6、正确掌握溶液转移的操作；7、正确掌握使用分光光度计的方法步骤二、实验原理实验1肝糖原的提取与鉴定糖原是生物的主要储能物质之一,主要储存与肝细胞中，采用研磨匀浆等方法可以使肝细胞破碎。
肝细胞破碎，细胞内容物流出.低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶并且使蛋白质沉淀，糖原则能够稳定地保存在上清液中，从而达到分离糖原与蛋白质等其他成分的目的。
糖原不溶于乙醇但可溶于热水，故可以先用95％乙醇将滤液中糖原沉淀，再溶于热水中。
糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。
这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中,依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。
此外，糖原还可以被酸水解成葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可以判定肝组织中糖原的存在。
糖原水解溶液与班氏试剂混匀沸水浴加热2min后会出现砖红色沉淀。
CuSO4 + 2NaOH = Na2SO4 + Cu(OH)2↓2Cu(OH）2 + C6H12O6 = 2CuOH +氧化型葡萄糖+ H2O2CuOH = H20 + Cu2O↓ （红色）Cu（OH)2 ==== H2O + CuO↓ （黑色）实验2肝糖原定量测定糖原在浓碱溶液中非常稳定，故可将肝组织先置于浓碱中加热,以破坏其他成分，保留肝糖原。
[精华版]实验五、肝糖原的提取与鉴定
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性偏碱性 斑氏试剂2ml 沸水浴5min 冷却 观察现象。
三.实验结果 四.分析讨论
谢谢观看
离心管中） 混匀、静置10min 弃去上清夜、留沉淀 加蒸馏水1ml
学习和掌握提取肝糖原的方法；
搅拌溶解而得
加入等体积95%乙醇
离心
粗阿袖镣叙镶韭嗅婚费戴荒傻巨之迪慷嫡争剿茅嫡兜插灭奇妮哟狠抠疥泥实验五、肝糖原的提取与鉴定实验五、肝糖原的提取与鉴定
取试管2支
各加1滴I2液、混匀 观察现象
弃去上清夜、留沉淀 搅拌溶解而得 本剩实余验 肝通糖过原对液动内物+浓肝H脏C研L3磨滴，在三沸氯水醋浴酸10作m用in下冷一却使其加中入的1蛋0%加白N质蒸aO被馏H沉3水-淀4滴，1m至二中l使糖原水解酶失活，从而过滤得到糖原。
取试管2支
各加1滴I2液、混匀 观察现象
赡右畴材撮顶移亿纪洋咖埠吊炊泛欢敦颤裔纵谷稠芭卷究部颈谱价砍祟佛实验五、肝糖原的提取与鉴定实验五、肝糖原的提取与鉴定
糖原溶液待用。
二、鉴定：ห้องสมุดไป่ตู้
1.取试管2支
加入肝糖原溶液10滴 加蒸馏水10滴
各加1滴I2液、混匀 观察现象
2.剩余肝糖原液内+浓HCL3滴 沸水浴10min 冷却 加入10%NaOH3-4滴至中
学习和掌握肝糖的一些特殊化学性质和鉴定方法。
醋酸2ml 过滤（滤液收集在带刻度的 学本习实和 验掌通握过肝对糖动的物一肝些脏特研殊磨化，学在性三研质氯磨和醋鉴酸至定作肉方用糜法下。一状使其中的蛋白质被沉淀，二使糖原水解酶失活，从而过滤得到糖原。
实验六、肝糖原的提
取与鉴定
肝糖原理的糖在体内的重要储存形式之一，是体内糖的重要来源之一，糖原 是一高分子化合物。
肝糖原的提取与测定
肝糖原的提取与鉴定一、实验目的：1、掌握碘与糖原作用的显色原理。
2、熟悉班氏试剂检验还原糖的原理。
3、了解实验动物的选择和注意事项。
二、实验原理：肝糖原是葡萄糖在人体内重要的储存方式之一。
肝糖原的合成和分解，对血糖浓度的调节起着关键的作用。
糖原是高分子化合物，正常情况下分子量约4×106，微溶于水，无还原性，与碘作用呈红色，这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。
将新鲜的肝组织与石英砂以及CCl3COOH共同研磨，当肝组织被充分破碎后，其中的蛋白质被CCl3COOH变性沉淀，而糖原仍溶于溶液中。
过滤除去沉淀，糖原不溶于乙醇，在滤液中加入乙醇将糖原沉淀出来。
将沉淀的糖原溶于水，一部分做碘的颜色反应，一部分经酸水解为葡萄糖，用班氏试剂检验。
三、实验步骤：（一）肝糖原提取1.取大白鼠一只，饱食30-60min后，置于封闭桶中，乙醚麻醉5分钟。
立即取出肝脏，迅速用滤纸吸去血液。
称重后置于研钵中，按照1g/1mL的比例加入10%三氯醋酸以及少量石英砂，初步研磨。
2.再按照1g/2mL比例加入5%三氯醋酸，继续研磨组织至糜状。
3000r/min离心10min，取上清液置于一刻度离心管中。
3.加入等体积95%预冷乙醇，混匀静置10min，此时糖原成絮状沉淀析出。
4.3000r/min离心10min，弃上清后将离心管倒置于滤纸上1-2min，吸去残余液体。
5.沉淀中加入蒸馏水溶解。
（二）肝糖原的鉴定1.取小试管2支，一支加入糖原溶液10滴，另一支加入蒸馏水10滴。
两管各加碘液1滴，混匀观察现象。
2.剩余糖原溶液中加入浓盐酸3滴，沸水浴10min水解。
取出冷却，用20%NaOH调至中性。
3.在一只大试管中加入班氏试剂2mL，在沸水浴中预热后，小心取水解液沿管壁加入，注意不要搅动下层班氏试剂。
沸水浴2min观察现象。
四、实验结果：1.加入糖原溶液的小试管中变为红色，而加入蒸馏水的小试管中仍为黄色；2.加入班氏试剂沸水浴后，试管中产生砖红色的沉淀环。
肝糖原测定
生物化学实验报告姓名：学号：专业年级：组别：生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称肝糖原的提取、鉴定与定量实验日期实验地点合作者指导老师评分教师签名批改日期一、实验目的1.掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。
2.了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。
3.掌握吸量管和微量移液器的使用方法。
4.掌握各种溶液混匀及转移的方法。
5.正确掌握使用离心机和分光光度计的方法步骤。
二、实验原理1.肝糖原的提取糖原储存于细胞内，采用淹没匀浆等方法可使细胞破碎，低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定地保存于上清液中，从而使糖原与蛋白质等其他成分分离开来。
糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95%乙醇将绿叶中糖原沉淀，再溶于热水中。
2.糖原的鉴定糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。
这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。
糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的的存在。
CuSO4 + 2NaOH = Na2SO4+ Cu(OH)2↓2Cu(OH)2 + C6H12O6= 2CuOH +氧化型葡萄糖+H2O2CuOH = Cu2O↓(红色) + H2OCu(OH)2⍙ CuO↓ (黑色) + H2O3.肝糖原的定量糖原在浓酸中可水解为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。
该物质在620nm处有最大吸收。
糖含量在10—100mg范围内，溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量的标准溶液比色，通过标准对照法即可计算出样品中糖原的含量。
糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前，肝组织先置于浓碱中加热，以破坏其他成分，而保留肝糖原。
三、实验材料1.样品鸡肝2.试剂95%乙醇、0.31mol/L(5%)三氯醋酸溶液、0.15mol/L NaCl溶液、浓HCl、12.5mol/L(50%)NaOH、碘试剂、班氏试剂、30%KOH溶液、标准葡萄糖液（50mg/L）蒽酮显色剂3.仪器和器材1、普通离心机，室温至100℃恒温水浴箱，722型分光光度计，天平2、剪刀、镊子、研钵3、试管架，离心管，试管4、刻度吸量管（2ml ,5ml），1000μl微量可调取液器5、100ml容量瓶6、白瓷反应板四、实验方法（一）实验流程1.肝糖原提取、鉴定实验流程：鸡肝约1.50 g，剪碎＋5%CCl3COOH 1 ml研磨至乳状＋5%CCl3COOH 3 ml研磨成肝匀浆，离心3分钟（4000 r / min）上清液（取2 ml）＋2ml 95%乙醇，混匀，静置10分钟分钟（4000 r / min）＋蒸馏水1 ml沸水浴2糖原溶液1ml＋浓HCl 250μl加碘试剂2沸水浴糖原溶液2滴250μl 呈色对比糖原水解液＋班氏试剂4滴混匀沸水浴2分钟，观察变化2.肝糖原定量实验流程：鸡肝0.15 g＋30%KOH 1.5ml （用吸量管）沸水浴15分钟冷却，全部转入100 ml容量瓶中加水至标线，仔细混匀，此为糖原提取液糖原的测定（二）操作步骤1.肝糖原提取、鉴定（见表1）表1肝糖原的提取与鉴定实验步骤2.肝糖原定量测定（见表2）表2 肝糖原定量测定实验步骤（三）注意事项1.肝糖原提取、鉴定（1）肝糖原提取一步，向上清液中加人等量的95％乙醇后，务必注意混匀。
肝糖原提取和测定
肝糖原的提取和鉴定一、实验目的1.了解肝糖原的性质并掌握其提取的方法。
2.熟悉肝糖原的鉴定方法。
二、实验原理肝糖原是糖在体内的重要储存形式之一。
其储存量虽然不多，但在代谢过程中，它是动物体内糖的重要的来源之一。
肝糖原的合成或分解对血糖浓度的调节起着重要的作用。
糖原属于高分子糖类化合物，微溶于水，无还原性，与碘作用变成红棕色。
提取肝糖原是利用三氯醋酸破坏肝组织中的酶，且肝组织中的蛋白质也被三氯醋酸所沉淀，而糖原仍留在溶液中。
过滤除去沉淀，滤液中的肝糖原可借加入的乙醇而沉淀。
将沉淀的糖原溶于水，即可得到糖原溶液。
糖原与碘作用呈红棕色。
糖原被酸水解为葡萄糖，可用班氏试剂检验。
利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定组织中糖原的存在。
三、实验材料、仪器和试剂1. 材料：小白鼠等动物新鲜肝脏组织2. 仪器：（1）天平（2）研钵（3）离心机（4）离心管（5）恒温水浴锅（6）试管（7）广泛试纸（8）移液管（9）洗耳球（10）电炉（11）量筒（12）滤纸3．试剂：（1）10%的三氯醋酸溶液（2）5%的三氯醋酸溶液（3）95%乙醇溶液（4）浓盐酸（5）20%的NaOH溶液（6）碘液：(取碘1g、碘化钾2g溶于500mL蒸馏水中)（7）班氏试剂：(将硫酸铜17.3g溶于100mL温蒸馏水中；取柠檬酸钠173g和无水碳酸钠100g溶于700mL温蒸馏水中，待冷却后，将硫酸铜溶液缓缓加入柠檬酸钠和碳酸钠混合液中，最后用蒸馏水稀释至1000mL)四、操作步骤(一)肝糖原的提取（1）肝匀浆的制备：迅速处死小白鼠，立即取出肝脏，用滤纸吸取附着的血液。
称取约1g肝脏置研钵中，加入少许石英砂及10%的三氯醋酸溶液1mL，研磨至呈乳状后再加入5%的三氯醋酸2mL，继续研磨，直至肝脏组织已充分磨成均匀糜浆。
（2）提取糖原：将制备好的肝匀浆以3000r/min的转速离心10min。
取上清液于另一离心管并量取体积，加入等体积的95%乙醇溶液，混匀后静置10min，使糖原呈絮状析出。
实验五、肝糖原的提取与鉴定
通过动物实验等方法检测肝糖原的生物活性。例如，给实验动物注射一定量的肝糖原后，观察其血糖水 平的变化情况，以判断肝糖原的生物活性。
04
实验结果与数据分析
实验结果展示
肝糖பைடு நூலகம்提取量
通过实验，成功从肝脏组织中提取出一定 量的肝糖原，提取量符合预期。
肝糖原纯度
经过纯化步骤，所得肝糖原的纯度较高， 杂质含量较低。
生物学活性验证
将提取的肝糖原与标准品进行生物学活性比较，如血糖调节活 性等。结果显示，提取的肝糖原具有良好的生物学活性，与标 准品相似。
05
实验讨论与结论
实验结果讨论
01
肝糖原提取效率
本次实验中，我们采用了XX方法提取肝糖原，通过对比不同提取条件
下的得率，发现XX条件下提取效率最高，为后续实验提供了可靠的基
实验原理
肝糖原是一种多糖类物质 ，主要存在于动物肝脏和 肌肉中，是动物体内的重 要能量来源之一。
肝糖原在肝脏中合成并储 存，当机体需要能量时， 肝糖原可分解为葡萄糖并 释放到血液中，以维持血 糖水平的稳定。
本实验通过提取肝脏中的 肝糖原，并利用其理化性 质进行鉴定，以深入了解 其在动物体内的功能和作 用。
肝糖原的鉴定
物理性质鉴定
通过观察肝糖原的颜色、气味、溶解性等物理性质进行初步鉴定。肝糖原应为白色或类白色粉末，无臭、无味，易溶 于水。
化学性质鉴定
利用肝糖原的还原性进行化学鉴定。可采用斐林试剂等还原糖试剂与肝糖原反应，观察颜色变化判断其还原性。同时 ，可利用肝糖原与碘的反应呈现蓝紫色等特性进行鉴定。
鉴定试剂
用于鉴定提取的肝糖原，如碘液等。
仪器与设备
匀浆器
用于将肝脏样本匀浆化，以便于提取肝糖 原。
肝糖原的提取,鉴定与定量实验报告
生物化学实验报告姓名：学号：专业年级： 2018级临床卓越创新班组别：第一实验室生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称肝糖原的提取，鉴定与定量实验日期2019-12-18 实验地点第一实验室合作者指导老师评分XX 教师签名李某某批改日期2013-06-03一、实验目的1.掌握组织样品的制备方法，了解注意事项。
2．了解肝糖原的提取，糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握操作方法。
3.正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。
4.熟练运用溶液混匀的多种方法5.学会溶液转移的操作6.正确使用分光光度计7.掌握离心机的正确操作步骤二、实验原理1.肝糖原的提取和鉴定：1）糖原储存于细胞内，采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎，低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定地保存于上清液中，从而使用糖原与蛋白质等其它成分分离开来。
2）糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95%乙醇将滤液中糖原沉淀，再溶于热水中。
3）糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。
这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。
4）糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的存在；2. 肝糖原的定量：1）糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物—5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。
该物质在620nm处有最大吸收。
2）糖含量在10-100μg范围内，溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色，通过标准对照法(直接比较法)即可计算出样品中糖原的含量。
3）糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前，肝组织先置于浓碱中加热，以破坏其它成分，而保留肝糖原。
三、材料与方法：以流程图示意1.实验材料试验样品和试剂仪器鸡肝，95%乙醇溶液，5%三氯醋酸溶液，浓盐酸，氢氧化钠溶液，碘试剂，班氏试剂，氢30%氧化钾溶液，标准葡萄糖液，蒽酮，蒸馏水恒温水浴箱，分光光度计，电子秤，离心机；剪刀，镊子，试管架，试管*3，刻度吸量管，加样枪，100ml容量瓶，白瓷反应板2.实验步骤1）肝糖原提取与鉴定2）肝糖原定量推论，并得出结论。
实验四、肝糖原的提取和鉴定
三、实验步骤
一、提取：
称肝脏约1g+10%三氯醋酸1ml 研磨 +5%三氯 醋酸2ml 研磨至肉糜状 过滤（滤液收集在带刻度的 离心管中） 加入等体积95%乙醇 混匀、静置10min 离心 弃去上清夜、留沉淀 加蒸馏水1ml 搅拌溶解而得 糖原溶液待用。
二、鉴定：
1.取试管2支
加入肝糖原溶液10滴 加蒸馏水10滴
肝糖原是糖在体内的重要储存形式之一是体肝糖原是糖在体内的重要储存形式之一是体内糖的重要来源之一内糖的重要来源之一本实验通过对动物肝脏研磨在三氯醋酸作用本实验通过对动物肝脏研磨在三氯醋酸作用下一使其中的蛋白质被沉淀二使糖原磷酸化下一使其中的蛋白质被沉淀二使糖原磷酸化酶失活从而过滤得到糖原
实验四、肝糖原习和掌握提取肝糖原的方法；
学习和掌握肝糖的一些特殊化学性质和 鉴定方法。
二、实验原理
糖原 是一高分子化合物。微溶于水，无还原性。 肝糖原是糖在体内的重要储存形式之一，是体
内糖的重要来源之一，
本实验通过对动物肝脏研磨，在三氯醋酸作用 下一使其中的蛋白质被沉淀，二使糖原磷酸化 酶失活，从而过滤得到糖原。
各加1滴I2液、混匀 观察现象
2.剩余肝糖原液内+浓HCL3滴 沸水浴10min 冷却 加入10%NaOH3-4滴至中
性偏碱性 斑氏试剂2ml 沸水浴5min 冷却 观察现象。
三.实验结果 四.分析讨论
肝糖原的提取实验报告
一、实验目的1. 掌握肝糖原提取的基本原理和方法。
2. 熟悉肝糖原的鉴定方法。
3. 了解肝糖原在生物体内的作用及其临床意义。
二、实验原理肝糖原是动物体内储存糖类的主要形式，主要由葡萄糖分子通过α-1,4-糖苷键和α-1,6-糖苷键连接而成。
在体内，肝糖原可作为能量来源，维持血糖水平的稳定。
本实验通过研磨、离心、沉淀等方法提取肝糖原，并利用碘液和班氏试剂进行鉴定。
三、实验材料与仪器材料：1. 新鲜小鼠肝脏2. 生理盐水3. 三氯醋酸4. 95%乙醇5. 碘液6. 班氏试剂7. 蒸馏水8. 乳钵9. 研磨棒10. 离心机11. 移液器12. 烧杯13. 试管仪器：1. 电子天平2. 恒温水浴锅3. 移液器4. 离心机5. 显微镜四、实验步骤1. 肝糖原提取：1. 将新鲜小鼠肝脏用生理盐水冲洗干净，去除脂肪和结缔组织。
2. 称取约2g肝脏组织，置于乳钵中，加入少量石英沙和10%三氯醋酸2mL，研磨5min。
3. 加入5%三氯醋酸4mL，继续研磨1min，直至肝脏组织充分磨成糜状。
4. 将研磨好的肝脏组织移入离心管中，以2500r/min离心10min。
5. 取上清液，加入同体积的95%乙醇，混匀后静置10min，待糖原沉淀析出。
6. 将沉淀物再次以2500r/min离心10min，弃去上清液。
7. 将沉淀物用蒸馏水溶解，即得肝糖原溶液。
2. 肝糖原鉴定：1. 取少量肝糖原溶液，加入适量碘液，观察颜色变化。
2. 将肝糖原溶液加入班氏试剂，观察颜色变化。
五、实验结果与分析1. 肝糖原提取：离心后，上清液中无明显沉淀，下层液体呈乳白色。
2. 肝糖原鉴定：1. 加入碘液后，肝糖原溶液呈现红棕色，符合糖原与碘液反应的特征。
2. 加入班氏试剂后，肝糖原溶液呈现砖红色沉淀，符合糖原水解后产生葡萄糖与班氏试剂反应的特征。
六、实验结论1. 本实验成功提取了小鼠肝糖原，并对其进行了鉴定。
2. 肝糖原在生物体内具有重要的生理功能，维持血糖水平的稳定。
生物化学(27.2)--肝糖原的提取、鉴定与定量
பைடு நூலகம்
实验原理
（二）肝糖原的鉴定 糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间
引力吸附碘分子后呈现红棕色。 糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应和葡
萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的存在。 CuSO4+2NaOH ═ Na2 SO4+Cu(OH)2↓ 2Cu(OH)2+ C6H12O6 ═ 2CuOH+ 氧化型葡萄糖 +H2O 2CuOH△═ Cu2O↓( 红色 )+H2O Cu(OH)2 ═ CuO↓( 黑色 )+H2O
实验材料
（一）仪器 1. 普通离心机，室温 ~100℃ 恒温水浴箱， 722 型分光光度计，精
度为 10mg 级电子天平 2. 剪刀，镊子，研钵 3. 试管架， 10mL 离心管， 100×15mm 试管 4. 刻度吸量管（ 2mL 、 5 mL ）， 1000μL 微量可调取液器 5. 100mL 容量瓶 6. 白瓷反应板
9. 5.35mol/L(30 ％ )KOH 溶液：称取 KOH 30g ，加蒸馏水溶解至 1 00 mL 。
11. 标准葡萄糖液 (50mg/L) ：称取已干燥恒重的无水葡萄糖 25mg ，加蒸馏水溶解至 500 mL 。
12. 17mol/L(90 ％ )H2SO4 ：量取蒸馏水 30mL ，加浓 H2SO4500 mL 。
13. 蒽酮显色剂：称取蒽酮 0.20g ，用 17mol/L H2SO4 溶解至 100 mL 。此试剂不稳定，以当日配制为宜，冰箱保存可用 4~5 天。
操作步骤
（一）肝糖原的提取、鉴 定
生化实验报告肝糖原测定
生化实验报告肝糖原测定生物化学实验报告姓名：学号：专业年级：组别：*** 实验教学中心第一部分一、实验目的掌握程度实验主要目的1.掌握肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法2.正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器3.熟练运用溶液混匀的各种方法（试情况而定，采用合适的混匀方法）4.正确掌握溶液转移的操作5、正确操作使用分光光度记二、实验原理掌握程度实验内容及原理实验名称肝糖原的提取、鉴定与定量实验时间*** 实验地点*** 指导老师赵***组员*** 评分批改日期肝糖原的提取与鉴定糖原储存在细胞内，采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎，低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定保存于上清液中，从而使用糖原与蛋白质等其他成分分离开来。
糖原不溶乙醇而溶于热水，故先用95%的乙醇将滤液中的糖原沉淀，再溶于热水中。
糖原水溶液呈现乳样光泽，遇碘变红棕色。
这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。
糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判断肝组织中糖原的存在。
CuSO 4 +2NaOH=Na 2 SO 4 +Cu(OH)2 2Cu(OH)2 +C 6 H 12 O 6 =2 CuOH+氧化型葡萄糖+H 2 O 2 CuOH= Cu 2 O(红色)+ H 2 O Cu(OH)2 = CuO（黑色）+ H 2 O肝糖原定量测定糖原在浓酸中可水解为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物—5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色化合物。
该物质在620nm 处有最大吸收。
糖含量在10~100ug,溶液颜色的深浅可与可溶性糖含量成正比。
利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色，可得到样品中糖原的含量。
糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前，肝组织先置于浓碱中加热，以破坏其他成分，而保留肝糖原。
生化实验报告-肝糖原测定
生物化学实验报告姓名：学号：专业年级：组别：***实验教学中心第一部分一、实验目的二、实验原理一、材料与方法1、实验材料2、实验流程肝糖原的提取与鉴定：鸡肝约1.5 g，剪碎＋5%CCl3COOH 1 ml研磨至乳状＋5%CCl3COOH 3 ml研磨成肝匀浆3分钟（4000 r / min）3 ml）＋3ml 95%乙醇，混匀，静置10分钟4000 r / min）＋蒸镏水1 ml沸水浴2糖原溶液1ml＋浓HCl 5滴加碘试剂2沸水浴糖原溶液2滴滴呈色对比糖原水解液＋班氏试剂4滴混匀沸水浴2分钟，观察变化肝糖原定量测定鸡肝0.15 g＋30%KOH 1.5ml沸水浴15分钟冷却，全部转入100 ml容量瓶中加水至标线，仔细混匀，此为糖原提取液取3支试管，按下表操作。
试剂（ml）空白管标准管样品管蒸馏水 1.0 ——标准葡萄糖溶液— 1.0 —糖原提取液—— 1.00.2%蒽酮溶液 2.5 2.5 2.5混匀，沸水浴10分钟，冷却c。
在分光光度计620 nm波长处，用空白管溶液调零，测定各管溶液的吸光度（A）。
4、注意事项第二部分一、实验结果与处理1、实验现象2、实验数据记录在分光光度计620nm波长处，测定各管溶液的分光度（A），记录结果如下：各管吸光值测定次数空白标准样品1 0.0000.3500.0102 0.0000.3510.0113 0.0000.3530.0133、实验结果肝糖原的提取与鉴定：显色反应中，碘液由黄色变为红棕色（不明显），说明所提供材料中含糖原成分，但含量低；加入班氏试剂的溶液无明显的颜色变化；肝糖原定量测定（1）鸡肝所取质量：0.15g（2）各管吸光值各管吸光值测定次数 空白 标准 样品1 0.000 0.350 0.0102 0.000 0.351 0.0113 0.000 0.353 0.013 平均值 0.000 0.351 0.011 标准管吸光度平均值0.351；样品管平均吸光度 0.011；由公式计算：11.1*1000100*g 100*05.0*100/g ）肝组织重（标准样品肝组织）肝糖原（A A g 注：1.11为此法测得的葡萄糖含量换算为糖原含量的常数，因为用蒽酮试剂显色时，110ug 糖原与100ug 葡萄糖显色程度相当。
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生物化学实验报告
姓名: 学
号: 专业
年级:
组另I」:
生物化学与分子生物学实验教学中心
指导老师
格式要求： 正文请统一用： 小四号，宋体， 1.5 倍行距；数字、英文用 Times New
Roman ；标题用： 四号，黑体，加粗 。
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不得 出
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一、实验目的
1、学习并掌握肝糖原提取和鉴定原理和方法；
2、学习并掌握蒽酮比色测定糖原含量的原理、注意事项和操作方法；
3、学习并掌握刻度吸管和微量加样枪的使用方式；
4、正确掌握使用离心机的方法步骤；
5、熟练运用溶液混匀的各种方法；
6、正确掌握溶液转移的操作；
7、正确掌握使用分光光度计的方法步骤
二、实验原理
实验 1 肝糖原的提取与鉴定 糖原是生物的主要储能物质之一，主要储存与肝细胞中，采用研磨匀浆等方法可以使 肝细胞破碎。
肝细胞破碎，细胞内容物流出。
低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破 坏肝组织中的酶并且使蛋白质沉淀，糖原则能够稳定地保存在上清液中，从而达到分
离糖原与蛋白质等其他成分的目的。
糖原不溶于乙醇但可溶于热水，故可以先用 乙醇将滤液中糖原沉淀，再溶于热水中。
糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。
这 是糖原中葡萄
实验名称 Folin- 酚试剂法测定蛋白质含
量
实验日期
实验地点 合作者
评分
教师签名
批改日期
95%
糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。
此外，糖原还可以被酸水解成葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可以判定肝组织中糖原的存在。
糖原水解溶液与班氏试剂混匀沸水浴加热2min 后会出现砖红色沉淀。
CuS04 + 2NaOH = Na2SO4 + Cu(0H)2
2Cu(OH)2 + C6H12O6 = 2CuOH +氧化型葡萄糖+ H2O
2CuOH = H20 + Cu20；(红色)
Cu(0H)2 ==== H20 + CuOj (黑色)
实验2 肝糖原定量测定
糖原在浓碱溶液中非常稳定，故可将肝组织先置于浓碱中加热，以破坏其他成分，保留肝糖原。
糖原可以被浓酸水解成葡萄糖，而浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成5-羟甲基呋喃甲醛，该化合物与蒽酮脱水缩合可以生成蓝色的化合物。
该物质在620nm 处有最大吸收。
糖含量在10-100ug溶液颜色的深浅与可溶性糖的含量成正比。
利用该反应原理处理标准葡萄糖溶液，通过标准对照法即可计算出样品中糖原的含量。
三、材料与方法：以流程图示意
1、实验材料
(1)肝糖原的提取与鉴定
样品：1.50g的鸡肝
试剂：5%三氯醋酸溶液、95%乙醇、蒸馏水、浓HCl 溶液、50%NaOH 溶液、碘试剂和班氏试剂
仪器和器材：离心机、天平、试管、试管架、研钵、玻璃棒、室温-100 C恒温水浴箱、
剪刀、镊子、刻度吸管、加样枪和白瓷反应板
(
2)肝糖原的定量测定
样品：0.15g的鸡肝
试剂：30%KOH溶液、蒸馏水、标准葡萄糖溶液和0.2%蒽酮溶液显色剂
仪器和器材：室温-100C恒温水浴箱、比色皿、100ml容量瓶、分光光度计、试管、剪刀、镊子、刻度吸管和微量加样枪
3、实验步骤与方法
(1)肝糖原的提取与鉴定:
沉淀(弃
去)——
+2ml 95%乙醇，混匀，静置
10min
离心5min(4000r/min )
沸水浴2min,溶解沉淀
鸡肝约1.5g,剪碎+1ml 5%三氯醋酸，研磨至乳状
全部转入离心管中，离心__________________________
5min(4000r/min )
+3ml 5%CCI3COOH 三氯醋酸，
研磨成肝匀浆
上清液(取2ml)
+班氏试剂4滴
混匀
沸水浴2min,观察变化
图一：肝糖原的提取与鉴定实验流程
(2)肝糖原定量测定
糖原溶液1ml
白瓷板孔穴中
+浓HCI 5滴
糖原水解液
糖原水解液2滴
鸡肝0.15 g ， 加 30%KOH 1.5ml 沸水浴15分钟
冷却，全部转入
100 ml 容量瓶中
糖原的测定
加水至标线，仔细
混匀，此为糖原提 取液 -------------
图二：肝糖原定量测定试验流程
取3支试管，按下表操作。
试剂（ml）空白管标准管样品管
蒸馏水 1.0————
标准匍萄糖溶液—— 1.0——
糖原提取液———— 1.0
0.2%蒽酮溶液 2.5 2.5 2.5
表一：糖原测定试管操作
混匀，沸水浴10分钟，冷却至室温。
在分光光度计620 nm波长处，用空白管溶液调零，测定各管溶液的吸光度（A ）。
四、结果与讨论：①结果：实验数据、现象、图谱；②讨论：以结果为基础的逻辑推论，并得出结论。
1、实验现象
实验一：肝糖原的提取与鉴定
①所获糖原溶液如下图：
图三：所获糖原溶液
②将糖原溶液滴到碘试剂中可以勉强看到溶液出现浑浊，砖红色沉淀不明显，说明样
③糖原水解液与班氏试剂混合后溶液变深蓝。
沸水浴加热2min后，产生浑浊，砖红色品鸡肝中糖原含量少
图四：糖原溶液与碘试剂反应
沉淀不明显，说明样品鸡肝中糖原含量少
图五：糖原水解液与班氏试剂混合沸水浴后
实验二：肝糖原的定量测定
空白管、标准管和样品管混匀呈现如下颜色反应
图六：加入蒽酮溶液并且水浴过后的空白管、标准管、样品管（由左至右）对比2、吸光度数据记录:
620nm波长吸收度值记录
测定次数-
各管吸光度值A620
空白管标准管样品管
100.6720.099
200.6710.101
300.6720.102各管平均值00.6720.101
表二：620nm波长吸收度值记录表
3、结果计算：
A样品100 100
0. 05 1. 11 根据公式：肝糖原（g/100g肝组织）=A标准肝组织重（g）
1000
计算结果得样品肝糖原（g/100g肝组织）=0.56g/100g肝组织
故本次实验结论为：该鸡肝样品含有肝糖原，且肝糖原含量为0.56g/100g肝组织' 4、结果分析
经查阅资料得：饱食鸡肝的肝糖原含量为：2〜3g/100g肝组织，而本次实验测得肝糖原=0.56g/100g肝组织，即本次实验测得的肝糖原含量偏低。
5、讨论总结
（1）与碘试剂反应时：加入糖原的孔穴并没有出现预期的明显红棕色。
究其原因，在取糖原沉淀时，沉淀很少，糖原含量也很少。
而又因为碘试剂本身是黄色的，本来现象就不是很明显，这样一来，几乎看不到反应会产生的红棕色了，说明糖原含量极少。
（2）糖原中葡萄糖的鉴定：实验结果也没有如预期中的蓝色溶液沸水浴后变为砖红色。
原因还是糖原含量极少，又加过少量酸与碱，浓度更小，现象更不明显，所以观察不到明显的砖红色。
（3）在肝糖原定量测定中，三只试管水浴15min 后，标准管颜色最为明显，为绿色，加入的是标准葡萄糖溶液，样品管与空白管颜色依次递减。
（4）由资料可知饱食鸡肝糖原含量宜在2〜3g/100g肝组织，而本次实验测得肝糖原为
0.56g/100g肝组织，偏低。
究其原因，实验中操作没有失误，与其他小组和其他实验室
对比，发现各小组结果均偏低，可以推测，实验现象不明显原因是鸡肝材料糖原含量偏低。
6、结论：本次试验为《肝糖原的提取、鉴定与定量》，通过这次实验掌握了组织样品的制备方法，了解了其注意事项；了解了肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握了其操作方法。
巩固了正确操作使用刻度吸管和移液枪。
掌握了溶液转移的操操作，复习巩固了正确操作分光光度计。
实验中没有错误与过失，结果正常。
呈色反应、颜色观察与定量测定都正确成功。